A

unque la mayor parte de los

avances que ha hecho posible
el desarrollo de la tecnologa del
ADN recombinante son resultado
deinvestigaciones realizadas en las
cuatro o cinco ltimas dcadas
(tabla 1), la historia realmente se
inici cuando los babilinios y egip-
cios produjeron frutos por fecunda-
cin artificial y aunque Scrates
(420 a.C.) hipotetiz quelos padres
no separecan alos hijos, los hijos
de grandes hombres de estado
generalmenteson perezosos o bue-
nos paranada, yaHipcrates (400
a.C.) afirm que el hombre trans-
mite las caractersticas hereditarias
en el semen (semilla) y que debe
haber otro fluido en lamujer, sien-
do el aporte aproximadamente
igual. Ms tarde, los hindes obser-
varon que ciertas enfermedades
aparecan en las familias y Man
(100-300 d.C.) nos dijo que el
hombreno puedeescapar asus or-
genes. Aunque no fue hasta
mediados del siglo XI X, con las
investigaciones independientes de
Charles Darwin y Gregor Mendel,
cuando realmentecomenz el con-
cepto actual degentica.
Charles Darwin (1809-1882),
conocido como padre de la biologa
moderna, fue el primero en descri-
bir que las especies no eran fijas e
inalterables, sino capaces de evolu-
cionar durante el tiempo, y que
slo los individuos cuyos rasgos
favorecieran la supervivencia y la
reproduccin se mantendran y se
propagaran. De forma casi simul-
tnea, Gregor Mendel (1823-1884)
GENTICA
Terapia gnica. Vectores de expresin
J UANA ROZALN
a
, VALENTN CEA
b
Y J OAQUN J ORDN
c
a
Licenciadaen Qumicas.
b
Catedrtico deFarmacologaen laUCLM.
c
Profesor titular deFarmacologaen laUCLM.
Centro Regional deInvestigaciones Biomdicas. Universidad deCastilla-LaMancha(joaquin.jordan@uclm.es).
En las ltimas dcadas se ha producido el desarrollo de una de las ramas
ms fascinantes de la biologa: la tecnologa del ADN recombinante,
que permite la manipulacin del genoma de un individuo,
con aplicaciones tanto desde el punto de vista teraputico como comercial,
al ofrecernos no slo el desarrollo de nuevos mtodos de diagnstico,
sino tambin la transferencia de informacin gentica.
102 OFFARM VOL 22 NM 8 SEPTIEMBRE 2003
MBITO FARMACUTICO
estableci los fundamentos dela
gentica moderna, realizando
experimentos con plantas y estu-
diando las leyes bsicas que con-
trolan la herencia, llegando a la
conclusin de que los rasgos o
caractersticas hereditarias son
transportados y transmitidos a los
descendientes como unidades dis-
cretas, originando el concepto de
gen, aunque el trmino propia-
mente dicho no se utilizara hasta
comienzos del siglo XX.
Quizs, debido a que Mendel
slo describi el comportamiento
esencial de los genes sin revelar su
naturaleza qumica, ni identificar
el material gentico, el punto de
inflexin de la sucesin imparable
de descubrimientos fue la descrip-
cin de la estructura del ADN por
Watson y Crick (1953). De esta
forma, comenz el conocimiento y
la comprensin de la estructura y
funciones del ADN hacia la
segunda mitad del siglo XX, desa-
rrollndose el concepto de cido
nucleico como macromolcula
bsica que contiene la informacin
gentica o interviene en su desco-
dificacin y describindose dos cla-
ses, el cido desoxirribonucleico
(ADN) y el cido ribonucleico
(ARN). Estos avances permitieron
a los cientficos, en la dcada de los
setenta, el desarrollo de tcnicas
capaces de combinar segmentos y
transferir porciones de ADN de un
organismo a otro, dando lugar a la
aparicin de la Gentica Molecular.
Esta ciencia abarca desde la replica-
cin del ADN, pasando por la tras-
cripcin, o copia del ADN a ARN,
hasta la traduccin o sntesis de
protenas que son en realidad las
efectoras de la funcin codificada
en el ADN. El perfeccionamiento
de estas tcnicas ha permitido
conocer que el origen de numerosas
enfermedades es el resultado de
alteraciones en la expresin y fun-
cionalidad de protenas, por lo que
hoy da se utilizan para el diagns-
tico de enfermedades que presen-
tan desrdenes genticos.
Latransduccin degenes forneos
en organismos vivos comenz con la
observacin dequeel ADN aislado
podaser introducido en clulas en
cultivo y steseintegrabaal geno-
may sintetizabalaprotenacorres-
pondienteen laclulareceptora.
Durante este trabajo revisaremos
los avances que han tenido lugar
en las tcnicas y vectores utilizados
en la aplicacin teraputica, dejan-
do para un segundo artculo las
aplicaciones que se estn llevando
a cabo en este campo.
La terapia gnica presenta tres
componentes indisociables y nece-
sarios: el primero, un gen de inte-
rs del cual se espera que la expre-
sin en una clula normal se acom-
pae de un efecto teraputico. El
segundo lo constituye la clula
blanco, sobre la cual hay que reali-
zar la modificacin y el tercero es
el vector, vehculo que transporta
el material gentico y permite su
introduccin en la clula blanco.
Los diferentes modelos experi-
mentales sobre los que se lleva a
cabo la manipulacin gentica se
clasifican, en in vivo, ex vivoe in
situ, dependiendo del tipo de
muestra y del mtodo utilizado.
En el procedimiento in vivose ino-
cula al paciente directamente con
el vector y los genes a transducir
alcanzan las clulas diana a travs
del torrente circulatorio, utilizn-
dose este mtodo para el trata-
miento de enfermedades tales
como la fibrosis qustica y algunas
neoplasias. En el proceso ex vivose
realiza la correccin del defecto
gentico en clulas extradas del
propio paciente que son cultivadas
y modificadas genticamente en el
laboratorio y que, al dividirse,
transmiten el transgn a sus clu-
las hijas, devolvindose al paciente
slo aquellas poblaciones celulares
en las que se ha comprobado la
integracin y funcionamiento
correcto del transgn. Este proce-
dimiento se utiliza cuando las
clulas diana son clulas o tejidos
que presentan la capacidad de
renovarse a partir de clulas pre-
cursoras, como es el caso delapiel,
los endotelios, el hgado o los mio-
blastos musculares. Ejemplos de
esta estrategia estn representados
por lamodificacin delinfocitos T
en el tratamiento de la deficiencia
en adenosinadesaminasadehepato-
citos en la hipercolesterolemia
familiar y delinfocitos infiltradores
de tumores en algunas enfermeda-
des neoplsicas. Laterceray ltima
estrategia la constituye la terapia
gnicain situ o somticaqueconsis-
teen laintroduccin delas modifi-
caciones genticas en las clulas
somticas de un organismo sin
modificar las clulas germinales.
Vectores
Entendemos por vectores a los sis-
temas que utilizamos como ayuda
en el proceso de transferencia de
un gen exgeno al interior de la
clula. Ellos facilitan la entrada y
biodisponibilidad intracelular del
material gentico a transducir y,
por consiguiente, su funciona-
miento correcto. Se ha utilizado
una gran variedad de vectores con
fines experimentales y de forma
genrica los podemos clasificar en:
vectores no virales y vectores vira-
les (tabla 2).
Vectoresnovirales
Los vectores no virales engloban
aquellas tcnicas de transduccin
dondeel material gentico es intro-
ducido utilizando tanto mtodos
qumicos (fosfato clcico, liposo-
mas) como fsicos (biobalstica,
electroporacin, microinyeccin).
Los vectores qumicos fueron los
primeros en utilizarse, alguno de
ellos, como el fosfato de calcio y
los liposomas, en la dcada de los
sesenta y setenta del siglo pasado
aunque no se lograron buenas efi-
ciencias en la transduccin hasta
mediados de los ochenta. La utili-
zacin del fosfato de calcio se basa
en la capacidad que presentan los
iones calcio para precipitar el
ADN provocando que la clula,
mediante endocitosis, introduzca
el ADN en su interior. No es una
VOL 22 NM 8 SEPTIEMBRE 2003 OFFARM 103
GENTICA
Entendemos por vectores
a los sistemas
que utilizamos como
ayuda en el proceso
de transferencia de
un gen exgeno
al interior de la clula
tcnica que provoque toxicidad en
las clulas, pero la expresin del
transgn es transitoria y con una
eficacia de transfeccin cercana al
10%. Su utilizacin se ve reducida
a cultivos celulares en aplicaciones
ex vivo. Los liposomas constituyen
bolsas rodeadas de una membrana
lipdica, a semejanza de una clula
eucariota animal, capaces de intro-
ducir ADN en la clula diana. Los
liposomas catinicos interaccionan
tanto con el material gentico a
transferir como con las membranas
celulares que deben atravesar,
debido a la presencia de cargas
netas negativas originadas por los
grupos fosfato en el ADN y por
residuos del cido silico de la
superficie celular. As, los lpidos
catinicos condensan el ADN y, ya
en forma de complejos transfectan-
tes, se unen a las protenas azuca-
radas de la membrana plasmtica
mediante enlaces electrostticos.
Los complejos transfectantes con
carganetapositivautilizan las pro-
tenas azucaradas de la membrana
plasmticaparafijarseen laclula.
Los lpidos catinicos interaccionan
con las cargas negativas del ADN
condensndolo, mientras que los
transportadores catinicos interac-
cionan con las cargas negativas que
presenta la membrana celular gra-
cias al exceso de cargas positivas,
medianteenlaces electrostticos.
Unacondensacin controladadel
ADN permitelaformacin depar-
tculas, con un dimetro de50-150
nanmetros, quecontienen unasola
molculadeADN, hecho quefacili-
tanotablementelapenetracin en las
clulas y posteriormente en el
ncleo. Se produce la captura del
100% delos complejos estables de
polinucletidos por atraccin decar-
gas y los lpidos se absorben a la
membranacelular debido apropie-
dades defusin, liberando el cido
nucleico directamente dentro del
citoplasma. Deestamaneraseevita
ladegradacin lisosomal. Estevector
no planteaproblemas en modelos in
vitro, sin embargo, in vivosu eficacia
se encuentra disminuida, llegando
incluso en algunas ocasiones a una
eficacianula. Entreellos destacan el
DMRIE (dimiristiloxi-propil-3-
dimetil-hidroxietilamonio/DOPE),
o las combinaciones DMRIE/DOPE
y DC-chol/DOPE. En cultivos de
clulas eucariotas seutilizacon fre-
cuencialalipofectamina, un liposo-
ma de formulacin 3:1 (w/w) del
lpido policatinico 2,3-dioleiloxi-
N-[2(sperminecarboxamido)etil]-
N,N-dimetil-1-propanaminio tri-
fluoroacetato (DOSPA) y el lpido
neutro dioleoil fosfatidil etanolami-
na(DOPE) en agua.
La buena eficiencia en el reparto
deADN in vivodeliposomas poli-
catinicos aunque presentan una
baja eficiencia de transfeccin,
constituyeunaalternativaatractiva
alos mtodos detransferenciaviral
al no presentar limitaciones en el
tamao del ADN a transducir y
tener una baja inmunogenicidad.
Los liposomas suelen ser adminis-
trados por va intravenosa, con la
ayuda de catteres, presentando
muy buenos resultados en las clu-
las de pulmn e hgado, quizs
debido a que los complejos trans-
fectantes se unen a partculas de
gran tamao, lo que impide que
puedan abandonar eficazmente el
sistema vascular, siendo retenidas
mecnicamente por filtros natura-
les, como los pulmones y el hgado.
Como ltimo ejemplo de los
vectores qumicos, citaremos la
transferencia de genes mediante
receptores. La insercin de mol-
GENTICA
104 OFFARM VOL 22 NM 8 SEPTIEMBRE 2003
Tabla 1. Hitos de la biotecnologa y de la tecnologa del ADN recombinante
1859 Darwin publica El origen de las especies
1865 Mendel demuestra que las caractersticas heredadas son llevadas en
unidades discretas que se reparten por separado en cada generacin
1869 Miescher descubre los cidos nucleicos
1902 De Vries denomina mutaciones a los cambios hereditarios repentinos
1939 Se crea la expresin biologa molecular
1941 Se demuestra que los genes controlan la sntesis de enzimas
1944 Se descubre que el ADN es material gentico
1946 Se sabe que Escherichia coli transfiere material gentico de un organismo a otro
1948 Los investigadores descubren que el cdigo gentico determina el tipo de
protena a ser sintetizada
1950 Se da con la composicin qumica de los cidos nucleicos
1953 Descubrimiento de la estructura de la doble hlice
1970 Se sintetiza in vitro un gen completo
Descubrimiento de la primera endonucleasa de restriccin especfica de
secuencia y de la enzima transcriptasa inversa
1972 Se consiguen las primeras molculas de ADN recombinante
1973 Se comienzan a utilizar los vectores plasmdicos para la donacin de genes
1976 Primer diagnstico prenatal utilizando una sonda especfica de gen
1977 Se desarrollan los mtodos de secuenciacin rpida del ADN
1978 Se construye la primera genoteca humana
1979 Se sintetiza la insulina utilizando ADN recombinante
Clonacin del primer antgeno viral humano (hepatitis B)
1982 Produccin comercial por E. coli de insulina humana
1983 Se utilizan plsmidos Ti diseados mediante ingeniera gentica para
transformar plantas
1985 Se desarrolla la tcnica de la reaccin en cadena de la polimerasa
1987 La insercin de un gen funcional en un vulo de ratn fertilizado cura la
enfermedad por mutacin de Shiverer
1988 Primera produccin de un cultivo de soja
1990 Primer maz frtil transformado con un gen forneo
Se inicia el Proyecto Genoma Humano
1991 Primeros cerdos y cabras transgnicos capaces de fabricar protenas
como la hemoglobina humana
Primera prueba de terapia gnica en pacientes humanos con cncer
1994 Tomate Flavr Savr es el primer alimento completo elaborado mediante
ingeniera gentica aprobado para la venta
Produccin de anticuerpos monoclonales totalmente humanos en ratones
diseados mediante ingeniera gentica
1995 Se descubre la secuencia del genoma de Haemophilus influenzae
1997 Ensayos clnicos con frmacos antisentido y vacunas de ADN
1998 Clonacin del primer mamfero (oveja Dolly)
Secuenciacin del genoma de C. elegans
2000 Primer borrador del genoma humano
Secuenciacin del genoma de Drosophila
2003 Muere la oveja Dolly
Reprogramacin de las clulas adultas con las tcnicas de clonacin
culas, que sern reconocidas por
receptores presentes en el tipo
celular elegido al vector del mate-
rial gnico, hace de esta tcnica un
mtodo direccionable, al ser posi-
ble establecer una interaccin vec-
tor/clula muy especfica. La natu-
raleza de los ligandos es muy
variada y comprende azcares,
pptidos y hormonas. Hoy da, se
utilizan ligandos capaces de deses-
tabilizar las membranas de los
endosomas slo a pH cidos, con
lo que se evita la degradacin de
los vectores por los complejos
enzimticos del lisosoma.
El primero delos vectores fsicos
que vamos a estudiar se conoce
como disparo departculas, biolsti-
cao bombardeo demicroproyectiles.
En l, el plsmido deADN atrans-
ferir es situado sobrelasuperficiede
pequeas gotas de1 a3 micras de
dimetro de oro o tungsteno que
posteriormenteson aceleradas, dis-
paradas bien medianteunadescar-
gaelctricao por un pulso degas,
hacialacluladiana. Lafuerzafsica
del impacto superalabarreradela
membranacelular. An as, lacapa-
cidad depenetracin es limitaday se
utilizan con frecuencia en cultivos
delneas celulares, epidermis, ms-
culo e hgado.
Los microproyectiles constituyen
un mtodo efectivo de transferir
genes en modelos tanto in vitro
como in vivo. Entre las ventajas
que presenta este mtodo, y que le
confieren un potencial de aplicabi-
lidad general, destacan su fcil
manejo y que un nico disparo
puede producir integraciones ml-
tiples. Sin embargo, presenta algu-
nas desventajas, como que en la
zona de descarga se produce muer-
te celular; adems, dependiendo de
la rigidez de los tejidos, la proce-
dencia del ADN extrao y la capa-
cidad de transcripcin intrnseca
aparecen grandes variaciones en la
eficiencia de la expresin de los
genes. As, la expresin consegui-
da suele ser transitoria y con una
frecuencia relativamente baja, cer-
cana a 10
4
, tan slo se logra la
integracin efectiva en el genoma
10
-8
de las clulas expuestas, lo que
hace que se requieran grandes
dosis para alcanzar el xito. Este
hecho limita la biobalstica en la
aplicacin de la terapia gnica. Sin
embargo, ensayos con animales
muestran que podra ser aplicado
de forma directa como parte de
protocolos de vacunacin. Adems,
presenta una utilizacin potencial
en la transformacin de clulas
vegetales, en la creacin de plantas
transgnicas tanto monocotiled-
neas (maz, arroz, trigo, avena y
caa de azcar) como en dicotile-
dneas (soja, tabaco y algodn).
Otro mtodo fsico es lamicroin-
yeccin, en el que el ADN es
introducido por inyeccin directa-
mente en el ncleo de las clulas
gracias a la ayuda de un microma-
nipulador, evitando de este modo
la degradacin citoplasmtica y
lisosomal. Las clulas que sobrevi-
ven este dao y han insertado el
material gentico presentan una
alta eficacia de su expresin. Esta
tcnica es muy laboriosa y necesita
clulas aisladas para su realizacin.
Se suele utilizar con frecuencia en
estudios ex vivo, aunque tambin
en la terapia gnica germinal, un
mtodo in vivodonde se lleva a
cabo la microinyeccin directa de
ADN desnudo en los proncleos
del vulo recin fecundado o en el
citoplasma. En vertebrados inferio-
res einvertebrados es latcnicade
transferenciadegenes ms utilizada
y en mamferos haresultado exito-
sa. Los embriones suelen tolerar la
microinyeccin degenes para, pos-
teriormente, ser cultivados in vitro
hasta un estado de desarrollo ms
avanzado, blastocito, y ser transferi-
dos en las hembras adoptivas. Aun-
quelos primeros individuos transg-
nicos obtenidos medianteestemto-
do fueron ratones, se realiza con
xito en vacunos, ovejas, cabras,
conejos y cerdos. Laeficienciainicial
de integracin gnica obtenida fue
tan slo deun 2%, aunquehoy da
sealcanzan niveles cercanos al 30%
del total deembriones tratados.
Cuando se lleva a cabo la inyec-
cin directa de la parte codificado-
ra a un tejido se conoce como tc-
nica ADN desnudo. En ella, el
ADN es vehiculizado en una solu-
cin salina o srica y normalmente
administrado mediante inyeccin
intramuscular. El mecanismo por
el que entra en la clula diana per-
manece siendo un enigma. Esta
tcnica presenta un porcentaje
bajo de transfeccin y no se logra
la integracin en el genoma. Se
utiliza en la terapia gnica in vivo,
aunque los calores y persistencia
de la expresin de genes son pro-
bablemente demasiado cortos
(das). Entre sus ventajas destacan
el ser un mtodo directo, simple,
econmico y con una baja toxici-
dad. El ADN desnudo est sien-
do utilizado como procedimiento
de vacunacin, ya que aunque el
valor de expresin de los genes es
bajo, resulta suficiente para alcan-
zar una respuesta inmunolgica.
Como ltimo ejemplo de vector
fsico citaremos la electroporacin.
Laaplicacin deunacorrienteelc-
trica a clulas es capaz de abrir
poros en la membrana celular que
permiten la entrada del gen en su
interior. Entre sus ventajas se
encuentran que las clulas pueden
ser aisladas del organismo y someti-
das aun control decalidad en el que
GENTICA
106 OFFARM VOL 22 NM 8 SEPTIEMBRE 2003
Tabla 2. Vectores utilizados en terapia gnica
Vectores no virales
Fsicos Qumicos Vectores virales
Biobalstica Fosfato clcico Retrovirus
Electroporacin Liposomas Adenovirus
Microinyeccin Receptores Virus asociados a adenovirus
Herpes simples
Cuando se lleva
a cabo la inyeccin
directa de la parte
codificadora a un tejido
se conoce como tcnica
ADN desnudo
serealizaunaseleccin delas mejo-
res clulas queson cultivadas en el
laboratorio antes deser implantadas
en el paciente. Entresus desventajas
estel hecho dequemuchas clulas
mueren al no soportar el choque
elctrico, por lo queno es laforma
ms indicadaen algunos tipos celu-
lares, aunques en clulas con una
altatasadeproliferacin.
Vectoresvirales
Hasta hace unos aos, cuando pen-
sbamos en los virus nos imagin-
bamos un agente infeccioso res-
ponsable de numerosas enfermeda-
des o unas partculas extremada-
mente pequeas que slo pueden
observarse gracias al microscopio
electrnico y que, aunque presen-
tan material gentico propio, son
incapaces de replicarse por s mis-
mos. Sin embargo, hoy da este
concepto empieza a cambiar y los
virus empiezan a ser considerados
como herramientas de trabajo, vec-
tores, que sirven para introducir
material gentico con fines tera-
puticos en las clulas diana.
En la tabla 3 se resumen las ven-
tajas y desventajas presentadas por
los vectores virales utilizados en
terapia gnica entre los que desta-
caremos los retrovirus, adenovirus
y el herpes simple.
Los virus no pueden ser utiliza-
dos directamente como se encuen-
tran en la naturaleza, necesitan ser
modificados para poder ser utiliza-
dos como vectores. Es necesario
convertirlos en entes deficientes en
replicacin en el interior de la
clula diana. Se trata, por tanto, de
producir una anulacin parcial del
genoma viral. Frecuentemente se
retiran regiones codificadoras de
algunas protenas estructurales
como gag, pol y env en los vectores
retrovirales, o de los elementos E1
en adenovirus, que son remplaza-
das por el gen o genes de inters.
Estas partculas son incapaces de
replicarse, pero mantienen la capa-
cidad de infectar. As, el vector
viral slo podr multiplicarse o
crecer en cultivos de lneas celula-
res modificadas genticamente que
sobreexpresan la parte genoma
viral que ha sido delecionado; a
estas clulas se las conoce como
clulas de empaquetamiento. La
cantidad de ADN que puede ser
insertado en un vector viral vara
dependiendo del tipo. Con todo,
los vectores virales presentan el
inconveniente de que, junto a la
informacin gentica que preten-
demos transducir, se encuentra el
material gentico propio del virus
y que, en algunos casos, al igual
que los adenovirus, pueden resul-
tar inmunogenticas.
De forma muy breve revisaremos
algunas de las caractersticas ms
interesantes de los vectores virales
ms utilizados. En la tabla 3 se
muestra una relacin de esas ven-
tajas e inconvenientes.
Los vectores retrovirales fueron la
estrategiapioneraen laterapiagen-
tica, en las tcnicas ex vivo. Sin
embargo, los niveles deexpresin en
unavariedad detipos celulares eran
considerablementemayores en culti-
vo quedespus deser trasplantados,
presentando adems una expresin
transitoriaen las clulas transduci-
das in vivo. Las formas deficientes en
replicacin de estos vectores se
obtienen remplazando las regiones
codificadoras para las protenas
estructurales gag, pol y envpor el gen
o genes deinters, lo quepermitela
incorporacin decADN dehasta8
kb. El uso de vectores retrovirales
presentaentresus principales venta-
jas su eficaz transduccin, su inte-
gracin genmicay laexpresin per-
sistente. Caberesaltar queestos vec-
tores presentan como desventajas la
derivacin oncognica, rarainsercin
y dependenciadeladivisin celular.
Los vectores adenovirales son virus
no envueltos de doble cadena de
ADN. Son deficientes en replicacin
y requieren deun sistemadecom-
plementacin quees lalneacelular
HEK293 (Human EmbryonicKidney
293) modificadaparaqueproduzca
constitutivamentelos elementos E1
virales, que son suprimidos en el
vector adenoviral.
Entre las ventajas de este vector
viral destacamos que pueden inser-
tar hasta 20 kb de gen, adems de
transducir clulas con gran nme-
ro de partculas virales y de infec-
tar clulas tanto en reposo como
en divisin. Sin embargo, presen-
tan el inconveniente de expresar
varias protenas virales que resul-
tan inmunogenticas, lo que con-
duce a una separacin ms rpida
del vector y las clulas transduci-
das. Adems, la transduccin repe-
tida no es satisfactoria normal-
mente, a menos que la exposicin
inicial est acompaada de una
GENTICA
VOL 22 NM 8 SEPTIEMBRE 2003 OFFARM 107
Tabla 3. Ventajas e inconvenientes de los vectores virales
Vector Ventajas Inconvenientes
Retrovirus Integracin estable Bajo ttulo
Fcil manejo Posible mutacin insercional
No provocan respuesta inmune Extincin del transgn in vivo
Transduccin eficiente Requieren proliferacin celular
Adenovirus Clulas en reposo o replicacin Respuesta inmune e inflamatoria
Episomales Direccionabilidad difcil
Estables in vivo Difcil manejo
Ttulos altos
Adenoasociados Clulas en reposo o replicacin Poca longitud del transgn
Posible integracin especfica Difciles de producir en gran
Poco inmunognicos cantidad
Ttulos altos No parecen transducir a todo
No son patgenos en humanos tipo de clulas in vivo
Posible mutacin insercional
Herpes virus Clulas en reposo Patogenicidad
Episomales Difcil manejo
Adecuados para el sistema
nervioso
Los vectores
retrovirales fueron
la estrategia pionera
en la terapia gentica,
en las tcnicas ex vivo
modulacin inmunolgica para
suprimir la respuesta inicial a las
protenas de la cpsula adenoviral.
Debido a la falta de integracin
del vector, la expresin de los nive-
les disminuye en el curso de pocas
semanas hastavarios meses, hacien-
do necesaria la administracin rei-
terada de vectores adenovirales en
algn momento que puede resul-
tar en respuestas inmunes e inacti-
vacin del vector.
Hoy da, disponemos devirus aso-
ciados alos adenovirus queson capa-
ces de integrar de forma especfica
en el cromosoma 19 humano. Sin
embargo, stos sehan visto relega-
dos aun plano ms discreto cuando
seobserv queestaintegracin espe-
cfica no ocurra con los vectores
derivados deestos virus, el tamao
del gen a transducir es bastante
limitado (menos de 4 kb), y slo
transduciran clulas en presenciade
un adenovirus. Actualmenteseestn
construyendo vectores VAA adeno-
virales hbridos, que presentan la
habilidad de los vectores VAA de
integrar con laventajadepoder aco-
modar grandes fragmentos deADN.
Como ltimo ejemplo de vector
viral estudiaremos aquellos que
derivan del herpes virus, que
resultan interesantes debido a su
tropismo especfico por el sistema
nervioso central, el tamao del gen
que pueden vectorizar y su alto
ttulo. Sin embargo, es un sistema
que apenas est desarrollado; los
producidos hasta el momento slo
permiten expresin transitoria del
gen de inters y su eficiencia de
transduccin es baja.
Conclusiones
El xito de la terapia gnica se
fundamenta en los siguientes
requisitos:
Una transferencia eficaz en las
clulas diana.
La estabilidad de los genes
introducidos, quedeben integrarse,
preferiblemente, en un lugar espec-
fico del genomadelaclulablanco.
La consecucin de una expre-
sin estable y apropiada de la
informacin gentica introducida.
A pesar de los avances obtenidos
en el diseo delos diferentes tipos
devectores, hastael momento nin-
gn sistema vectorial cumple con
todas las condiciones paraconvertir-
lo en ideal. Los vectores no virales
resultan ms econmicos y ms fci-
les deproducir quelos virales; ade-
ms, su faltadeantigenicidad hace
posiblequepuedan ser administra-
dos repetidamente y con menores
riesgos patolgicos quelos vectores
virales. Con todo, los sistemas vira-
les resultan ms eficientes y presen-
tan niveles deexpresin ms altos y
duraderos en el tiempo. Los vectores
retrovirales son los ms utilizados,
por lo quedebido asu eficienciay
seguridad sehan iniciado yalos pri-
meros ensayos clnicos. I
Bibliografa general
BleaseM, Culver K, Anderson WF, et al. T
lymphocyte-directed genetherapy for
ADA-SCID. Initial trial results after 4
years. Science1995;270:475-80.
Bordignon C, Notarangelo LD, Nobali N,
et al. Gene therapy in peripheral
blood lymphocytes and bonemarrow
for ADA Immunodeficient patients.
Science1995;270.
Feldman SH. Components of genetherapy
experimentation that contributeto relati-
verisk. Comp Med 2003;53(2):147-58.
Garry PN, Allan RS. Expression vectors
and delivery systems. Current Opi-
nion in Biotechnology 1998;447-50.
Grossman M, Raper S, Kozarsky K, et al. Suc-
cessful ex vivo genetherapy directed to
liver in apatient with familial hypercho-
lesterolaemia. Nat Genet 1994;6:335-41.
Johnson-SalibaM, Jans DA. Genetherapy:
optimising DNA delivery to thenucleus.
Curr Drug Targets2001;2(4):371-99.
Meyer F, Finer M. Genetherapy: progress
and challenges. Cell Mol Biol (Noisy-
le-grand) 2001;47(8):1277-94.
Rosenberg SA. TNF/TIL human genethe-
rapy protocol. Hum Gene Ther
1990;1:443-62.
Strayer DS. Viral genedelivery. Expert Opin
Investig Drugs 1999;8(12):2159-72.
108 OFFARM
GENTICA
Los vectores no virales
resultan ms econmicos
y ms fciles de producir
que los virales