CALCULOS Y RESULTADOS

1. PESO SECO
Clulas: Sacharomices cereviceae
Tabla N 4
Tubo Peso (tubo+muesta se!a"#
1 (Agua) 11.690
2 11.443
3 11.728
4 11.452
5 13.546
6 13.307
Peso Se!o (Ps" $ %eso (muesta se!a + tubo" & %eso 'el tubo
Se debe multiplicar por el factor de diluci! "
d
# 1$10 para %ue el re&ultado de
e! g de c'lula& $ ml. (l pe&o de lo& tubo& &e ob&er)a! e! la tabla 2.
Tubo N 1
*& # 11.690g + 11.690g # 0
Tubo N (
*& # 11.443+ 11.441g # 0.002 g$ml , "
d
# 2 , 10
-4
g de c'lula$ml
Tubo N )
*& # 11.728g + 11.725g # 0.003 g$ml , "
d
# 3,10
-4
g de c'lula$ml
Tubo N 4
*& # 11.452g + 11.448g # 0.004 g $ml , "
d
# 4,10
-4
g de c'lula$ml
Tubo N *
*& # 13.546g + 13.540g # 0.006 g$ml , "
d
# 6,10
-4
g de c'lula$ml
Tubo N +
*& # 13.307g + 13.298g # 0.009 g$ml , "
d
# 9,10
-4
g de c'lula$ml
Re%ote ,-.al
TU/OS
1 ( ) 4 * +
# 'e
!el0ml
0 2 , 10
-4
3,10
-4
4,10
-4
6,10
-4
9,10
-4
# 'e !el0L
0 0.2 0.3 0.4 0.6 0.9
1R2,3CAS
.omo &e ob&er)a e! la "igura a medida %ue aume!ta la co!ce!traci! de la
Sacharomyces cerevisiae e! pe&o /0medo1 aume!ta tambi'! la ab&orba!cia1
i!dica!do u!a correlaci! po&iti)a. 2o %ue i!dica1 %ue a medida %ue e,i&ta
ma3or co!ce!traci! de c'lula& de le)adura e! u!a &oluci!1 la ab&orba!cia
&er4 ma3or1 por lo %ue1 la ca!tidad de lu5 %ue atra)ie&a a la &oluci! &e reduce
a medida %ue aume!ta la co!ce!traci! de '&ta.
AN2L3S3S DE RESULTADOS
6e acuerdo co! lo& re&ultado& &e puede co!cluir %ue la t'c!ica de pe&o &eco
fue el m'todo ma& e,acto1 pue& &e acerco ma& a lo& dato& reale&1 e&to &e logra
ma!ipula!do lo& tubo& de forma adecuada1 de modo %ue &e &iga! lo&
procedimie!to& al pie de la letra1 u! tiempo de &ecado adecuado 3 u!a pe&ado
e! la mi&ma bala!5a. (,i&te &i! embargo la po&ibilidad de %ue !o &e e)aporara
el agua de la bioma&a por completo permitie!do de e&ta forma %ue &e aume!te
el pe&o. Si! embargo lo& re&ultado& e&tu)iero! acorde a la& co!ce!tracio!e&1
por lo %ue podemo& decir %ue e&te m'todo arro7 dato& acorde& a lo&
e&perado&.
CONCLUS3ONES
2o& re&ultado& obte!ido& por medio de e&te laboratorio permite re&altar la
e,actitud de lo& re&ultado& obte!ido& a tra)'& de la t'c!ica de pe&o &eco1
moti)o por el %ue &e ratifica &u utili5aci! a !i)el de laboratorio de igual ma!era
la rapide5 3 co!fiabilidad de la t'c!ica de de!&idad ptica re&palda &u u&o para
la determi!aci! de bioma&a celular e! el 4rea de biotec!olog8a9 a pe&ar de
%ue el co!teo directo e& u! poco &ub7eti)o 3 puede i!currir e! errore&1 lo&
re&ultado& obte!ido !o& mo&traro! u!a te!de!cia adecuada 3 acorde a lo
e&perado.
PRE1UNTAS CO4PLE4ENTAR3AS
1. Co.sulte 5 e6%l-7ue otos mto'os ut-l-8a'os %aa la me'-!-9. 'e la
b-omasa m-!ob-a.a.
Abso!-9.: .ua!do u! /a5 de lu5 paralelo (colimado) golpea u!a part8cula
e! &u&pe!&i!1 parte de la lu5 e& refle7ada1 parte e& di&emi!ada1 parte e&
ab&orbida 3 parte e& tra!&mitida. 2a !efelometr8a mide la lu5 di&per&ada por
u!a &oluci! de part8cula&. 2a turbidimetr8a mide la lu5 di&per&ada como u!
decrecimie!to de la lu5 tra!&mitida a tra)'& de la &oluci!. .o! relaci! a la
lo!gitud de o!da 3 al tama:o de la part8cula puede! e,i&tir tre& tipo& de
di&per&i!. 2o& m'todo& de di&per&i! de la lu5 &o! la& t'c!ica& m4& utili5ada&
para mo!itorear el crecimie!to de lo& culti)o& bacteria!o&. So! mu3 0tile& 3
podero&o& pero puede! lle)ar a re&ultado& err!eo&. *ri!cipalme!te1 da!
i!formaci! &obre el pe&o &eco (co!te!ido macromolecular).
Tub-'-met:a: 2a turbidimetr8a mide la reducci! de la tra!&mi&i! de lu5
debido a part8cula& de u!a &u&pe!&i! 3 cua!tifica la lu5 re&idual tra!&mitida.
(&tudio& terico& 3 e,perime!tale& /a! mo&trado %ue &olucio!e& diluida& de
difere!te& tipo& de bacteria&1 i!depe!die!teme!te del tama:o celular1 tie!e!
ca&i la mi&ma ab&orba!cia por u!idad de co!ce!traci! de pe&o &eco. (&to
%uiere decir %ue1 e! &olucio!e& diluida&1 la ab&orba!cia e& directame!te
proporcio!al al pe&o &eco1 i!depe!die!teme!te del tama:o celular del
microorga!i&mo.
Peso ;<me'o: Se obtie!e a partir de u!a mue&tra e! &u&pe!&i! %ue e&
pe&ada luego de la &eparaci! de la& c'lula& por filtraci! o ce!trifugaci!. (&
u!a t'c!ica 0til para gra!de& )ol0me!e& de mue&tra. 2a pri!cipal de&)e!ta7a e&
%ue el dilu3e!te %ueda atrapado e! el e&pacio i!tercelular 3 co!tribu3e al pe&o
total de la ma&a. 2a ca!tidad de l8%uido rete!ida puede &er importa!te1 por
e7emplo1 u! pellet de c'lula& bacteria!a& mu3 empa%uetada& puede co!te!er
u! e&pacio i!tercelular %ue aporta e!tre el 5-30; del pe&o1 de acuerdo a la
forma 3 deformaci! celular. *ara corregir el pe&o /0medo &e determi!a la
ca!tidad de l8%uido %ue %ueda rete!ida e! el e&pacio i!tercelular luego de u!a
ce!trifugaci!1 para ello &e utili5a! &olucio!e& de pol8mero& !o i!ico& (como el
6e,tra!) %ue puede! i!gre&ar e! el e&pacio i!tercelular pero !o puede!
atra)e&ar la& parede& bacteria!a&.
=olume. 'e !lulas em%a!a'as 5 .<meo 'e !lulas: (l crecimie!to de
u!a poblaci! bacteria!a puede &er e!te!dido de&de difere!te& per&pecti)a& 3
de acuerdo a '&ta& &e puede llegar a determi!ar la medida del crecimie!to
media!te di)er&a& metodolog8a&. *ara algu!o&1 el crecimie!to e& la capacidad
para multiplicar&e %ue tie!e! la& c'lula& i!di)iduale&1 e&to e& i!iciar 3 completar
u!a di)i&i! celular. 6e e&ta forma1 &e co!&idera a lo& microorga!i&mo& como
part8cula& di&creta& 3 el crecimie!to e& e!te!dido como u! aume!to e! el
!0mero total de part8cula& bacteria!a&. (,i&te! do& forma& para determi!ar el
!0mero total de microorga!i&mo& e! u!a mue&tra<
a) =ecue!to micro&cpico de part8cula&
b) =ecue!to electr!ico de part8cula&
Re!ue.to m-!os!9%-!o: (& u!a t'c!ica com0!1 r4pida 3 barata %ue utili5a
u! e%uipamie!to f4cilme!te di&po!ible e! u! laboratorio de microbiolog8a. *ara
e&to& recue!to& &e utili5a! ge!eralme!te c4mara& de recue!to&1 au!%ue
tambi'! puede! reali5ar&e a partir de mue&tra& filtrada& e! membra!a& 3
tra!&pare!ti5ada& o te:ida& co! colora!te& fluore&ce!te& (>ara!7a de acridi!a).
2a ma3or dificultad del recue!to e! c4mara e& obte!er reproductibilidad e! el
lle!ado de la c4mara co! l8%uido. ?tra dificultad e& la ad&orci! de la& c'lula&
e! la& &uperficie& del )idrio1 i!clu3e!do pipeta&. (&ta ad&orci! e& cr8tica e! el
proce&o de diluci! de la mue&tra 3 &e mi!imi5a al reali5ar la& dilucio!e& e!
medio& de alta fuer5a i!ica. 2a& c4mara& m4& utili5ada& &o! la& de >a?@sle5
3 la de PetoAAB>ausse. 2a primera tie!e la )e!ta7a %ue puede &er utili5ada
co! ob7eti)o& de i!mer&i!1 au!%ue la ma3or8a de lo& recue!to& &e reali5a! co!
ob7eti)o& &eco&. @!a de la& ma3ore& )e!ta7a& del recue!to micro&cpico e&
bri!dar i!formaci! adicio!al &obre el tama:o 3 la morfolog8a de lo& ob7eto&
co!tado&.
CCmaa 'e e!ue.to 'e PetoAAB>ausse
Re!ue.to ele!t9.-!o: 2o& co!tadore& electr!ico& permite! reali5ar
recue!to& de bacteria&1 le)adura& !o filame!to&a& 3 proto5oario&1 pero !o de
/o!go& 3 microorga!i&mo& filame!to&o& o micelare&. (&to& i!&trume!to&
co!&ta! b4&icame!te de do& compartimie!to& comu!icado& a tra)'& de u!
pe%ue:o co!ducto. (! ambo& compartimie!to& /a3 electrodo& %ue mide! la
re&i&te!cia el'ctrica del &i&tema1 3 como el orificio del co!ducto e& mu3
pe%ue:o 3 &u re&i&te!cia e& mu3 alta1 la re&i&te!cia el'ctrica de cada
compartimie!to e& i!depe!die!te.
Detem-.a!-9. 'e C!-'os .u!le-!os: (& u!a t'c!ica %ue permite
determi!ar i!directame!te la ma&a de u!a poblaci! bacteria!a. Se determi!a
la ca!tidad e,i&te!te de u! determi!ado 4cido !ucleico (ge!eralme!te 6>A) 3 a
partir de e&te dato &e e&tima la ma&a de la poblaci!.
Detem-.a!-9. 'e .-t9#e.o: (& u!a t'c!ica %ue permite determi!ar
i!directame!te la ma&a de u!a poblaci! bacteria!a. (,i&te! di&ti!ta& t'c!ica&
para determi!ar la ca!tidad de !itrge!o %ue co!tie!e u!a mue&tra co!
relaci! al compue&to %ue &e %uiera determi!ar. *uede a!ali5ar&e el !itrge!o
!o proteico media!te el >?
2
-
1 >?
3
-
1 >A
4
B
1 el !itrge!o proteico media!te
ab&orci! e! @C1 =eacci! de Diuret1 =eacci! de 2oEr31 o el !itrge!o total
media!te la 6ige&ti! de F7elda/l.
3.!o%oa!-9. 'e %e!usoes a'-a!t-Dos: (& u!a t'c!ica %ue
permite determi!ar i!directame!te la ma&a de u!a poblaci! bacteria!a. (!
e&ta t'c!ica &e adicio!a al medio u! compue&to marcado radiacti)ame!te %ue
puede &er i!corporado a la c'lula1 3 luego &e determi!a la ca!tidad de marca
i!corporada por toda la poblaci!.
(. Estable!e u. !om%aat-Do e.te las tes t!.-!as estu'-a'as
T!.-!a =e.taEas DesDe.taEas
De.s-'a'
9%t-!a
(& r4pida1 preci&a 3 )er&4til
f4cil de u&ar 3 eficie!te e!
co&to.

(,acto e! co!dicio!e&
optima& de aplicaci! de
e&ta t'c!ica.
Se limita cua!do &e tie!e! e! el
medio de ferme!taci! otro&
&lido& e! &u&pe!&i!.

>o difere!cia c'lula& )iable& de

c'lula& muerta&.

(& limitado para co!ce!tracio!e&

mu3 ele)ada& de c'lula& e! el
medio de ferme!taci!
Peso se!o (&ta t'c!ica e& 0til para
gra!de& )ol0me!e& de
mue&tra1 debido a %ue
difere!cia& del orde! de lo&
miligramo&.

=epre&e!ta! el pe&o de u!
gra! !0mero de bacteria&
(& eco!mico 3 f4cil de
aplicar
.ompo!e!te& )ol4tile& de la c'lula
puede! perder&e por el &ecado

puede e,i&tir algu!a degradaci!

de la e&tructura celular 3$o
compo!e!te& celulare&.

la mue&tra &eca puede recobrar

/umedad dura!te el pe&ado1
pri!cipalme!te &i el ambie!te tie!e
u!a /umedad relati)a alta.

Se limita para c'lula& dif8cile& de

ce!trifugar

=e%uiere de muc/o tiempo e!

comparaci! co! lo& otro&
m'todo&
Co.teo '-e!to
(!Cmaa 'e
Neubaue"
permite ob&er)ar
directame!te la morfolog8a
3 tama:o de la& c'lula&
e&tudiada&.

G!dica co!dicio!e&
&ubptima& de crecimie!to
o pre&e!cia de u! ge!otipo
o fe!otipo alterado&

utili5a u! e%uipamie!to
f4cilme!te di&po!ible e! u!
laboratorio de biotec!olog8a
Algu!a& c'lula& por &u tama:o !o
&e puede! co!tar

Se re%uiere tiempo 3 /abilidad

>o e& eficie!te e! &u&pe!&io!e&
poco de!&a&.

@!a dificultad e& obte!er

reproductibilidad e! el lle!ado de
la c4mara co! l8%uido.

Se pre&e!ta la ad&orci! de la&

c'lula& e! la& &uperficie& del
)idrio1 i!clu3e!do pipeta&.
). FGu so. los !oloa.tes su%aD-talesH
2o& colora!te& &upra)itale& &o! &u&ta!cia& %ue colorea! la& parte& i!ter!a& de
la& c'lula& &i! !ece&idad de &er de&truida1 por lo ge!eral e&to& &o! compue&to&
de color i!te!&o %ue permite u! re&alte e!)idiable facilita!do el co!teo.
So! )ario&1 como el a5ul de cre&ilo1 )ioleta cri&tal1 a5ul de *ru&ia1 )erde Ha!o
e!tre otro&
/3/L3O1RA,3A
S!a##I A. 1JJ+. Diotec!olog8a para i!ge!iero&. (ditorial 2imu&a S.A.
*rimera (dici!. I',ico. p192
S@oo#. >olle. N-ema.. (KK1. *ri!cipio& de a!4li&i& i!&trume!tal.
(ditorial Iac JraE Aill. Kui!ta (dici!. (&pa:a. *321.
>e.C.'e8 A. 1JJL. Iicrobiolog8a. (ditorial *ara!i!fo1 Iadrid.