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UNIVERSIDAD JOS CARLOS MARITEGUI

FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL

INFORME DE PRCTICAS PRE - PROFESIONALES

MINISTERIO DE SALUD
DIRECCION EJECUTIVA DE SALUD AMBIENTAL

PERIODO: 17 DE ENERO AL 15 ABRIL 2011

Presentado por:
Bach. Rosala Mery Chambilla Ccosi
Moquegua, 01 de Agosto del 2012

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INDICE GENERAL
INTRODUCCION...02
I. GENERALIDADES.....04
1.1 Razn social de la Empresa o Institucin Descripcin Ubicacin....04
Organizacin de la Empresa o Institucin.......04
Objetivos de la prctica.......06
II. FUNDAMENTO TEORICO......07
2.1 laboratorio ambiental.....07
A) Anlisis microbiolgico de agua....07
A.1. Bacterias heterotrficas....07
A.2. Coliformes totales....10
A.3. Coliformes fecales. (Termo tolerantes)...........14
III. MATERIAL Y METODO UTILIZADO..17
3.1 Bacterias heterotrficas.....17
3.2 Coliformes totales por filtro de membrana....23
3.3 Coliformes fecales por filtro de membrana...26
3.4 Coliformes totales, fecales y E. coli..28
IV. RESULTADOS DE LA PRCTICA REALIZADA....31
A.) Agua potable..31
B) Agua de piscina...33
C.) Puntos de monitoreo..35
V. CONCLUSIONES Y VI. SUGERENCIAS...36
VII. BIBLIOGRAFIA.....38
VIII. ANEXOS.......39

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INTRODUCCION.
El Ministerio de Salud, a travs de la Direccin Ejecutiva de Salud Ambiental
DESA, en calidad de Autoridad Sanitaria y como responsable de la preservacin,
monitoreo y control de la Calidad Sanitaria de los Recursos Hdricos, cuyo objetivo
fundamental es la preservacin sanitaria y ambiental de la calidad de los recursos
hdricos, mediante una evaluacin y/o anlisis microbiolgica a travs del
Laboratorio de Salud Ambiental, asegurando la calidad de las aguas en beneficio de
la poblacin, actividades productivas y mantener el equilibrio ecolgico en los hbitat
acuticos.
El Monitoreo de la calidad sanitaria de los Recursos Hdricos se ejecuta a travs de la
una Red de Vigilancia conformada por diferentes establecimientos de salud, en donde
en cada uno de ellos se encuentra un inspector sanitario el mismo que es responsable
de realizar los monitoreos y controles de agua de consumo humano en los diferentes
puntos establecidos, como las mediciones de cloro residual y parmetros
fisicoqumicos de campo (temperatura, turbiedad, pH, conductividad, TSD y cloruro
de sodio), as tambin se realiza el control y monitoreo de las aguas superficiales el
cual es realizado por el profesional encargado de la DESA, algunas de las muestras
obtenidas son analizadas en el laboratorio de salud ambiental como anlisis para
coliformes totales, fecales, E. coli, bacterias heterotrficas, como se detallan ms
adelante.
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En el presente informe se describe ms ampliamente cada uno de las actividades
realizadas como los mtodos y tcnicas aplicados en cada uno de los anlisis
realizados; as tambin los resultados obtenidos durante los tres meses de Prctica Pre
- profesionales, concluyendo con las recomendaciones y sugerencias. Asimismo, este
informe permitir conocer ms a detalle la funcin del laboratorio ambiental que se
encuentra en el MINSA mediante la Direccin Ejecutiva de Salud Ambiental.













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I. GENERALIDADES.
1.1. RAZON SOCIAL DE LA EMPRESA O INSTITUCION DESCRIPCION
UBICACIN.
La Direccin Regional de Salud Moquegua, es el rgano que por delegacin de
la Alta Direccin del Ministerio de Salud ejerce la autoridad de salud. Es un
rgano de lnea desconcentrado del Gobierno Regional de Moquegua, depende
administrativamente de la Gerencia Regional de Desarrollo Social del Gobierno
Regional Moquegua y mantiene dependencia tcnica y funcional del Ministerio
de Salud, el cual se encuentra ubicado en la Avenida 25 de Noviembre S/N.

1.2. ORGANIZACION DE LA EMPRESA O INSTITUCION.
ESTRUCTURA ORGANICA
rgano de direccin
- Direccin General
rganos de lnea
- Direccin de Salud Ambiental

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Figura Nro. 01



Director Ejecutivo
De Salud Ambiental

Asistente Ejecutivo I
Coordinador del Equipo de
Trabajo Ecologa, Proteccin
del Medio Ambiente y Salud
Ocupacional
(Supervisor/a Administrativo/a)
Coordinador del Equipo de
Trabajo Saneamiento Bsico,
Higiene Alimentara y Zoonosis
(Supervisor/a Administrativo/a)

Mdico Veterinario
Especialista en Salud
Ambiental (2)
Especialista en Sistema
de informacin
Geogrfica

Especialista en Salud
Ambiental

Bilogo

Coordinador del Equipo de
Trabajo Laboratorio Ambiental
(Bilogo)

Medico
Especialista en Salud
Ambiental (2)

Bilogo
Tcnico/a Sanitario
Ambiental

Bilogo
Especialista en Salud
Ambiental
o I
Tcnico/a de Laboratorio
(4)

Tcnico/a Sanitario
Ambiental
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1.3. OBJETIVOS DE LA PRCTICA.

Aplicar los conocimientos tericos, habilidades y destrezas con el fin de adquirir la
experiencia necesaria para el futuro desenvolvimiento de la carrera profesional.
Potenciar las conocimientos y competencias Formativa, fortaleciendo el nivel
acadmico adquirido durante los diferentes ciclos acadmicos.














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II. FUNDAMENTO TEORICO.

2.1 LABORATORIO AMBIENTAL.
En el rea de laboratorio ambiental se realiza la evaluacin de la calidad sanitaria y/o
microbiolgica de aguas y Alimentos.

A. ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUA.
A.1. Bacterias heterotrficas.
Se denomina a todas aquellas bacterias que se alimentan de restos de desechos.
Dentro de este grupo existe un enorme grupo de bacterias, pero todas ellas se
caracterizan por transformar, en presencia del oxgeno, los restos orgnicos de
desecho en lodos. Estos lodos si no se retiran llegarn a enturbiar el agua del acuario
y a saturar los poros de las cargas mecnicas del filtro. Estas bacterias son las nicas
contenidas en los denominados aceleradores biolgicos ya que las responsables de la
sintetizacin del nitrito y el nitrato son bacterias sumamente delicadas.
Son el tipo ms comn de microorganismos en nuestro acuario, son bacterias muy
resistentes, se reproducen muy rpidamente sin algn tipo de asistencia, consumen
compuestos orgnicos y producen Amoniaco (NH
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).
Tambin se les conoce como hetertrofa, son aquellas bacterias que usan compuestos
del carbono orgnico como fuente de energa y el carbono para su crecimiento, en
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contraposicin con las bacterias autotrficas que utilizan los compuestos inorgnicos
como fuente de energa y el CO2 como fuente de carbono. Esta definicin de bacteria
hetertrofa es amplia e incluye tanto a las bacterias saprofiticas como a las patgenas.
En cualquier nueva instalacin, el desarrollo de las colonias heterotrficas es el
primero que se desarrolla degradando cualquier desecho orgnico. Estas bacterias no
requieren ser introducidas pues aparecen de forma natural a travs de esporas
repartidas en el aire o en los propios cuerpos de los animales o superficies de los
materiales introducidos. Aparecen en cuanto haya algn residuo orgnico del que
alimentarse. Las colonias de bacterias heterotrficas se desarrollan a gran velocidad
por simple divisin.
Unidades formadoras de colonias (UFC).
Es el nmero mnimo de clulas separables sobre la superficie, o dentro de un medio
de agar que da lugar al desarrollo de una colonia visible del orden de decenas de
millones de clulas descendientes. Las UFC pueden ser pares, cadenas o racimos, as
como clulas individuales. Las Unidades Formadoras de Colonias (UFC) se miden
en UFC/mL, UFC por mililitro.
Recuento de bacterias heterotrficas.
Clculo del nmero de bacterias vivas hetertrofas que existen en los diferentes tipos
de agua para consumo humano.
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El recuento de bacterias heterotrficas en placa, anteriormente denominado recuento
estndar en placa, consiste en agregar un mililitro de muestra o de la dilucin de la
muestra a una placa petri estril, por duplicado, y verter un volumen adecuado de
agar plate count; el cul debe estar a una temperatura de 45 a 46 C, luego se realiza
la homogenizacin, se deja solidificar e incuba a 35 0,5 C por 48 horas. El conteo
de las colonias se expresa como UFC / mL.
Medios de cultivo.
Agar plate count (triptona glucosa extracto de levadura agar)
Composicin:
Triptona 5,0 g
Extracto de levadura 2,5 g
Glucosa 1,0 g
Agar 15,0 g
Agua destilada 1 L.




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A.2. Coliformes totales.
La denominacin genrica coliformes designa a un grupo de especies bacterianas que
tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante como
indicadores de contaminacin del agua y los alimentos.
Coliformes totales son bacterias que forman parte del grupo Coliformes y son
definidas como bacilos gram negativos, no esporulados que fermentan la lactosa con
produccin de cido y gas a 35 0.5 C dentro de las 48 3 horas.
Hbitat del grupo coliforme.
Las bacterias de este gnero se encuentran principalmente en el intestino de los
humanos y de los animales de sangre caliente, es decir, homeotermos, pero tambin
ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en suelos, semillas y
vegetales.
Los coliformes se introducen en gran nmero al medio ambiente por las heces de
humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse que la mayora de los coliformes
que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. Sin embargo, existen muchos
coliformes de vida libre.


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Los coliformes como indicadores.
Tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de contaminacin fecal en
el control de calidad del agua destinada al consumo humano en razn de que, en los
medios acuticos, los coliformes son ms resistentes que las bacterias patgenas
intestinales y porque su origen es principalmente fecal. Por tanto, su ausencia indica
que el agua es bacteriolgicamente segura.
Asimismo, su nmero en el agua es proporcional al grado de contaminacin fecal;
mientras ms coliformes se aislan del agua, mayor es la gravedad de la descarga de
heces.
Los coliformes son una familia de bacterias que se encuentran comnmente en las
plantas, el suelo y los animales, incluyendo a los humanos. En general, las bacterias
coliformes se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o en
los sedimentos del fondo. Por su amplia diversidad el grupo coliformes ha sido divido
en dos grupos: coliformes totales y coliformes fecales.
Bacterias que integran el grupo
El grupo coliforme est formado por los siguientes gneros:
Escherichia
Klebsiella
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Enterobacter
Citrobacter
Recuento de Coliformes totales.
Es el clculo de la densidad sobre la base del nmero de colonias tpicas contadas
sobre la membrana filtrada, el volumen filtrado y la dilucin de la muestra si hubiera.
La densidad bacteriana se obtiene a travs de la formula y se expresa como UFC de
Coliformes totales /100 mL.
Proceso de anlisis en laboratorio.
La prueba consiste en hacer filtrar volmenes de agua, adecuados, con ayuda de una
bomba de vaco, a travs de una membrana de nitrocelulosa de 47 mm. de dimetro,
con una porosidad de 0.45 Lm; la que luego se coloca en una placa petri conteniendo
el agar M-Endo, e incubar a temperatura de 35 C 0.5C por 24 horas. Esta tcnica
permite examinar volmenes muy variables de agua y ofrece un resultado directo de
la concentracin de bacterias coliformes (por el recuento de colonias), en lugar de un
estimado estadstico, como es el caso de los Tubos mltiples.
Medios de cultivo
Agar Endo Les.
Caldo lauril triptosa. (CLT).
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Caldo verde brillante bilis lactosa (BRILLA)
Agua de dilucin.
Tiosulfato de sodio.

Recuento.
Las colonias tpicas de Coliformes, tienen las siguientes caractersticas, son de color
rojo oscuro, con un brillo metlico en la superficie. El rea brillante puede ser slo un
pequeo punto o bien cubrir por completo la superficie de la colonia.
Contar las colonias con brillo con ayuda de una lupa estereoscpica de 10 a 15
aumentos, o simplemente otro instrumento ptico, con ayuda de una luz blanca
fluorescente colocada directamente y lo ms perpendicular posible al plano del filtro.
Las colonias sin brillo pueden ser rosadas, rojas, blancas o incoloras y se consideran
como no Coliformes. Un elevado recuento de colonias no Coliformes puede interferir
con el mximo desarrollo de los Coliformes.
Agua desinfectada o de efluentes de aguas residuales contienen a veces
microorganismos en condiciones anmalas que crecen de forma relativamente lenta y
producen un brillo mximo al cabo de 22 24 hrs. Los microorganismos procedentes
de aguas no desinfectadas pueden producir brillo a las 16 18 hrs, decayendo
despus de 24 30 hrs.
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A.3. Coliformes fecales. (termotolerantes)
Los coliformes fecales son microorganismos con una estructura parecida a la de una
bacteria comn que se llama Escherichia coli y se transmiten por medio de los
excrementos.
Son bacterias que forman parte del total del grupo Coliformes y son definidas como
bacilos gran-negativos, no esporulados que fermentan la lactosa con produccin de
cido y gas a 44,5 C 0,2C dentro de las 24 hrs. 2 hrs. La mayor especie del
grupo de Coliformes fecales (termotolerantes) es la Escherichia coli,
aproximadamente en un 95% del grupo de los coliformes presentes en heces fecales y
en menor grado las especies de Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter.
Los coliformes fecales se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar
temperaturas ms elevadas. Esta denominacin est ganando ms adeptos
actualmente, pues sera una forma ms apropiada de definir este subgrupo que se
diferencia de los coliformes totales por la caracterstica de crecer a una temperatura
superior.
La capacidad de reproduccin de los coliformes fecales fuera del intestino de los
animales homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de
materia orgnica, pH, humedad, etc. Algunos gneros son autctonos de aguas con
residuos vegetales, como hojas en descomposicin. Tambin pueden reproducirse en
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las biopelculas que se forman en las tuberas de distribucin de agua potable. Por
estas razones y por la existencia de bacterias que responden a la definicin de
coliformes que no son de origen fecal y que incluso pueden ser lactosa-negativas
(apareciendo como positivas si se aplica la prueba de B-galactosidasa), el grupo de
los coliformes totales tiene actualmente poca utilidad como indicador de
contaminacin fecal.
La presencia de coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro
de agua puede estar contaminado con aguas negras u otro tipo de desechos en
descomposicin. Generalmente, las bacterias coliformes se encuentran en mayor
abundancia en la capa superficial del agua o en los sedimentos del fondo. Los niveles
recomendados de bacterias coliformes fecales son:
Agua potable: menos de 0 colonias por 100 ml de la muestra de agua.
Natacin: menos de 200 colonias por 100 ml de la muestra de agua
Navegar/Pescar: menos de 1,000 colonias por 100 ml de la muestra de agua.

Proceso de anlisis en laboratorio.
La prueba consiste en hacer filtrar volmenes de agua adecuados, con ayuda de una
bomba de vaco, a travs de una membrana de nitrocelulosa de 47 mm de dimetro,
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con una porosidad de 0,45 Lm; la cual se coloca en una placa petri conteniendo el
caldo M-FC, e incuba a una temperatura de 44,5 C 0.2C por 24 horas.
Esta tcnica permite examinar volmenes muy variables de agua y ofrece un
resultado directo de la concentracin de bacterias coliformes (por el recuento de
colonias), en lugar de un estimado estadstico, como es el caso de Tubos mltiples.
Medios de cultivo.
Caldo M FC
cido roslico
Caldo lauril triptosa.
Agua de dilucin (Solucin tampn de fosfato)
Caldo EC.
Tiosulfato de sodio






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III. MATERIAL Y METODO UTILIZADO
3.1 Bacterias heterotrficas
Alcance. Este mtodo se aplica a muestras de aguas de consumo humano, pozos.
Equipos y materiales. Adicionalmente a lo requerido en el Instructivo de preparacin
de medios de cultivo y reactivos.
Incubadora de aire caliente a 35 0,5 C
Frascos con agua de dilucin, Con una capacidad de 100 mL., autoclavables.
Pipetas serolgicas de 10 mL. Deben ser exactas dentro de una tolerancia de
2.5%.
Placas petri de vidrio 100 x15mm esterilizables.
Preparacin de la muestra
Luego de colectar la muestra, iniciar el anlisis lo antes posible para reducir al
mnimo las alteraciones de la poblacin microbiana. El tiempo mximo
recomendado que puede transcurrir entre la toma de muestra y el anlisis es de 8
horas (tiempo mximo de traslado 6 horas y 2 horas de tiempo de procesamiento).
Si el anlisis no puede iniciarse en las primeras 8 horas, mantener la muestra a una
temperatura inferior a 4 C, pero sin congelarla. No debe permitirse que el
intervalo mximo entre la toma de muestra y el anlisis supere las 24 horas.
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Antes de proceder al anlisis, marcar cada placa con el cdigo de la muestra, fecha
y la dilucin.
Mezclar cuidadosamente todas las muestras o diluciones mediante movimientos
completos de arriba abajo (y de adelante a atrs). Tambin se puede utilizar un
agitador mecnico durante 15 segundos para agitar la muestra o las diluciones.

Diluciones de la muestra
Realizara las diluciones de forma que el nmero de colonias en una placa sea 30 a
300 colonias. Por ejemplo si se sospecha que el recuento de hetertrofos en placa
alcanzar 3000, se prepararn placas con diluciones de 10-2. En la mayora de
muestras de agua de consumo humano se obtendrn placas adecuadas para realizar
el recuento, sembrando 1 mL y 0,1 mL de la muestra no diluida y 1 mL de una
dilucin 10 -2.
Para realizar las diluciones, utilizar una pipeta esterilizada, la cual debe ser
cambiada para cada dilucin que se prepare. Si la pipeta se contamina antes de
haber acabado el pase, substituirla por otra esterilizada. No preparar diluciones y/o
efectuar el plaqueado (vertido del agar) bajo luz solar directa.
Tener cuidado al sacar las pipetas esterilizadas del envase, sin pasar el extremo de
la pipeta a travs de los extremos expuestos de las pipetas del envase o por la boca
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o el cuello de los frascos de dilucin. Cuando se tome la muestra, no introducir la
pipeta ms de 2 3 cm del nivel de la superficie de la muestra o de la dilucin.
Cuando se transfiera la muestra utilizar una pipeta de 1 ml, la cual debe
mantenerse en un ngulo de alrededor de 45 con la punta tocando el fondo de la
placa petri o dentro del cuello del frasco de dilucin. Levantar la tapa de la placa
petri lo suficiente para introducir la pipeta. Se dejar que el lquido drene en su
totalidad, tocar una vez con la punta de la pipeta en un punto seco del fondo de la
placa. Cuando se midan cantidades de 0,1 ml, djese que la muestra drene desde la
graduacin elegida como referencia hasta que se haya vertido 0,1 ml, retirando la
pipeta sin que toque la placa. Utilizar diluciones decimales para preparar las
muestras de volmenes inferiores a 0,1 ml. Al analizar aguas residuales o turbias,
no se medir el inoculo de 0,1 ml de la muestra original, si no que se preparar una
dilucin adecuada.
Preparar dos placas por dilucin. Despus de depositar el inoculo verter el medio
de cultivo y mezclar cuidadosamente. No dejar transcurrir ms de 20 minutos entre
el inicio del pipeteado y la adicin del medio a las placas.
Plaqueo
Licuar el agar plate count, con mucho cuidado evitando que hierva, mantener el
medio lquido en un bao de agua entre 44 y 46 C hasta que llegue el momento
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de usarlo. No se debe confiar en el tacto como un indicador de la temperatura del
medio cuando vaya a aadirse al agar. No se re esterilizar el medio. Desechar el
agar lquido que contenga precipitado.
Limitar el nmero de muestras a ser plaqueadas a una serie, de manera que no
transcurran ms de 20 minutos (preferiblemente 10 minutos) entre la dilucin de la
primera muestra y la adicin del medio a la ltima placa de la serie. Verter de 15 a
20 ml del medio licuado mantenido de 44 a 46 C en cada placa petri levantando
suavemente la tapa de la placa lo suficiente para agregar el agar. Evitar el vertido
del medio fuera del envase o en el borde de la placa. Cuando se vierte el agar de
frascos o tubos que han sido mantenidos en agua, secar con un papel toalla y
flamear el cuello del frasco antes de verter el agar. Una vez aadido el medio a
todas las placas, mezclar cuidadosamente el medio lquido con la porcin de
muestra previamente colocada en la placa, con cuidado de no proyectar la mezcla
contra el borde, girando primero la placa en una direccin y despus en direccin
opuesta o haciendo girar la placa en forma de ocho varias veces. Dejar solidificar
la placa durante 10 minutos e invirtanse y colquense en la incubadora.
Controles: comprobar la esterilidad del medio y de los blancos de agua de dilucin
preparando con ellos placas fluidas en cada serie de muestras. Preparar controles
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adicionales para determinar la contaminacin de las placas, las pipetas y del
ambiente.

Incubacin
Incubar a 35C durante 48 horas.

Recuento de colonias.
Inmediatamente despus de la incubacin, contar todas las colonias de las placas
seleccionadas haciendo uso del contador de colonias. Cuando no se disponga de
este tipo de instrumento, utilizar cualquier otro contador, siempre que proporcione
aumento e iluminacin equivalente.
Considerar solo las placas que tienen entre 30 y 300 colonias. Calcular el recuento
bacteriano por mililitro, multiplicando el nmero promedio de colonias de las dos
placas seleccionadas perteneciente a la misma dilucin por el inverso de la
dilucin utilizada. Reportar en UFC/ mL.
Si ninguna de las placas de una muestra tiene colonias, reportar un recuento
inferior a una vez el recproco de la dilucin ms baja (<1).
Cuando el nmero de colonias por placa supere ampliamente las 300, no reportar
resultados del tipo Demasiados numerosas para el recuento (DNPR). Para menos
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de 10 colonias /cm2, contar las que existen en 13 cuadrados (del contador de
colonias) representativos de la distribucin de las colonias. Si es posible
seleccionar 7 cuadrados consecutivos horizontales a travs de la placa y 6
cuadrados consecutivos verticales, con la precaucin de no contar ms de una vez
un mismo cuadrante. Multiplicar la suma del nmero de colonias de los 13 cm2
representativos por 5, para calcular el nmero de colonias por placa, cuando el
rea de esta sea de 65 cm2.
Si hay ms de 10 colonias/ cm2, contar 4 cuadrados significativos, calcular el
promedio por cm2 y multiplicar por el factor adecuado para obtener el nmero de
colonias por placa. El factor es de 57 para las placas desechables de plstico y de
65 para las de vidrio. Cuando los recuentos bacterianos superen las 100 colonias
reporte el resultado mayor de (>) 6500 veces el inverso de la dilucin ms alta, en
el caso de placas de vidrio, y mayor de 5,700 veces el recproco, en el de las placas
de plstico. Reportar como recuento estimado de UFC/ml.
Cuando aparezcan colonias expansivas en la placa seleccionada, contar como una
unidad cada uno de los siguientes tipos: cadenas de colonias que parezcan ser
consecuencia de la desintegracin de un grupo de bacterias al mezclar el agar y la
muestra; expansiones que se desarrollen como placas de crecimiento entre el agar
y la base de la placa petri. Contar como colonias individuales aquellas que posean
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aspecto de colonias y crezcan muy cerca unas de otras, aunque sin tocarse, siempre
que la distancia entre ellas sea al menos igual al dimetro de la colonia ms
pequea. Tambin se contaran como colonias individuales las adyacentes con
aspecto distinto en lo que se refiere a forma color etc.
Si hay exceso de crecimiento expansivo en una placa, considerar como
diseminantes. En caso de que las placas resulten incontables por que se haya
perdido el factor de dilucin, se hayan cado accidentalmente; estn contaminadas
o las placas de control indiquen que el medio, otros materiales o el instrumental
estn contaminados, se referirn en el reporte como accidente de laboratorio

3.2 Coliformes totales por filtro de membrana.

Alcance. El mtodo se aplica a muestras de aguas de consumo humano, pozo,
manantiales, tratadas.

Equipo y materiales. Adicionalmente a lo requerido en el Instructivo de preparacin
de medios de cultivo y reactivos.
Incubadora de aire caliente a 35 0,5 C.
Equipo de filtracin.
Equipo generador de vaci (Bomba)
Frascos con agua de dilucin, con una capacidad de 100 ml., autoclavables.
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Pipetas serolgicas de 10 ml y 1 ml. Deben ser exactas dentro de una tolerancia de
2.5%.
Placas Petri de vidrio esterilizables.
Pinzas de punta plana.
Preparacin de la muestra.
Seleccionar el tamao (volumen) de la muestra, el cual depender de la densidad
bacteriana que se desee esperar, en el caso de las muestras de agua potable, estar
limitada por el grado de turbidez o por el crecimiento de no Coliformes en el
medio.
El volumen ideal de muestra, es aquel que nos proporciona un recuento de 20 a 80
colonias de Coliformes y no ms de 200 colonias de todos los tipos. En el caso de
agua potable se recomienda filtrar volmenes de 100 - 500 ml o muestras
duplicadas de volmenes pequeos (50 25 ml). Para otros tipos de agua se
procede a realizar las respectivas diluciones.
Las muestras deben recolectarse en frascos estriles de 500 ml, de boca ancha con
tapa rosca. En el caso que es agua tratada y tiene cloro residual, los frascos deben
contener to sulfato de sodio al 3% (0,25 ml por cada 250 ml de muestra).
En el caso que se filtre volmenes de 20 ml se debe aadir 10 ml de agua de
dilucin estril al embudo antes de la filtracin, permitiendo de esta manera
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aumentar el volumen de la muestra y una mejor dispersin uniforme de la muestra
en la superficie de la membrana.
Las placas de agar Endo Les, deben atemperarse (colocar las placas a 35C), antes
de iniciar el proceso de anlisis, as mismo, marcar cada placa con el cdigo de la
muestra, fecha y dilucin. Preparar las diluciones correspondientes de la muestra,
se debe agitar vigorosamente aproximadamente 25 veces, para asegurar una buena
homogenizacin, transferir con una pipeta estril un volumen de 10 ml de la
muestra a un frasco con 90 2 ml de agua de dilucin. De esta manera se tiene la
primera dilucin (10-1).
Homogenizar el frasco que contiene la dilucin (10-1), con una nueva pipeta
estril transferir 10 ml a un nuevo frasco de dilucin, teniendo as la segunda
dilucin (10-2). Continuar con este proceso hasta realizar todas las diluciones del
caso, dependiendo del grado de contaminacin de la muestra.
Ordenar los frascos conteniendo las diluciones, en secuencia decreciente de
concentracin (de mayor a menor dilucin), cuando se trabaja con diluciones se
empieza con la ms diluida.



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3.3 Coliformes fecales por filtro de membrana.

Alcance. El mtodo se aplica a muestras de aguas de consumo humano, pozo,
manantiales tratadas.

Equipo y materiales Adicionalmente a lo requerido en el Instructivo de preparacin y
esterilizacin de medios de cultivo y reactivos.
Incubadora de bao de agua a 44,5 0,2 C.
Equipo de filtracin.
Equipo generador de vaci (Bomba)
Membrana de nitrocelulosa de 0,45 micras de porosidad y 47 mm de dimetro.
Frascos con agua de dilucin, Con una capacidad de 100 ml., autoclavables.
Pipetas serolgicas de 10 ml y 1 ml. Deben ser exactas dentro de una tolerancia de
2.5%.
Tubos de ensayo y tubos Durham.
Pinzas de punta plana.
Asas de inoculacin.
Almohadillas absorbentes.
Placas Petri de vidrio esterilizables.

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Preparacin de la muestra.
Seleccionar el volumen de la muestra, el cual depender de la densidad bacteriana
que se desee esperar, en el caso de las muestras de agua potable, estar limitada
por el grado de turbidez o por el crecimiento de no Coliformes en el medio.
El volumen ideal de muestra, es aquel que nos proporciona un recuento de 20 60
colonias de Coliformes fecales por membrana.
Las muestras deben recolectarse en frascos estriles de 500 ml, de boca ancha con
tapa rosca. En el caso que es agua tratada y tiene cloro residual, los frascos deben
contener to sulfato de sodio al 3% (0,25 ml por cada 250 ml de muestra).
En el caso que se filtre volmenes de 20 ml, se debe aadir 10 ml de agua de
dilucin estril al embudo antes de la filtracin, permitiendo de esta manera
aumentar el volumen de la muestra y una mejor dispersin uniforme de la muestra
en la superficie de la membrana.
Las placas de caldo M- FC, deben estar preparadas, antes de iniciar el proceso de
anlisis, as mismo, marcar cada placa con el cdigo de la muestra, fecha y
dilucin.
Para preparar las placas de cultivo, hay que seguir los siguientes pasos, colocar
una almohadilla absorbente en la placa petri y agregar de 1,8 a 2 ml de medio M-
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FC, hasta saturar la almohadilla. Eliminar cuidadosamente de la placa de cultivo el
posible exceso de lquido.
Preparar las diluciones correspondientes de la muestra, se debe agitar
vigorosamente aproximadamente 25 veces, para asegurar una buena
homogenizacin, transferir con una pipeta estril un volumen de 10 ml de la
muestra a un frasco con 90 2 ml de agua de dilucin. De esta manera se obtiene
la primera dilucin (10-1).
Homogenizar el frasco que contiene la dilucin (10-1), con una nueva pipeta
estril transferir 10 ml a un nuevo frasco de dilucin, obteniendo as la segunda
dilucin (10-2). Continuar con este proceso hasta realizar todas las diluciones
del caso, dependiendo del grado de contaminacin de la muestra.
Ordenar los frascos conteniendo las diluciones, en secuencia decreciente de
concentracin (de mayor a menor dilucin), cuando se trabaja con diluciones se
empieza con la ms diluida.

3.4 Coliformes totales, fecales y E. coli.
Alcance. Este mtodo se aplica a muestras de aguas residuales, superficiales, mar y
agua tratada.

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Equipos y Materiales. Adicionalmente a lo requerido en el Instructivo de preparacin
y esterilizacin de medios de cultivo y reactivos.
Incubadora de aire caliente a 35 0,5 C.
Incubadora bao maria a 44,5 0,2 C.
Frascos de dilucin, capacidad de 100 ml., autoclavables.
Pipetas serolgicas de 10 ml, tolerancia de 2.5%.
Tubos de ensayos, resistentes al autoclavado, con dimensiones de 18 x 150 mm
(para medios de concentracin simple) y 20 x 150 mm (para concentracin doble).
Tubos (campanas) Durham.
Probetas, matraces, esptulas, vasos de precipitacin, magnetos).
Asas de siembra de nquel-cromo o platino de 3,0 a 3,5 mm de dimetro.

Dilucin de la muestra.
Recepcionada las muestras, proceder a preparar las diluciones respectivas, el
nmero de diluciones depender de si la muestra es de procedencia de agua
superficial o residual.
Agitar vigorosamente aproximadamente 25 veces, para asegurar una buena
homogenizacin, transferir con una pipeta estril un volumen de 10 ml. de la
muestra a un frasco con 90 2 ml. de agua de dilucin. De esta manera se obtiene
la primera dilucin (10-1).
31

Homogenizar el frasco que contiene la dilucin (10-1), con una nueva pipeta
estril transferir 10ml. a un nuevo frasco de dilucin, teniendo as la segunda
dilucin (10-2). Continuar con este proceso hasta realizar todas las diluciones del
caso, dependiendo del grado de contaminacin de la muestra.
Ordenar los frascos conteniendo las diluciones, en secuencia decreciente de
concentracin (de mayor a menor dilucin).













32

IV. RESULTADOS DE LA PRCTICA REALIZADA.

6.1 Resultados.
A) Agua potable.
CUADRO N
O
01
MUESTRAS DE AGUA POTABLE
PARAMETROS FISICOQUIMICOS Y
CLORO RESIDUAL
CUMPLEN CON
LOS LMP DE
A.C.H.
NO CUMPLEN
CON LOS LMP
DE A.C.H.
TOTAL DE
MUESTRAS
REALIZADAS
pH (6.5 - 8.5) 29 0 29
Temperatura 29 0 29
Conductividad (1500) a 25 C 29 0 29
Solidos totales disueltos (1000) 29 0 29
Cloro residual (0.5mg/l) 9 20 29
Turbidez (5 NTU) 23 6 29
Fuente: Propia.

Segn el cuadro que observamos podemos mencionar que el pH, temperatura,
conductividad, STD cumplen con los Limites Mximos Permisibles para Agua de
Consumo Humano (ACH). Sin embargo el Cl residual sobrepasa los niveles
establecidos por la OMS, siendo un factor importante en la calidad de agua ya que la
poblacin puede verse afectada por estos niveles de cloro.

33

CUADRO N
O
02
ANALISIS MICROBIOLOGICO DE AGUA POTABLE


PARAMETROS
CUMPLEN CON
LOS LMP DE
A.C.H.
NO CUMPLEN
CON LOS LMP
DE A.C.H.
TOTAL DE
ANALISIS
REALIZADAS

Coliformes fecales. (C.F)
(Ausencia) 25 3 28

Recuento heterotrficas 0 0 0

Coliformes totales.

0

0

0

Fuente: Propia.

En el siguiente cuadro observamos que en el parmetro de coliformes fecales (C.F)
encontramos 3 puntos que no cumplen con los Lmites Mximos Permisibles los
mismos que corresponden a la zona de Samegua siendo esta poblacin de riesgo a
presentar enfermedades infecciosas gastrointestinales.
Nota:
C.F. Menos de 1 U.F.C/100ml: Significa Ausencia.






34

B) Agua de piscina.
CUADRO N
O
03
MUESTRAS DE AGUA DE PISCINA
PARAMETROS
CUMPLEN EL
REGLAMENTO
SANITARIO.
NO CUMPLEN EL
REGLAMENTO
SANITARIO.
TOTAL DE
MUESTRAS
REALIZADAS
pH (6.5 - 8.5) 27 0 27
Temperatura 27 0 27
Cloro residual (0.4 - 1.2
mg/l) 15 12 27
Turbidez (5 NTU) 22 5 27
Fuente: Propia.

Podemos observar en el cuadro de muestras de agua de piscina que 12 puntos de
muestreo de cloro residual se encuentran por debajo de lo establecido de acuerdo a
la norma sanitaria, encontrndose las piscinas de los Vegetales y Parque Ecolgico;
siendo este ltimo el ms predominante en riesgo para la poblacin que acude.





35

CUADRO N
O
04
ANALISIS MICROBIOLOGICO DE PISCINA
PARAMETROS
CUMPLEN EL
REGLAMENTO
SANITARIO.
NO CUMPLEN EL
REGLAMENTO
SANITARIO.
TOTAL DE
ANALISIS
REALIZADAS
Coliformes fecales. C.F.
(Ausencia)
7 6 13
Recuento heterotrficas 0 0 0
Coliformes totales. 0 0 0
Fuente: Propia.

El cuadro nos muestra que del total de los anlisis Microbiolgicos de piscina existen
6 muestras que no cumplen el reglamento sanitario presentando coliformes fecales
tanto en la Piscina del Mirador, vegetales y ecolgicos, enfatizando este ltimo ya
que es el que se presenta con mayor frecuencia, durante la poca de verano, siendo
por lo tanto un riesgo para los veraneantes que acuden a esta piscina.
Nota:
C.F. Menor de 1.8 NMP/100ml: Significa Ausencia






36

C) Puntos de monitoreo.
PUNTOS DE MUESTREO
TIPO DE AGUA
ZONA DE MUESTREO
Agua potable
Samegua
San Francisco
28 de Julio
Mariscal Nieto
La Bodeguilla
Agua de piscina
Piscina el Mirador
Piscina Parque Ecolgico Adulto
Piscina Parque Ecolgico Nios
Piscina los Vegetales Adulto
Piscina los Vegetales Nios
Fuente: Propia.

6.2 Actividades.
Toma de Muestra de Agua.
Preparacin de material.
Preparacin de la muestra para su anlisis.
Preparacin de medio de cultivo.
Anlisis Microbiolgico
- Por la tcnica de Numeracin en Placa.
- Por la Tcnica de Tubos Mltiples de Fermentacin - Numero Ms Probable.

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V. CONCLUSIONES.

Se logr realizar 29 muestras para agua de consumo humano siendo los siguientes
parmetros: pH, Temperatura, Conductividad, STD y cloro Residual: a la vez
tambin se realizaron 28 muestras para anlisis microbiolgico de agua potable, en
cuanto al monitoreo de Agua de Piscina se realiz 27 muestras realizando los
parmetros como: cloro residual, pH, temperatura, turbidez y 13 muestras
microbiolgicos para anlisis de coliformes fecales en el mismo recurso.

Los parmetros realizados como: pH, Conductividad, Solidos Totales disueltos,
realizados en los diferentes puntos del agua potable de los distritos de Moquegua,
Samegua y la bodeguilla se encuentran dentro de lo establecido por los LMP, lo
que no sucede con los niveles de Cloro residual y la Turbidez.

En cuanto a los niveles de cloro residual en los distritos ya mencionados se
encuentra que ms del 50% de la totalidad de las muestras sobrepasan los niveles
establecidos por la norma de agua de consumo humano u OMS, y en cuanto a la
Turbidez vemos que un 25% de las muestras sobrepasan los 5 NTU, siendo esto
probablemente por la presencia de las avenidas, los mismos que alteran la calidad
38

de agua y en las reacciones de la administracin de cloro como la presencia
Microbiolgica en el agua.

De las 28 muestras realizadas para el anlisis microbiolgico (Coliformes fecales)
del Agua Potable, 3 muestras resultaron patolgicos o no cumplen con los LMP de
Agua Para Consumo Humano, esto probablemente por la presencia del 25 % de los
que no cumplen con los niveles de Turbidez ya que estudios han demostrado que
en el proceso de eliminacin de los organismos patgenos, por la accin de
agentes qumicos como el cloro, las partculas causantes de la turbiedad reducen la
eficiencia del procesos y protegen fsicamente a los microorganismos del contacto
directo con el desinfectante.

En cuanto al monitoreo de Agua de Piscina, los niveles de Cloro Residual y los
anlisis microbiolgico (coliformes fecales) se encuentran con ms del 50% de
muestras que no cumplen con el reglamento sanitario de Agua de Piscina, siendo
las Piscinas de los Vegetales y parque ecolgico. Por lo tanto la calidad de ambas
Piscinas es un riesgo para la transmisin de enfermedades; por ello es necesario
llevar a cabo una adecuada desinfeccin del agua de la piscina ya que en ausencia
de un adecuado tratamiento, el agua se puede transformar en un medio de cultivo
para bacterias y hongos, que son responsables de diversas enfermedades
39

infecciosas como la dermatitis, otitis, afecciones del aparato respiratorio o sistema
digestivo.

Finalmente todos los puntos de monitoreo tanto Fisicoqumicos, como la medicin
de niveles de cloro residual y los anlisis microbiolgicos en Agua Potable y en
Agua de Piscina son monitoreados permanentemente por el personal de la
Direccin de Salud Ambiental - Moquegua como tambin por el personal de salud
de los diferentes establecimientos o jurisdiccin correspondiente, los mismos que
al encontrarse alterados en cuanto a la calidad de este recurso tratan de ver las
mejor solucin al problema, trabajando en conjunto con la EPS de Agua potable y
a la vez enfatizando los puntos alterados para realizar el control y/o monitoreo
respectivo.










40

VI. RECOMENDACIONES

Es importante que el cloro residual presente en el agua tiene que ser monitoreada
constantemente por las autoridades, ya que puede tener efectos adversos en la
salud de los usuarios.

Como se ha visto que la turbidez altera la calidad del agua y como las normas de
calidad establecen un criterio para turbiedad en la fuente de abastecimiento, esta
debe mantenerse en los ms mnimos niveles, con la finalidad de garantizar la
eficacia del proceso de desinfeccin del agua de consumo humano ya que es
primordial para la salubridad de la poblacin.

A pesar de que la dosificacin del cloro se realiza de forma constante, puede
suceder que en algn momento exista una cantidad excesiva de cloro tanto en el
agua potable, vaso de la piscina como en el ambiente. Por lo que esto puede
afectar la salud de las persona ms expuestas al cloro, como el personal encargado
de la dosificacin, los nadadores, el personal de mantenimiento entre otros,
pudiendo ocasionar posiblemente daos a nivel de mucosa y aparato respiratorio
ya que es un gas irritante, por lo que se debe mantener en los niveles ms
adecuados para evitar estos posibles daos.
41

En caso de existir concentraciones altas de cloro en las piscinas, se debe evaluar el
sistema de cloracin y a la vez constatar si existe una adecuada ventilacin, el
mismo que ayudara a reducir la concentracin de los niveles de cloro.

Finalmente es importante que los profesionales responsables de la supervisin de
los niveles de cloro en agua potable y de piscinas deben de cumplir o hacer
cumplir estrictamente la norma existente sobre el control del cloro libre y residual
para agua de consumo y de piscinas ya que de por medio se encuentra la salud de
la poblacin.


























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VII. BIBLIOGRAFIA.
1. MINSA DESA. Gua de procedimiento de recuento de bacterias heterotrficas -
LSA P5.4-MG01. PERU 2008.
2. MINSA DESA. Procedimiento de anlisis de coliformes totales por filtro de
membrana - LSA P5.4-MG06. PERU 2008.
3. MINSA DESA. Procedimiento de anlisis de coliformes fecales por filtro de
membrana- LSA P5.4-MG07. PERU 2008.
4. MINSA DESA. Procedimiento de anlisis de coliformes totales, fecales y E.
coli. - LSA P5.4-MG2345. PERU 2008.
1. http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme










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VIII. ANEXOS.
RECUENTO DE BACTERIAS HETEROTROFICAS

ANEXO 1: Diagrama de flujo del procedimiento.



44

PROCEDIMIENTO DE ANALISIS DE COLIFORMES TOTALES POR FILTRO DE MEMBRANA

ANEXO 2: Diagrama de flujo del procedimiento


45

PROCEDIMIENTO DE ANALISIS DE COLIFORMES FECALES POR FILTRO DE MEMBRANA

ANEXO 3: Diagrama de flujo del procedimiento.


46

PROCEDIMIENTO DE ANALISIS DE COLIFORMES TOTALES, FECALES Y E. COLI.

ANEXO 4: Diagrama de flujo del procedimiento.