04 PD BT MTM

Microbiologa y taxonoma microbiana
Programa desarrollado

Ingeniera en:
Biotecnologa

Programa de la asignatura:

Clave:
200920416
190920416

ESAD


Unidad 1. Taxonoma microbiana

Antes del descubrimiento de los microorganismos se crea que todos los seres vivos que
existan eran plantas y animales, sin embargo durante el siglo XIX se comprob que los
microorganismos tienen propiedades tanto de plantas y animales. En 1866, Haeckel
propuso que los microorganismos se incluyeran en un clado separado, el del los Protistas,
que inclua a: algas, hongos, protozoarios y bacterias. Sin embargo a mediados del siglo
XX las nuevas tcnicas de microscopa electrnica, revelaron que las bacterias por su
estructura celular difieren fundamentalmente de los otros tres grupos; por lo que se
localizan dentro del reino Monera, ya poseen un tipo de estructura celular ms primitiva
llamada procaritica. Linneo un estudioso de la botnica nacido en Suecia categoriz un
enorme grupo de especies estableciendo divisiones que las agrupaban para su estudio,
muchas de esas categoras son usadas en la actualidad (Solomon et al., 2008).

La clasificacin Linneana es la denominada clasificacin binomial, que se escribe en latn
y denomina a las especies y gneros de cada ente vivo, establecindose as un lenguaje
cientfico adoptado internacionalmente.

Existen 5 reinos en orden evolutivo: Monera (se incluyen a las bacterias y a las algas
verde-azules o cianobacterias, no tienen ncleo ni orgnulos definidos), Protista (incluye a
los microorganismos eucariotas, como algas rojas y pardas; y los protozoos), Fungi y/o
Hongos (no son plantas aunque parezcan, poseen clulas eucaritas con su ncleo y
paredes celulares definidas pero carentes de pigmentos fotosintticos), Plantae y/o
plantas (presentan pigmentos fotosintticos) y Animalia y/o animales (que incluye a todos
los animales invertebrados y vertebrados). La mayor parte del mundo cientfico utiliza hoy
estos cinco reinos para clasificar al mundo de la diversidad biolgica; por lo que al
biotecnlogo le sern de gran utilidad el conocer a los microorganismos para usarlos a
nivel industrial y en beneficio del ambiente que lo rodea (Solomon et al., 2008).

Presentacin de la unidad

La importancia de estudiar taxonoma microbiana radica en conocer las investigaciones y
logros cientficos, mediante anlisis taxonmicos, donde el alumno desarrollar
habilidades para identificar los sistemas de clasificacin de microorganismos y como es
que llevan a cabo su proliferacin de tal manera que se apliquen los conocimientos
adquiridos para la elaboracin de un ensayo.

Propsitos

- Analizars la forma de nombrar a los microorganismos y su importancia dentro del
mbito ambiental e industrial.


- Incorporars los conceptos fundamentales de taxonoma microbiana con el fin de
entender el desarrollo cuantitativo de las bacterias, lo cual posteriormente te permitir
desarrollar habilidades para la investigacin, resolucin de problemas y toma de
decisiones.

Competencia especfica

Analizarla taxonomaycrecimientobacteriano mediantela
comprensindesusfundamentos ybeneficios para proponermejorasalos
distintosprocesos biotecnolgicos.

1.1. Definicindetaxonoma

La taxonoma es un rea de la ciencia biolgica que comprende tres disciplinas diferentes:
clasificacin, nomenclatura e identificacin.
La taxonoma se divide en:
Microtaxonoma: su objetivo es identificar, describir y delimitar especies.
Macrotaxonoma: su finalidad es construir clasificaciones de los taxones y se auxilia
de la microtaxonoma (Solomon et al., 2008).

Ahora bien, para llevar a cabo la clasificacin de las bacterias, los taxnomos bacterianos
se vieron forzados a buscar, adems de las caractersticas estructurales, diferentes tipos
de propiedades como las bioqumicas, fisiolgicas y ecolgicas. Dicha clasificacin se
basa en atributos funcionales, ya que la mayor parte de las bacterias slo pueden
identificarse por lo que hacen y no simplemente por su apariencia. Esto representa un
problema adicional para el taxnomo bacteriano, el estudio de estas propiedades
funcionales conlleva a la realizacin de experimentos, por lo tanto ste nunca podr estar
seguro de haber llevado a cabo los experimentos adecuados con fines taxonmicos:
podra ocurrir que omitiera la realizacin de ciertos experimentos que indicaran la
existencia de agrupamientos significativos dentro de una coleccin de cepas. Sin
embargo, est tomando auge una nueva alternativa biotecnolgica que podra resolver
pronto el problema, son las tcnicas moleculares para la caracterizacin genotpica
bacteriana, que proporcionan una posible base objetiva para la definicin de especie
bacteriana (Trtora, 2008).


En el siglo XVIII, Carlos Linneo desarroll un sistema de
clasificacin para nombrar a los microorganismos como
una forma de facilitar la comunicacin eficaz entre los
microbilogos, por lo que se le conoce como el Padre de
la Taxonoma, que es la ciencia encargada de la
clasificacin y denominacin de la gran variedad de
especies existentes (Solomon et al., 2008).
Carlos Linneo (1707-1778)
(http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Carl_von_Linn%C3%A9.jpg)

La taxonoma (del griego , taxis, "ordenamiento", y , nomos, "norma" o "regla")
es la ciencia de la clasificacin; est relacionada con la Sistemtica, que se refiere a la
clasificacin o agrupamiento sistemtico de los organismos en grupos o categoras
llamados taxa (del griego, transliterado como taxis, "ordenamiento"), por lo tanto es
un grupo de organismos emparentados, que en una clasificacin dada han sido
agrupados, asignndole al grupo un nombre en latn, una descripcin, y un "tipo", de
forma que el taxn de una especie es un espcimen o ejemplar concreto. La taxonoma
se divide en tres partes:

a) Clasificacin: es el agrupamiento ordenado de unidades dentro de unidades mayores.
b) Nomenclatura: es la denominacin de las unidades definidas tomando en cuenta su
clasificacin.
c) Identificacin: hace uso del criterio establecido por la clasificacin y nomenclatura
mencionadas, ya que los microorganismos se identifican comparando las
caractersticas de las unidades desconocidas y las conocidas.

1.1.1.Nomenclatura

Como se mencion anteriormente, la nomenclatura es una de las partes de la taxonoma
y, respecto a sta, existen cdigos como el zoolgico, botnico y bacteriolgico que se
basan en determinados principios comunes mediante el sistema de clasificacin de
Linneo, el cual se denomina sistema binomial de nomenclatura, donde a cada especie
se le asigna un nombre compuesto de dos partes: la primera designa el gnero, y la
segunda el epteto especfico, los cuales se escriben en letra cursiva; los dos anteriores
forman el nombre cientfico de cada especie. Es importante destacar que el epteto
especfico siempre debe ir precedido del nombre del gnero abreviado o completo
(Solomon et al., 2008).


1.1.3.Biologa sistemtica

En el sistema binomial de nomenclatura se agrupa a las especies dentro de un gnero
comn, estos a su vez se constituyen en familia, las cuales a su vez se agrupan en
ordenes, los ordenes en clases, las clases en filums filo (phylum, plural phyla que es un
tipo de organizacin),los filums forman reinos y los reinos dominios (Solomon et al., 2008).

Categora o nivel
taxonmico
Caractersticas
Especie Organismo que solo se
puede reproducir con otro de
su misma especie
Gnero Grupo de especies
relacionadas.
Familia Grupo de gneros
relacionados.
Orden Grupo de familias
relacionadas.
Clase Grupo de rdenes
relacionadas.
Filum o Phylum Grupo de clases
relacionadas.
Reino Grupo de phyla relacionados
Dominio Grupo de reinos.
Vida Las especies que habitan el
planeta.

Niveles taxonmicos

La forma de nombrar a los microorganismos es mediante la clasificacin en grupos de una
serie grande de microorganismos; los cuales deben parecerse entre s con un grado
mayor de semejanza que los miembros de otro grupo.

De esta manera, el objetivo del nombre cientfico es el de poseer un nico nombre que
pueda ser utilizado en todo el mundo, en cualquier lengua, para referirse a un nico taxn

Los nombres cientficos son en latn, o latinizados. A continuacin se muestran algunos
ejemplos:


Nombre vulgar Nombre cientfico
Perro Canis familiaris o C. familiaris
bacteria que causa el clera Escherichia coli o E. coli
bacteria causante de la fermentacin del
yogurt
Lactobacillus bulgaricus o L. bulgaricus.

Los nombres cientficos no son muy usuales, puesto que se escriben en latn y es muy
difcil su pronunciacin; por lo que es preferible usar el nombre vulgar o comn a pesar de
que suele variar segn las localidades o regiones.

Actividad 1. Archivo evolutivo

En esta actividad ejercitars el dominio de nomenclatura analizando la clasificacin
taxonmica de dos microorganismos distintos.Ests de acuerdo en la forma de nombrar
a los organismos que nos rodean como lo propuso Linneo?Con base en lo que has
aprendido menciona que clasificacin propondras t si fueses taxnomo, realiza lo que a
continuacin se te pide:

1. Elige dos microorganismos diferentes.

2. Por medio de un cuadro comparativo,describe la clasificacin taxonmica de cada uno
de elloshaciendo nfasis en sus diferencias

3. Apoyatu trabajo con imgenes y s cuidadoso con la ortografa.

4. Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U1_A1_XXYZ y envalo a tu
Facilitador(a) mediante la seccin de Tareas.

Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de
contenidos, ya que tu Facilitador(a) puede detectar esta situacin sin dificultad; tu
formacin exige que desde esta etapa todo producto o tarea que reportes sea totalmente
original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud
se proyecte directamente en tu prctica profesional.

1.4.1. rboles filogenticos

La clasificacin moderna a menudo recibe el nombre de sistemtica, porque se basa en
relaciones evolutivas entre los organismos. Muchos taxnomos utilizan la sistemtica ya
que tratan de reconstruir la historia evolutiva o filogenia (produccin de los filums) de los
organismos.Por lo tanto un rbol filogentico muestra las relaciones evolutivas entre
varias especies u otras entidades que se cree que tienen un ancestro en comn; es una
forma de cladograma (Solomon et al 2008).


Un cladograma es un diagrama representativo en la clasificacin taxonmica de los
organismos, en el que se muestra la relacin entre distintas especies segn una
caracterstica derivada, resultado del anlisis cladstico de una especie. Los cladogramas
son importantes herramientas filogenticas para el estudio de conceptos cientficos.

En biologa, se utilizan rboles parecidos a los genealgicos para representar cmo se
encuentran emparentados evolutivamente los organismos, se les conoce como rboles
filogenticos. En los rboles genealgicos se utiliza informacin proporcionada por los
familiares y para los rboles filogenticos se usa informacin proveniente de fsiles, as
como aqulla generada por la comparacin estructural y molecular de los organismos

rbol filogentico de la
vidahttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/55/Phylogenetic_tree-es.png

En la figura anterior se explica a manera de rbol filogentico el origen evolutivo de la vida
en el planeta, de acuerdo a las caractersticas morfolgicas de dichos organismos,stos
van desde las formas sencillas como las bacterias hasta las ms complejas como las
plantas y animales (Solomon et al., 2008).

Debido al origen evolutivo de las especies, estas pueden tener diferentes formas de
rboles filogenticos:

Monofilticos: es un grupo de organismos que tiene un antepasado comn con todos y
cada uno de sus descendientes.


rbol monofiltico
http://www.ual.es/GruposInv/myco-ual/galer13.htm

Parafiltico: si faltan algunos de los descendientes, los cuales han sido incluidos en otros
grupos.

rbol parafiltico

Polifiltico: si contiene organismos de varios clados, es decir, que no proceden de un
antepasado comn cercano; simplemente, se han reunido por conveniencia de los
investigadores.

rbol Polifiltico


Actividad 2. Bacterias fichadas

Con la finalidad de reforzar lo visto anteriormente sobre rboles filogenticos, en esta
actividad profundizars en el conocimiento de las relaciones que existen dentro del rbol
filogentico enfocado a las bacterias patgenas y especies de microorganismos que
causan enfermedades comunes en Mxico.

1. Realiza una lista de cuatro especies de bacterias que causan enfermedades en
Mxico y coloca entre parntesis la enfermedad provocan.

2. Analizala siguiente cuestin, tomando en cuenta su distancia filogentica y
metabolismo:Cul es la relacin filogentica entre ellas?En un documento de Word,
construye un rbol filogentico que lo explique

3. Ingresa a la base de datos y comparte con tus compaeros tu listado, el rbol
filogentico que construiste y la respuesta a la pregunta.

Nota:Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de
formacin exige que desde esta etapa todo producto o tarea que reportes sea totalmente
original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud
se proyecte directamente en tu prctica profesional.

1.2. Crecimientoindividualypoblacional

El crecimiento bacteriano implica un aumento ordenado en el nmero de clulas
(poblacin) y de los componentes celulares de un organismo del estado inmaduro al
estado adulto; incluye inmersamente la divisin de una bacteria en dos clulas hijas en un
proceso llamado fisin binaria, biparticin, las clulas hijas resultantes sern
genticamente idnticas a la clula original. De este modo tiene lugar la "duplicacin
local" de la poblacin bacteriana. Las dos clulas hijas creadas tras la divisin no
sobreviven necesariamente (Brooks, 2011)

Sin embargo, si el nmero de supervivientes supera la unidad, la poblacin bacteriana
experimenta un crecimiento exponencial. La medicin de una curva del crecimiento
exponencial de las bacterias en un cultivo ha sido tema de estudio de los microbilogos.
Los procesos fundamentales empleados para ello son la enumeracin bacteriana
(recuento celular) por mtodos directos e individuales (microscopa), mtodos directos y
masivos (biomasa), por mtodos indirectos e individuales (conteo de colonias), o por
mtodos indirectos y en bloque (nmero ms probable (NMP), turbidez, absorcin de
nutrientes).


El objeto de estudio del biotecnlogo es reconocer de manera terica el crecimiento
bacteriano en un cultivo que conlleva a resumirse en cuatro fases diferentes: fase Log,
fase exponencial, fase estacionaria y fase de declive o muerte; y de esta manera podr
aplicar los conocimientos a nivel industrial y ambiental dichos microorganismos para un
beneficio especfico tomando en cuenta factores del ambiente tanto abiticos como pH,
Temperatura en C, O
2
, (oxigeno), presin osmtica, nutrientes (CHONSP) y biticos
como la competencia por los nutrientes, depredacin y lisis viral (Trtora, 2008).

Las clulas bacterianas son microorganismosunicelulares que presentan un tamao de
unos pocos micrmetros (0.5 a 5 m) y diversas formas incluyendo esferas (cocos),
barras (bacilos) y hlices (espirilos) (Fig. 7). Las bacterias son procariotas (no tienen
ncleo definido ni presentan orgnulosmembranosos internos), poseen una pared celular
compuesta de peptidoglucanoestructura bsica de la pared celular de las bacterias; la
molcula es un copolmero formado por una secuencia alternante de N-acetil-glucosamina
y el cido N-acetilmurmico unidos mediante enlaces -1,4. Muchas bacterias disponen
de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y son mviles. Del estudio de las
bacterias se encarga la bacteriologa (rama de la microbiologa) (Trtora, 2008).

Respecto al tamao de las bacterias que son microscpicas, hablemos primero cuando
medimos la longitud de un objeto, estamos viendo cuantas veces entra una unidad de
medida en el largo del objeto. La unidad de medida de la longitud es el metro (m). El
sistema de unidades de medida que incluye al metro junto a sus mltiplos y submltiplos
se llama Sistema Mtrico Decimal.

Mltiplo Submltiplos Longitudes microscpicas
mirimetro 1 mam =
10,000 m
Metro m Micrmetro 1m = 0.001 mm
kilmetro 1 km = 1,000 m Decmetro 1 dm = 0.1 m 1 mm = 1000 m
hectmetro 1 hm = 100 m Centmetro 1 cm = 0.01 m 1 m = 0,001 mm = 1 10
-3

mm
decmetro 1 dam = 10 m Milmetro 1 mm = 0.001 m 1 m = 0,000 001 m = 1 10
-
6
m
1 m = 10 dm = 100 cm = 1
mm
1 m = 1 000 000 m
Conversiones para determinar las diferentes longitudes


Morfologa de las bacterias
http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Morfolog%C3%ADa_bacteriana.jpg

Generalmente el crecimiento de las bacterias es porque se reproducen ya sea por
biparticin o fisin binaria (forma asexual); tras la duplicacin del ADN, que est dirigida
por la ADN-polimerasa que se encuentra en los mesosomas, la pared bacteriana crece
hasta formar un tabique transversal separador de las dos nuevas bacterias. Tambin
presentan reproduccin sexual o parasexual (intercambian fragmentos de ADN) (Trtora,
2008).

Es importante distinguir el crecimiento individual de clulas y el crecimiento de
poblaciones de clulas:

Crecimiento individual: es el incremento de una clula respecto al tamao y peso, es
usualmente un preludio a la divisin celular

Crecimiento poblacional: es el incremento en el nmero de clulas como una
consecuencia del crecimiento y divisin celular

El crecimiento microbiano se divide principalmente en cuatro etapas que son:

Etapas del crecimiento bacteriano
(Trtora et al, 2007)


a) Fase Lag o de rezago
Este periodo consiste en la adaptacin de las clulas microbianas a su nuevo ambiente.
En esta fase, las clulas microbianas no tienen muchos metabolitos y enzimas, debido a
las condiciones desfavorables que representaba el cultivo previo. En este lapso de tiempo
se forman las enzimas y los metabolitos intermedios hasta alcanzar las concentraciones
necesarias para reiniciar el crecimiento (Trtora, 2008).

Este periodo se puede prolongar en el caso de que el medio de cultivo previo y las
condiciones actuales resulten tan diferentes que las clulas sean genticamente
incapaces de sobrevivir, por lo que slo unas cuantas mutantes podrn subsistir, y
obviamente se requerir ms tiempo para que stas se multipliquen lo suficiente y sea
notorio el aumento de clulas (Trtora, 2008).

b) Fase exponencial
En esta fase las clulas se encuentran en un estado de crecimiento sostenido. Se
sintetiza nuevo material celular a una tasa constante (tasa = relacin entre la cantidad y la
frecuencia de un fenmeno), pero ste material es en s cataltico y la masa aumenta de
manera exponencial, es decir crece muy rpidamente en el tiempo. Matemticamente
exponencial se refiere elevar un nmero o -base- X a un determinado exponente- y (x
y
);
por ejemplo, si la base x es igual a 2 y el exponente y es igual a 4; la potencia ser 2
4
lo
cual equivale a 2x2x2x2 = 16. Para el caso del crecimiento microbiano por razones y
resultados experimentales la base de potencia que se considera es el nmero e- que es
la base de los logaritmos de Neper, el cual es un nmero importantsimo en la naturaleza
que vale e = 2.7182818284; por lo tanto sus potencias se escriben y = e
x
o x = e
y
.

El crecimiento continuar hasta que uno o ms nutrimentos se agoten, o hasta que se
acumule tal cantidad de metabolitos txicos que se inhiba el crecimiento. El nutrimento
limitante para los organismos aerobios suele ser el oxgeno: cuando la concentracin
bacteriana es de aproximadamente 1 x 107 ml es necesario incrementar el ingreso de
oxgeno mediante agitacin o burbujeo; pero cuando la concentracin alcanza 4 o 5 x 109
bacterias por ml, la tasa de difusin de oxgeno no puede satisfacer las demandas aun en
un medio aireado, por lo que el crecimiento disminuye progresivamente (Trtora, 2008).

A diferencia del crecimiento exponencial, el crecimiento lineal slo implica que se est
aumentando en solo una unidad la masa con respecto al tiempo.

c) Fase estacionaria

Ante el agotamiento de nutrimentos en el medio o la acumulacin de metabolitos txicos
el crecimiento cesa por completo despus de un periodo de decrecimiento en la tasa de
crecimiento. Por lo general en esta fase se observa recambio celular, lo cual se debe a
que, aunque existe una prdida lenta de clulas por muerte, dicha prdida se compensa


exactamente por la formacin de nuevas clulas a travs de crecimiento y divisin. As, la
cifra de clulas viables se mantiene constante, aunque en realidad en el conteo aumente
poco a poco el nmero de clulas, si se cuentan tambin las muertas (Trtora, 2008).

Para comprender lo anterior debemos considerar que, para una clula microbiana, muerte
significa la prdida irreversible de la capacidad para reproducirse (crecer y dividirse), lo
cual se comprueba cuando una clula es incapaz de producir una colonia en cualquier
medio. De lo anterior se deriva que designar a una clula microbiana como muerta no
implica su destruccin fsica. La duracin de esta fase depende de la naturaleza del
microorganismo y de las condiciones del medio.

d) Fase de declinacin y/o muerte

Esta fase representa el decremento de clulas debido al aumento progresivo de la tasa de
mortalidad, misma que tarde o temprano alcanza un valor sostenido. Por lo general, una
vez que la mayora de las clulas ha muerto, la tasa de mortalidad disminuye
bruscamente, por lo que un nmero pequeo de sobrevivientes pueden persistir en cultivo
por meses o aos. Dicha persistencia puede deberse a que las clulas consiguen crecer
gracias a los nutrimentos liberados por las clulas que mueren y se lisan, observndose
recambio celular (Trtora, 2008).

1.2.1.Tasadecrecimientoy tiempodegeneracin

El crecimiento microbiano que es el cambio en el nmero de clulas por unidad de tiempo
determinada. El tiempo juega un papel muy importante para que la clula se divida en
dos, el cual puede ser desde minutos, horas y hasta das.

Tasa de crecimiento: es el cambio del nmero de clulas o masa por unidad de tiempo
Generacin: intervalo para la formacin de dos clulas provenientes de una.

Tiempo de generacin: tiempo que tarda una poblacin en duplicarse. Se puede definir
tambin como la cantidad de tiempo requerida para completar un ciclo de divisin.

Factores que influyen en el crecimiento

a. Factores externos
Condiciones ambientales o culturales: pH, T (en escala centgrada = grados centgrados
C), disponibilidad de H
2
O, O
2
, CO
2
y tiempo.
Condiciones nutricionales: Tasa C/N 10:1, 12:1, azufre y otros microelementos.

b. Factores internos
Estos factores son inherentes a cada microorganismo o especie en particular,
principalmente se refiere a su capacidad metablicapara transformar los nutrientes que


consume en elementos que pueden utilizarse para su crecimiento, reproduccin y el
mantenimiento de sus condiciones de vida, el metabolismo le permite adaptarse a los
cambios en su medio permitindole sobrevivir, sin embargo estosfactores internos pueden
verse modificados cuando los factores externos ejercen mucha presin sobre el
microorganismo, en ocasiones la presin es tal que sobrepasa la capacidad de un
microorganismo para adaptarse, lo conlleva a la muerte. Un ejemplo claro de esta
situacin es el efecto que los antibiticos tienen sobre el crecimiento de microorganismos
patgenos.

1.2.2.Crecimientoexponencial ysincrnico

El crecimiento de una poblacin resulta de la suma de los ciclos celulares de todos los
individuos de dicha poblacin.

Crecimiento exponencial: durante el crecimiento exponencial, la tasa de crecimiento de
las clulas (medida en gramos de biomasa producida por hora), cuando el crecimiento no
es limitado por los nutrimentos, se puede obtener multiplicando la constante de la tasa de
crecimiento por la concentracin de biomasa. La constante de la tasa de crecimiento es la
tasa a la cul las clulas producen ms clulas, y el valor que esta toma se interpreta
como los gramos de biomasa producidos por cada gramo de biomasa preexistente
creados en una hora.

El crecimiento se denomina exponencial porque la biomasa se incrementa
exponencialmente con respecto al tiempo. De lo anterior se deriva que, si graficamos el
logaritmo de la concentracin de la biomasa (o celular) en funcin del tiempo, como
ocurre en la curva del crecimiento, obtendremos una lnea recta como representacin de
esta fase (Trtora, 2008).

Crecimiento sincrnico: todas las clulas se encuentran simultneamente en la misma
fase del crecimiento celular. Los cultivos sincrnicos son muy difciles de mantener por lo
que su importancia est principalmente ligada a los estudios bsicos de biologa
microbiana. Sin embargo, en la naturaleza, las bacterias del suelo se encuentran en
condiciones de crecimiento prximas a la fase estacionaria (en la que se produce una
cierta sincronizacin del cultivo) y, por consiguiente, durante cierto tiempo las poblaciones
naturales probablemente se comporten como relativamente sincrnicas (Trtora, 2008).

1.2.3.Determinacindel crecimiento

Existen diferentes sistemas para detectar y medir el crecimiento de microorganismos. Se
mide por cambios sucesivos en el nmero de clulas o por el peso de la masa de las
clulas. Existen varios mtodos para contar las clulas o estimar la masa de stas
(Brooks, 2011).


Formas de visualizar el crecimiento bacteriano
Caja petri autora nuestra de practica en el laboratorio (crecimiento bacteriano colonias
blancas) y Tubos de ensaye color amarillo indica presencia de colonia
Recuento de clulas
1) Conteo de clulas al microscopio: se emplea un dispositivo graduado con 25 cuadrados
cuyo volumen y rea es conocido: Cmara de Petroff-Hausser, cmara de Neubauer,
hemocitmetro.
Limitaciones:
Es muy cansado, no es prctico para un gran nmero de muestras.
No es muy sensible, se necesitan al menos 106 bacterias/ml para que sean
observadas al microscopio
No distinguen clulas vivas de muertas.

http://www.unad.edu.co/fac_ingenieria/pages/Microbiologia_mutimedia/3_4_3recue
nto.htm

Dispositivo graduado para el conteo de clulas bacterianas

2). Conteo de clulas viables: una clula viable es definida como aqulla que es capaz de
dividirse y formar una colonia en el medio de cultivo. El conteo en placas es el mtodo
ms utilizado.

Pueden ser:
Diseminacin en placa (siembra en placa por extensin).
Se asume que cada colonia surgi de una clula nica, contando el nmero de colonias
uno puede calcular el nmero de clulas viables en la muestra.


Mtodo de vaciado en placa.

Forma de contar clulas bacterianas en placas de agar

1.2.4.Medida demasamicrobiana

Mtodos directos: estos mtodos requieren preparaciones limpias, sin partculas extraas.
1. Determinacin del peso hmedo:
se tara (calibrar hasta que la balanza especifique el peso real) un tubo de
centrfuga
se centrifuga el cultivo y se elimina el sobrenadante
se determina el peso del sedimento.
Inconvenientes: grandes errores, debido al lquido intercelular retenido,
cuya cuanta depende a su vez de la forma y tipo de agrupaciones de la
cepa, intensidad del empaquetamiento, etc.
2. Determinacin del peso seco: como el anterior, pero el sedimento se seca antes
de ser pesado (105
o
C, toda la noche), hasta peso constante. Las medidas de peso
seco suelen representar el 10-15% de los valores de peso hmedo.
Inconvenientes: mtodo tedioso (requiere mucho tiempo) y con bastantes
errores: es difcil pesar menos de 1 mg con exactitud en las balanzas
habituales de laboratorio. 1 mg de peso seco equivale a unas 5x10
9

bacterias.
3. Determinacin del nitrgeno total: tcnica de micro-Kjeldahl.
4. Determinacin de un componente caracterstico: peptidoglucano, ADN, ARN,
protenas, entre otros.

Mtodos indirectos: se determina mediante lo que se observa, sin necesidad de una
caracterstica especial para su visualizacin.
1. Medida de consumo de nutrientes o de produccin de algn metabolito por
unidad de tiempo. Ejemplos: consumo de oxgeno (QO
2
) y consumo de
carbnico (QCO
2
), determinados por el respirmetro de Warburg. Produccin
de cidos.


2. Mtodos turbidimtricos (pticos). La base comn de estos mtodos consiste
en la medicin de la cantidad de luz dispersada o transmitida a travs de un
cultivo bacteriano.
3. Medicin de luz transmitida:

Escala de MacFarland: Se trata de una serie de patrones de turbidez (no son claros o
transparentes como el agua) previamente calibrados. Consiste en varios tubos de
vidrio hermticamente cerrados que contienen {1% de Cl
2
Ba + cantidades crecientes
de H
2
SO
4
(cido sulfrico) al 1%}; por lo tanto, en cada tubo se origina un precipitado
de SO
4
Ba, origen de la turbidez. Para cada cepa bacteriana hay que establecer la
equivalencia entre la turbidez de cada tubo y la masa o la concentracin de bacterias
(en cls/ml) que genera una turbidez similar. Se trata de una serie de patrones de
turbidez previamente calibrados. Consiste en varios tubos de vidrio hermticamente
cerrados que contienen {1% de Cl
2
Ba + cantidades crecientes de SO
4
H
2
al 1%}; por lo
tanto, en cada tubo se origina un precipitado de SO
4
Ba, origen de la turbidez. Para
cada cepa bacteriana hay que establecer la equivalencia entre la turbidez de cada
tubo y la masa o la concentracin de bacterias (en cls/ml) que genera una turbidez
similar.
Espectrofotmetro: Este aparato es de uso habitual en cualquier laboratorio de
Microbiologa o Bioqumica. Mide la densidad ptica (D.O.), es decir la absorbancia.
D.O. = A = -logT/100
donde T= transmitancia
Nefelmetro: Es un aparato similar al anterior, pero el dispositivo sensor est situado
en ngulo recto respecto de la direccin de la luz incidente, y lo que se mide es pues,
la luz dispersada directamente por la preparacin. Posee mayor sensibilidad que el
espectrofotmetro.

1.2.5.Medida del nmero de individuos

Mtodos directos: se mide lo que se observa a simple vista o con ayuda de equipo
especial.
1. Cmara de recuento de Petroff-Hauser: Consiste en un portaobjetos especial con una
graduacin en superficie y unas medidas muy concretas:
excavacin con 0.02 mm de profundidad
rea de 1 mm
2
, dividida en un retculo de 25 cuadrados grandes
cada cuadrado grande est subdividido a su vez en 4x4 = 16 cuadrados pequeos.
O sea, la muestra se distribuye en 16X25 = 400 celdillas (cuadros pequeos).
La muestra, una vez dispensada entre el porta y el cubre, se deja reposar sobre la
plataforma del microscopio durante unos minutos, y se cuenta el nmero de clulas
en varias celdillas (normalmente en 16, equivalentes a uno de los cuadros grandes).
Se anota el nmero n de clulas observadas en esas 16 celdillas. Entonces, la
concentracin celular es fcil de establecer:
n x 25 x 50 x 1000 = concentracin en clulas/ml.


Ventajas: es un mtodo muy rpido
Inconvenientes: slo sirve para suspensiones relativamente concentradas (>10x10
6

cls./ml). Por debajo de este valor el nmero de clulas vistas en el campo del
microscopio es muy pequeo y poco significativo estadsticamente. En bacterias
mviles, hay que inmovilizarlas previamente, con una mezcla de alcohol y agua.

2. Recuento en preparaciones teidas: Se dispone de un porta con una excavacin
circular (de rea At) con un volumen conocido (v). Sobre esta excavacin se extiende
la muestra con asa de siembra o con micropipeta, y se fija y tie por algn colorante.
Se observa con un microscopio dotado de un juego de ocular y objetivo que delimitan
un rea de campo (Ac). Si en dicho campo se cuentan n bacterias, la concentracin de
bacterias por mililitro ser: nAt/Ac 1/v

3. Recuento proporcional de Wright: Se mezcla la suspensin bacteriana problema con
una cantidad conocida de bolitas de ltex o de hemates (clulas sanguneas =
sangre). La concentracin bacteriana se deduce de la proporcin de bacterias y
partculas observadas en el mismo campo microscpico. Este mtodo se emplea ms
frecuentemente en Virologa.

4. Contadores electrnicos de partculas (tipo Coulter): Se hace pasar una suspensin
bacteriana por un tubo capilar, entre los dos polos de una corriente elctrica. Cada vez
que por un orificio (30 mm dimetro) pasa una partcula (p. ej., bacteria) se interrumpe
la corriente, lo cual es recogido por un dispositivo de registro electrnico, que detecta el
nmero y el tamao de las partculas que van pasando. (El tamao detectado es
funcin de la intensidad del pulso de voltaje al paso de la partcula). Recientemente se
ha introducido la citometra de flujo activada por fluorescencia (FACS). Es una
sofisticada modificacin en la que las partculas a contar se marcan previamente con
un anticuerpo monoclonal anticuerpo homogneo producido por una clula hbrida
producto de la fusin de un clon de linfocitos B descendiente de una sola y nica clula
madre y una clula plasmtica tumoralu otro ligando especfico hacia alguna molcula
de superficie, unidos a su vez a un fluorocromo, una molcula que emite fluorescencia
al incidir sobre ella un haz de luz lser.

Mtodos indirectos: Son mtodos que miden el nmero de bacterias viables (que no
equivale al de totales).
1. Mtodo del nmero ms probable: Su fundamento estriba en la distribucin de Poisson:
una distribucin aleatoria de partculas en una serie de muestras iguales, en funcin
del nmero medio de partculas presentes en una suspensin (presencia y ausencia de
microorganismos).

La tcnica consiste en sembrar alcuotas de la suspensin original problema sobre un
medio lquido o slido adecuado; tras el tiempo de incubacin adecuado se anota la
proporcin obtenida de muestras donde no se haya dado crecimiento, P
0
(x = 0).


Entonces, segn la distribucin de Poisson: P
0
= e
m
y por lo tanto es fcil calcular el
valor de m: m = -lnP
0

Conteo de numero ms probable (NMP) para bacterias
http://www.uprm.edu/biology/profs/massol/manual/p4-nmpenumeracion.pdf

2. Recuento de viables en placa: Como esta tcnica ser explicada al alumno en clase, y
adems la realizar en las prcticas, remitimos a las pertinentes explicaciones "en
vivo". Es una de las tcnicas de recuento ms usadas en la rutina del laboratorio de
Microbiologa.
Precauciones:
para minimizar los errores estadsticos de muestreo (para que los resultados
san concretos y creibles), se recomienda sembrar 5 placas de cada dilucin,
porque llega haber ocasiones en donde no crece nada.
hay que usar pipetas nuevas en cada dilucin.
contar las placas donde existan entre 50 y 300 colonias.

3. Determinacin de la proporcin clulas viables/clulas totales: Si se est interesado en
conocer esa proporcin se recurre a una tcnica de microcultivos en cubreobjetos: hay
que seguir peridicamente la evolucin del crecimiento de clulas individuales y
determinar la proporcin de aquellas clulas no viables (visibles al microscopio, pero
incapaces de crecer).

4. Recuento sobre filtros de nitrocelulosa: Se usa para suspensiones diluidas de bacterias.
Se hace pasar un gran volumen de suspensin a travs de una membrana de
nitrocelulosa estril, que retiene las bacterias. Posteriormente, el filtro se deposita
sobre la superficie de un medio de cultivo slido. Las colonias se forman sobre el filtro
y se cuentan, deducindose la concentracin original en funcin del volumen de
suspensin que se hizo pasar por el filtro.

Actividad 3. Un mundo raro
Esta actividad representa uno de los mayores retos pues implica crear un mapa
conceptual (MMCC) en el cual reflejars tu dominio de los temas anteriormente vistos, al
construirlo describirs en l las relaciones entre los conceptos de la microbiologa
relacionados con las fases de crecimiento bacteriano y sus formas de medirlo, adems
de la morfologa bacteriana. Elaborar un mapa mental que ejemplifique la morfologa
bacteriana, las fases de crecimiento bacteriano y formas de medir dicho crecimiento.


En un documento de texto o archivo de imagen plasma un mapa conceptual que
contenga las siguientes caractersticas:

El mapa conceptual debe presentar una estructura arborescente que incluya los
siguientes aspectos:

1. Concepto o idea original
2. Palabras clave
3. Conectores
4. Conectivos y palabras de conexin
5. Conceptos en diferentes niveles en este caso puedes desarrollarlo mnimo en tres
niveles

De esta manera a partir del concepto o idea de origen ocurre:

6. Desprendimiento de conceptos secundarios
7. Conectores y proposiciones.- conectores son palabras o preposiciones insertas
entre dos conceptos y son tiles para producir nuevas proposiciones o
enunciados con sentido.
8. Enlaces cruzados.- son puentes entre proposiciones dentro de la arborizacin.
9. Jerarquizacin.- es el orden en ascendente-descendente en funcin de la
complejidad de los conceptos o proposiciones tratados en la arborizacin del
MMCC.

Evidencia de aprendizaje. Mi extincin

Esta actividad implica que exteriorices en un cuerpo de ideas e informacin todo lo que
hasabordado en esta asignatura. Para ello enfocars tus conocimientos en un agente
patgeno que ha trado consecuencias fatales a la especie humana, el Virus del VIH,
para lo cual investigars algunas teoras que lo caracterizan, as como propuestas
cientficas actuales para combatirlo.Como colofn incursionars en algunas ideas que te
permitan desarrollar las propias acerca de la diferencia que existe entre un
microorganismo y un virus. Con base en lo anterior, realiza lo que a continuacin se te
pide:

1. Lee los siguientes artculos:
Determinantes de la transmisin vertical del VIH en Catalua (1997-
2001): es posible su eliminacin?
Infeccin-enfermedad por VIH/SIDA
Estrategias de eliminacin del sarampin en el mundo

2. Con base en las lecturas, elabora un ensayo en un documento de texto que


contenga propuestas tericas sobre el virus del VIH y la forma de
eliminarlo.Tambin debes incluir la diferencia que existe entre el Virus VIH con
respecto a una bacteria.

3. Considera que tu documento debe contarcon los siguientes elementos:
Una extensin de por lo menos una cuartilla.
Nombre del tema.
Introduccin, desarrollo y conclusiones.
Bibliografa y ligas de pginas web consultadas.
Contenido sin ningn signo de plagio.
Tipo de letra Arial 11 e interlineado de 1.15.

4. Guarda tu actividad con la nomenclatura MTM_U1_EA_XXYZ yenvalaa tu
Facilitador(a) para recibir retroalimentacin.

Cierre de la Unidad

Como te habrs dado cuenta, la clasificacin de un microorganismo es un proceso
elaborado que toma en cuenta no solo aspectos evolutivos, anatmicos o de desarrollo, si
que tambin incorpora aspectos moleculares que te pueden aportar mayor conocimiento
sobre los diferentes procesos metablicos microbianos que puedes emplear en tus
actividades diarias en la industria de la Biotecnologa. Adems de contar con bases
slidas sobre filogenia, taxonoma y sistemtica ahora sers capaz de profundizar en el
estudio de los microorganismos ms tiles en los procesos que se llevan a cabo en el
sector donde te desarrolles y podrs elegir los microorganismos o procesos metablicos
que estos llevan a cabo que te permitan desarrollar mejor tu trabajo.

As mismo, cuentas con las bases para determinar los patrones de crecimiento te un
microorganismo , este proceso en particular es de vital importancia ya que la
productividad de una industria (por ejemplo la cervecera) est directamente relacionada
con el crecimiento del microorganismo que utilicen para un proceso determinado, ahora t
tienes las bases para determinar las tasas de crecimiento de manera directa e indirecta,
esto te permitir identificar todos los elementos que intervienen en el crecimiento de los
microorganismo y determinar acciones para mejorar este y otros procesos para obtener
resultados exitosos en tu prctica diaria.

Fuentes de consulta

Bibliografa bsica

Gonzlez,G. M. (2007) Microbiologa ambiental. Corpus.
Pidello,A. (2011) Ecologa microbiana. Corpus
Willey,J. (2009) Microbiologa Mc.Graw Hill / Interamericana


Bibliografa complementaria

Solomon, P. E., Berg, R. L. y Martin, W. D. (2008). Biologa. 8 ed. Editorial Mc
Graw Hill. 1338 pp.
Trtora, G. J., Funke, B. R. y Case, C. L. (2007). Introduccin a la microbiologa. 9
a

ed.Editorial Mdica Panamericana. pp 956.
Brooks. (2011). Microbiologa Mdica. 25 ed. Mc Graw Hill. pp 815.
Brock, Madigan, Martinko, Parker. 2004. Biologa de los microorganismos, 10 ed,
Prentice Hall
Prescott, Harley, Klein. (2004). Microbiologa, McGraw-Hill Interamericana.


Unidad 2 Microbiologa


La importancia de la Microbiologa deriva de la necesidad biolgica de estudiar los
organismos que no son visibles a simple vista, y que slo con ayuda de un microscopio se
pueden observar, pero que su presencia en diferentes ambientes naturales o en la
industria es indispensable, ya sea participando dentro de los ciclos de incorporacin de
nitrgeno, azufre y carbono, como aportando sus propiedades metablicas dentro de
algn proceso. Una de sus caractersticas importantes es que poseen la propiedad de
adaptar su medio encontrando rpidamente las condiciones ptimas para crecer y
colonizarlugares y ambientes tan variados e inimaginables que puedan existir, como la
superficie de una prtesis ya implantada en el cuerpo de un paciente, un geiser a altas
temperaturas, aguas con alto contenido en sales, las cavidades corporales de animales
una herida, un reactor, entre muchos otros.

Propsitos

El alumno comprender que los microorganismos son seres diminutos, plsticos y
adaptables, capaces de crecer en nmeros insospechados y expandirse haciendo uso de
su metabolismo tan variado y especializado; identificarn su importancia dentro del mbito
industrial y ambiental, donde incorporar los conceptos fundamentales de microbiologa,
medios de cultivo, y condiciones ptimas del crecimiento con el fin de entender el
desarrollo cualitativo de las bacterias.


Analizar el crecimiento bacteriano mediante el estudio de su fundamentacin qumica para
determinar el tipo y medio de cultivo segn los distintos criterios de anlisis de
crecimiento.

Microbiologa

La microbiologa es una rama auxiliar de la biologa dedicada al estudio de la vida
microscpica,es decir de los microorganismos de los que ya hemos hablado que
comnmente se les suele llamar microbios; podemos encontrarlos en todas partes
(ubicuos) ya que son los ms abundantes de la Tierra, El ser humano pudo darse cuenta
de su existencia y observarlos hasta la llegada del microscopio a mediados del siglo XVII.


Los primeros en visualizar la abundancia y diversidad de microorganismos a pesar de lo
rudimentario de sus instrumentos, por ejemplo, los primeros microscopios fueron Robert
Hooke y Antonie van Leeuwenhoek, observaron diferentes formas de vida microscpicas
como levaduras, algunas bacterias entre otros microorganismos presentes en el agua de
lluvia encharcada, fluidos corporales, superficies como suelos y rocas, entre otras.

Izquierda Robert Hooke y Derecha Antonie van
Leeuwenhoek

http://www.kyrene.org/staff/sreed/Scien
ce/Scientist/Webpages/2009_10
/Period%204/Leeuwenhoek_Ant
on%20van/index.htm

2.1 Definicin de Microbiologa

La Microbiologa etimolgicamente proviene delos vocablos griegosmicro que significa
pequeo, bios que significa vida y logosque quiere decir estudio o tratado; por lo tanto es
la ciencia que estudia los seres vivos muy pequeos, cuyo tamao se encuentra por
debajo del poder resolutivo del ojo humano, por lo que se requiere el empleo del
microscopio. Abarca una enorme heterogeneidad de tipos estructurales, funcionales y
taxonmicos: desde partculas no celulares como los virus y hasta organismos celulares
tan diferentes como las bacterias, los protozoos y parte de las algas y de los hongos.

Campo de estudio de la microbiologa

http://smilejud
ith.blogspot.c
om/2010/10/
microbiologia.
html

Podemos definir, pues, a los microorganismos como seres de tamao microscpico
dotados de individualidad, con una organizacin biolgica sencilla, y que necesitan para
su estudio una metodologa propia y adecuada a sus pequeas dimensiones. Las
caractersticas estructurales, su fisiologa bioqumica, gentica, taxonoma, ecologa, entre
otras son aspectos del estudio de la microbiologa.


Tambin se ocupa del estudio de las diferentes actividades microbianas y su relacin con
el ser humano, ya que pueden acarrear consecuencias tanto benficas, como
perjudiciales; por esta razn se estudian los nichos ecolgicos de los correspondientes
agentes, sus modos de transmisin, los diversos aspectos de la microbiota patgena en
sus interacciones con el hospedador, los mecanismos de defensa de ste, as como los
mtodos desarrollados para combatirlos y controlarlos, no olvidndose de aquellas que
reportan beneficios por medio de los procesos microbianos para la obtencin de materias
primas o elaboradas, y de su modificacin y mejora racional con vistas a su imbricacin
en los flujos productivos de las sociedades.

La microbiotacomnmente denominada flora nativa de un cuerpo sano (los integrantes de
esta microbiota son bacterias), son un conjunto de microorganismos que intervienen
benficamente en los procesos vitales como la digestin de alimentos, la sntesis de
vitaminas en el intestino, proteccin frente a patgenos, entre otras.

A continuacin se muestra un cuadro de las bacterias consideradas flora normal en
humanos y su localizacin anatmica:

Bacterias Piel Conjuntiva Nariz Faringe Boca Intestino
Grueso
Uretra Vagina
Staphylococcus
epidermidis
++ + ++ + ++ + ++ +
Staphylococcus
aureus
+ +/- + + + ++ +/- +
Streptococcus
mitis
- - - + ++ +/- + +
Streptococcus
salivarius
++ ++ -
Streptococcus
mutans
+ ++
Streptococcus
faecalis
+/- + ++ + +
Streptococcus
pneumoniae
+/- +/- + + +/-
Streptococcus
pyogenes
+/- +/- + + +/- +
Neisseriae + + ++ + + +
Neisseria
meningitidis
+ + ++ +
Veillonellae + +/-
B. Coliformes (E.
coli)
+/- +/- +/- + ++ + +
Proteus mirabilis +/- + + + + + +
Pseudomonas +/- +/- + +/-


aeruginosa
Haemophilus
influenzae
+/- + + +
Bacteroides + + ++ + +/-
Espiroquetas + + +
Lactobacilos + ++ + ++
Clostridios +/- ++
Clostridium
tetani
+/-
Corinebacterias ++ + ++ + + + + +
Micobacterias + +/- +/- + +
Actinomicetos + +
Micoplasmas + + + +/- +
++ = ms frecuente; + = comn; +/- = irregular, ocasional o
transitorio.Copyright 2011 Mama.com.mx Derechos reservados

Localizacin de la flora normal del cuerpo humano
http://rantes22.blogspot.com/
2011/04/la-flora-bacteriana-
intestinal-podria.html

Finalmente, la Microbiologa se ocupa de todas las tcnicas y metodologas destinadas al
estudio experimental, manejo y control de los microorganismos.

2.1.1. Microbiologa Ambiental

La microbiologa ambiental abarca el estudio de los microorganismos que habitan o
existen en ambientes naturales o artificiales. El origen de los trabajos cientficos en este
campo se basa en las observaciones de Antonie van Lewenhoeck (1677). Los
microorganismos pueden existir como clulas aisladas o como agregados celulares. Las
clulas microbianas aisladas son capaces de llevar a cabo sus funciones vitales de
crecimiento, generacin de energa y reproduccin independiente de otras clulas.


Adems pueden alcanzar una elevada densidad poblacional en cultivos y son ms fciles
de manipular para estudios genticos como la manipulacin de su ADN.

La microbiologa, adems de ser una ciencia que auxilia a la biologa, es una ciencia que
proporciona herramientas para determinar la naturaleza de los procesos caractersticos
de la vida en los que intervienen algunos microorganismos, enfocndose en la resolucin
de muchos problemas prcticos que son importantes en medicina, agricultura y la
industria.

La fertilidad de los suelosdepende en gran medida de los procesos que algunos
microorganismos llevan a cabo, por entre ellos la fijacin biolgica del nitrgeno
atmosfrico, este proceso consistente en la reduccin de N
2
(nitrgeno molecular) a
NH
4
+
(amonio) a cargo de la enzima nitrogenasa, es despus de la fotosntesis, la ruta
metablica ms importante para el mantenimiento de la vida en la Biosfera.

Curiosamente, este proceso crucial slo puede ser llevado a cabo por unos pocos
procariotas; los microorganismos fijadores de nitrgeno no constituyen un grupo
taxonmico homogneo, la nica caracterstica que comparten es la presencia de la
enzima nitrogenasa en sus procesos metablicos, dichas bacterias comprenden

organismos fototrofos, como bacterias pertenecientes a la familia Rhodospirillaceae,
Clorobiaceae y Cianobacteriae; organismos quimioautotrofos, como bacterias de los
gneros Thiobacillus, Xanthobacter y Desulfovibrio y organismos heterotrofos como las
bacterias petenecientes a la familia Frankiaceae, al grupo Rhizobiaceae y a los gneros
Azotobacter, Enterobacter, Klebsiella y Clostridium.

Ciclo de nitrgeno donde intervienen las bacterias
http://www.porquebiotecn
ologia.com.ar/educacion/
cuaderno/ec_24.asp?cua
derno=24


Estos organismos pueden realizar la fijacin biolgica de
nitrgenoindependientemente o estableciendo relaciones simbiticas con otros
organismos; estas formas simbiticas son entre las rizobiceas y las leguminosas,
que antiguamente eran aprovechadas para la renovacin de los suelos mediante la
prctica de la rotacin de cultivos.

Ubicacin de las bacterias fijadoras de nitrgeno
http://www.porq
uebiotecnologia.
com.ar/educacio
n/cuaderno/ec_2
4.asp?cuaderno
=24

2.1.2. Microbiologa Industrial

A la Microbiologa Industrial tambin se le ha denominado biotecnologa microbianase
puede definir como el mbito de la microbiologa orientado a la produccin de elementos
de inters industrial mediante procesos en los cuales intervenga, en algn paso, un
microorganismo.

Por ejemplo, la produccin de: alimentos (fermentacin del pan o cerveza) y suplementos
dietticos (como los cultivos de algas, vitaminas o aminocidos), biopolmeros, como el
xantano, alginato, celulosa, cido hialurnico, polihidroxialcanatos;
3
biorremediacin de
entornos contaminados
4
o tratamiento de desechos;
5
as como la produccin de principios
activos de inters en medicina, como la insulina y hormona del crecimiento o de
sustancias implicadas en el diagnstico.

La microbiologa industrial es tan antigua como la manipulacin de alimentos fermentados
como el vino, pan o yogur. No obstante, durante el siglo XX su aplicacin se diversific
con el nimo de generar un gran nmero de compuestos qumicos complejos de forma
ms sencilla y barata que mediante sntesis orgnica; este hecho se debe a la enorme
versatilidad metablica de los microorganismos que, frecuentemente, son capaces de
producir los compuestos deseados o sus precursores. Por ejemplo, la microbiologa
industrial ha sido clave en la produccin de penicilinas, naturales, como la penicilina G
(esto es, producidas de forma totalmente microbiolgica) o semisintticas, como la
meticilina, que requieren la purificacin de un intermediario que luego ha de modificarse


qumica o enzimticamente. Finalmente, la tecnologa del ADN recombinante ha
permitido, con un enfoque de ingeniera gentica, diversificar an ms la disciplina,
llegando a producirse protenas humanas mediante microorganismos transformados con
genes humanos.
8

mbito industrial de la microbiologa
http://luisita28.blogspot.com/,
http://sociologiarural.skyrock.c
om/,

En la industria de los lcteos, frecuentemente se utilizan bacterias de tipo Gram (+)
anaerobias, se caracterizan por una gran produccin de acido lctico, se incluyen los
gneros Lactobacillus,Streptococcus,Leuconostoc y Pediococcus. Por ejemplo la
acidificacin de la leche llevada a cabo por Streptococcus lactis y cremoris, la
produccin del yogurt y quesos de pasta cocida Steptococcus thermophilus.

Lactobacillus casei Shirotay algunos productos lcteos
Obtenida de: www.sciencephotolibrary.com
http://www.sciencep
hoto.com/search?su
btype=keywords&se
archstring=lactobacill
us&oldsearchstring=
bacterias&matchtype
=&sort_results=&me
dia_type=images&lic
ense=both&channel
=sc

Actividad 1. Con meln o con sanda

En esta actividad comparars entre los diferentes mbitos de estudios de la
microbiologa en las ramas de la microbiologa ambiental e industrial.
1.- De las diferentes ramas de la microbiologa realiza un cuadro comparativo haciendo
nfasis en la importancia de cada rama.
2.- Escoge un ejemplo de aplicacin de cada una de las ramas de la microbiologa y
menciona que pasara si no se llevase a cabo tal proceso.
3.- Apoya tu trabajo con imgenes y s cuidadoso con la ortografa


4.- Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U2_A1_XXYZ y envalo a tu
facilitador (a) mediante la seccin de tareas.
contenidos, ya que tu facilitador (a) puede detectar esta situacin sin dificultad; tu
formacin exige que todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio
de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte
directamente en tu prctica profesional.

2.2. Crecimiento microbiano

En un sistema biolgico se define al crecimiento como el aumento ordenado de las
estructuras y los constituyentes celulares de un organismo; por ejemplo cuando se
siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los mismos comienzan a
dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta el medio de cultivo para
"fabricar" nuevos microorganismos. Este proceso contina hasta que algn nutriente del

medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el crecimiento se detiene. El aumento de la
masa celular producido por acumulacin de productos de reserva no constituyen
crecimiento.

Visualizacion del crecimiento en caja petri y en el microscopio
http://graficas.explora.cl/
otros/biotec/lacto.html

2.2.1. Crecimiento Individual

Consiste en el aumento del tamao y peso de las clulas que precede a la divisin celular.
Esta divisin implica tambin un aumento en el nmero de clulas (proliferacin de la
poblacin). Uno de los procesos que comnmente experimentan las bacterias para
dividirse es la fisin binaria, a travs de la cual una clula madre al alcanzar un
determinado volumen se divide dando dos clulas hijas. El proceso de fisin binaria
consiste en la autoduplicacin del material hereditario seguido de la reparticin en las dos
clulas hijas, las que se separan por estrangulamiento de la membrana celular y
formacin de la pared celular. Podemos referirnos mas especficamente al crecimiento
individual cuando realizamos el famoso experimento de germinar una semilla de frijol o de
maz, al cabo de unos cuantos das observamos que comienzan a brotar las partes que
van a conformar una planta madura.


Divisin celular de una bacteria mediante el proceso de fisin
binaria
http://es.wikipedia.org/wiki/
Archivo:Binary_fission_es.
svg
http://www.unavarra.es/ge
nmic/microgral/Tema%200
2.-
kj%20Cultivo%20de%20mi
croorganismos.pdf

2.2.2. Crecimiento Poblacional

Es un crecimiento respecto al nmero de clulas (proliferacin de la poblacin). Se
conoce como tiempo de duplicacin generacional al tiempo en que tarda una poblacin en
duplicar su nmero. Los tiempos de duplicacin varan segn el microorganismo del que
se trate. Por ejemplo, para obtener la primera generacin de Eschericha coli (bacteria
causante de infecciones intestinales) tarda en promedio12.5 min., Rhizobium meliloti
(bacteria que fija nitrgeno atmosfrico) 1.8 hr y Nitrobacter sp (bacterias que fijan
nitrgeno atmosfrico) aprox. 20 hr.

Las poblaciones microbianas raramente mantienen un crecimiento exponencial
prolongado. Si ello ocurriera en poco tiempo la tierra estara cubierta de una masa


microbiana mayor que la de la tierra misma. El crecimiento est normalmente limitado por
la disponibilidad de nutrientes y por la acumulacin de productos del propio metabolismo
microbiano que en altas concentraciones resultan txicos para la poblacin.

2.3. Cultivo de Microorganismos

Un medio de cultivo, es un recurso que sirve para lograr la multiplicacin de
microorganismostales como bacterias, hongos y parsitos en el laboratorio, la finalidad de
un medio de cultivo es proporcionar el ambiente ptimo para favorecer el crecimiento del
microorganismo deseado.

Los cultivos son empleados en los campos de la medicina humana y veterinaria como
mtodosde propagacin para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que
causan enfermedades. Por ejemplo nuestras manos que estn en continuo contacto con
diversas superficies que contienen un sinfn de microorganismos, por eso se recomienda
lavarse antes de cada alimento y despus de ir al bao.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura ptima ajustada a las necesidades

particlares del microorganismo, al igual que la humedad y presin de oxgeno, as como
un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los
nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
Se recomienda por ejemplo lavarse las manos con frecuencia para evitar que la piel
adquiera caractersticas ideales para alojar microorganismos que puedan causar algn
dao.

Medio muy ptimo el que crecen
bacterias
http://cienciaslacoma.blogspot.com/2010/09/mi
croorganismos-en-nuestras-manos.html

2.3.1. Tipos de Cultivo

Un medio de cultivo para bacterias, es una mezcla de sustancias que permiten el
crecimiento de las bacterias en el laboratorio. Un microorganismo se puede cultivar o
sembrar en medio lquido o en medio slido. Los medios de cultivo deben estar
enriquecidos con distintos nutrientes que van, desde carbohidratos simples (azcares),


protenas, lpidos (grasas) hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de
caldo de carne, as como los requerimientos que nosotros necesitamos para crecer. Para
aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos
de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se
multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria
individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas
de millones de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez
en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.

Izquierda medio de cultivo
slido y derecha medio de
cultivo liquido.

http://es.wikipedia.org/wiki/Cultivo_(microbiolog%C3%ADa)

Se pueden clasificar segn sus caractersticas fsicas en: slidos, semislidos y lquidos.
La diferencia es slo la cantidad de una sustancia que llevan para solidificar (agar):

Lquidos: se preparan todos los constituyentes en una disolucin acuosa (agua
destilada). Ya disueltos, se reparten en matraces o tubos de ensayo que tapamos
y esterilizamos con calor,proporcionan nutrientes a las bacterias y, adems, es
ms fcil determinar sustancias producidas por las bacterias porque es ms fcil
purificar sustancias en medio lquido. Por ejemplo el medio de cultivo lquido de
cerebro corazn infusin es apto para el crecimiento de bacterias aerobias y
anaerobias como los estreptococos y neumococos.

Forma de esquematizar un medio de cultivo
lquido
http://www.google.com.m
x/imgres?q=cultivos+bact
erianos+en+tubos+de+en
saye&um=1&hl=es&biw=
1280&bih=593&tbm=isch
&tbnid=51jS9cBFRnSynM
:&imgrefurl= y
http://www.slideshare.net/
breid/pruebas-
bioqumicas-y-medios-de-
cultivo-en-bacterias


Slidos: Se procede del mismo modo que con los medios lquidos, pero, al disolver en
agua destilada, aadimos de 15 a 20 g/l de agar. Lo esterilizamos y lo depositamos en
placas o cajas petri cuando est a unos 60 C y cuando alcance los 50 C ya sern
slidos. El agar nutritivo es utilizado como medio de cultivo slido general para
obtener el crecimiento de bacterias con pocas exigencias nutritivas, otro medio el agar
Mac Conkey que se utiliza para el crecimiento d bacilos Gram negativos.

Forma de esquematizar un medio
de cultivo slido

http://www.stockphotos.mx/image.php?img_id=4
367343&img_type=1

Semislidos: su apariencia es de gel. Slo llevan 5 g/l de agar, se utilizan poco,
por ejemplo para determinar la movilidad bacteriana. Si se hace una siembra y la
bacteria es inmvil, la bacteria crecer en la cara interna del tubo donde hicimos la
siembra, pero si la bacteria es mvil crecer alrededor de ese tubo.

Actividad 2. Buen provecho.
Esta actividad es un gran reto ya que implica crear un mapa conceptual (MMCC) en el
cual reflejars tu dominio del tema anterior, al construirlo describirs en el las relaciones
entre los tipos de medios de cultivo y su aplicacin en el mbito microbiolgico.
1.- concepto o idea original
2.- palabras clave
3.- conectores
4.- conectivos y palabras de conexin
5.- conceptos en diferentes niveles en este caso puedes desarrollarlo mnimo en tres
niveles
1.- desprendimiento de conceptos secundarios
2.- conectores y proposiciones.- conectores son palabras o preposiciones insertas entre
dos conceptos y son tiles para producir nuevas proposiciones o enunciados con sentido
3.- enlaces cruzados.- son puentes entre proposiciones dentro de la arborizacin


4.- Jerarquizacin.- es el orden en ascendente-descendente en funcin de la complejidad
de los conceptos o proposiciones tratados en la arborizacin del MMCC.

El agar es un polisacrido obtenido de la pared celular de varias especies de algas rojas
de los gneros Gelidium, Euchema y Gracilaria, la palabra agar viene del malayo agar-
agar, que significa jalea; es un elemento solidificante empleado frecuentemente para la
preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua
hirviendo y se solidifica al enfriarse, no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y
no es atacado por aquellas que crecen en l.

Agar
http://www.slideshare.net/breid/pruebas-
bioqumicas-y-medios-de-cultivo-en-
bacterias

La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes
bacterias provocan su licuacin.
Los medios de cultivo deben contener agua (H
2
O), carbono (C), nitrgeno (N), azufre (S),
fsforo (P), calcio (Ca), sodio (Na), magnesio (Mg), molibdeno (Mo), cobre (Cu) y zinc
(Zn); es decir como si quisiramos preparar un pastel necesitamos, leche, harina, huevo,
mantequilla, saborizantes; entre otros, si alguno de estos faltara el paste no se podra
terminar. Lo mismo sucede con los medios de cultivo, si falta algn nutriente no podr
propiciar el crecimiento de los microorganismos.

Ingredientes que debe contener un medio:

http://www.slideshare.net/guested7523/cre
cimiento-microbiano

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos
de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor
nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos


que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el
crecimiento de los microorganismos menos resistentes.
El oxgeno, como constituyente del agua, es esencial para todos los organismos. Sin
embargo, el oxgeno molecular es requerido de diferentes maneras por los
microorganismos.

Microorganismos aerobios: Requieren de manera obligada del oxgeno necesariamente
para llevar a cabo su metabolismo. Existen dos grupos los organismos aerobios estrictos
que requieren oxgeno en concentraciones similares a la atmosfrica (20%) y los aerobios
microaerfilos que requieren oxgeno en concentraciones inferiores a las de la atmsfera
(5-10%).

Microorganismos anaerobios: son aquellos organismos que no requieren de oxgeno para
llevar a cabo sus funciones metablicas, pudiendo ser de tres tipos: anaerobios
facultativos aquellos que crecen en ausencia y en presencia de oxgeno pero crecen
mejor con oxgeno, anaerobios estrictos aquellos que no solo no requieren oxgeno, sino
que su presencia los destruye y los anaerobios aerotolerantes son aquellos que no
requieren oxgeno pero lo toleran; no mueren en su presencia.

Medios de Cultivo: en funcin de su composicin, distinguimos dos grupos de medios de
cultivo:

Medios sintticos o definidos: aquellos que contienen cantidades precisas de
sustancias orgnicas e inorgnicas puras disueltas en agua destilada.

Medios complejos o indefinidos: contienen sustancias altamente nutritivas, pero de
composicin indefinida. Suelen llevar sustancias como extractos de carne,
peptona, extractos de levadura, bovril; la ventaja de este medio de cultivo es que
contiene muchos factores de crecimiento, por lo que podemos cultivar en l gran
nmero de microorganismos. El inconveniente es que no conocemos lo que el
microorganismo est consumiendo,ejemplos: Caldo nutritivo: extracto de carne +
peptona + agua, Agar nutritivo: extracto de carne + peptona + agua + agar.

Clasificacin de los medios de cultivo

Generales: son medios que requieren contenidos mnimos de C, N, S, P, energa,
oligoelementos, pH adecuado.

Enriquecidos: se le llama as porque algunos microorganismos no son capaces de
desarrollarse en medios de cultivo generales; para lograrlo es necesario enriquecerlo
con sustancias nutritivas como la sangre, el suero, extractos de tejidos animales, tales
medios son enriquecidos, y los microorganismos que crecen en ellos son


microoorganismos exigentes o fastidiosos; un ejemplo de este tipo de medio de cultivo
es el de agar-sangre.

Selectivos: aquellos que contienen uno o varios compuestos que inhiben el
crecimiento de un determinado tipo de microorganismos y no afectan a otros tipos; por
ejemplo el cristal violeta inhibe las Gram +. Otra manera es modificar la fuente de
carbono; si sustituimos la glucosa por maltosa, seleccionamos aquellos
microorganismos capaces de digerirla.

Diferenciales: son medios que contienen distintos compuestos qumicos o indicadores
sobre los que determinados microorganismos adquiere coloraciones especficas o
reaccionan de una manera determinada. Ejemplo: Agar levine tiene colorantes
especiales (eosina y azul de metileno) que nos permiten diferenciar a las colonias que
viven en el medio. Escherichia coli forma colonias de color verde claro, mientras que
E. enterobacter forma colonias de color rosa salmn.

De transporte: su nica funcin es mantener vivas a las bacterias desde la toma de la
muestra hasta su llegada al laboratorio. Les proporciona humedad (agar) y elimina los
productos txicos (carbono activo).

Actividad 3.T eres para m

Discute acerca de la relacin de las condiciones naturales en donde se desarrollan los
microorganismos (microambiente) en relacin con los medios de cultivo.
Ejemplo: Agar sanguis. Imita algunas de las condiciones microambientales presentes
dentro del torrente sanguneo.
De acuerdo a los temas vistos en clase discute porque son importantes tener una serie
de condiciones ambientales ptimas para la preparacin de medios de cultivo, menciona
que pasara si se modificara una de tales condiciones.

Medios de Cultivo de uso Habitual

Existen un sinfn de medios de cultivo, la mayora de ellos son especficos para que
crezca una bacteria en comn, los ms importantes se enuncian en la siguiente tabla:

Caldo comn Agar-hgado Medio SIM
Caldo de extracto de carne
bovina
Agar-patata glicerinado Medio cerebral de Hibler
Caldo exento de azcares Medio biliado-verde brillante Medio al huevo de Dorset
Agar Tiosulfato, Citrato, Sales
de bilis, Sacarosa (TCBS)
Agar eosina azul de metileno
(EMB)
Medio al suero hemtico de
Loeffler
Prueba de Voges-Proskauer Agar verde brillante Agar huevo glicerinado
Caldo Suero Caldo formiato-ricinoleato Medio de Lowenstein-Jensen


Agua-suero de Hiss Agar-desoxicolato Medio sinttico de Dorset
Solucin Dunham Caldo base tetrationato Agar-sangre-glucosa-cistina
Caldo triptsa fosfatado Agar citrato de Simmons Medio #110 para estafilococos
Leche Caldo urea Agar Bacto-Middlebrook 7H10
Caldo de enriquecimiento para
PPLO
Medio para la produccin de
toxina por estafilococos
Agar Bacto-Middlebrook OADC
Enrichment
Agar-nutritivo Agar SS (Salmonella-Shigella) Agar oleico base Bacto-Dubos
Agar-suero Agar-urea base Agar de endo
Agar-sangre Medio descarboxilasa base Medio al tioglicolato
Medio de Edwards Agar fenilalanina Patata
Agar-sangre violeta-azida-
sdica
Agar nitrato Otros medios vegetales
Medio CIN para Yersinia Agar acetato de plomo Agar soya tripticasa
Agar-chocolate Agar hierro de Kliger Agar marino Zobell
Agar cetrimida Gelatina nutritiva Agar Mac Conkey
Caldo con carbohidratos Agar Mueller-Hinton Medio Campy

A continuacin se enuncian caractersticas de algunos medios:

Agar Eosina y Azul de Metileno (EMB)

Es un medio utilizado para el aislamiento y diferenciacin de bacilosentricos Gram
negativos. Este medio tambin es conocido como Agar EMB por sus siglas en ingls.
Permite la diferenciacin de las colonias fermentadoras de lactosa de las no
fermentadoras. Lasacarosa est incluida en el medio para detectar a los miembros del
grupo coliforme que fermentan ms rpidamente la sacarosa que la lactosa.

El envase donde viene el medio de cultivo contiene Digerido Pancretico de Gelatina 10.0
g/L, Lactosa 5.0 g/L, Sacarosa 5.0 g/L, Fosfato Dipotsico 2.0 g/L, EosinaY 0.4 g/L, Azul
de Metileno 0.065 g/L, Agar Bacteriolgico 15.0 g/L a un pH de 7.2 0.2.

Se prepara suspendiendo 36 g del medio en un litro de agua purificada, calentar con
agitacin suave hasta su completadisolucin y hervir durante un minuto. Esterilizar en

autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una
temperatura entre 45-50C y vaciar en placas de Petri estriles, recolectar las muestras y
sembrarlas tan pronto lleguen al laboratorio, sembrar las placas por estra, incubar las
placas a 35- 37C durante 18 a 24 horas y observar el crecimiento.
Las colonias de Salmonella y Shigella son translcidas, de color mbar o incoloras. Los
coliformes queutilizan la lactosa y/o sacarosa producen colonias de color azul a negro con
centros obscuros y brillometlico. Otros coliformes como Enterobacter presentan colonias
mucosas de color rosa. Las cepas deEnterococcus faecalis son parcialmente inhibidas.


Medio de cultivo Agar EMB y colonias bacterianas de
Enterobacter aerogenes
http://www.instrumentalm
edico.com/productos/me
dios-de-cultivo-
deshidratados/agar-
eosina-azul-metileno-
emb-levine-
500ghttp://archive.microb
elibrary.org/ASMOnly/det
ails.asp?id=2553&Lang

Agar Mueller Hinton:

Es un medio utilizado para realizar las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana
enmicroorganismos aerbicos por el mtodo de Bauer-Kirby. Este medio tambin es
conocido como AgarM-H. Se llevan a cabo pruebas desusceptibilidad a antibiticos, con
este medio se han llevado a cabo una gran cantidad de estudios sobre
susceptibilidad antimicrobiana.

En este medio la infusin de carne y la peptona de casena proveen la fuente de
nitrgeno, vitaminas,carbn y aminocidos. El almidn es agregado para absorber
cualquier metabolito txico y el agar esadicionado como agente solidificante. Contiene
infusin de carne 300.0 g/L, almidn. 1.5 g/L, peptona de casena H 17.5 g/L, agar
bacteriolgico 17.0 g/L a un pH de 7.4 0.2.

Agitacin suave hasta su completadisolucin y hervir durante un minuto, esterilizar en
autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15minutos. Dejar enfriar a una
temperatura entre 45-50 C y vaciar en placas de Petri estriles. Para obtenerdesarrollo
de Neisseria enfriar el medio a 45-50 C y agregar sangre de borrego desfibrinada estril
al 5%calentada a 80 C. Para realizar pruebas de oxacilina y meticilina con estafilococcos
el medio deber sersuplementado con 2% de cloruro de sodio.

Error! Referencia de hipervnculo no vlida.
Editar de la web
http://www.azuld
iagnosticdb.com
/upload/index.ph
p?route=product
/product&produc
t_id=1366 y
http://atlas.med
micro.info/index.
php?jazyk=en&s


Agar Mueller-Hinton y una colonia de Pseudomonas aeruginoses ekce=1&podsek
ce=8

Caldo nutritivo:

Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de
microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso est descripto en
muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de
importancia sanitaria.

Medio no selectivo, contiene pluripeptona y extracto bacteriano. Puede ser utilizado
adems, como pre-enriquecimiento en la bsqueda de Salmonella spp. a partir de
alimentos, ya que permite recuperar clulas de carne que constituyen la fuente de
carbono y nitrgeno necesarias para el adecuado desarrollo daadas, diluir metabolitos
txicos y sustancias inhibitorias. Contiene pluripeptona 5.0g/L y extracto de carne 3.0g/L a
pH final: 6.9 0.2. Se prepara empleando 8 g de polvo por cada litro de agua destilada,
calentar hasta disolver, distribuir y esterilizar en autoclave 118-121 C durante 15 minutos,
dejar enfriar y sembrar los microorganismos por inoculacin directa incubndose despus
en aerobiosis a 35-37C durante 24 horas.

Envase de medio de cultivo de caldo nutritivo
http://www.jampar.com.pe/product/detalle/
013010079.html

Agar Hierro de Kliger:

Es un medio que se emplea para la diferenciacin de cultivos puros de bacilos
Gramnegativos con base en su capacidad para fermentar la dextrosa y la lactosa y la
produccin de sulfuro dehidrgeno. Presenta extracto de levadura y peptonas que fungen
como fuentes de nitrgeno, vitaminas y minerales, el sulfato frrico y el tiosulfato son
indicadores de la produccin desulfuro de hidrgeno.


Tambin tiene cloruro de sodio que ayuda a mantener la presin osmtica. Funciona
comoagente solidificante. Contiene una mezcla de peptonas 20g/L, cloruro de sodio
5.0g/L, lactosa 10.0g/L, tiosulfato de sodio 0.5g/L, dextrosa 1.0g/L, citrato de hierro y
amonio 0.5g/L, rojo de fenol 0.025g/L, agar bacteriolgico 15.0g/L, a un pH de 7.4 0.2

El mtodo de preparacin del medio, es suspender 52 g del medio en un litro de agua
destilada, calentar con agitacin suave hasta su completadisolucin y hervir durante un
minuto, dispensar en tubos de vidrio, tapar y esterilizar en autoclave a121C (15 libras de
presin) durante 15 minutos, dejar enfriar en posicin inclinada, el color del medio
preparado es rojo y se suele colocar en tubos para la siembra de microorganismos.
Posteriormente para la siembra tomar una colonia bien aislada a partir de un medio slido,
inocular los tubos inicialmente por picadura en el fondo del tubo (de 3 a 5 mm) y
posteriormentepor estra en la superficie, incubar los tubos con las tapas flojas a 35- 37C
durante 18 a 48 horas, leer los tubos para la produccin de cido en el fondo y la
superficie, as como la produccin degas y sulfuro de hidrgeno.

Los resultados se leen una superficie alcalina y un fondo cido (rojo/amarillo) indica
fermentacin solo de la dextrosa, una superficie y fondo cido (amarillo/amarillo) indica la
fermentacin de dextrosa y lactosa, una superficie y fondo alcalino (rojo/rojo) indica que
no hubo fermentacin de ninguno de los carbohidratos, la presencia de burbujas o
fracturas en el medio indica la produccin de gas, la presencia de un precipitado negro
indica la produccin de sulfuro de hidrgeno.

Formas en las que se visualizan resultados de la
siembra de microorganismos en agar Hierro de kliger
http://www.slideshare.net/roberch
avez/medios-de-cultivo-y-
pruebas-bioquimica-presentation


Caldo triptosa fosfatado:

Medio que sirve para propsitos generales, til para el cultivo de bacterias
nutricionalmente exigentes, especialmente Streptococcus spp., a partir de diversas
muestras. En el medio de cultivo, la triptena aporta los nutrientes necesarios para el
adecuado desarrollo de microorganismos. La glucosa es el hidrato de carbono
fermentable. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el fosfato disdico otorga
capacidad buffer.Este medio de cultivo, es utilizado para el crecimiento de bacterias
nutricionalmente exigentes. Tambin puede agregarse como adyuvante a cultivos
celulares, y permite el agregado de agar, sangre o acida sdica para ser utilizado en
determinados propsitos. Contiene triptosa 20 g/L, glucosa 2.0 g/L, cloruro de sodio 5.0
g/L, fosfato disdico 2.5 g/L a un pH 7.3 0.2. Se siembra directamente, a partir del
material de estudio, incubndose en aerobiosis, a 35-37 C, durante 18-24 horas.

Agar Salmonella-Shigella:

Tambin conocido como Agar SS, es utilizado para el aislamiento de especiesde
Salmonella y Shigella a partir de muestras clnicas y de alimentos.El Agar Salmonella
Shigela tiene un desempeo superior a otros medios para el aislamiento de especies
deSalmonella y Shigella.

En este medio las sales biliares #3.3 y el verde brillante actan como inhibidores de
bacilos Grampositivos, de la mayora de bacilos coliformes y del swarming en Proteus
spp., mientras que permiten elcrecimiento de Salmonella spp. El tiosulfato de sodio y el
citrato frico permiten la deteccin de laproduccin de H
2
S (sulfuro de hidrgeno). La
lactosa proporciona la fuente de carbohidratos, el rojo neutro y el verde brillanteactan
como indicadores de pH y el agar es agregado como agente solidificante, acta a un pH
de 7.0 0.2C

Para prepararlo se suspenden 60 g del medio en un litro de agua destilada, calentar con
agitacin suave hasta su completadisolucin y hervir durante un minuto, enfriar a una
temperatura entre 45-50 C y vaciar en placas Petriestriles. No esterilizar en autoclave.
Para la siembra se recolectan las muestras en contenedores estriles o con hisopos
estriles transportados en unmedio de transporte, sembrar las muestras por el mtodo de
la estra para obtener colonias aisladas, incubar las placas a 35-37 C durante 24 a 48
horas y examinar el crecimiento.

Algunas cepas de Shigella spp. son inhibidas en este medio por lo que es recomendable
utilizarmedios adicionales.Las enterobacterias pueden ser diferenciadas en base a su
capacidad de fermentar la lactosa. Lasespecies de Salmonella y Shigella son no
fermentadoras de la lactosa y forman colonias incoloras en elAgar SS.


Las especies de Salmonella que son productoras de sulfuro de hidrgeno desarrollan
colonias concentro obscuro. Los coliformes son parcialmente inhibidos. E. Coli produce
colonias de color rosa a rojo y puedenpresentar una zona de precipitado. Las colonias de
Enterobacter aerogenes son cremosas de color rosa.Citrobacter y Proteus spp. Pueden
crecer produciendo colonias con centros de color gris o negro debido ala produccin de
H
2
S. Enterobacter faecalis es parcialmente inhibido presentando colonias incoloras.

Medio de cultivo Agar SS y micrografa electrnica de colonias
bacterianas de Salmonella spp.

Como se preparan los medios

Los medios de cultivo, siempre deben prepararse utilizando agua destilada (salvo el
Marino). Es necesario ajustar siempre el pH. Todos los utensilios deben estar
perfectamente limpios. Todos los medios deben esterilizarse.
Los medios se preparan en matraces cnicos con tapa. Se pesa la cantidad de medio
requerida, se disuelve o suspende en el agua. Se ajusta el pH. Se esteriliza a 121C por
20 min. Se espera a que enfri (42C) Servir 20 ml aprox. en cada caja de Petri en un
rea estril para evitar contaminacin de los medios; de preferencia limpiar el rea con
alcohol y tener cerca un mechero.

Pasos para elaborar un medio de cultivo en cajas petri y en tubos
http://ocwus.us.es
/produccion-
vegetal/sanidad-
vegetal/tema_22/
page_09.htm


Esterilizacin

Hmeda, autoclave (como una olla de presin).
Seca, horno
Gaseosa: xido etileno, formaldehido o perxido (H
2
O
2
).
Filtracin: membranas de 0.45 y 0.22 m.

Autoclaves para esterilizar medios de
cultivo comnmente usadas
http://www.figursa.com/autoclaves.php

Mtodo de siembra por agotamiento o en estra

Se necesita una caja o placa petri en la cual se coloca el medio de cultivo y se procede a
sembrar una muestra ya sea slida o lquida, se recomienda el uso de un asa de platino
para realizar la siembra.
La metodologa a seguir es como se esquematiza en la figura siguiente donde:

(a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero hasta que tenga
tonalidad del rojo vivo,

(b) introducirla en la suspensin bacteriana u objeto para recoger una muestra,

(c) sembrar haciendo estras sobre la superficie de un medio slido en una placa Petri, y

(d) volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un
segundo grupo de estras en una regin nueva de la placa. Repetir el proceso una tercera
y una cuarta vez, hasta conseguir que los grupos de clulas se diluyan y se separen
clulas aisladas y

(e) despus de la incubacin, se desarrollan colonias aisladas. Para estar seguro de que
el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una colonia aislada y sembrar
por estras una segunda placa. Para que los microorganismos crezcan se incuba a 37 C
durante 24 horas y, en la primera zona, habr un amasijo de clulas. En la segunda, parte


de la primera zona estar mejor extendida, y en la tercera y en la 4 mejor an. Si
tomamos una colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un cultivo puro.

Forma de sembrar en caja petri con medio de cultivo slido.
Editar de la web http://bioservice77.obolog.com/esterilizacion-calor-
cultivo-luz-microrganismos-335412

Mtodo de siembra en tubo

A diferencia del cultivo en placa se necesitan tubos bacteriolgicos estriles, los cuales
pueden contener tanto medio de cultivo lquido como slido.
El mtodo de siembra es tomando un asa de platino y esterilizarla por flameado en la
llama de un mechero hasta que tenga tonalidad del rojo vivo, introducirla en la suspensin
bacteriana u objeto para recoger una muestra, sembrar haciendo una picadura cuando el
medio es slido, siembra en superficie diagonal y agitando el asa dentro del tubo cuando
el medio es lquido.
En los tubos con medio de cultivo lquido se pueden llevar a cabo diluciones sucesivas a
tal grado de obtener un cultivo puro con pocas clulas que despus se sembraran en un
medio slido.


Formas de sembrar en tubo
Editar de la web http://mediateca.educa.madrid.org/imagen/tags.php?pag=3&tag=ensayo

Despus de llevarse a cabo la siembra de los microorganismos, los medios de cultivo se
ponen a incubar tal y como se especifica para cada bacteria que se desea obtener o
aislar.

Equipo usado para el crecimiento de
microorganismos estufa incubadora o
incubadora
http://uriel-93.over-blog.com/article-
32831322.html

2.3.2. Preservacin de Microorganismos

Antiguamente los microorganismos han sido empleados como materia prima esencial de
trabajo en la obtencin de una variedad de medicamentos (antibiticos, vitaminas y
aminocidos), elaboracin de alimentos (pan, queso, leche, bebidas y licores) y
fabricacin de solventes y reactivos, entre otras aplicaciones. El creciente uso de estos
materiales biolgicos en la biotecnologa y la proteccin medioambiental han fortalecido la
necesidad de mantener los cultivos microbianos de manera que sus propiedades
permanezcan estables.

La preservacin de cepas (muestras) microbianasdebe garantizar la viabilidad, pureza y
estabilidad gentica de los cultivos, caractersticas que coinciden con los objetivos de un
buen mtodo de conservacin

Con frecuencia la eleccin de la tcnica ms adecuada para conservar cultivos
microbianos resulta difcil, pues deben tomarse en consideracin los criterios de viabilidad
y pureza de las cepas, cambios poblacionales y genticos, nmero y valor de los cultivos,
costo, suministro y transporte de cepas, as como la frecuencia del uso de los cultivos.


El mtodo de conservacin que se elija debe garantizar la supervivencia de al menos el
70 % de las clulas por un perodo considerable de tiempo, de forma tal que la poblacin
sobreviviente se asemeje a la original como sea posible, conserve las propiedades de
importancia de los cultivos y minimice la ocurrencia de los eventos genticos. De igual
manera debe reducir al mnimo el riesgo de contaminacin y permitir que la pureza del
cultivo permanezca inalterable.

A esto se le suma la distribucin, para la cual se necesitarn rplicas conservadas y
empaquetadas convenientemente que permitan la llegada al lugar de destino en las
mejores condiciones. Los microorganismos son enviados por varios medios: correo areo,
postal o a travs de las manos, de un laboratorio a otro dentro de un mismo pas y con
frecuencia a travs de las fronteras o continentes.Su distribucin y manipulacin est
regulada en el mbito internacional y nacional, y para su transportacin es necesario el
uso del triple empaque para asegurar que todo el personal involucrado en este proceso
est protegido de la exposicin a cualquier agente contenido en el envase.
Algunos cultivos son empleados como cepas controles, cepas de ensayo, cepas de
produccin industrial y pueden ser utilizadas frecuentemente en un laboratorio. En estos
casos, la facilidad del recobrado y el riesgo de contaminacin de los cultivos necesitan ser
considerados

Existen dos formas ms importantes de conservacin:

I. Congelacin (a 70 C y 196 C) y liofilizacin como tcnicas que minimizan al
mximo el riesgo de cambio gentico en las clulas y las mantienen viables por 10
aos o ms, as se han podido conservar materiales biolgicos como cultivos de
hongos, bacterias y levaduras, algas, suero, clulas sanguneas, entre otros. El
elevado costo de los equipos que emplean estos mtodos dificulta su
implementacin en muchas instituciones. Se necesitan mantener libres de
humedad, por lo que se ocupan materiales extra para lograrlo como arena, slica
gel, perlas de vidrio; donde cesa el crecimiento, as como el almacenamiento en
tierra, parafina lquida y la suspensin en agua estril (destilada o de mar).

Izquierda un congelador y derecha un
liofilizador
http://www.lobov.com.ar/site/nte
cnica_det.php?id=4


II. Se propone llevar a cabo la resiembra peridica, que es una tcnica que permite la
supervivencia de los cultivos en cortos perodos de tiempo. De lo que se trata es
de transferir el cultivo del medio seco a uno fresco proporcionndole las
condiciones ptimas de crecimiento, lo que condiciona el elevado riesgo de
contaminacin y variabilidad de las caractersticas de las cepas.

Cierre de la unidad

Con los temas vistos en esta unidad te pudiste dar cuenta como los microorganismos se
pueden reproducir de manera muy rpida, colonizar diversos hbitats y sobre todo cuales
son las condiciones y los requerimientos para dicho proceso. Pudiste constatar que los
microorganismos se utilizan en muchos estudios tanto en el medio ambiente, la salud,
industria entre otros. Ahora podrs integrar estos conocimientos junto con los de la unidad
anterior donde tendrs un bosquejo mayor de cmo es el desarrollo cualitativo de las
bacterias.

Para saber ms

Ver Video http://www.youtube.com/watch?v=pI3V5KPj5XQ&feature=relatedanaliza cmo
fue que se lleg al conocimiento de los microorganismos y su impacto significativo en las
ciencias biolgicas.

Evidencia de Aprendizaje. Mundo microbitico

Elabora un cartel para exposicin en congreso* especializado en un medio de cultivo que
tu elijas, describe cmo es dicho medio de cultivo, las diferentes especies de organismos
que pueden cultivarse, las condiciones necesarias para que subsistan y la importancia de
la identificacin de dichas especies.

2.- apoya tu trabajo con imgenes y s cuidadoso con la ortografa
3.- guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U2_EA_XXYZ y envalo a tu

Fuentes de consulta

Bibliografa bsica
Gonzlez,G. M. y C. A. M. (2007) Microbiologa ambiental. Corpus. 120 pp.


Pidello,A. (2011).Ecologa microbiana. Corpus
Willey,J., Sherwood, L. M. y Woolverton, C. J. (2009).Microbiologa.7
a
ed. MGraw
Hill-Interamericana.

Atlas, M. R. y Bartha, R. (2002). Ecologa microbiana y Microbiologa ambiental. 4
ed. Pearson Addison Wesley. 677pp.
Brock, D. T. y Madigan, T. M. (). Microbiologa. ed. Prentice Hall. 956 pp.
Brooks, G. F., Butel, J. S. y Morse, S. A. (2011). Microbiologa Mdica. 25 ed. Mc
Graw Hill. pp 815.
Madigan, M. T., Martinko, J. M. y Parker, J. (2004). Brock. Biologa de los
microorganismos. 10
a
ed. Prentice Hall. 1089 pp.
Prescott, L. M., Harley, J. P. y Klein, D. A. (2005). Microbiologa. 5
a
ed. McGraw-
Hill Interamericana. 1236 pp.
Solomon, P. E., Berg, R. L. y Martin, W. D. (2008). Biologa. 8
a
ed. Mc Graw Hill.
1338 pp.
a

ed.Mdica Panamericana. 956pp.


Unidad 3.Caracterizacin microbiana


Nos resulta muy sorprendente que, con muchos avances en conocimientos cientficos y
tecnolgicos de los que se disponen en la actualidad, an miles de personas se vean
afectadas por el ataque de una gama de bacterias. Hasta nuestros das el mundo oculto
de los microorganismos no haba sido descubierto, puesto que su diminuto e inapreciable
tamao los hace pasar por invisibles, salvo por las grandes consecuencias que estos
ocasionan. El llevar a cabo la caracterizacin microbiana es de vital importancia y tiene el
fin fundamental de poder conocer sus caractersticas morfolgicas y fisiolgicas y de esta
manera diferenciar las principales tcnicas que existen para estudiar en particular a las
diferentes especies, pudiendo estas participar dentro de los ciclos biogeoqumicos del
agua, oxgeno, carbono, nitrgeno, azufre. Reaccionan muy diferentes ante agentes
qumicos, positivamente con los nutrientes para el crecimiento bacteriano o de manera
negativa como con los frmacos que atacan a las bacterias.

Propsitos

El alumno comprender de qu forma influyen en la vida cotidiana las caractersticas de
las bacterias, a que se debe su importancia tanto a nivel industrial como ambiental, donde
incorporar los conceptos fundamentales de la microbiologa, medios de cultivo, pruebas
y tcnicas bioqumicas, as como caracteres genticos para comparar cualitativamente a
las bacterias.


Analizar la caracterizacin microbiana mediante el estudio de tcnicas para determinar
las caractersticas apropiadas, segn los propsitos del investigador.

3.1. Caracterizacinmicrobiana

Para poder realizar una identificacin microbiana es necesario identificar sus caracteres
morfolgicos, fisiolgicos, serolgicos y qumicos que son los que nos van a dar pauta
para poder diferenciar entre una especie y otra, o bien identificarlos si es que an no lo
han sido. El estudio de tales propiedades conlleva a la realizacin de experimentos,
pruebas y tcnicas para identificar a las bacterias. En la actualidad las tcnicas
bioqumicas estn tomando auge como una nueva alternativa para resolver problemas
que anteriormente se tenan, estas tcnicas permiten la caracterizacin genotpica
bacteriana y proporcionan una posible base objetiva para la identificacin de las especies
bacterianas. Una herramienta especifica muy til es como el uso del microscopio para


poder observar ms a detalle sus estructuras, ya que como sabemos son
microorganismos tan diminutos que no pueden ser observados a simple vista.

Cuando alguien se enferma y presenta variada sintomatologa (tos, dolor de cabeza,
fiebre, estornudo, cuerpo cortado) se puede asociar a patologas de un catarro, gripe,
resfriado, y en casos ms extremos una neumona, bronquitis y la muy conocida
influenza, se acude por consiguiente al mdico para que recete un medicamente que
solucione el problema, pero antes que nada l realiza una serie de cuestionamientos para
poder llegar a un diagnstico y poder suministrar algn antibitico, ya que existen
variadas especies de bacterias que causan los mismos sntomas y se tiene que hacer una
serie de pruebas de identificacin para poder proporcionar un diagnstico de la
enfermedad que se tiene.

3.1.1.Caracteres morfolgicos

Vamos a comenzar aclarando algunos conceptos biolgicos importantes, el trmino
morfologa hace referencia a la forma de los microorganismos y con ayuda del
microscopio electrnico se han podido estudiar y revelar detalles estructurales de las
bacterias. Las bacterias son considerados organismos procariotasa nivel macroscpico,
las encontramos en forma de colonias o filamentos que contienen clulas especializadas y
de manera microscpica es que tienen dos formas comunes, ya sea la esfrica (cocos) o
cilndrica (bacilos, espiroquetas) y dentro de cada una hay subvariedades de formas.

Una de las caractersticas principales de estas clulas es que no presentan un ncleo
verdadero como los eucariotas, ya que van almacenar su ADN (material gentico o
informacin gentica) en una estructura denominada nucleoide, el cual solo es perceptible
por microscopia de luz y de material teido con ayuda de un colorante conocido como
Feulgen que es el que nos va a indicar la presencia de ADN (Brooks,et al. 2011).

Nucleoides de Bacillus cereus teidas con Feulgen.
Editar de la web
http://www.human-
healths.com/bacillus-cereus-
2/bacillus-cereus.php


Para poder observar la presencia de la membrana nucleoidal es necesario hacerlo a
travs de una micrografa electrnica, a excepcin de los plantomicetos, que son un grupo
de bacterias acuticas donde su nucleoide est rodeado por una cubierta nucleoidal
formada por dos membranas compuestas de lpidos.

Primero debes de saber que para poder diferenciar una clula procariota de una eucariota
es que la primera no cuenta con un aparato similar al huso mittico, la regin nucleoidal
est llena con fibrillas de ADN. El nucleoide de la mayor parte de las clulas bacterianas
consiste en una molcula circular nica y continua, que vara en tamao de 0.58 a casi 10
millones de pares de bases, aunque como en todo hay sus excepciones ya que algunas
bacterias poseen dos, tres o incluso cuatro cromosomas diferentes. Ahora bien el material
gentico que es de forma circular (plsmidos que son pequeas molculas circulares de
ADN capaces de existir de forma independiente respecto a los cromosomas del husped
o sea que son insertados por los virus) hay dos excepciones que han mostrado poseer
cromosomas lineales (op cit.).

Para las bacterias el nmero de nucleoides y tambin el nmero de cromosomas,
depende de las condiciones de proliferacin. Con esto podemos ver que las bacterias con
rpido crecimiento tienen nucleoides ms grandes por clula que los que tienen
crecimiento lento, aunque cuando se presentan varias copias, todas son similares
(haploides) (op cit.).

Otra caracterstica morfolgica importante es la membrana plasmtica que es la que
rodea al citoplasma, esta membrana es el punto de contacto de la clula con el ambiente
por ello es la responsable de la relacin de la clula con el exterior. La membrana
bacteriana difiere de otra debido a que esta carece de esteroles como el colesterol,
aunque contienen molculas pentacclicas, similares al esterol, denominadas hopanoides,
que los podemos encontrar en nuestro ecosistema. Estos hopanoides se sintetizan
(derivan) a partir de los mismos precursores de los esteroides y estos hopanoides son los
posibles encargados de la estabilizacin de la membrana (Prescott,et al. 2000).

Corte delgado de clula de E. coli fijada con tetrxido de osmio y fijado ms
tarde con acetato de uranilo acuoso, que muestra dos regiones nucleares
ocupadas con fibrillas de ADN.
Brooks,
et al.
2011


Componentes qumicos de la membrana plasmtica
Prescott, et al. 2000

El modelo de mosaico fluido (S. Jonathan Singer y Garth Nicholson) es la estructura de
membrana ms aceptada donde diferencian dos tipos de protenas de membrana (op cit.):
a) Protenas perifricas: estn dbilmente conectadas a la membrana y pueden
eliminarse fcilmente, son solubles en soluciones acuosas y constituyen
aproximadamente del 20 al 30% del total de las protenas de membrana.
b) Protenas integrales: estn no se extraen fcilmente y son insolubles en soluciones
acuosas cuando se eliminan los lpidos.

El modelo de mosaico fluido de la estructura de la membrana bacteriana mostrado en la
figura siguiente muestra a las protenas integrales (azules) flotando en una bicapa lipdica.
Las protenas perifricas (morado) estn asociadas de forma poco firme con la superficie
de la membrana interna. Las esferas pequeas representan los extremos hidrfilos de los
fosfolpidos de membrana, y las colas onduladas son las cadenas de cidos grasos
hidrfobos. Puede haber tambin otros lpidos de membrana, como hopanoides (amarillo).
Para que quede ms claro, los fosfolpidos se muestran con un tamao proporcionalmente
superior al que poseen en las membranas verdaderas.


Estructura de la membrana plasmtica.
Prescott,et al.
2000

La membrana plasmtica retiene al citoplasma y lo separa del medio exterior, actuando
como barrera selectivamente permeable que va a permitir el paso de iones y molculas
particulares, tanto hacia dentro como fuera de la clula, mientras que evita el
desplazamiento de otras, por ello no hay prdida de componentes es
enciales por exudacin (evaporacin), mientras se facilita el movimiento de otras
molculas (Brooks,et al. 2011).

Podemos encontrar dentro de la clula algunas sustancias que no puedan atravesar la
membrana plasmtica por lo que requieren emplear sistemas de transporte para dicha
actividad, dentro de estos sistemas tenemos la absorcin de nutrientes, la excrecin de
residuos y la secrecin de protenas. La membrana plasmtica es una estructura
importante ya que en ella se desarrollan numerosos procesos metablicos como la
respiracin, fotosntesis y sntesis de lpidos y de constituyentes de la pared celular. A su
vez esta membrana ayuda a las bacterias a detectar y responder a sustancias qumicas
del medio exterior (quimiotaxia), por lo que sin esta membrana no sobreviviran los
microorganismos (Solomon,et al. 2008).

Dentro de la membrana plasmtica encontramos estructuras comunes una de ellas es el
mesosoma que son invaginaciones de la membrana plasmtica, para formar vesculas,
tbulos o lamelas y los podemos observar tanto en bacterias gram positivas (ms
prominentes) como gram negativas, aunque su funcin exacta se desconoce (Prescott,et
al. 2000).

La mayora de las estructuras de una bacteria gram positiva se muestran en la siguiente
figura, solamente una pequea parte de las protenas de superficie se han incluido para
simplificar el dibujo, cuando existen, estas protenas cubren la superficie. Las bacterias
gram negativas tienen una morfologa similar.


Morfologa de una bacteria gram positiva.
Prescott,et al. 2000

Estos mesosomas suelen situarse a continuacin de los septos o tabiques que dividen las
bacterias y algunas veces parecieran estar unidas al cromosoma bacteriano, por lo que se
cree que estn involucrados en la formacin de la pared celular durante su divisin o
desempear un papel en la replicacin del cromosoma y su distribucin a las clulas hijas,
o bien pueden participar tambin en procesos secretorios (op cit.).

Como en todo, dentro de las bacterias tambin encontramos sistemas internos diferentes
a los mesosomas, ya que los plegamientos de la membrana plasmtica pueden ser
extensos y complejos en bacterias fotosintticas, como las cianobacterias y las bacterias
prpura, o en bacterias con una intensa actividad oxidativa, como las nitrificantes (utilizan
nitrgeno para su metabolismo y lo descomponen), ya que pueden construir agregados de
vesculas esfricas, vesculas aplanadas, o membranas tubulares (op cit.).

Membranas
internas bacterianas. Membranas de bacterias nitrificantes y
fotosintticas. a) Nitrocystis oceanus con membranas paralelas
atravesando toda la clula. Obsrvese el nucleoplasma (n) con
estructura fibrilar. b) Ectothiorhodospira mobilis con un sistema
extenso de membranas intracitoplasmticas (x60000).
Prescott,et al.
2000


La pared celular bacteriana debe su resistencia a una capa compuesta de diversas
sustancias conocidas como murena, mucopptidos o peptidoglucano (todos son
sinnimos). La mayor parte de las bacterias se clasifican como gram positivas o gram
negativas con base en su respuesta al procedimiento de tincin de gram (Brooks,et al.
2011).

Diagramas esquemticos de pared celularde bacterias gram positivas y
gram negativas.
Madigan,et al.
2009

Las paredes celulares de bacterias presentan una capa rgida que es la responsable de la
resistencia de la pared celular. En especies gram negativas existen capas adicionales que
se sitan en el exterior de sta, dentro de estas especies de bacterias presentan puentes
que se establecen por lo general mediante enlaces peptdicos directo entre el grupo
amino del diaminopimlico de una cadena y el grupo carboxilo de la D-alanina terminal de
otra cadena adyacente. En las bacterias gram positivas el entrecruzamiento se establece
mediante un puente interpeptdico cuya composicin vara en cuanto a tipo y nmero de
aminocidos de un organismo a otro. Por ejemplo, en una de las bacterias gram positivas
(S. aureus), el puente interpeptdico est formado por cinco glicinas. La lisozima es una
enzima que destruye al peptidoglucano originando la lisis celular. (Madigan,et al. 2009).

Madigan,et
al. 2009


Peptidoglucano en E. coli y en Staphylococcus aureus. a) en E. coli y
otras bacterias gram negativas no se forma puente intermedio. b) el
puente intermedio de pentaglicina en S. aureus bacteria gram positivo.

Las bacterias gram negativas, adems de peptidoglucano, tienen una membrana externa
compuesta por lipopolisacridos, protenas (porinas facilitan la permeabilidad a travs de
la membrana externa) y lipoprotenas. El espacio entre la membrana citoplasmtica y la
membrana externa se le denomina periplasma y contiene importantes protenas para las
funciones celulares este espacio entre estas dos capas es de aproximadamente 15 nm de
anchura y tiene un contenido gelatinoso (op cit.).
Otra caracterstica morfolgica y de las ms importantes su movilidad mediante la
natacin que es debida a una estructura llamada flagelo que funciona por rotacin (como
si fuera la hlice de un helicptero), impulsando a las clulas a travs de un medio lquido
(Madigan,et al. 2009).

Los flagelos bacterianos son apndices largos y finos que se encuentran libres por un
extremo y unidos a la clula por el otro. Como son tan finos (15-20 nm de grosor
dependiendo de la especie), un flagelo individual solo es visible por microscopa ptica
despus de una tincin especial (ayuda a aumentar su dimetro) (op cit.).
De acuerdo a la posicin del o los flagelos que presente la clula, estos pueden ser: sin
flagelo (atrico), un solo flagelo (monotrico), un flagelo en cada extremo (anfitrico), grupos
de flagelos en uno o en los dos extremos (lofotrico) y flagelos distribuidos sobre toda la
superficie de la clula (peritricos) como se esquematizan en las figuras siguientes.

Formas de flagelos de una bacteria

Como pudimos observar en la figura anterior los flagelos tienen forma helicoidal y
muestran una distancia constante entre cada dos vueltas o curvaturas adyacentes que se
denomina longitud de onda y es constante para cada organismo. El filamento de los
flagelos bacterianos se compone de subunidades de una protena llamada flagelina.
Un flagelo est constituido por varios componentes. En la base del filamento se halla una
regin ms ancha llamada gancho que es la que une el filamento a la parte motora, este
motor se ancla a la membrana citoplasmtica y en la pared celular est constituido por un
eje central que atraviesa una serie de anillos.


Morfologa de anclaje de los flagelos a una bacteria Gram negativa izq y gram positiva
der.

3.1.2.Caracteresfisiolgicos

La versatilidad metablica de las bacterias les confiere el gran xito evolutivo, ya que
todos los mecanismos posibles de obtencin de materia y energa se encuentran en las
bacterias, es como si fuese un coche, es decir cmo se lleva a cabo su funcionamiento,
es a lo que se llama fisiologa.
Comenzaremos con la funcin de la membrana citoplasmtica que es:

a. Da permeabilidad selectiva y transporte de solutos: la membrana citoplasmtica forma
una barrera hidrfoba impermeable a la mayor parte de las molculas hidroflicas,
aunque existen varios sistemas de transporte de nutrientes que trabajan contra un
gradiente de concentracin hacia el interior de la misma y productos de desecho hacia
el exterior. Este gradiente de concentracin va a permitir el incremento de la
concentracin de nutrientes en el interior de la clula. Existen 3 mecanismos de
transporte a travs de la membrana y uno especial:
Transporte pasivo no utiliza energa y funciona solo cuando el soluto se encuentra en
concentraciones ms elevadas fuera de la clula, sus variantes son la osmosis que es
el paso del agua a travs de membrana semipermeable desde una regin de mayor
concentracin a otra de menor concentracin y la otra es difusin es el movimiento
neto de partculas como tomos, molculas e iones desde una regin de mayor
concentracin hacia otra de menor concentracin.
Transporte activo es el transporte de una sustancia a travs de una membrana que no
depende de la energa potencial de un gradiente de concentracin, requiere ATP
como fuente de energa. Muchos nutrientes se concentran ms de 1000 veces como


consecuencia del transporte activo, lo que depende de la fuente de energa utilizada:
transporte acoplado con iones y transporte con casete unido a ATP.

Transporte pasivo y activo
http://recursos.cnice.
mec.es/biologia/bachil
lerato/segundo/biologi
a/ud03/02_03_04_02_
031.html

Translocacin de grupo: dicho proceso permite que las bacterias utilicen sus fuentes
energticas de manera eficiente al acoplar el transporte con el metabolismo. En este
proceso, una protena transportadora de membrana sufre fosforilacin (ruta
metablica) en el citoplasma a expensas del fosfoenolpiruvato, la protena
transportadora fosforilada se une al azcar libre en la cara exterior de la membrana,
es transportada hacia el citoplasma y liberada en forma de carbohidrato unida a un
fosfato. Imagina que tu estas en una fiesta y quieres salir pero no sabes cmo as que
ves a una chica (o) solo cerca de la salida y le haces la pltica y poco a poco la
empiezas a rodear hasta que tu estas ya en la puerta y entonces ah te encuentras a
un amigo que va a entrar y corres a saludarlo y te sales junto l.

b. Transporte de electrones y fosforilacin oxidativa que es un proceso de la ruta
metablica en el cual se utiliza energa liberada por la oxidacin de nutrientes y fin es
la produccin de ATP. Los citocromos y otras enzimas y componentes de la cadena
respiratoria incluyen ciertas deshidrogenasas que se ubican en la membrana
citoplasmtica. La membrana citoplasmtica bacteriano es un anlogo funcional a la
membrana mitocondrial de las clulas eucariotas.

c. Excrecin de exoenzimas hidrolticas y patogenia de las protenas.- todos los
organismos que dependen de polmeros orgnicos macromoleculares como fuente
energtica excretan enzimas hidrolticas que desdoblan los polmeros hasta
subunidades lo suficientemente pequeas para penetrar la membrana citoplasmtica.
Las bacterias secretan las enzimas directamente al medio externo o en el espacio
periplasmtico entre la capa de peptidoglucano y la membrana externa de la pared
celular en el caso de las bacterias gram negativas.


d. Transporte de enzimas y molculas que participan en la biosntesis de ADN, polmeros
de la pared celular y lpidos de la membrana, portar receptores y otras protenas
quimiotacticas y otros sistemas sensoriales de transduccin.

e. Funciones de biosntesis: la membrana citoplasmtica es el sitio de los lpidos
transportadores sobre los cuales se ensamblan las subunidades de la pared celular
as como de la biosntesis de las enzimas de la pared celular.

f. Sistemas quimiotcticos: las sustancias con capacidad de atraccin y repulsin se
unen a receptores especficos en la membrana bacteriana. Hay al menos 20
quimiorreceptores diferentes en la membrana de E. coli, algunos de los cuales
tambin actan como el primer paso en el proceso de transporte (Brooks,et al. 2011).

La pared celular brinda proteccin osmtica y desempea una funcin esencial en la
divisin celular, tambin sirve como preparador para su propia biosntesis. Varias capas
de la pared son sitios de determinantes antignicos mayores de la superficie celular y uno
de sus componentes lipopolisacridos (LPS) de las paredes celulares de bacterias gram
negativas) son causantes de la actividad endotxica inespecfica de las bacterias gram
negativas. La pared celular no muestra permeabilidad selectiva, sin embargo, una capa de
la pared gram negativa que es la membrana externa evita el paso de molculas
relativamente grandes (Brooks,et al. 2011).

Aunque la principal funcin de la membrana externa es estructural, una importante
propiedad biolgica es que resulta txica para los animales. Estas propiedades txicas se
asocian con la capa de lipopolisacridos y en particular con el lpido A.

Como ya se mencion anteriormente las bacterias cuentan con un flagelo ahora vamos a
ver cmo funciona este en una bacteria gram negativa: el anillo L se inserta en la capa de
LPS y el anillo P en el peptidoglucano. El anillo MS se ancla en la membrana
citoplasmtica y el anillo C en el citoplasma. En el filamento existe un estrecho canal a
travs del cual la flagelina alcanza su destino durante la sntesis del flagelo. Las protenas
Mot funcionan como motor flagelar y las protenas Fli constituyen el conmutador del
motor. El motor flagelar determina el giro del filamento para propulsar a la clula a travs
del medio. Para explicar la rotacin del flagelo se ha propuesto un modelo de turbina de
protones. El flujo de protones a travs de la protena Mot puede ejercer fuerza sobre las
cargas presentes en los anillos C y MS, haciendo girar el rotor (Madigan,et al. 2009).

Ahora de manera general el movimiento flagelar se da de la siguiente manera: los
motores rotatorios tienen tpicamente dos componentes principales el rotor y el estator. El
motor flagelar, el rotor est compuesto por el eje central y los anillos L, P, C y MS. En
conjunto, estos elementos componen el cuero basal. El estator est representado por las
protenas Mot que rodean al cuerpo basal y que funcionan generando un par de torsin.


El movimiento rotatorio del flagelo lo proporciona el cuerpo basal. La energa requerida
para la rotacin procede de la fuerza motriz de protones. El flujo de protones a travs de
la membrana citoplasmtica se realiza por el complejo Mot que impulsa la rotacin del
flagelo se translocan aproximadamente 1000 protones. Se desconoce en realidad como
ocurre esto por ello se propuso el modelo de turbina de protones en donde los protones
que fluyen por canales a travs del estator ejercen fuerzas electrostticas sobre cargas de
las protenas del rotor que estn dispuestas helicoidalmente. Las atracciones entre las
cargas positivas y negativas originan que el cuerpo basal rote a medida que los protones
pasan por el estator (Madigan,et al. 2009).

Otro tipo de movimiento es por deslizamiento en superficies slidas y se da en procariotas
mviles carentes de flagelos. Este movimiento se da en bacterias como alguna gram
negativas (Myxococcus sp) y otras mixobacterias. Se cree que esto lo hace por medio de
la excrecin de un polisacrido que se va adhiriendo a la superficie y la clula se desplaza
por traccin.

3.2 Caracteres Quimiotxicos

El hablar de quimiotaxis que es un fenmeno que experimentan los microorganismos, en
especial las bacterias, van a dar una respuesta dirigiendo sus movimientos de acuerdo a
la concentracin de agentes qumicos y nutritivos que hay en el ambiente donde se
encuentran.

Para entender mejor la quimiotaxia recordemos cuando de nio se asista a la primaria, al
escuchar los diferentes timbres reaccionbamos dependiendo de cual fuese la situacin,
as los timbrados ms importantes eran la hora de entrada, la hora del recreo y la hora de
salida, y por consiguiente se experimentaba una respuesta para cada uno. Si era la hora
de entrada se apuraba uno para no llegar tarde y que le pusiesen retardo, si era la hora
del recreo se saba que era momento de jugar, comer golosinas y por ltimo el timbre que
anunciaba la salida indicando el trmino de jornada escolar.

Por fin la hora del recreo es una analoga a la quimiotaxia.

http://www.pintodibujos.com/
2010/11/recreo-para-
colorear.html


3.2.1 Fundamentos de la caracterizacin quimiotxica

Las bacterias como sabes las podemos encontrar en casi todas partes desde lugares
donde se presentan gradientes de agentes fsicos y qumicos lo cual los ha hecho
evolucionar para responder de modo positivo o negativo a estas variables, lo cual har
que la molcula realice movimientos dirigidos denominados tactismos. Dentro de estos
tactismos tenemos a uno que es la quimiotaxis que es la respuesta a agentes qumicos y
otra no menos importante la fototaxis que es la respuesta a la luz.
La quimiotaxis se ha estudiado con detalle en bacterias flageladas y se conoce bastante a
nivel gentico acerca de cmo se transmite el estado del medio ambiental externo al
conjunto flagelar. Por lo que respecta a este tema nos enfocaremos en la quimiotaxia en
bacterias flageladas, aunque tambin se presentan en bacterias deslizantes.

Bacteria E. coli
http://www.sciencephoto.c
om/media/297239/view

La quimiotaxia ha sido estudiada en gran parte en E. coli que tiene flagelacin peritrica
(flagelos distribuidos por varios lugares de la pared celular). Para poder comprender como
afecta la quimiotaxis a E. coli debemos centrarnos en el comportamiento de una clula
enfrentada a un gradiente qumico de una sustancia. En ausencia de un gradiente, las
clulas de E. coli se mueven al azar y realizan carreras mediante las cuales se desplazan
hacia delante de una forma suave, y tambin tumbos, mediante los cuales la clula se
para y cambia de direccin girando al azar. Durante el movimiento hacia delante en una
carrera, el motor flagelar rota en el sentido contrario a las agujas del reloj, el movimiento
hacia delante cesa y tiene lugar un tumbo (Madigan,et al. 2009).


Quimiotaxis en una bacteria con flagelacin peritrica como E. coli. a)
En ausencia de una sustancia atrayente, la clula se desplaza al azar
mediante carreras y cambia de direccin mediante tumbos. b) En
presencia de un atrayente, las carreras se favorecen y la clula se
mueve en la direccin del gradiente positivo de la sustancia atrayente.

Madigan,et al.
2009

Tras un tumbo, la direccin de la siguiente carrera ocurre al azar. De este modo, mediante
sucesivas carreras y tumbos, la clula se desplaza aleatoriamente por su entorno sin ir a
una parte concreta. Sin embargo, la presencia de un gradiente de una sustancia atrayente
cambia este comportamiento de movimiento sin sentido. A medida que el organismo capta
concentraciones ms altas de la sustancia quimiotactica, las carreras son ms frecuentes
y los tumbos ms escasos. El resultado neto de este comportamiento es que el organismo
se desplaza por el gradiente hacia concentraciones ms elevadas de la sustancia
atrayente. Si lo que el organismo detecta es una sustancia repelente opera el mismo
mecanismo, pero en este caso es la disminucin de la concentracin del repelente lo que
estimula la frecuencia de las carreras y favorece su alejamiento.

Movimiento flagelar en procariotas con flagelacin peritrica.
Madigan,et al. 2009

En la figura anterior se muestra el movimiento hacia delante se debe a la rotacin de los
flagelos en sentido contrario a las agujas del reloj. La rotacin inversa, en sentido de las
agujas del reloj, origina una voltereta, y luego, cuando vuelve a producirse una nueva


rotacin contraria a las agujas del reloj, la clula se desplaza en una nueva direccin. Por
lo mismo que las clulas procariotas son muy pequeas ellas se guan solamente por una
comparacin del estado fsico o qumico de su entorno que ocuparon segundos atrs
utilizando una serie de protenas denominadas quimioreceptores las cuales se ubican en
la membrana. Por lo que dice que las bacterias son capaces de responder a gradientes
temporales ms que a espaciales, por lo que podra considerarse como un sistema de
respuesta sensorial anlogo al de las respuestas del sistema nervioso de los animales.

En bacterias con flagelacin polar (los flagelos se localizan en uno o ambos extremos de
la clula) pueden invertir la direccin de rotacin de sus flagelos e invertir as el sentido de
movimiento, aunque algunas giran solamente en el sentido de las del reloj. Aunque este
ltimo tiene la facilidad de reorientarse por medio de un flagelo que es de tipo insercin
subpolar detiene peridicamente su rotacin y durante ese breve momento reorienta al
azar por movimiento browniano (movimiento aleatorio sin razn aparente).

Movimiento flagelar procariota con flagelacin polar. Las clulas
cambian de sentido invirtiendo la rotacin flagelar o bien, en el
caso de los flagelos unidireccionales, mediante paradas
peridicas que permiten la reorientacin. La flecha amarilla
indica la direccin del desplazamiento de la clula.
Madigan,et al. 2009

3.2.2 Principales tcnicas

La demostracin de la quimiotaxis bacteriana puede llevarse a cabo sumergiendo un
pequeo capilar de vidrio, que contenga una sustancia quimiotactica, en una suspensin
de bacterias mviles que no contengan dicha sustancia. A partir de la punta del capilar se
establece un gradiente en el medio, de tal modo que la concentracin disminuye
gradualmente a medida que se aumenta la distancia a la punta del capilar. Cuando el
capilar contiene una sustancia atrayente, las bacterias se movern hacia el capilar
formando un enjambre alrededor del extremo abierto y, posteriormente, muchas de las


bacterias mviles se introducirn en el capilar incluso si contuviera una solucin de la
misma composicin que el medio, debido a movimientos al azar.

Medida de la quimiotaxis mediante ensayo en tubo capilar
Madigan,et al. 2009

a) Insercin de un capilar en la suspensin bacteriana. Cuando se inserta el capilar
comienza la formacin del gradiente.
b) Capilar control que contiene una solucin salina que ni atrae ni repele
c) Acumulacin de bacterias en el capilar que contiene una sustancia atrayente.
d) Repulsin de bacterias por una sustancia repelente. Sin embargo, si se trata de un
compuesto atrayente, la concentracin de bacterias dentro del capilar ser varias veces
mayor que la de fuera. Cuando se extrae el capilar despus de un cierto perodo de
tiempo, se cuentan las clulas y se compara el resultado con el de un control, se pueden
identificar fcilmente sustancias atrayentes y repelentes.

Cintica de la acumulacin de bacterias en capilares con varias sustancias.
Madigan,et
al. 2009

Si el capilar que se inserta contiene una sustancia repelente, la concentracin de
bacterias en el capilar ser considerablemente menor que la del control. En este caso, las
clulas perciben un aumento en la concentracin del repelente y los quimioreceptores
correspondientes influyen sobre el motor flagelar para que la rotacin permita el


alejamiento del repelente. Utilizando el mtodo del capilar, es posible analizar si las
sustancias son atractivas o repelentes para una bacteria determinada.

La quimiotaxis tambin puede estudiarse microscpicamente. Utilizando una cmara de
video que capte la posicin de las bacterias a distintos tiempos y marque la trayectoria de
cada clula, es posible visualizar este fenmeno. Este mtodo ha sido adaptado a
estudios de bacterias quimiotcticas en medios naturales. Se piensa que en la naturaleza
los principales agentes quimiotacticos para las bacterias son los nutrientes secretados por
clulas microbianas de mayor tamao o por otros microorganismos vivos o muertos.

La siguiente figura muestra huellas de bacterias mviles en agua marina al desplazarse
por las proximidades de una clula de un alga (mancha blanca en el centro) que fueron
detectadas mediante un sistema de videocmara acoplado a un microscopio. Advirtase
que las clulas responden positivamente al oxgeno (aerotaxis) que el alga produce por
fotosntesis. La velocidad media de las clulas fue de 25 m/segundo. El alga tiene unos
60 m de dimetro.

Huellas de bacterias mviles en agua marina
Madigan,et al. 2009

Otros tipos de tcnicas utilizadas es por medio de preparacin de medios de cultivo con
diferentes gradientes de concentracin.

3.2.3. Desventajas

Entre las desventajas de esta quimiotaxia es que por ejemplo existen algunos derivados
como el Eugenol que es utilizado como agente bactericida en enfermedades infecciosas
bucales que cuando las bacterias estn en contacto con esta sustancia mueren. Algunos
ensayos para la medicin de quimiotaxis no estn disponibles por lo que no es confiable
su reproducibilidad.

Actividad 1. Huella gentica

En esta actividad leers el artculo La huella gentica de la seleccin natural que
puedes descargar desde el aula, te servir como detonador para entablar una charla en


el foro que lleva el nombre de esta actividad. Discute acerca de cmo la caracterizacin
bacteriana contribuy al conocimiento de la evolucin de los microorganismos. Esto te
permitir diferenciar los linajes aunque procedan de un antepasado en comn.
Una vez que hayas ledo el artculo dirgete al foro y participa a partir de las preguntas
que se te plantean
Para participar en el foro:
1. Dirgete al aula.
2. Ingresa al foro con el nombre de esta actividad y realiza lo que en l se
teindica.
*Es recomendable que previo a tu ingreso al foro consultes la Rbrica de
participacin en foros que se encuentra en la pestaa Material de apoyo.
Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o
copia de contenidos, ya que el facilitador(a) puede detectar esta situacin sin
dificultad. Tenpresente que tu formacin exige que desde esta etapa todo
producto o tarea quereportes sea de tu iniciativa y creatividad, con la intensin de
que en lo sucesivo estaactitud se proyecte directamente en tu prctica
profesional.

La extrema diversidad que existe entre las bacterias se ve reflejada ms intensamente en
sus propiedades fisiolgicas y bioqumicas que en la forma que estas presentan. Aunque
parece sencillo explicar la morfologa bacteriana, las caractersticas bioqumicas y
fisiolgicas estn basadas en la qumica de los componentes estructurales de la clula
bacteriana, por lo que se consideran de gran utilidad en la descripcin de los
microorganismos.

Se necesita conocer detalladamente que cambios sufren las bacterias durante los
procesos metablicos, como es que se llevan a cabo las reacciones bioqumicas, que
enzimas intervienen y cules son los productos intermedios que se generan.


Tubos de ensaye con cultivo microbiano y su reaccin
ante las pruebas bioqumicas
http://aexbe.es.tl/Nuevo-.--
Pruebas-bioqu%EDmicas.htm

La figura anterior muestra la forma de expresar una respuesta ante las pruebas
bioqumicas o medios de cultivo especiales para obtener alguna especie en particular de
bacteria. El cambio o vire de color significa que reaccionan positivamente o favorable a la
produccin de una enzima, fermentacin de lactosa, produccin de indol, entre otras.

Fundamentos de la caracterizacin por pruebas bioqumicas

Los microorganismos se suelen cultivar en medios que generalmente contienen
sustancias nutritivas especficas o sustratos los cuales se incuban y despus de cierto
tiempo el cultivo se examina para ver los cambios bioqumicos que han ocurrido.
Al observar en el microscopio los cultivos microbianos solamente permite visualizar como
estn distribuidos en varios grupos los microorganismos basados exclusivamente en su
forma, sin embargo cada grupo presenta una extrema diversidad de tipos basndose en
su actividad bioqumica, serolgica y su poder patgeno.
Para poder estudiar a fondo los microorganismos es fundamental la obtencin de un
cultivo puro y despus realizarle una serie de pruebas bioqumicas, ya que las bacterias
reaccionan de modo distinto a los diversos mtodos que existen y tales reacciones son
tiles para clasificarlas.

Ejemplos de bacterias teidas vistas al microscopio electrnico
http://estructurayfuncio
ncelularbacteriana.wiki
spaces.com/Tinciones+
de+microorganismos


En la unidad anterior se estudi la forma de obtener cultivos puros a partir de una serie de
cultivos bacterianos y de materiales que se suponen contaminados por grmenes
patgenos, mediante una serie de resiembras con ayuda de un asa bacteriolgica que
tiene un alambre de platino, la cual es pasada al fuego para esterilizarla y as evitar la
contaminacin de cepas.

3.3.2.Principales tcnicas

En la actualidad al convivir con una gran mayora de microorganismos, es de gran utilidad
el poder identificar que especies intervienen negativamente en una actividad o de manera
benfica, ya que es de gran importancia para entender de qu forma atacarla o explotarla.
Para llevar a cabo la identificacin bacteriana es necesario procesarlas a nivel de
laboratorio conocer tanto sus caractersticas morfolgicas, la reaccin que presentan a la
tincin de Gram, agrupacin y morfologa de las colonias, reacciones metablicas como la
produccin de enzimas, entre otras.

Uno de los mtodos ms usados es la utilizacin de colorantes para teir a las clulas y
facilitar su observacin. Los colorantes son compuestos orgnicos y cada tipo de
colorante tiene afinidad por determinados componentes celulares. Muchos colorantes que
se utilizan qumicamente sus molculas estn cargadas positivamente, es decir son
bsicos o catinicos, por ejemplo el jugo de limn o la coca-cola son cido y por lo tanto
estn cargados negativamente a diferencia del sudor o la sal de mesa que son salados
(bsico) y tienen carga positiva.

Para llevar a cabo las tinciones de muestras bacterianas se requiere llevar los siguientes
procesos:
1. Realizar un frotis y fijarlo
2. Aplicar un colorante
3. Decolorarlo con alcohol puro (96%)
4. Lavarlo con agua.
5. Aplicar otro colorante de contraste.
6. Observarlo al microscopio electrnico.

Metodologa de tincin de bacterias

Para la preparacin de los frotis se necesita un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, en
donde se va a colocar una gota de la muestra bacteriana que se va a teir en el caso de


que sea lquida o toma un hisopo hacindolo pasar sobre el cultivo, el hisopo se parece a
un cotonete con los que usualmente se limpian los odos. La muestra se frota
directamente sobre el portaobjetos, donde puede visualizarse con facilidad. El material
colocado en el portaobjetos se deja secar al aire o bien se pasa varias veces por la zona
azul de una flama hasta que el vidrio est tan caliente que moleste al tacto pero no
queme, de esta forma se evita contaminacin de la muestra. Posteriormente se realizan
los pasos siguientes que corresponden para cada tincin que se va a llevar a cabo.
A continuacin se muestra una serie de tinciones y pruebas bioqumicas que se emplean
en los test rutinarios para la descripcin e identificacin de las bacterias.

Tincin de Gram: este tipo de tincin revela la forma de la clula bacteriana, su
agrupacin y grupo taxonmico al que pertenece ya sea Gram positivo o Gram
negativo.
La tincin de Gram fue introducida en el ao de 1884 por el dans Christian Gram, para
teir a las bacterias. En la actualidad es una tcnica comnmente utilizada que consiste
en teir la muestra bacteriana (frotis) con el colorante violeta de genciana, someterla a la
accin mordiente de lugol, lavar con alcohol puro (96%) hasta eliminar el exceso de
colorante y teir luego con un colorante de contraste, como la fucsina bsica o safranina.
Las bacterias que retienen la violeta de genciana se llaman Gram positivas (Gram +) y las
que se decoloran y se tien en rojo por el colorante de contraste son Gram negativa
(Gram -).

Tincin de Gram en bacterias bacilares
http://pathmicro.med.sc.
edu/fox/gram-st.jpg

La figura anterior muestra la reaccin ante la tincin de gram de las bacterias bacilares.
Las gram positivas aparecen teidas de color morado mientras que las gram negativas de
color rosa. Esta diferencia en respuesta a la tincin de Gram se debe a la estructura de su
pared celular como ya se especific anteriormente. Despus de la tincin con el colorante
bsico (cristal violeta o violeta de genciana), se le agreg el alcohol el cual decolora a las
clulas gram negativas pero no a las gram positivas y por ltimo antes de observarlas al
microscopio se tien con un colorante de contraste (safranina) para que se pueda
visualizar perfectamente.


Algunos ejemplos de bacterias que reaccionan a la tincin de Gram positivo son:
S t a p h y l o c o c c u s
a u r e u s , S t r e p t o c o c c u s
p n e u m o n i a e ,
M i c r o c o c c u s s p ,
C l o s t r i d i u m
p e r f r i n g e n s , C .
s e p t i c u m , L i s t e r i a s p ,
A c t i n o m y c e t e s i s r a e l i i ,
N o c a r d i a s p .

Ejemplos de bacterias que reaccionan a la tincin de Gram negativo son:

N e i s e r i a m e n i n g i t i d i s ,
M o r a x e l l a s p ,
A c i n e t o b a c t e r s p , E .
C o l i , H a e m o p h i l u s
i n f l u e n z a e , V i b r i o
c h o l e r a e , C a m p y l o b a c t e r
j e j u n i , F u s o b a c t e r i u m
s p .

Tincin de Ziehl-Neelsen: este tipo de tincin es esencialmente para aquellas
bacterias cido-resistentes como el bacilo que causa la tuberculosis. Resulta difcil
teirlas, pero una vez que el colorante ha penetrado en la bacteria, las cuales lo
conservan despus del tratamiento con cido diluido. La propiedad de resistencia se
debe tanto que en la capa de su membrana celular y dentro de la clula (citosol)
poseen lpidos.

Se lleva a cabo realizando el frotis habitual, salvo que este se fija por calor, se cubre la
preparacin con fucsina fenicada, se calienta hasta producir vapores (aprox. 3 minutos),
se decolora con alcohol-clorhdrico hasta que las partes ms finas no tengan colorante y
las ms gruesas tomen un color rojizo. Despus se le coloca una tincin de contraste con
azul de metileno (1minuto), se lava con agua y seca para por ultimo observarlas al
microscopio. Las bacterias cido-resistentes se tien en rojo y las clulas y otras bacterias
en azul.


Bacilo causante de la tuberculosis Mycobacterium tuberculosis
http://www.auxiliare
senfermeria.net/20
11/07/la-tincion-
para-
micobacterias.html

Tincin de azul de metileno: para teir a las bacterias se emplea una mezcla de azul
de metileno, alcohol etlico e hidrxido de potasio (KOH), la cual se vierte sobre la
muestra bacteriana y se deja actuar de 3 a 5 minutos lavndola posteriormente con
agua y se observa al microscopio electrnico.

Tincin de capsulas: las capsulas de las bacterias son frgiles, por lo que nos se tien
con los mtodos corrientes, se utiliza una solucin de colorante cristal violeta que se
calienta y despus se realiza un lavado con sulfato de cobre. La capsula bacteriana se
tie de color azul plido, mientras que la clula y su interior aparecen teidas de color
azul obscuro.

Tincin de Esporas: algunas especies de bacterias producen intracelularmente
estructuras especiales llamadas endosporas, que son clulas diferenciadas
resistentes al calor, agentes qumicos y radiacin. Funcionan como estructuras de
supervivencia para proporcionar al organismo resistencia a condiciones adversas
como temperaturas extremas, desecacin, limitacin de nutrientes. Los gneros ms
estudiados con esta tcnica son Bacillus y Clostridium.

El mtodo de Schaeffer y Fulton es habitual para teir esporos, se cubre el frotis con
verde malaquita en solucin acuosa dejndolo reposar media hora, despus se calienta
hasta observar vapores durante medio minuto, eliminar con agua el exceso de colorante y
por ltimo aplicar safranina. Los esporos retienen el color verde y las partes vegetativas
se tien de rojo.

Bacillus subtilis, observe los esporos teidos de verde
http://bacillus8.blogspot.com/


Tincin de flagelos: los flagelos de las bacterias son invisibles en las preparaciones
corrientes, por lo que solo pueden visualizarse con tinciones especiales. Los flagelos
se observan en cultivos bacterianos recientes (12-18 horas), en un tubo con 5 ml de
caldo nutritivo, se cultiva la muestra procedente de la placa de agar hasta que se
observe una ligera turbidez, se coloca en la estufa a 37C durante 1 hr.
Posteriormente se colocan 2 o 3 gotas de la muestra sin mezclarlas ni extenderlas, se
flamea en la parte azul de la llama y se deja secar al aire. Para la tincin se ocupa una
mezcla homognea en agua destilada de fucsina bsica, alcohol etlico, cido tnico y
cloruro de sodio. Se coloca el colorante a la muestra dejndolo actuar de 5 a 15
minutos hasta observar un precipitado y se lava para finalmente observarse al
microscopio electrnico. Observndose los flagelos de color rosa o rojo y el resto de la
clula es de color rosa tenue o bien sin color.

La tincin de Feulgen es una tcnica para teir nucletidos, fue descubierta por Robert
Feulgen, se basa en la hidrolizacin del DNA por medio de una solucin diluida de
cido clorhdrico (HCl) donde se van a liberar las bases puricas del ADN.

Prueba de Catalasa: este tipo de prueba bioqumica es muy til para observar la
presencia de la enzima catalasa que se encarga de descomponer el perxido (H
2
O
2
)
en oxgeno y agua, se localiza en las bacterias que son aerobias y anaerobias
facultativas. El mtodo usual es realizar un frotis, agregarle una gota de perxido, si se
visualiza la formacin de burbujas el resultado es positivo, mientras que si no sucede
de lo contrario el resultado es negativo. Una especie que reacciona positivamente a la
catalasa es Penicillium simplicissimum.

Prueba de Oxidasa: esta prueba comnmente se utiliza para determinar la enzima
citocromo-C-oxidasa, entre algunos gneros que resultan positivos a esta prueba
destacan Pseudomonas sp, Neisseria sp, Moraxella sp, Vibrio sp, Aeromonas sp. Se
lleva a cabo para determinar la oxidacin en presencia del citocromo C. Usualmente
se ocupan discos de papel de filtro, una caja petri, reactivo de oxidasa (solucin de
NNN'N', tetrametil, 1-4 fenilendiamina). Se coloca un disco inmerso de reactivo
oxidasa que se pone sobre la muestra bacteriana, inmediatamente si la reaccin se
hace positiva indica un color azul-violeta intenso, de lo contrario la prueba ser
negativa.

Prueba de Indol: se prepara utilizando usando caldo triptfano y se observa la
produccin de indol. Se inocula el medio y se incuba durante 2 das y pasado el
tiempo se utiliza el reactivo de Kovac para evidenciar la prueba. Se lleva a cabo
cubriendo el medio con 2 ml de cloroformo, seguido de 2 ml del reactivo de kovac, una
reaccin positiva denota la aparicin de color rosa o rojo intenso en la capa de
cloroformo, de lo contario la prueba es negativa.


Forma de observarse la prueba de Indol
http://www.joseacortes.com/galeriaimag/
microorganismos/indol.jpg

Voges-Proskauer y Rojo de Metilo: se basan principalmente en la determinacin de
acetoina que es un producto final de la sntesis de la glucosa. La acetona es tambin
conocida como butanodiol o acetil-metil-carbinol. Estas pruebas se asocian, ya que
permiten la identificacin de enterobacterias que son microorganismos anaerobios
facultativos. Para llevar a cabo estas pruebas se necesita de un medio de cultivo caldo
de Clark y Lubs que tenga 3 das de inoculacin, pasado el tiempo se separa en dos
muestras, una para cada ensayo correspondiente.

Rojo de metilo al tubo se le aaden de 4-5 gotas de reactivo indicador Rojo de Metilo, se
agita para homogeneizar y se observa la coloracin que se obtuvo, ser positiva si cambia
a un color rojo y negativa si permanece amarillo.

Voges-Proskauer a la otra muestra del tubo de cultivo se le aade una mezcla del
reactivo A Voges-Proskauer que contiene alfa-naftol 5% en etlico absoluto observando
que el medio adquiere un aspecto lechoso y reactivo B de Voges-Proskauer hidrxido de
potasio (KOH), se observara que desaparece el aspecto lechoso y se agita fuertemente.
La prueba se torna positiva cuando en menos de cinco minutos aparece un color rosado-
violceo que inicia en la parte superior del tubo y si no hay coloracin alguna la pruebas
es negativa.


Visualizacin de la prueba rojo de metilo.

Adems de las tinciones y las pruebas antes mencionadas existen medios de cultivo que
van a funcionar como evidencia de crecimiento de alguna especie bacteriana muy en
particular, entre los que destacan:
Citrato de Simmons: este tipo de medio se emplea para la diferenciacin de cepas de
E. coli fecal de las del grupo aerogenes las cuales crecen tambin en este medio ya
que se utiliza citrato. Tambin existen otras especies como las del gnero Salmonella,
en especial S. typhimurium, S. typhosa y S. paratyphi que utilizan citrato como
nutriente para crecer.
El agar Nitrato: sirve para identificar bacterias que realizan la reduccin de los nitratos
a nitrito, se aade una solucin al tubo con cultivo microbiano, esta es una mezcla de
cido actico ms cido sulfanlico y cido actico con alfa-amidonaftaleno. Si al
observar el tubo de color rojo-rosado indica la presencia de nitritos.
Medio SIM: este medio tiene tres finalidades en las muestras bacterianas, sirve para
comprobar hidrgeno sulfurado, Indol y motilidad. Se lleva a cabo una siembra por
picadura, donde la aparicin de una ligera zona negra a lo largo del trayecto de la
siembra, se considera una produccin positiva de hidrgeno sulfurado. La motilidad se
nota por el crecimiento en forma de limpia tubos alrededor del trayecto central de la
picadura., las bacterias inmviles no penetran en el agar semislido y por ultimo para
comprobar la formacin de Indol se utilizan tiras de papel empapadas de solucin
saturada de cido oxlico y se corrobora con el reactivo de Kovac.

Actividad 2. Pruebas bioqumicas

En esta actividad comparars entre las principales pruebas bioqumicas utilizadas para la
identificacin de bacterias, lo que te permitir poder hacer uso en un caso necesario de
anlisis ya sea ambiental, de salud, farmacutico, industrial entre otros. Realiza lo
siguiente:


1.- En un documento de textoelabora un cuadro comparativo de las principales pruebas y
tinciones bioqumicas haciendo nfasis en la importancia de cada prueba.

2.- Apoya tu trabajo con imgenes y s cuidadoso con la ortografa

3.- Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U3_A2_XXYZ y envalo a tu

contenidos, ya que tu facilitador (a) puede detectar esta situacin sin dificultad, tu

3.4. Caracteres Genticos

Habrs escuchado hablar de la ingeniera gentica, te preguntaras a que se refiere, es
una ciencia auxiliar de la gentica que se encarga del uso y aplicacin de tcnicas in vitro
para modificar el material gentico de los microorganismos en el laboratorio, dicho
material gentico (ADN) puede despus reinsertarse en el microorganismo de donde se
extrajo o bien en otra especie de inters.
Recientemente han tenido gran auge los anlisis moleculares genticos. Ha pasado por tu
mente hacerte la pregunta del por qu no tienes algn rasgo que te identifique con tus
progenitores y has encontrado respuesta alguna. He aqu donde acta la gentica que es
una ciencia auxiliar de la biologa que se encarga del estudio de la herencia, de cmo es
que las caractersticas fenotpicas y genotpicas se van a transmitir de una generacin a
otra (herencia gentica).

Esta ciencia se inici con el monje austriaco John Gregor Mendel (1822-1884), que es
considerado el padre de la Gentica, experiment con guisantes (chicharos) con los
cuales llevo a cabo una serie de experimentos respecto a su apariencia fsica cruz
organismos con caractersticas fsicas diferentes con los que demostr la transmisin de
los caracteres genticos. Aunque sus experimentos no fueron tomados en serio, fue hasta
1900 que sus trabajos se volvieron a retomar y posteriormente durante las dcadas
siguientes sirvieron de base para los genetistas que se dedican a estudiar la transmisin
de los caracteres y la expresin de la informacin gentica.
En la actualidad son de gran utilidad, por ejemplo sabrs que en criminologa son
esenciales para esclarecer crmenes, muy importantes en pleitos de paternidad, para
erradicar y combatir enfermedades, mejoramientos de semillas y de especies animales y
la ms importante dentro del estudio de los microorganismos para su identificacin.


3.2.1. Fundamentos de la caracterizacin gentica

Las estructuras que son esenciales para la gentica microbiana, se encuentran dentro de
la clula, especficamente estamos hablando del cromosoma bacteriano, donde se
localiza el cido desoxirribonucleico (ADN o DNA).
El ADN es el material gentico que se utiliza para guardar la informacin gentica,
supongamos que es el disco duro de una computadora, sabes pues que en l puedes
guardar toda la informacin que se genera al trabajar.
Una secuencia de ADN es simplemente la unin de miles de nucletidos. Un nucletido
est formado por una azcar de 5 carbonos (pentosa) llamada desoxirribosa, un grupo
fosfatado y una base nitrogenada, que en este caso se dividen en bases puricas como la
adenina (A) y guanina (G) y en bases pirimidicas que son timina (T) y citosina (C)
(Solomon, et al. 2008).

Cada especie microbiana tiene una secuencia gentica diferente, lo cual le confiere
caractersticas que las diferencian y son de suma importancia para la identificacin
bacteriana. Se tiene conocimiento de la secuencia gentica de algunas bacterias, pero en
general la mayora contienen entre 500 a 6000 genes. En 1949 Edwin Chargaff y sus
colegas de la Universidad de Colombia llegaron a determinar la composicin de bases de
ADN de diversos organismos y tejidos, entre los que destacan el de la bacteria E. coli que
contiene 26.1 % de adenina, 23.9 % de timina, 24.9 de guanina y 25.1 % de citosina
(Solomon, et al. 2008).


Estructura de un nucletido que forma parte del DNA
Editar del Solomon et al. 2008

3.2.2.Principales tcnicas

En la actualidad se han secuenciado completamente los genomas de muchas bacterias,
lo que ha revelado el nmero y la disposicin de los genes que poseen. La clonacin y la
secuenciacin han revolucionado el estudio de la estructura y la funcin del genoma en
todos los organismos. Los procesos de transformacin, transduccin y conjugacin se han
utilizado para mapear la localizacin de los genes en un cromosoma bacteriano
(Madigan,et al. 2009).

Se han desarrollado y mejorado tcnicas para auxiliar a la ingeniera gentica, dichas
tcnicas se basan en la capacidad para cortar el ADN de inters en fragmentos
especficos y purificar dichos fragmentos para su posterior manipulacin. Entre las
herramientas bsicas destacan: enzimas de restriccin, separacin de cidos nucleicos
por electroforesis, hibridacin de cidos nucleicos, las sondas de cido nucleico,
clonacin molecular y vectores de clonacin.


Electroforesis en gel
http://betbettybea.blogspot
.com/2011/11/electroforesi
s.html

Las imgenes anteriores muestran cmo es que se lleva a cabo una electroforesis en gel.
La figura de la izquierda ejemplifica como el investigador coloca con mucho cuidado y con
ayuda de una micropipeta la muestra de ADN en los posos del gel de agarosa, se
sumerge en bromuro de etidio y se aplica corriente elctrica y posteriormente la imagen
derecha es la observacin final de la tcnica con la ayuda de una cmara de luz
ultravioleta, donde las marcas son el ADN.

Despus de aislado y purificado el DNA se siembra la muestra en una placa porosa de gel
de agarosa o poliacrilamida, la cual es sometida aplicndole corriente elctrica. Al
aplicarse la corriente lo que va a provocar es que las molculas se van a mover a travs
del gel impulsadas por la corriente. Esta tcnica nos permite separar molculas de
acuerdo a su peso molecular y carga (positiva o negativa), debido a esto provoca que las
molculas pequeas o las de cierta carga se van a mover con mucha mayor velocidad
que las molculas grandes. Los cidos nucleicos por naturaleza estn cargados
negativamente, por lo tanto se van a dirigir hacia el polo positivo.

Durante el siglo pasado se han llevado a cabo experimentos para encontrar la secuencia
completa del genoma de varias especies bacterianas, esto implica una serie de trabajo
excesivo llevadas a cabo en laboratorios dotados de nuevas tecnologas de obtencin,
procesamiento y visualizacin de los microorganismos.

Cada organismo tiene una secuencia nica de DNA genmico, excepto los gemelos
idnticos. A diferencia de los organismos superiores cuyo material gentico contiene
cadenas repetitivas de ADN, las cuales varan en nmero y disposicin respecto a cada
especie. El DNA se puede sintetizar in vitro mediante un mtodo en fase slida, donde se
obtienen copias de secuencias especficas de ADN y son necesarias para muchas
tcnicas moleculares, un mtodo por el cual se sintetizan estas copias in vitro de ADN es
la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) fue inventada por Kary Mullis, el cual
recibi el premio nobel por su invento (Madigan,et al. 2009).


La PCR puede copiar segmentos de ADN hasta mil millones de veces en un tubo de
ensayo, un proceso llamado amplificacin, que genera grandes cantidades de genes
especficos u otros segmentos de ADN para toda una serie de aplicaciones en la biologa
molecular. Imaginemos pues que es una fotocopiadora a la cual manipulamos y
programamos para que nos de cmo resultado una cantidad especfica de copias de
algn documento, al final tendremos pues copias idnticas a la original y bsicamente eso
es lo que hace la tcnica de PCR. Utiliza una DNA-polimerasa que copia molculas de
ADN de manera natural, no las copia de manera completa, sino que amplifica fragmentos
de hasta algunos miles de pares de bases de una molcula de ADN ms grande.

La tcnica bsica para el estudio molecular de las bacterias es:
i. Cultivar la muestra bacteriana en un medio general.
ii. Llevar a cabo un aislamiento para purificar la bacteria.
iii. Si es necesario volver a resembrar el microorganismo en un medio especial para
evitar contaminacin de cepas.
iv. Aplicar una serie de pruebas y tinciones mencionadas en el tema anterior que
sirven para identificar la especie bacteriana.
v. Teniendo el cultivo puro, seguir incubando hasta obtener varias generaciones.
vi. Tomar una masa de microorganismos y centrifugarlos para obtener por diferencia
de peso molecular el ADN.
vii. Aplicar tcnicas especficas para lo que se requiere conocer cmo, la secuencia
de nucletidos, las protenas, los genes.

Una herramienta que auxilia para el estudio del material gentico son los microscopios,
que con los grandes avances tecnolgicos han ido especializndose ms respecta a los
intereses particulares del investigador, entre los cuales destacan los microscopios pticos
de campo brillante, de campo obscuro, de fluorescencia, con focal, de contraste de fases,
de interferencia, tambin microscopios electrnicos de transmisin, de barrido.

Csmidos:son vectores plasmdicos que contienen el sitio cos del genoma lambda (),
que genera extremos cohesivos cuando se cortan, son muy tiles en la tecnologa del
DNA recombinante, con estos es posible clonar fragmentos de ADN ms grandes, se
utilizan para fabricar genotecas de cDNA y son estudiados cuando el gen se expande de
30 a 40 kilobases (kb), es decir miles de bases que componen el ADN. La ventaja que
tienen los csmidos, es que es posible clonar fragmentos de DNA forneo ms grandes
que los originales.


Esquema de un csmido
http://genetica-
moderna.blogspot.com/2010/08/man
ipulacion-genetica.html

Plsmidos:son elementos genticos que se replican independientemente del cromosoma,
forman parte de otro elemento gentico. Existe una inmensa cantidad de plsmidos de
ADN de doble cadena molculas de material gentico que la mayora son circulares, no
obstante hay algunos que son lineales. Los plsmidos difieren de los virus ya que no
causan dao alguno a la clula husped y no presentan formas extracelulares.
Los plsmidos se diferencian de un cromosoma bacteriano, ya que los primeros portan
solo genes no esenciales y los cromosomas genes que son muy esenciales.
En cepas de E. coli se han asilado ms de 300 plsmidos naturales. El DNA de los
plsmidos es bicatenario y contienen de 1 Kbp hasta 1 Mbp.

Localizacin de un plsmido bacteriano

http://caibco.ucv.ve/caibc
o/vitae/VitaeDos/Articulo
s/BiologiaCelular/carcter.
htm


3.2.3.Desventajas

Pero los investigadores se han topado con un gran problema, el cual es que agentes
qumico, condiciones del medio ambiente hacen que los genes sufran mutaciones. Una
mutacin es aquella que produce cambios en la secuencia nucletida del DNA, no
obstante el ndice de mutacin global es mayor que la frecuencia de daos en el DNA,
puesto que todos los organismos tienen complejos enzimticos que reparan algunas
lesiones que llegase a sufrir el ADN.
Otro problema al que suelen enfrentarse es que al momento de cultivar la cepa, esta no
se pueda obtener pura, ya que existen especies bacterianas que comparten
genticamente secuencias de nucletidos, las cuales con los mtodos de tincin o
pruebas no se puedan diferenciar.

Evidencia de Aprendizaje. Plsmidos y Csmidos

Esta actividad es un gran reto ya que implica crear un mapa conceptual (MMCC) en el
cual reflejars tu dominio del tema anterior, al construirlo describirs las aplicaciones
biotecnolgicas de plsmidos respecto a la forma del ADN. Elaborar un mapa conceptual
donde apliques la biotecnologa de plsmidos respecto a la forma de ADN.

1.- concepto o idea original
2.- palabras clave
3.- conectores
4.- conectivos y palabras de conexin
5.- conceptos en diferentes niveles en este caso puedes desarrollarlo mnimo entres
niveles


1.- desprendimiento de conceptos secundarios
2.- conectores y proposiciones.- conectores son palabras o preposiciones insertas entre
dos conceptos y son tiles para producir nuevas proposiciones o enunciados con sentido
3.- enlaces cruzados.- son puentes entre proposiciones dentro de la arborizacin
4.- Jerarquizacin.- es el orden en ascendente-descendente en funcin de la complejidad
de los conceptos o proposiciones tratados en la arborizacin del MMCC.

Realiza lo siguiente:

1. En un documento de Word elabora un mapa conceptual siguiendo las indicaciones


anteriores. Eres libre de profundizar tanto como deseas.

2.- S cuidadoso con la ortografa

3.- Guarda tu documento con la nomenclatura BIC_U3_EA_XXYZ y envalo a tu

contenidos, el facilitador puede detectar esta situacin sin dificultad, tu formacin exige
que desde esta etapa todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y
propio de tu iniciativa y creatividad, para que en lo sucesivo esta actitud se proyecte

Nota 2: No olvides revisar/consultar la Escala de evaluacin para que puedas guiarte
correctamente en el diseo de estructura de tu ensayo y en el proceso de solucin o
respuesta de tu Evidencia de Aprendizaje (EA).

O. A. Relacionar columnas sobre los diferentes tipos de caracterizacin
microbiolgica, ventajas y desventajas de cada una de ellas.
1. En esta actividad realizars un formato de relacin de columnas donde debers
incluir:
Los tipos de caracterizacin microbiolgica
Las ventajas y desventajas del uso de estas caracterizaciones.
3.- Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U3_OA_XXYZ y envalo a tu
Esto te permitir utilizar adecuadamente las terminologas vistas en el tema, as como
identificar la ms adecuada respecto a las ventajas y desventajas.


Cierre de Unidad

Como te habrs dado cuenta con los temas vistos en esta unidad, la gran capacidad
metablica que tienen los microorganismos para reaccionar a las diferentes pruebas y
tinciones, as como est involucrado el material gentico para poder estudiar los
caracteres del genoma para determinar especficamente la huella dactilar de cada especie


y que tan importante son en la actualidad las diversas tcnicas para llegar a la obtencin
de ADN purificado y de esta forma conocer ms acerca de estos microorganismos para
poder aplicarla en experimentos de gran utilidad para poder erradicar enfermedades,
mejoramiento de cepas para produccin de vinos o lcteos e incluso remediar nuestro
medio ambiente haciendo en las bacterias que intervienen en los procesos de fijacin del
nitrgeno, el tratamiento de aguas residuales.

Para saber ms

Para corroborar lo aprendido sobre la tcnica de tincin de Gram observar el siguiente
video http://www.gefor.4t.com/bacteriologia/tinciondegram.html.
Para entender mejor la tcnica de electroforesis en gel ver los siguientes videos
http://www.youtube.com/watch?v=sbCusDyYoi0 y
http://www.youtube.com/watch?v=WeRwsr5JUwA
Para comprender como se lleva a cabo la PCR observar el siguiente video
http://www.youtube.com/watch?v=i1o4jYepdxs.
Para comprender que son los plsmidos ver el siguiente video
http://www.youtube.com/watch?v=RfMTv1km0RU.

Fuentes de consulta

Bibliografa bsica

Pidello,A. (2011). Ecologa microbiana. Corpus
Willey, J., Sherwood, L. M. y Woolverton, C. J. (2009). Microbiologa. 7
a
ed. MGraw
Hill-Interamericana.


Graw Hill.
microorganismos. 12
a
ed. Pearson Adison-Wesley.
a
ed. McGraw-
Hill Interamericana.
a
ed. Mc Graw Hill.
a

ed.Mdica Panamericana.


Unidad 4.Ecologa microbiana


La ecologa microbiana es una ciencia que recientemente comenz a tener importancia,
pues est estrechamente relacionada con problemas de contaminacin y la interaccin
que el hombre tiene con su ambiente, pero aborda su contenido temtico mezclando
temas de biologa con las ciencias auxiliares ecologa y microbiologa que abordan el
estudio fundamental de como los microorganismos juegan un papel importante en la
biosfera. Es imposible concebir la vida en el planeta Tierra sin la gran diversidad de seres
vivos y las actividades que estos llevan a cabo en conjunto.

Forman pues un factor importante dentro de las cadenas trficas de los ecosistemas, la
funcin que desempean en los ciclos biogeoqumicos (oxgeno, carbono, nitrgeno,
agua), las interacciones con el resto de los organismos vivos; las cuales llevan a definir su
papel importante para mantener la salud de los ecosistemas. Por ejemplo te habrs dado
cuenta que si no realizas la limpieza de una pecera se forma una pelcula que recubre las
paredes y obviamente los peces empiezan a presentar problemas puesto que el exceso
de microorganismos hace que compitan por nutrientes bsicos, otro muy comn es la
placa dental que se forma diariamente de manera normal ayudando a la proteccin del
esmalte; mientras que si se presenta en forma excesiva esta puede provocar el deterioro
del mismo. Tambin habrs notado que en un rio las piedras tienen una textura
resbaladiza que hace peligroso el cruce puesto que puedes caer y lastimarte, pues son
los microorganismos que hacen posible esto al igual que recubren las superficies de las
tuberas, los cascos de los barcos.

Propsitos

En esta unidad comprenders los conceptos importantes de cmo los microorganismos se
relacionan con otros y el medio ambiente que le rodea para llevar a cabo actividades
importantes, que variedad de especies intervienen en procesos de la industria alimenticia,
farmacutica, agropecuarios y en la medicina (salud); por ejemplo la importancia de la
flora bacteriana de los organismos que ayuda a protegerlos contra agentes patgenos.

Adems analizaras por qu son importantes los biofilms en la vida cotidiana y de cmo se
lleva a cabo el qurum sensing.


Relacionar los distintos conceptos de la ecologa microbiana mediante el estudio de su


fundamentacin ecolgica para comprender el comportamiento de diferentes
microorganismos empleados en las tcnicas y procesos biotecnolgicos.

4.1. Concepto de hbitat y biodiversidad

Actualmente el impacto de las actividades humanas (urbano-industrial-agropecuarias y
recreacionales) en los componentes del Sistema Tierra ha generado una crisis ambiental,
la cual ha despertado gran preocupacin no slo en la comunidad cientfica sino en la
sociedad en general.

En trminos de la ecologa microbiana el hablar de hbitat es pues el entorno natural en el
que vive un organismo, poblacin o especie. Los factores que lo componen son dos:

De tipo bitico, es decir que tienen vida como las plantas, microorganismos, los
animales, los hongos y

De tipo abitico que son aquellos que no tienen vida pero son vitales como el agua, el
aire, la luz solar, el suelo, la presin atmosfrica.

Relacionemos el tema de hbitat con tu casa, que est conformada por varias
habitaciones y en cada una de ellas se realizan diferentes actividades, ubicas entonces la
cocina, la sala, el comedor, el bao y las recamaras como habitaciones primordiales. La
funcin de cada una de las habitaciones es contribuir a la vida cotidiana, tenemos pues
una habitacin donde dormimos, descansamos, baamos, comemos.

Por otro lado la biodiversidad es la variedad de organismos vivos considerada a nivel de
diversidad gentica, diversidad de especie y diversidad de ecosistema. Estamos hablando
de sumar la proporcin de cada especie que existe y cuantas especies hay en nmero de
cada una de ellas dentro del ecosistema; es decir riqueza ms abundancia.


Biodiversidad biolgica de Mxico
http://biodi
versidad-
mexico-
fanny.blog
spot.com/

Por ejemplo la diversidad humana (Homo sapiens) del planeta Tierra es muy variada, as
sabes que existen razas humanas que se pueden distinguir genticamente por el tono de
piel, los rasgos fsicos, y por el lugar donde habitan debido a sus costumbres, vestimenta,
idioma. Tambin en los animales podemos observar diferencias entre las especies de
perros, gatos, mariposas, peces, bacterias, hongos y en las plantas se denominan
variedad de especie como el maz, frijol, chile, manzana, uva; y seguiramos hablando de
un sinfn de especies que t ya conoces.

Biodiversidad Biolgica del planeta Tierra
http://recursosnaturalesd
echiapas.blogspot.com/2
011/05/dia-mundial-de-
la-biodiversidad.html


En el planeta Tierra la poblacin de seres vivos que conviven se esquematiza en el
siguiente grfico, donde a pesar de que las bacterias ocupan un porcentaje menor
comparado por ejemplo con los insectos son de gran utilidad a nivel industrial para la
elaboracin de productos alimenticios, farmacuticos, para el tratamiento de aguas
residuales, en el medio ambiente con la fijacin del nitrgeno atmosfrico, en medicina
para creacin de nuevos antibiticos, entre otras cosas.

Porcentaje de la biodiversidad en la Tierra

Sabes pues que la ecologa microbiana va a estudiar las interacciones de los
microorganismos con su entorno, los estudios han tomado su auge despus de la mitad
del siglo pasado (XX), pero desde el origen de la vida en la Tierra hace 3,600 millones de
aos en el En Arcaico, antes de la Era Paleozoica cuando aparecieron los primeros
organismos procariotas; estas relaciones comenzaron a llevarse a cabo, pero no fue sino
hasta que apareci el gnero Homo sapiens (humano) no se poda explicar
cientficamente en ese entonces como es que se llevaban a cabo dichas relaciones con
los organismos y el medio ambiente.

Como se observa en la figura siguiente en el En Arcaico fue donde empez la vida, con
los primeros microorganismos procariotas que eran bacterias termfilas puesto que haba
grandes erupciones volcnicas que dieron origen a la formacin de los continentes.


Eras geolgicas
Editar de la
web
http://histori
ageologicad
emexico.blo
gspot.com/2
011/04/eras
-
geologicas.
html

El planeta Tierra en sus inicios no era como lo conocemos actualmente con 5 continentes
(frica, Amrica, Asia, Europa, Oceana) rodeados de grandes masas de agua (mares);
sino que era solo una gran masa de tierra llamada Pangea, la cual se estableci durante
la Era Paleozoica y con el paso de los aos evoluciono hasta lo que hoy conocemos. As
como se fueron formando los continentes fue apareciendo la vida.

Cuesta trabajo entender el pasado evolutivo de la vida en la Tierra, ya que se requiere
entender su naturaleza propia, los procesos que se han llevado a cabo y como es que
evolucionaron dentro del ambiente utilizando tanto los componentes biticos como
abiticos.

4.1.1.Nicho ecolgico desde el punto de vista bacteriano

La incgnita que se plantean los microbilogos respecto a las relaciones que existen entre
las bacterias y su medio ambiente, es tratar de explicar por qu los microorganismos se
encuentran en sitios especficos, con ciertos rasgos que los distinguen y en un cierto
espacio temporal; por lo cual su tarea fundamental es la de evaluar la diversidad,
abundancia y distribucin de los microorganismos dentro de ambientes como los
ecosistemas, comunidades, poblaciones y de manera individual para poder entender el
papel fundamental que desempean en la biosfera.


Diversidad de microorganismos
Editar de la web
http://www.encuentos.com/educacion-
ambiental-2/dia-internacional-de-la-
diversidad-biologica-22-de-mayo/

Un nicho ecolgico es bsicamente un hbitat de uno o varios microorganismos en el
que influyen los factores biticos y abiticos. Estas relaciones que se forman pueden ser
de manera positiva como la simbiosis que se define como la relacin que existe entre dos
o ms microorganismos que comparten un ecosistema determinado, presenta variantes
como:

Parasitismo: una forma de simbiosis en la que un miembro (microorganismo) de la
relacin resulta perjudicado, ya que es un organismo que obtiene sus nutrientes de
otro organismo, que se denomina hospedador. Algunos patgenos que causan
enfermedades presentan este tipo de relacin, entre ellas tenemos a la bacteria E.
coli que causa infecciones intestinales si sobre pasa la forma normal de la flora
bacteriana, la Chlamydia trachomatis que causa clamidiosis (provoca secrecin y
escozor al orinar, genera esterilidad en el varn), Neisseria gonorrhoeae bacteria que
causa la gonorrea, la causante de la sfilis Treponema pallidum.


Bacteria Chlamydia trachomatisizq. y cocos de Neisseria gonorrhoeae der.
Editar de
la web
http://ww
w.urolog
osdemex
ico.com/t
ransmisi
on_sexu
al.html y

Mutualismo: relacin simbitica en la que ambas especies resultan beneficiadas,
como las que estn asociadas a la flora bacteriana del tracto digestivo y convierten
las protenas que consumimos al ingerir leche en cido lctico Lactobacillu ssp, otra
relacin es la que existe entre las bacterias fijadoras de nitrgeno (gneros
Azotobacter, Nitrobacteres una bacteria gram negativa, Rhizobiumes de tipo gram
negativa bacteria que origina los ndulos)y las leguminosas presentan ndulos donde
se alojan dichas bacterias, existen otras bacterias en los tanques donde se almacena
el petrleo crudo y la gasolina se acumula humedad la cual hace posible un hbitat
ideal para ellas que van a oxidar los hidrocarburos en condiciones anxicas ya que
consumen sulfuro (H
2
S) que es muy corrosivo y puede agujerar los tanques con el
constante goteo de agua y acidificacin del combustible.

Lactobacillus sakeizq. yRhizobium bacteria fijadora de nitrgeno der.
http://archive.microbelibrary.org/ASMOnly/Details.asp?ID=1471 y
http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacion/cuaderno/ec_24.asp?cuaderno=
24


Comensalismo: relacin simbitica donde una especie resulta beneficiada, mientras
que la otra no sale ni beneficiada ni perjudicada. Son ejemplo las bacterias que
habitan en el intestino animal, se desarrollan debido al consumo de los nutrientes que
se librean despus del metabolismo del animal, ejemplos tpicos son Nitrosomonas
(bacteria que se alimenta de compuestos inorgnicos, son auttrofas necesitan de
oxgeno para vivir y de amoniaco como fuente de energa)yBacillus sp que se asocia
con los hongos micorrzicos para obtener compuestos orgnicos que son secretados
por las races de las plantas.

Bacteria Nitrosomona sp izq y Colonias de Bacilluscereus der.
http://www.teamaquafix.com/ammoniainwastewater.aspx y
http://www.health-healths.com/wp-content/uploads/2011/07/Background2.jpg

4.1.2.Concepto de especie

El trmino de especie de manera microbiolgico es muy ambiguo, porque no existe un
concepto aceptado universalmente para los organismos procariotas; pero puede definirse
como la coleccin de cepas que comparten un gran nmero de caractersticas
importantes, pero difieren en una o ms propiedades significativas de otras colecciones
de cepas.

La especie es considerada como la unidad fundamental de la diversidad biolgica,
tomando en cuenta datos fenotpicos, genotpicos y de filogenia. Las cepas (conjunto de
microorganismos) presentan para clasificarlas en nica especie, una hibridacin de su
ADN-ADNde un 70 %, y parecerse a la secuencia del gen 16S rARN en un 97 %.
Basndose en estos criterio se han reconocido 7,00 especies de bacterias y arqueas.

La siguiente tabla muestra un ejemplo de cmo es que se llega a definir al
microorganismo fototrfico Allochromatium warmingii tomando en cuenta los rasgos
relevantes para su clasificacin jerrquica (Madigan et al; 2009).

El gnero Allochromatium normalmente se localiza en lugares anxicos iluminados de
lagos, manantiales sulfurosos y otros hbitats acuticos donde se acumula sulfuro de
hidrgeno (H
2
S) el cual reduce el bixido de carbono (CO
2
); la forma que presentan son
ovaladas o como bacilos con flagelos y el azufre esta contenido dentro de las clulas.


Bacterias rojas del azufre
Editar de
Madigan et al;
2009

Taxonoma Nombre Propiedades Mtodo de confirmacin
Dominio Bacteria Clulas bacterianas;
secuencias de RNA
ribosmico tpicas de
bacterias
Microscopa; anlisis de
la secuencia de RNA
ribosmico 16S;
presencia de
biomarcadores nicos,
por ejemplo el
peptidoglicano
Filum Proteobacteria Secuencias de RNA
ribosmico tpicas de
Proteobacterias
Anlisis de la secuencia
del RNA ribosmico 16S
Clase Gammaproteobacteria Bacterias gram
negativas; secuencias de
ARN ribosmico tpicas
de Gammaproteobacteria
Tincin de Gram,
microscopia
Orden Chromatiales Bacterias fottrofas
purpura
Pigmentos
caractersticos
bacterioclorofila a
Gnero Allochromatium Bacterias prpura del
azufre con forma de
bastn
Microscopia
Especie Warmingii Clulas de 3,5-4,0 m X
5-11 m; almacenan
azufre principalmente en
los polos de la clula
Medida de las clulas en
el microscopio usando
un micrmetro;
determinando la posicin
de los glbulos de S
0

dentro de la clula


Fotografa al microscopio ptico de clulas de la bacteria purpura
del azufre Allochromatium warmingii
Editar de Madigan
et al; 2009

El pigmento caracterstico de las plantas superiores encargada de realizar la fotosntesis
en organismos fottrofos oxignicos es la molcula de clorofila a, a diferencia de las
bacterias que presentan bacterioclorofila en organismos fottrofos anoxignicos.

Molculas de clorofila izq. y bacterioclorofila der.
Editar de Madigan et al;
2009

Para entender mejor el concepto de especie piensa en tu persona, t eres muy diferente
a los dems ni siquiera te pareces a tus hermanos e inclusive aquellos que son gemelos
tienen algn rasgo que los diferencia, entonces estars de acuerdo que la especie es en
esencia especial y nica.

4.1.3. Concepto de poblacin

En microbiologa la poblacin se refiere al grupo de clulas microbianas de una misma
especie (colonia o cepa) que conviven al mismo tiempo en un lugar especfico. Las


poblaciones presentan caractersticas diferentes a las que tienen los individuos que las
componen. Comparten caracteres genticos iguales. Las colonias son la forma en la que
se representa el crecimiento en un medio de cultivo de poblaciones que se han originado
a partir de una clula que es macroscpicamente visible. Al conjunto de poblaciones
bacterianas tambin se le denomina gremios.

Por ejemplo las personas que forman parte de tu familia son un grupo de individuos que
comparten caractersticas genticas que viven en cierto lugar, las cuales son muy
diferentes con las otras familias que son sus vecinos y por lo tanto el conjunto total de
diferentes familias forma entonces una poblacin.

4.1.4. Concepto de comunidad

En un hbitat microbiano raramente las poblaciones de clulas viven aisladas, las cuales
se van a relacionar con otras poblaciones en conjuntos que se denominan comunidad.
Las comunidades estn compuestas por todas las poblaciones de todas las especies
diferentes que conviven juntas en un lugar determinado y por consiguiente tienen
caracteres genotpicos distintos. Hablemos pues de ti que como individuo que perteneces
a una familia, el conjunto de familias forma poblaciones y varias poblaciones van a formar
una comunidad.

4.1.5. Concepto de ecosistema

Dentro de una comunidad microbiana la diversidad y abundancia de microorganismos
est controlada por los recursos (nutrimentos) y por las condiciones que presentan como
temperatura, pH, concentracin de oxgeno que existe en el medio. Las caractersticas
que presentan los hbitats es muy diferente y pueden existir factores que favorezcan el
crecimiento de un microorganismo en especfico, pero que a su vez es daino para otro.
Bsicamente el ecosistema incluye a los organismos vivos y las condiciones fsicas y
qumicas de su entorno.

Tales comunidades microbianas van a interaccionar con macroorganismos y factores
abiticos en donde el funcionamiento constituye el ecosistema.

Continuemos hablando de ti que como individuo perteneces a una familia, el conjunto de
familias forma poblaciones, varias poblaciones forman una comunidad y todas las
comunidades forman el ecosistema.

Estamos partiendo pues de lo particular a lo general de manera macroscpica porque
tenemos entonces al organismo (especie nica), varios organismos de la misma especie
forman poblaciones, muchas poblaciones forman comunidades y todas las comunidades
van a comprender el ecosistema. Si hablsemos de manera microscpica de lo particular
a la general a un organismo (especie) lo componen partculas, las cuales forman tomos,


estos constituyen molculas que forman organelos, varios organelos constituyen la clula,
varias clulas forma tejidos, el conjunto de tejidos forma rganos y la unin de varios
rganos sistemas que van a constituir a un individuo como tal.

Editar del
Solomon
et al;
2008


Organizacin jerrquica de la vida

Como se esquematiza en la figura de arriba el nivel de organizacin de la vida es como si
estuviramos hablando de la taxonoma de un organismo que de lo simple va a constituir
algo ms complejo.

Existen tanto ecosistemas terrestres como acuticos, y estos a su vez se subdividen en
naturales y artificiales. Los naturales son aquellos que se crean sin que el hombre
intervenga por ejemplo los bosques, selvas, desiertos, tundra, praderas, mares y ocanos;
y los artificiales son aquellos creados por la mano del hombre como los campos de
cultivo, jardines, zoolgicos, acuarios, presas. En ambos casos se establecen condiciones
ptimas para la formacin de micro-hbitats o micro-ambientes en donde los
microorganismos intervienen para regular procesos, llevara a cabo actividades
importantes para la vida diaria.

4.2. Sucesin ecolgica en comunidades bacterianas

La sucesin de las colonias bacterianas viene marcada por el crecimiento de las colonias,
poblaciones o gremios. El proceso de desarrollo secuencial de una comunidad respecto al
tiempo implica la sustitucin de especies de una etapa por diferentes especies en la etapa
siguiente es a lo que se denomina sucesin de especies bacterianas donde influye el
tiempo que puede ser desde segundos, minutos, horas hasta das; a diferencia de la
sucesin que presentan los ecosistemas acuticos (mar, ro, lago) o terrestres (selva,
bosque, desierto, pradera, tundra) en los que pueden pasar decenas, cientos o miles de
aos para que se establezcan las comunidades.

Papel ecolgico de los microorganismos
Editar del Prescott et al, 2000

Entre los ecosistemas microbianos destacan aquellos que se forman tanto en el suelo,
agua dulce como los lagos, charcos, ros y corrientes, agua salada como los mares; as
como en los vegetales. Aunque tambin son importantes aquellos que se forman en el


humano y otros animales. Estos ecosistemas pueden variar respecto a la estructura fsica,
la composicin de nutrientes y la temperatura que conjuntamente van a influir en la
diversidad y abundancia de los microorganismos ah presentes.

Suelo: comnmente denominamos tierra a la capa sobre la que nos paramos, pero
ese trmino est mal dicho pues debe de llamarse suelo, se forma por la interaccin
de la roca, topografa, el clima y los seres vivos. Los suelos pueden ser de tipo
mineral y orgnico del cual el mineral es que ms abunda en ecosistemas terrestres,
el cual est formado de minerales inorgnicos, materia orgnica, aire-agua y
organismos vivos tanto microorganismos como macroorganismos.

En el suelo estn presentes partculas (limo, arena y arcilla) en las cuales se van adherir
las bacterias formando microcolonias y estas se van asociar con la rizosfera y dichos
microorganismos se pueden analizar mediante microscopia de fluorescencia. La actividad
de los microorganismos en el suelo viene regulada por la cantidad de agua disponible y
los nutrientes presentes como el carbono, el fosforo y el nitrgeno que forman parte de las
molculas de la vida.

Hbitat microbiano del suelo
Editar de Madigan et al; 2009

Agua dulce: en el agua existen microorganismos productores y consumidores de
oxgeno, los cuales llevan a cabo los procesos de fotosntesis y respiracin y son muy
importantes en la naturaleza de los ciclos del oxgeno y del carbono. Los
microorganismos que habitan en los lagos, ros y agua encharcada estn en forma
suspendida y se denominan fottrofos oxignicos, conformados por cianobacterias y
algas que reducen el CO
2
a materia orgnica a partir de la luz solar. El oxgeno es
hidrosoluble en los hbitats acuticos; se va degradando lentamente por los


microorganismos que habitan en la superficie y al disminuir se convierte en un
ambiente anxico, entrando a escena los microorganismos quimioorgantrofos
anaerobios y aquellos que fermentan y respiran anaerbicamente.

Por ejemplo te habrs dado cuenta que en una pecera al contener mucha materia
orgnica (alimento para peces), se va a degradar lentamente propiciando as el
crecimiento de microorganismos que encuentran las condiciones ptimas y van a tapizar
las paredes de la pecera hacindola que se torne de color verdosa, esto tambin ocurre
en los ros y lagos limpios y cristalinos, que reciben descargas de agua y desechos
despus de un tiempo las caractersticas son diferentes y presentan olor desagradable.

La bacteria Vibrio cholerae habita en el agua
Editar de
http://todosloscaminos
haciati.blogspot.com/2
010/11/mundo-vibrio-
cholerae-javier-
flores.html y
http://fundacionio.org/i
mg/bacteriology/cont/v
ibrio_cholerae.html

Plantas:estos organismos van a presentar caractersticas variadas durante su ciclo de
vida que van a influir en la vida de los microorganismos, los vegetales son organismos
fotosintticos que convierten el CO
2
a oxgeno. Los microorganismos que conviven en
estos micro-hbitats estn muy expuestos a los materiales que la planta produce
(exudados, savia), as como a la radiacin ultravioleta que les provoca alteraciones
genticas.

Tenemos pues bacterias que van a estar en diferentes rganos de la planta como la raz
(denominada rizosfera que es la regin que rodea la raz y el rizoplano que es la
superficie real de la raz), se van a excretar azucares, aminocidos, hormonas y
vitaminas; las bacterias y hongos forman microcolonias y se relacionan de manera
simbitica con las bacterias para llevar a cabo la fijacin del nitrgeno.

En la superficie de las hojas (filosfera) tambin se van a localizar bacterias encargadas de
la fijacin del nitrgeno. Algunas bacterias proporcionan beneficios a la planta, pero
existen otras que van a resultar malignas como el caso de los patgenos (fitopatgenos)
que causan enfermedades a las plantas, entre los gneros ms comunes estn
Pseudomonas, Xanthomonas, Xylella y Erwinia. Tambin existen bacterias que se alojan
en los tallos, semillas, flores y frutos de la planta.


Una planta que crece en buenas condiciones no va a experimentar estrs a diferencia de
aquellas que experimentan periodos de sequias, temperaturas elevadas, la limitacin de
nutrientes, la alimentacin de insectos u otros factores que intervienen para aumentar su
estrs y provocarle susceptibilidad a infecciones bacterianas.

Bacterias en races de plantas para la fijacin de nitrgeno
Editar de la web
http://biologia.laguia2000.c
om/monera/relaciones-de-
los-microorganismos-con-
otros-seres-vivos-
simbiosis-y-de-
comensalismo

Agua salada:a diferencia del agua dulce, los mares (ocanos) presentan
caractersticas diferentes que varan como la salinidad, temperatura media,
profundidad y el estado nutricional. Se pueden encontrar dos tipos de
microorganismos aquellos que se encuentran en la superficie del mar abierto y los de
las grandes profundidades marinas.

Al igual que en el agua dulce, las zonas costeras estn en contacto con descargas de
desechos y por lo tanto van a presentar grandes cantidades de nutrientes que son
ptimos para el crecimiento de microorganismos fottrofos, y estos a su vez son de gran
importancia en las cadenas trficas para las bacterias hetertrofas y animales acuticos
(peces y crustceos). Prochlorococcus es un organismo fottrofo oxignico abunda en los
mares tropicales y subtropicales.

En los ocanos tropicales y subtropicales abundan las cianobacterias fottroficas
Trichodesmiumcuyas clulas fijan nitrgeno y se observan en forma de penachos
filamentosos y constituyen la biomasa de los ocanos como se observa en la figura
siguiente el mar se torna verdoso por la presencia de esta bacteria

Trichodesmiumbacteria que habita en los mares y fija nitrgeno
http://archiv.ethlife.ethz.
ch/images/trichodesmiu
m-l.jpg y
http://www.coas.oregon
state.edu/index.cfm?fus
eaction=content.display
&pageID=589

El humano y los animales: en este tipo de micro-hbitats las bacterias encuentran


condiciones ptimas para desarrollarse, la forma de expresar la sintomatologa en el
humano como en los animales en algunos casos es muy similar. En la mayora de los
casos para evitar contraer alguna enfermedad bacteriana se recomienda vacunarse
para prevenir, pero cuando la enfermedad ataca lo que se debe realizar es aplicar
antibiticos para contrarrestar la enfermedad.

La tabla que a continuacin se presenta, enuncia algunas bacterias importantes que
atacan tanto a humanos como a los animales (Brooks et al; 2011):

Algunas de las enfermedades bacterianas que se pueden prevenir mediante la aplicacin
de vacunas son: difteria, ttanos, tos ferina, neumona, meningitis, otitis, septicemia,
osteomielitis, faringitis, celulitis, epiglotitis, infecciones de la piel, odo, urinarias, entre
otras.

Nombre de la bacteria Enfermedad que causa
Bacillus anthracis Carbunco o ntrax
Bordetella pertussis Tos ferina
Brucella spp Brucelosis
Chlamydia trachomatis Conjuntivitis
Clostridium perfringens Gangrena gaseosa
Clostridium tetani Ttanos
Clostridium botulinum Botulismo
Corynebacterium diphtheriae Difteria
Coxiella burnetii Fiebre Q
Escherichia coli Diarrea
Legionella pneumophila Enfermedad del Legionario
Listeria monocytogenes Encefalitis
Mycobacterium tuberculosis Tuberculosis
Mycobacterium leprae Lepra
Neisseria gonorrhoeae Gonorrea
Neisseria meningitidis Meningitis
Salmonella sp Salmonelosis
Salmonella typhi, S. paratyphi Fiebre tifoidea
Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus,
Klebsiella pneumoniae, Mycoplasma spp, Chlamydia spp.
Neumona
Streptococcus spp Erisipela
Streptococcus pyogenes Escarlatina
Treponema pallidum Sfilis
Vibrio cholerae Clera
Yersiniaenterocolitica Gastroenteritis
Yersinia pestis Peste


4.2.1. Fases

En ecologa la sucesin implica la transformacin de un ecosistema desde su origen hasta
su establecimiento, la cual no se podra llevar sino es mediante una serie de fases
intermedias. La sucesin entonces se suele describircomo los cambios en la composicin
de especies en un cierto tiempo. Se entiende por ejemplo cmo es que un campo con el
paso del tiempo se convierte en un hermoso bosque.

Existen dos tipos de sucesin:

Primaria que se va a establecer en una zona que no presenta algn tipo de comunidad
por ejemplo la que ocurre en las dunas, las nuevas islas (coralinas, deltas), es una zona
virgen por ejemplo es lo que sucedi cuando aparecieron las primeras especies en el
planeta Tierra a las cuales se les denomina pioneras o colonizadoras por ser las primeras
en establecerse.

Sucesin ecolgica primaria establecimiento de un bosque

http://galeria
s.educ.ar/m
ain.php?g2_
view=keyalb
um.Keywor
dAlbum&g2
_keyword=e
squema&g2
_itemId=952
8

Secundaria que es aquella que se establece sobre una zona donde anteriormente ya
haba vida, es lo que ocurre despus de un incendio, inundacin, derrumbe, deslave,
plagas, enfermedades, tala de bosques, establecimiento de cultivos, lo que lleva a la
perdida de la mayora de las especies que habitaban anteriormente.


Sucesin ecolgica secundaria despus de un incendio
http://cbta85salvemoselplanet
a.blogspot.com/2009/06/suce
sion-ecologica.html

Sabes pues como se lleva a cabo la sucesin de manera macroscpica en los
ecosistemas, pero en el micro-hbitat de las bacterias como se lleva a cabo este proceso.

a. Primero debe de establecerse la colonizacin de una bacteria en un lugar
adecuado del ambiente (agua, suelo, plantas, animales y el humano).

b. Despus se lleva a cabo el crecimiento de la o las bacterias como se sabe este
presenta varias etapas o de adaptacin o lag, exponencial, estacionaria y de
declinacin o muerte, van a formar micro-colonias individuales que se van a unir
unas con otras formando una red en donde el poder activo ya sea benfico o
patgeno de la bacteria an no tiene la capacidad para desarrollarse totalmente y

c. Finalmente la sucesin bacteriana que se caracteriza por un aumento en la
complejidad de la composicin microbiana la cual va a tomar mayor fuerza
respecto a su poder patgeno o en beneficio en algn proceso.

En una infeccin estomacal causada por la ingesta de alimentos contaminados con la
bacteria E. colia pesar de que forma parte de la flora normal del cuerpo humano, al
consumir alimentos mal cocidos, leche y jugos sin pasteurizar se desencadena la
colonizacin de la bacteria en el intestino y causa la diarrea. No se percata uno de la
enfermedad hasta que se presentasintomatologa caracterstica y por consiguiente se
tiene que suministrar un antibitico para evitar la proliferacin bacteriana y acabar con su
poblacin; esto dura aprox. de 5 a 10 das.

Otro ejemplo muy comn es la placa que se forma sobre los dientes llamada placa dental,
consta de una masa de bacterias pudindose encontrar en 1mm de rea que pesa 1 mg
unos 250 millones de bacterias y en la cavidad bucal existen unas 350 Clases ms de
bacterias que pueden contribuir a la formacin de la placa; por eso es recomendable
lavarse los dientes despus de cada alimento para evitar tener un exceso de material


nutritivo que es ideal para el crecimiento de bacterias. Si no se llevase la limpieza dental y
bucal adecuadamente puede contraerse inflamacin de encas, periodontitis, caries. Por
eso, si quieres tener una gran sonrisa lvate los dientes tres veces al da, o quieres verte
como la imagen de abajo.

Importancia de la limpieza dental
http://www.tenersalud.com/2010/07/30/la-placa-dental/
http://revista-tareaweb.blogspot.com/
http://ligasensalud.blogspot.com/2010/09/calculo-dental.html

Actividad 1. Mi vecino me vigila

En esta actividad comprenders y analizars como la ecologa estudia a los
microorganismos en forma de conjuntos e individualmente.
Destaca ejemplos cuando las bacterias estn en grupos haciendo nfasis en cmo se les
denomina a cada conjunto.
Explica cmo es ms fcil estudiar a las bacterias de forma grupal o individual y porque.


1. En un documento de Power Point elabora una presentacin de 10 diapositivas mximo
siguiendo las indicaciones anteriores. Eres libre de profundizar tanto como deseas.

2. Apoya con imgenes el trabajo de informacin que realizaste.


4.- Guarda tu documento con la nomenclaturaMTM_U4_A1_XXYZ y envalo a tu

contenidos, el facilitador puede detectar esta situacin sin dificultad, tu formacin exige
que desde esta etapa todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio
de tu iniciativa y creatividad, para que en lo sucesivo esta actitud se proyecte



4.2.2. Competencia y evolucin

En la vida cotidiana entre el hombre siempre ha existido competencia ya sea por trabajo,
dinero, quien viste mejor, quien trae el mejor auto, el o la mejor pareja y con los animales
y plantas es casi parecido ya que existe competencia por luz, nutrientes, para aparearse,
quien es el que domina ms. Entonces te imaginaras cmo ser la competencia entre los
microorganismos, ellos han tenido que desarrollar estrategias de adaptacin que les
permiten mejorar las oportunidades de sobrevivencia y su reproduccin, as como sus
caractersticas genticas han ido cambiando de generacin en generacin, lo que les ha
permitido presentar diferencias entre las poblaciones de bacterias y de esta manera poder
explicar su origen y antepasado.

Entonces, al ser organismos microscpicos tienen que desarrollar estrategias que les
permitan prevalecer en el medio ambiente. Hay bacterias que compiten por un mismo
sustrato, cantidad de luz, temperatura, humedad, pH, nutrientes (alimento), oxigeno,
nitrgeno, azufre. Otros factores que influyen para que un microorganismos prevalezca es
la dominancia que presenta respecto a otras especies, que tan longevo es (viejo), las
interacciones que presenta con el medio que le rodea, entre ms adaptado este ms
ventajas tendr para seguir con vida.

Competencia entre bacterias
http://graficas
.explora.cl/otr
os/Xsemana/
yogur.html
http://vancom
icinaala.blogs
pot.com/

Por ejemplo la bacteria Vibrio cholerae compite con Escherichia coli, ambas son bacilos
gram negativos E. coli forman parte de la flora normal y habita en el intestino del ser
humano y de los animales, mientras que V. choleraese encuentra en aguas marinas y
superficiales.


E. colies una bacteria aerobia o anaerobia facultativa, puede ser mvil por tener flagelos
peritricos o no ser mvil, fermenta glucosa en lugar de oxidarla, produce un gas, catalasa
positiva, oxidasa negativa, reduce nitrato a nitritos, positiva en indol, lisina descarboxilasa
y fermentacin de manitol. Produce diarrea frecuentemente en el mundo, por la ingesta de
alimentos contaminados.

Vibrio cholerae es una bacteria aerobia, presenta un flagelo polar, son oxidasa positiva,
crecen a pH 8.5 a 9.5, fermenta sacarosa y manosa, produce la enterotoxina termolbil
que causa el clera, una diarrea liquida abundante que rpidamente puede desencadenar
deshidratacin y la muerte del paciente al ingerir agua contaminada. De la misma especie
se derivan los siguientes serogrupos que se mencionan a continuacin:

Vibrio cholerae serogrupos O1 y O139: causa clera epidmico y pandmico.
Vibrio cholerae serogrupos no O1 y no O139: causa diarrea coleriforme, diarrea leve y
raras veces infecciones extraintestinales.

Por lo tanto en el intestino donde al ingerir por descuido alimentos y agua contaminados
con bacterias Vibrio cholerae y Escherichia coli provoca una competencia de ambas por
sustrato (intestino), nutrientes, luz, humedad, temperatura; y lleva consiguientemente a
desencadenar una lucha campal entre dichas bacterias, pero oh! sorpresa la que resiste
mejor y como quien dice resulta vencedora es Vibrio choleraesobre E. coli.

Se observa aVibrio choleraecombatiendo contraE. coli
http://microgaia.blogspot.co
m/2010/12/vibrio-cholerae-
el-rambo-de-las.html

El que existan por ejemplo diferentes serogrupos de V. cholerae significa que se ha ido
adaptando lentamente a los diferentes factores que la interfieren en su crecimiento desde
que se origin, estos procesos han sido clave para determinar su historia de vida (como
han ido evolucionando paulatinamente) y se han reforzado para responder a sus
necesidades.


4.2.3. Comunidad clmax

El conjunto de poblaciones conforma pues una comunidad, la cual alcanza su equilibrio
(clmax) al finalizar el proceso de sucesin bacteriana. Tambin se considera lmite de
madurez de un ecosistema donde no hay escases de nutrientes, temperatura, humedad,
pH, es decir se concentran las condiciones ptimas para que el crecimiento se desarrolle
adecuadamente.

En un ecosistema terrestre por ejemplo conforme la biomasa aumenta, la respiracin por
igual y llega un momento en el que se equilibran (igualan) la respiracin y la produccin
ocasionando que se detenga la sucesin; pero difcilmente se llega al clmax ya que
intervienen procesos de retroceso que frenan el equilibrio ecolgico como los incendios,
un huracn, derrumbe, deslave, los cambios climticos, las inundaciones, sequias, las
glaciaciones, la formacin o aparicin de nuevos volcanes y la deriva de las placas
tectnicas.

4.3.Biofilms

Las superficies son hbitats microbianos importantes por dos razones:
1.- los nutrientes se adsorben a las superficies por lo que a menudo contienen ms
recursos que los que estn disponibles para las clulas del plancton (clulas que llevan
una existencia flotante).
2.- Las superficies son zonas a las que se adhieren las clulas microbianas. La adhesin
es una manera de permanecer en un hbitat favorable y no ser arrastradas por el agua.

Por lo tanto, en las superficies se suele detectar un nmero elevado de microorganismos
y mucha actividad (Madigan et al., 2009).

Las diferencias en los niveles de nutrientes se acentan a medida que se pasa de la
columna de agua a las superficies donde los nutrientes y microorganismos tienden a
acumularse. A medida que disminuyen los niveles de nutrientes, aumenta la ventaja de
estar asociado a superficies. La importancia de las superficies para la colonizacin
microbiana fue descubierta por muchos microbilogos del pasado, entre ellos N. L.
Shngen (principios de 1900). Y C. E. Zobell (1940-1950). Zobell estableci el papel de la
adhesin macromolecular dependiendo de la concentracin de los nutrientes, y observ
tambin que la adhesin bacteriana es un proceso de dos pasos, que comprenden la
adhesin reversible e irreversible (Prescott et al., 2000).

A medida que las clulas bacterianas que crecen sobre superficies, tienden a formar
biopelculas: agrupamiento de clulas bacterianas adheridas a una superficie y
encerradas en una matriz adhesiva excretada por las clulas. La matriz consiste en una
mezcla de polisacridos, pero pueden contener protenas e incluso cidos nucleicos. Las


biopelculas atrapan nutrientes para el crecimiento microbiano y ayudan a evitar que se
desprendan las clulas superficiales expuestas a corrientes de lquidos (Madigan et al.,
2009).

Las biopelculas contienen regularmente varias capas porosas y las clulas de cada capa
se pueden se pueden examinar mediante microscopia lser confocal de barrido.
Dentro de estas biopelculas podemos encontrar desde una o dos especies hasta incluso
una gran diversidad de bacterias. Un ejemplo de esta lo podemos ver en la superficie de
los dientes donde podemos encontrar cientos de filotipos diferentes. Con esto podemos
decir que las biopelculas son comunidades microbianas funcionales y que no solo se
encargar de atrapar nutrientes en una matriz adhesiva.

Ejemplos de Biofilms
Madigan et
al., 2009
Ejemplos de
biopelculas
microbianas.

En la figura de arriba se describe:
a. Seccin transversal de una biopelcula experimental de clulas de Pseudomonas
aeruginosa. La capa amarilla (de unos 15 m de profundidad) contiene clulas y se
tie mediante una reaccin que revela la actividad de la fosfatasa alcalina.

b. Microscopa lser confocal de barrido de una biopelcula natural (vista superior) en
una superficie de una hoja. El color de las clulas indica su profundidad en la
biopelcula: rojo para las clulas sobre la superficie; verde, a 9 m de profundidad;
azul, a 18 m de profundidad.
c. Una biopelcula de procariotas oxidadores de hierro adheridas a rocas ricas en hierro
de Ro Tinto (Espaa). Cuando el agua rica en Fe
2+
pasa sobre y a travs de la
biopelcula, los microorganismos oxidadores de hierro lo oxidan.

4.3.1. Propiedades

Como sabemos para poder identificar algo es necesario reconocer las caractersticas o
propiedades que este presenta y las biopelculas no son la excepcin por lo que a
continuacin se mencionarn y describirn las caractersticas fsicas y qumicas de estas,
dentro de las Propiedades Fsicasdestacan:
* Color y consistencia


* Biomasa
* Densidad
* Concentracin de oxgeno disuelto
* Erosin
* Espesor

Al utilizar como ejemplo un aparato de biodiscos utilizado en el tratamiento de efluentes
domsticos en sus etapas iniciales el color de la biopelcula es generalmente gris o gris
amarronado y filamentoso, mientrasque en etapas posteriores es amarronado o rojizo
amarronado, gelatinoso y menos filamentoso.

Cuando la biomasa presenta un color grisindica la biomasa que preferentemente va a
remover materia orgnicacarbonosa (con altas cantidades de carbono que los
microorganismos utilizan para su alimentacin), mientras que la que presenta una
coloracin amarronada rojiza es caracterstica de la predominancia demicroorganismos
nitrificantes (son los microorganismos que se encargan de oxidar el amonio).

La concentracin de oxgeno disuelto en el afluente (lo que concurre en abundancia) tiene
una influencia directa en la densidadde la biopelcula al igual que la fracciones de exo-
polmeros (polisacridos), de materia orgnica, de protozoos, degusanos e insectos.

La erosin se define como el proceso de remocin de partculas dentro o fuera de la
biopelcula, en el biodisco quees altamente dependiente de las condiciones dinmicas del
sistema da origen al bioslido sedimentado (remocin masiva de porciones de biopelcula
que caen por gravedaddebido a la fuerza de corte).

El espesor se puede medir esto es: el tamao de los flculos o el espesor de la pelcula
en estosprocesos se miden en milmetros, mientras que los microorganismos individuales
se miden enmicrones.Cuando el espesor de la biopelcula se incrementa, el oxgeno
disuelto no es capaz de difundirsehasta el fondo del mismo, por lo tanto los
microorganismos de la capa inferior, unidas al soporte, podran cambiar
alternativamenteadaptndose a las nuevas condiciones ambientales (anaerobiosis, sin
oxgeno). Por lo que el espesor de la biopelcula es inversamente proporcional a la
velocidad de flujo del lquido, lo que va a disminuir exponencialmente con los aumentos
de la velocidad de rotacin de los discos.

Como todo tiene un principio y un final las biopelculas no son la excepcin por lo que el
crecimiento de la biopelcula continua hasta que llega un momento en que no reciben ms
oxgeno las capas profundas lo que va a producir el desprendimiento de la capa
bacteriana. Este desprendimiento, se ve influenciado por diferentes factores como: la
velocidad de giro de losdiscos y el dimetro de los mismos, entre otros. Despus de dicho
acontecimiento comenzar la formacin deuna nueva pelcula, y as indefinidamente.


Ahora bien una vez descritas las propiedades fsicas ahora describiremos las propiedades
qumicas dentro de estas destacan las siguientes:

La biopelcula es generalmente viscosa e hidroflica (a fin al agua) debido a lapresencia
de componentes polimricos extracelulares que estn constituidos por polisacridos con
residuos hidroflicos y otros polmeros intracelulares. Por lo quela adsorcin bacteriana al
soporte ocurre de la siguiente manera: Al inicio la clula bacteriana se mantiene unida a
la superficie gracias a enlaces dbilesintermoleculares, que resultan de las fuerzas entre
la clula y el soporte, incluyendo: fuerzas deLondon Van der Waals, interacciones
electrostticas, interacciones estricas y puentes polimricos.

4.3.2. Desarrollo

La formacin de las biopelculas comienza con la adhesin de una clula a una superficie
es como una seal que desencadena la expresin de los genes especficos para la
biopelcula. Los genes van a codificar protenas que sintetizan las molculas de
sealizacin intercelulares e inician la formacin de la matriz. Esto es el comienzo de una
formacin de la pelcula por lo que la primer clula pierde su flagelo y se inmoviliza,
aunque se desconoce el mecanismo, pero de alguna forma por decirlo as las bacterias
sienten una superficie adecuada y realizan lo necesario para comenzar el crecimiento de
la biopelcula.

Formacin de biopelculas.

Madigan et al.,
2009

La formacin de biopelculas comienza con la adhesin de unas pocas clulas que luego
crecen y se comunican con otras clulas. Se forma la matriz y se extiende a medida que
crece la biopelcula, como se esquematiza en la imagen de arriba
Se est investigando activamente cmo se percibe la superficie, pero el cambio real del
crecimiento de biopelcula lo desencadena la sntesis de guanosina-monofosfato dimrica
cclico (c-di-GMP), un derivado del nucletido guanosina-trisfofato. El c-di-GMP lo
sintetizan una serie de protenas relacionadas con las protenas perceptoras de
membrana que, de algn modo, detectan la posibilidad de crecer adheridas a la
superficie. Se piensa que el c-di-GMP funciona desencadenando la expresin de los
genes especficos de la biopelcula y activando las enzimas celulares que sintetizan el
material de la matriz (Madigan et al., 2009).


La comunicacin intercelular es decisiva para el desarrollo y mantenimiento de una
biopelcula. En Pseudomonas aeruginosa, un notable formador de biopelculas, las
molculas sealizadoras intercelulares principales son compuestos llamados de
homoserina-lactonas acidas. A medida que se van acumulando, transmiten a otras clulas
de P. aeruginosa adyacentes (un mecanismo llamado percepcin qurum) que la
poblacin de esta especie est aumentando y entonces se desarrolla la biopelcula. Con
el tiempo, se forman grandes hongos de P. aeruginosa que miden unos 100 m de alto y
que contienen miles de millones de clulas atrapadas en una matriz de polisacridos
pegajosa (op cit.).

Madigan et al., 2009

En la figura de la izquierda se puede observar botones pequeas clulas de P.
aeruginosa adheridos a una superficie en las primeras etapas de la formacin de la
biopelcula. En la figura de al lado un hongo de biopelculas maduro. El hongo ms
grande mide unos 120 m de altura.

Pueden aparecer biopelculas de P. aeruginosa en la fibrosis qustica. Esta enfermedad
gentica est relacionada a menudo con la formacin de una biopelcula tenaz de P.
aeruginosa en los pulmones, que produce sntomas de neumona. Adems de la
sealizacin intra-especie, en las biopelculas probablemente tambin se produzca la
sealizacin inter-especies para coordinar las etapas necesarias para formar y mantener
la estructura (op cit.).

La mayor parte del tracto digestivo humano est colonizado por grupos especficos de
microorganismos que dan lugar a biofilms naturales. Estos biofilms naturales protegen
frente a especies patgenas (Prescottet al., 2000).
La insercin de dispositivos protsicos (procedimiento mdico utilizados para diagnsticos
tales como: neuropata hereditaria motora y sensorial 1-3, Sndrome de Mobius y atrofia
hemifacial) en el cuerpo humano a menudo lleva a la formacin de biofilms sobre la
superficie del dispositivo.

Fundamentalmente, los grmenes implicados son Staphylococcus epidermis, otros
estafilococos coagulasa negativos y bacterias gramnegativas. Estos habitantes de la piel
poseen la capacidad de adherirse tenazmente a las superficies de los dispositivos


protsicos inanimados. En el interior de los biofilms, las bacterias estn protegidas de los
mecanismos normales de defensa del cuerpo y tambin de los antibiticos; por lo tanto, el
biofilm es una fuente de infeccin de otras partes del cuerpo cuando las bacterias se
desprenden por la descamacin del biofilm. Algunos ejemplos de la importancia mdica
de los biofilms son:

Las muertes que siguen a las infecciones masivas de pacientes receptores de
corazones artificiales Jarvik 7.
Pacientes con fibrosis qustica que albergan gran cantidad de P. aeruginosa
productoras de grandes cantidades de polmeros de alginato, que inhiben la difusin
de antibiticos.
Los dientes, donde los biofilms forman la placa dental que lleva a la caries.
Los lentes de contacto, donde las bacterias pueden provocar intensa irritacin,
inflamacin e infeccin ocular.
Los sistemas de aire acondicionado y otros sistemas de retencin de agua, donde
bacterias como especies de Legionella( bacteria gramnegativa con forma de bacilo
que vive en aguas estancadas y que soporta un amplio rango de temperatura) pueden
quedar protegidas por los biofilms de los efectos de la cloracin.

4.3.3. Dispersin

Durante su fase de dispersin las biopelculas liberan constantemente clulas
planctnicas, las cuales pueden causar infeccin porque estn a merced de agentes
antibacterianos y del sistema inmunitario, el cual genera una respuesta inflamatoria que
produce un exudado altamente nutritivo, que se percola a travs de la biopelcula y
proporciona nutrientes a la microbiota residente para abastecer las necesidades de sta,
lo que ayuda a la seguridad, sustentabilidad y estabilidad de la comunidad microbiana; de
esta forma, el sacrificio de pocas bacterias promueve la supervivencia de la comunidad
(Castrilln et al., 2011).

Actividad 2. En la oscuridad de la tubera.

En esta actividad podrs reforzar tus conocimientos sobre los biolfilms compartiendo y
discutiendo tus ideas sobre este tema en un foro titulado En la oscuridad de la tubera
en donde debers discutir sobre el peligro de los casos de biofilm de Pseudomonas
aeruginosa en tuberas de los lavabos dentro de quirfanos y proponer soluciones al
respecto, considerando el comportamiento y etapas de los biofilms.

Para participar en el foro:

1. Dirgete al aula.


2. Ingresa al foro con el nombre de esta actividad y realiza lo que en l se te
indica.

*Es recomendable que previo a tu ingreso al foro consultes la Rbrica de
participacin en foros que se encuentra en la pestaa Material de apoyo.

Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia
de contenidos, ya que el facilitador(a) puede detectar esta situacin sin dificultad. Ten
presente que tu formacin exige que desde esta etapa todo producto o tarea que
reportes sea de tu iniciativa y creatividad, con la intensin de que en lo sucesivo esta
actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.

4.3.4. Quorum-sensing

Las bacterias liberan seales qumicas que difunden entre las bacterias cercanas.
Conforme aumenta la poblacin de bacterias, aumenta la concentracin de la seal
qumica. A travs del proceso conocido como qurum sensing, las bacterias detectan
cundo se alcanza una determinada concentracin crtica de una molcula seal. La
bacteria responde activando un proceso biolgico especfico y forma una biopelcula.
Los bilogos han descubierto que la sealizacin defectuosa puede causar o contribuir al
desarrollo de diversas enfermedades, incluso el cncer y la diabetes (Solomon et al.,
2008).

Actividad 3. La sucesin bacteriana

En esta actividad reforzaras lo aprendido acerca del qurum-sensing, para lo cual se te
pide elaborar una grfica donde se ubique las fases de la sucesin microbiana y la
importancia del qurum-sensing.

1. Disea una grfica en formato Excel donde identifiques las fases de la sucesin
microbiana
2. En un apartado realiza la importancia del qurum-sensing dentro de la
biotecnologa.
3. Apoya tu trabajo con imgenes y se cuidadoso con la ortografa.
4. Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U4_A3_XXYZ y envalo a tu
Facilitador(a) mediante la Base de datos.




4.4. Biorremediacin

El potencial biogeoqumico de los microorganismos parece ilimitado y a menudo se ha
dicho que son los mejores qumicos de la tierra. Y como tales se han utilizado para extraer
metales valiosos de menas con poco mineral (lixiviado microbiano) y como agentes para
adecentar el ambiente. El trmino biorremediacin se refiere a la eliminacin de aceites,
sustancias qumicas txicas u otros contaminantes de un ambiente mediante
microorganismos. La biorremediacin es una manera econmica de limpiar los
contaminantes y, en algunos casos, es la nica manera prctica de hacerlo (Madigan et
al., 2009).

4.4.1. Impacto

Para que la biorremediacin se considere una tecnologa aplicable para eliminar un
contaminante especfico, es necesario demostrar que dicha sustancia o una mezcla
qumica que la contenga, es biodegradable y que el proceso de biorremediacin no tendr
efectos colaterales adversos sobre el ecosistema. Los productos finales de la
biorremediacin eficaz, como el agua y el dixido de carbono, son inocuos y su presencia
no presenta ningn peligro para el ambiente ni para los organismos vivos (Atlas y Bartha,
2006).

La biorremediacin es barata en comparacin con los mtodos fsicos para descontaminar
el medio ambiente, que pueden resultar extraordinariamente caros. Mientras que las
tecnologas convencionales exigen el traslado de grandes cantidades de desechos txicos
o suelo contaminado, una caracterstica de la biorremediacin es que puede efectuarse in
situ y solo requiere un equipamiento sencillo.

La biorremediacin, empero, no es la solucin para todos los problemas de contaminacin
ambiental. Como otras tecnologas est limitada por las condiciones locales y por el
tiempo disponible para llevar a cabo el tratamiento, y la gama de materiales que puede
tratar es restringida. Tiene un gran potencial destructor de contaminantes, especialmente
en los casos de suelo contaminado por combustibles o creosota (biocida fabricado a base
del fraccionamiento de alquitranes para la proteccin de la madera).

4.4.2. Principales tcnicas

La biodegradacin de contaminantes en el ambiente es un proceso complejo cuyos
aspectos cuantitativos (los que se pueden contar, medir) y cualitativos (los que se
observan como el color, sabor entre otros) dependen de la naturaleza y cantidad del


contaminante, de las condiciones locales y estacionales, y de la composicin de la
comunidad microbiana autctona (Atlas y Bartha, 2006).
Las dos estrategias generales de la biorremediacin son la modificacin ambiental, como
pueden ser la aplicacin de nutrientes y la aireacin, y la siembra de degradadores de
xenobiticos apropiados.

Para demostrar la utilidad potencial de una tcnica de biorremediacin es importante
documentar la biodegradacin aumentada del contaminante en condiciones controladas.
Dado que esto suele ser imposible in situ, se requieren ensayos de laboratorio. Las
variables que se miden habitualmente en los ensayos de biorremediacin de laboratorio
incluyen el recuento de poblaciones, la medida de respiracin microbiana (consumo de
oxgeno o produccin de dixido de carbono) y la determinacin de la velocidad de
degradacin (desaparicin de contaminantes individuales o totales) en comparacin con
los controles que no se utiliza la biorremediacin. Las metodologas empleadas en estas
medidas son fundamentales. Sin duda, la medida ms directa de la eficacia de
biorremediacin es el registro de la desaparicin del contaminante.

Los tratamientos de biorremediacin no deben tener efectos ecolgicos adversos. Por
ejemplo si utilizamos algn abono o un aditivo qumico es necesario determinar la
toxicidad inmediata por pruebas toxicolgicas estandarizadas, as como la toxicidad
crnica y los efectos subletales.

4.5.Biofouling

El biofouling tambin conocido como bioincrustaciones se origina en las superficies
metlicas como en las embarcaciones (pero tambin incluyen tomas de agua, anclas,
entre otros)que se encuentran en contacto con aguas industriales o naturales, como una
acumulacin no uniforme que resulta de los procesos fisicoqumicos (pH, salinidad, entre
otros) y biolgicos (sustancias metablicas de los microorganismos) causantes de la
corrosin microbiolgica.

De manera ms detallada el origen de estas bioincrustaciones comienza con un proceso
de adhesin de una gran variedad de micro y macroorganismos, los cuales buscan
generar un ambiente adecuado para su proliferacin. Dentro de los organismos que
podemos encontrar en las bioincrustaciones tenemos a moluscos, crustceos, algas,
diatomeas y, en menor proporcin, a bacterias resistentes que hacen parte de la vida
marina tpica de las aguas tropicales.


Ejemplo de biofouling en un tripoide.
http://www.google.com.mx/imgres?imgurl=http://w
oodshole.er.usgs.gov/operations/stg/Gear/biofouli
ng.JPG&imgrefurl=http://woodshole.er.usgs.gov/o
perations/stg/Gear/tripod.htm&usg=__qxdxnoX9g
u0mg-Sr-
GivCvEqSxs=&h=1536&w=2048&sz=965&hl=es&
start=1&zoom=1&tbnid=9xY4PbnmiiH97M:&tbnh=
113&tbnw=150&ei=6ebfTubLNMqDsgKY49XmBg
&prev=/search%3Fq%3Dbiofouling%26um%3D1
%26hl%3Des%26sa%3DN%26gbv%3D2%26tbm
%3Disch%26prmd%3Divnsb&um=1&itbs=1

4.5.1. Impacto

Las bioincrustaciones pueden alcanzar proporciones de hasta 150 Kg por metro
cuadrado, lo que obliga a los buques, embarcaciones e incluso submarinos, entre otros a
tener un mayor consumo de combustible, debido al incremento de la resistencia de la
embarcacin al agua. Aunado a esto se presenta un aumento de la turbulencia de las
embarcaciones lo que hace que se alteren las propiedades de reflexin del sonido,
comprometiendo las operaciones basadas en el sonar.

Otro riesgo que existe es de los buques, yates y maquinaria mantenida en puertos por
largos perodos, que posteriormente son transportados a nuevas sitios sin haber sido
limpiados previamente lo que origina un vector de transferencia de especies, lo que hace
que las especies se vuelvan exticas y por lo tanto invasoras, a su vez estas especies
pueden tambin ir acompaados de especies comensales, parasitas o patgenas.
Algunos ejemplos son los siguientes:

Las biopelculas desarrolladas por bacterias, cianobacterias y diatomeas
Filamentos de alga verde (a menudo Enteromorphaspp.) y poblaciones de alga
roja y marrn
Organismos ssiles (organismos que no son capaces de moverse y permanecen
adheridos), incluyendo esponjas, hidroides, corales, anmonas de mar, gusanos de
tubo, percebes, moluscos bivalvos, briozoos y cordatos (todos los cuales se
adhieren al sustrato adecuado y se propagan por desoves, con variaciones en la
duracin de la vida larvaria).
Organismos bentnicos mviles y epibentnicos, incluyendo anlidos poliquetos
errantes, esqueletos de camarones, anfpodos, ispodos, cangrejos, nudibranquios,
whelks (caracoles depredadores), crinoideos y peces territoriales (esp. Gobiidae y
formas similares). Este grupo evita la remocin a travs cualquiera de las
siguientes formas:
- adherirse y agarrarse a otras especies incrustantes o a las partes del casco que pueden
servirle de refugio


- acomodarse en espacios muy pequeos entre especies incrustadasestablecidas o
muertas
- refugiarse en aberturas del casco y de tuberas (incluye peces pequeos).

Ejemplo del impacto del biofouling en una embarcacin
http://www.google.com.mx/imgre
s?imgurl=http://www.drillingcontr
actor.org/dcpi/2009/july-
aug/ahead/biofouling4.jpg&imgr
efurl=http://www.drillingcontracto
r.org/biofouling-is-tip-of-green-
iceberg-1995&usg=__w-
eFjB_fukw8JGPX_BRIogQFlik=
&h=534&w=550&sz=64&hl=es&
start=4&zoom=1&tbnid=jhFECs
QThR-
KFM:&tbnh=129&tbnw=133&ei=
6ebfTubLNMqDsgKY49XmBg&p
rev=/search%3Fq%3Dbiofouling
%26um%3D1%26hl%3Des%26
sa%3DN%26gbv%3D2%26tbm
%3Disch%26prmd%3Divnsb&u
m=1&itbs=1

4.5.2. Tcnicas anti-fouling

Debido a esta problemtica varias asociaciones han realizado un programa anti-fouling
que se ha emprendido en los recientes aos por medio de grandes investigaciones para la
bsqueda dealternativas sostenibles a las actuales estrategias de anti-fouling ms txicas.

Estas estrategias incluyen, control biolgico (usando pastoreadores naturales); nuevos
materiales tales comorevestimientos no-txicos de anti-fouling; mtodos elctricos
(generando biocidas (CI
-
) o cambios depH), nuevas tcnicas de manejo de moluscos y
tcnicas de inmersin.

Existen tres principios fundamentales para el anti-fouling:
Combatir asentamiento inicial, repeler o matar.
Prevenir el desarrollo de fouling, inhibidores de crecimiento y
Remover el biofouling, limpiar, reducir las fuerzas de adhesin o superficies liberadoras de
fouling


Anti-fouling. Izquierda una larva de cirrpedo, en el centro uncirrpedo
inmaduro y a la derecha un grupo de cirrpedos maduros.
http://www.crabp
roject.com/client
/files/CRAB_Bes
t_Practice_Guid
elines-
Spanish.pdf


Las tecnologas y las estrategias para combatir biofouling en superficies sumergidas
http://www.crabproject.com/client/files/CRAB_Best_Practice_Guidelines-Spanish.pdf


Evidencia de aprendizaje. La comunicacin intercelular

En esta actividad podrs integrar lo aprendido a lo largo de esta unidad con respecto a
los biofilms o biopeliculas. Debers elaborar un ensayo sobre la comunicacin bacteriana
dentro de un Biofilm en alguna mucosa humana durante algn proceso infeccioso.
Realizaras un ensayo de cmo es que se da la comunicacin bacteriana dentro del
biofilm tanto para su desarrollo como para preservacin.


1.- En un documento de Word elabora un ensayo de al menos una cuartilla donde
expongas la importancia de la comunicacin entre bacterias.

2.- Haz nfasis en como se lleva a cabo esta comunicacin en alguna mucosa humana
durante el proceso de infeccin.


4.- Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U4_EA_XXYZ y envalo a tu


Nota 2: No olvides revisar/consultar la Escala de evaluacin para que puedas guiarte
correctamente en el diseo de estructura de tu ensayo y en el proceso de solucin o
respuesta de tu Evidencia de Aprendizaje (EA).

Al finalizar tu evidencia de aprendizaje, es importante que lleves a cabo tu ejercicio de
autorreflexin, para ello, ingresa al Foro de Preguntas de Autorreflexin y consulta las
preguntas que tu Facilitador(a) publique ah para esta unidad, a partir de ellas, realiza tu
ejercicio en un documento de texto y envalo mediante la herramienta Autorreflexiones.

O.A.
En esta actividad pondrs a prueba tus conocimientos adquiridos durante la unidad,
mediante un crucigrama acerca de los principales conceptos involucrados en ecologa
microbiana.


1. Realiza un crucigrama con ayuda de los temas vistos en clase, o bien puedes
apoyarte de literatura externa
2. Se cuidadoso con la ortografa
3. Recuerda que para realizar un crucigrama es necesario:
a. Colocar un prrafo con la idea principal y la respuesta ir en el crucigrama ambas
deben ser claras y concisas.
4. Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U4_OAU_XXYZ y envalo a tu
facilitador mediante la seccin de tareas.
contenidos, ya que tu facilitador puede detectar esta situacin sin dificultad, tu

Cierre de Unidad

Como te habrs dado cuenta los microorganismos juegan un papel ecolgico muy
importante dentro de los diferentes hbitats y esto te podr dar una idea de cmo es que
se pueden comportar si se presenta alguna problemtica. A su vez tu tendrs la
capacidad de poderlos resolver y sobre todo poder controlar cuando estos se vuelvan una
plaga, siempre y cuando utilices criterios ecolgicos cuidando el ambiente.

Para saber ms

Para entender mejor el tema del origen de la vida en la Tierra ver el siguiente video
http://www.youtube.com/watch?v=wIZCM7tqwwU
Hemos estudiado todo lo relacionado con los microorganismos en especial las
bacterias, pero existen otros microorganismos como los virus que no se consideran
dentro de los tres Dominios (Bacteria, Archaea y Eukarya), por lo que se te
recomienda ver el siguiente video para ver saber que es el VIH y sus caractersticas
http://lacienciaysusdemonios.com/category/medicina/page/2/.
Para comprender como es que se lleva a cabo la sucesin en ecosistemas terrestres
ver el video http://www.youtube.com/watch?v=M1J1U3Hd7nA

Bibliografa bsica
Atlas, R. M. y Bartha, R. (2006). Ecologa microbiana y microbiologa ambiental. 4
ed. Pearson, Adison Wesley.
Castrilln, R. L. E., Palma, R. A. y Padilla, D. M. del C. (2011). Interferencia de las
biopelculas en el proceso de curacin de heridas. Dermatologa RevMex.
55(3):127-139. Consultado en lnea el 23 de noviembre del 2011
http://www.medigraphic.com/pdfs/derrevmex/rmd-2011/rmd113e.pdf


Pidello,A. (2011). Ecologa microbiana. Corpus
WALEED, M. K. ZAID. (1993).Tesis doctoral: Physical Properties of Rotating
Biological Contactor Biofilms.
Copyright byWaleed M. K. Zahid,
Willey, J., Sherwood, L. M. y Woolverton, C. J. (2009). Microbiologa.7
a
ed.
MGrawHill-Interamericana.

http://www.crabproject.com/client/files/CRAB_Best_Practice_Guidelines-Spanish.pdf


Graw Hill. .
microorganismos. 12
a
ed. Pearson Adison-Wesley.
a
ed. McGraw-Hill
Interamericana.
a
ed. McGraw Hill.
a

ed.Mdica Panamericana.

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