PRUEBAS

INMUNODIAGNOSTICAS
INMUNOLOGIA 2009
Dra. Virginia Bolaos de Corzo
Departamento de Microbiologa
FMVZ - USAC
Las respuestas inmunitarias contra la
mayora de los antigenos inducen la
produccin especifica de anticuerpos y
linfocitos T efectores.
Este reconocimiento entre el antigeno
anticuerpo o linfocito sienta las bases
del diagnostico inmunolgico.

El estudio de las inmunoreacciones se
realiza mediante el empleo de tcnicas
inmunolgicas basadas en la deteccin
de y evaluacin de la respuesta humoral
( anticuerpos y complemento) o de base
celular (linfocitos T y fagocitos).

SEROLOGIA
La medicin de las interacciones Antigeno-
Anticuerpo con fines diagnsticos.
Se realizan en 2 vas:
Utilizacin de anticuerpos especficos para
detectar el antigeno.(diagnostico directo)
Utilizacin de antigenos especficos para
detectar anticuerpos. (diagnostico indirecto)




La reaccin entre el Ag y el Ac es de
naturaleza fsica y qumica.
La fuerzas que los mantienen unidos,
son de tipo no covalente, como la
atraccin electrosttica, los puentes de
hidrgeno y las fuerzas de Van der
Waals y la exclusin del agua.
Afinidad de un anticuerpo es la fuerza o
intensidad de la unin, entre un sitio de
unin del anticuerpo y un determinante
antignico.
Avidez: es la fuerza con la que el
anticuerpo multivalente se une a un
antgeno multivalente.
Especificidad; capacidad de los anticuerpos de
distinguir y reaccionar con una estructura
qumica entre muchas.
Reactividad cruzada: el anticuerpo reacciona
con otro antgeno, cuando este y el antgeno
que estimulo la produccin del anticuerpo
especifico comparten un epitopo idntico o
muy similar.
REACTIVOS
Muestra: suero.
Se debe obtener en forma asptica.
No usar anticoagulante.
Dejar coagular la sangre en forma inclinada.
No refrigerar hasta que el coagulo se haya
retrado.
Transportar en refrigeracin.
Almacenar el suero en congelacin.
VOLUMEN RECOMENDADO
La cantidad de sangre que se obtendr
depende de la especie animal:
Bovinos 10 ml.
Equinos 10 ml.
Cerdos 5 ml.
Ovinos y caprinos 5 ml.
Pollos 1 ml.
Gallinas 2 ml.
Perros y gatos 2 3 ml.
REACTIVOS
ANTIGENOS.
Constituidos por el microorganismo o parsito.
1. Antigenos crudos: presentan el inconveniente de
dar reacciones heteroespecificas.
2. Antigenos puros.
3. Antigenos altamente purificados:
Anticuerpos monoclonales.
Grmenes recombinantes.
BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO
Se debe leer con detenimiento los instructivos de la
pruebas.
Los sueros deben estar en buenas condiciones no
hemolisados.
El suero debe agitarse suavemente, pues los
anticuerpos sedimentan.
Los antigenos debern conservarse en refrigeracin.
Realizar controles de calidad a los antigenos,
peridicamente.
Monitorear la temperatura del laboratorio (18 26
grados centigrados)
BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO
El tiempo de incubacin debe controlarse con
precisin.
No se debe mantener los reactivos a
temperatura ambiente mas de lo necesario.
Manejar los materiales que se usaron como si
fueran infecciosos.
Utilizar controles positivos y negativos.
No se debe hacer modificaciones al protocolo
de la prueba recomendado.
CARACTERISTICAS DESEABLES EN LAS PRUEBAS DE
INMUNODIAGNOSTICO

Utilizar pequeas cantidades de reactivos.
Sensibles y especificas.
Estandarizada y validada.
Reproducible.(nter laboratorios)
Antigenos inactivados.
Sencilla.
Equipo y reactivos accesibles, econmicos.



CATEGORIAS DE LAS PRUEBAS
INMUNODIAGNOSTICAS
1. Pruebas de unin primaria.
Miden la cantidad de inmunocomplejos (unin
antigeno-anticuerpo), utilizando
radioistopos, colorantes fluorescentes o
enzimas.
Radioinmunoanalisis (RIA)
ELISA
Inmunofluorescencia.

Los anticuerpos o antgenos marcados reciben
el nombre de conjugado. Los anticuerpos
conjugados suelen ser monoclonales o
antinmunoglobulinas especificas.
Se les llama sistemas competitivos. Se
establece competencia por los sitos de unin
disponibles entre el reactivo conocido, (ag, o
ac) aadido al ensayo a concentracin
limitada, y el elemento a investigar.
Pruebas de union secundaria
Los complejos se agregan y originan
fenmenos perceptibles visualmente. Son
reacciones no reversibles.
Dependen en gran medida del estado fsico
del antigeno, de la temperatura, de los
electrolitos presentes en la reaccin, de la
afinidad y avidez en la interaccin antigeno-
anticuerpo, proporcin entre ambos, tipo de
inmunoglobulina presente.
CATEGORIAS DE PRUEBAS
INMUNODIAGNOSTICAS
2. Pruebas de unin secundaria:
La reaccin antigeno anticuerpo va
seguida de una segunda reaccion.
Si el antigeno es soluble la reaccin
que se da es de precipitacin.
Si el antigeno es particulado
(suspensin) la reaccin es de
aglutinacin.
Son de menor sensibilidad que las
primarias, pero mas clsicas.
PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA
Aglutinacin: en placa, en tubo.
Precipitacin: Inmunodifusion en agar,
inmunoelectroforesis
Hemoaglutinacin.
Inhibicin de la hemoaglutinacin.
Fijacin de complemento.
Neutralizacin y Seroneutralizacion
realizadas in vitro.
CATEGORIAS DE PRUEBAS
INMUNODIAGNOSTICAS
Pruebas de unin terciaria.
Evalan la capacidad de los anticuerpos
de neutralizar la capacidad biolgica de
un antigeno ( virus, toxinas).
Identificacin de toxinas.
Identificacin de virus
Medir la actividad de un anticuerpo para
neutralizar a un microorganismo.
Pruebas de proteccin (anticuerpos)

Se basan en la medicin de las
manifestaciones biolgicas que el
sistema inmune desarrolla frente a un
antgeno en el animal, incluyendo la
evaluacin del efecto protector real de
los anticuerpos o su capacidad de
neutralizar la accin biolgica del
antgeno.
OBJETIVOS DE LA SEROLOGIA

Identificacin de problemas de salud.
Determinacin de la distribucin de una enfermedad.
Determinacin de la incidencia y prevalencia de una
enfermedad.
Evaluacin del sistema inmune del individuo o de
una poblacin.
Medicin de la inmunidad materna.
Programacin de calendarios de vacunacin.
Evaluacin de programas o campaas de
vacunacin.