Histologa (anatoma microscpica)

Objetivo: Mediante el uso de tcnicas microscpicas,

comprender la micro-anatoma de clulas, tejidos y
rganos, y correlacionar la estructura con su funcin.
Tcnicas de microscopa ptica ms usadas:
Combinacin de colorantes basfilos y acidfilos (por ej.,
Hematoxilina-Eosina, Tricrmico de Mallory)
Histoqumica (Fosfatasa cida, PAS [cido peridico-Schiff])
Inmuno-histoqumica (uso de Ac contra estructuras especficas,
conjugados con molculas fluorescentes [IFD e IFI] o con enzimas)

Microscopa electrnica de transmisin (MET) y de barrido (MEB)
Hematoxilina-Eosina: Tcnica de coloracin
Fijacin de la muestra con Formalina (solucin acuosa tamponada de
formaldehdo). Detiene el metabolismo y conserva la estructura del tejido
(protenas pero no lpidos mal fijador de membranas).
Lavado y deshidratacin (serie de soluciones alcohlicas de concentracin
creciente hasta el 100%). Extraccin del alcohol con Xileno, luego inclusin de
la muestra con parafina fundida (miscible en Xileno). Enfriamiento y endureci-
miento de la parafina Taco cortes de 5-15 de espesor con micrtomo
que se montan sobre portaobjetos.
Coloracin con Hematoxilina: extraccin de la parafina con Xileno, re-
hidratacin del corte con soluciones alcohlicas de concentracin decreciente, y
tincin con solucin acuosa de Hematoxilina.
Coloracin con Eosina: deshidratacin del corte con soluciones alcohlicas de
concentracin creciente, y tincin con solucin alcohlica de Eosina. Lavado
con Xileno, agregado de un lquido de montaje no acuoso, y cobertura con un
cubre-objetos para lograr un preparado permanente.
Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloracin
La Eosina es un colorante cido (predomina densidad de carga negativa), por lo cual
se asocia y colorea a estructuras catinicas del citoplasma y matriz extracelular, tales
como: filamentos citoplasmticos (como los de clulas musculares); membranas
intracelulares; y fibras extracelulares (por sus aminocidos bsicos ionizados).
La Hematoxilina se asocia con
mordientes para actuar como
un colorante bsico, por lo
cual se asocia y colorea
estructuras aninicas (que
posean fosfatos, sulfatos y/o
carboxilos ionizados):
Heterocromatina y nuclolos
RNA ribosomal
Matriz extracelular (por los
sulfato de los GAG)
cido peridico-Schiff (PAS): Fundamento
El cido peridico rompe la unin entre carbonos con hidroxilos
adyacentes, y forma grupos aldehdo. El reactivo de Schiff reacciona
con los aldehdos para dar un color rojo prpura intenso.
La reaccin de PAS tie
carbohidratos, y se usa para
detectar:
Grnulos de glucgeno
Moco en diversas clulas
Membrana basal de los
epitelios
Fibras reticulares del tejido
conjuntivo