10 REACCIONES ANTGENO ANTICUERPO

TEMA 10 REACCIONES ANTGENO / ANTICUERPO Y SUS APLICACIONES. OBJETIVOS ESPECFICOS Al finalizar el tema el estudiante podr: 1. Explicar el papel de la respuesta inmune en las enfermedades infecciosas. 2. Citar los factores que afectan la reaccin antgeno anticuerpo. 3. Discutir brevemente el fundamento, la aplicacin e interpretacin de los resultados de las siguientes reacciones antgeno / anticuerpo. Neutralizacin Precipitacin Aglutinacin Inmunofluorescencia 4. Sealar las caractersticas y actividades biolgicas del complemento. 5. Discutir brevemente el fundamento, la aplicacin e interpretacin de los resultados de la prueba de fijacin de complemento. 6. Elaborar un cuadro comparativo de las reacciones antgeno / anticuerpo, incluyendo: Tipo de antgeno, clase de Anticuerpo involucrado, sensibilidad y aplicaciones.

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REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO Las reacciones antgeno-anticuerpo se estudian ms fcilmente "in vitro" utilizando preparaciones de antgenos y antisueros. El estudio de las reacciones antgeno-anticuerpo "in vitro" se denomina serologa y es de especial importancia en la microbiologa diagnostica. En las reacciones antgeno-anticuerpo se distinguen 2 fases: la primera consiste en la unin del antgeno con el anticuerpo y la segunda en las manifestaciones que resultan de dicha unin. La primera fase se realiza por la combinacin de reas pequeas tanto del antgeno como del anticuerpo, denominadas respectivamente determinante antignico y sitio activo, que al unirse forman un complejo antgeno-anticuerpo. La reaccin es reversible, siguiendo, por consiguiente, la ley de accin de masas y existen factores externos que pueden modificar dicha unin, como son: el pH, la temperatura y la fuerza inica. Dependiendo de la naturaleza del antgeno y del anticuerpo y de las condiciones de la reaccin se pueden observar diferentes tipos de reacciones serolgicas: Neutralizacin Mediante anticuerpos especficos se pueden neutralizar toxinas, virus o enzimas, Los anticuerpos neutralizantes requieren un solo tipo de combinacin con el antgeno para poder actuar y as pueden ser univalentes, aunque anticuerpos bivalentes o multivalentes pueden neutralizar tambin. Un antisuero que contiene anticuerpos neutralizantes contra una toxina se denomina "antitoxina".

(a) Accin de una toxina (b) Neutralizacin

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Precipitacin La reaccin de precipitacin ocurre cuando se combina un anticuerpo, por lo menos divalente, con un antgeno soluble y esto conlleva a la formacin de agregados que precipitan. Como las reacciones de precipitacin son fcilmente observables "in vitro", stas resultan pruebas serolgicas muy tiles, especialmente para medir concentraciones de anticuerpos. Para que la precipitacin ocurra en forma mxima se necesita que tanto el antgeno como el anticuerpo estn en concentraciones ptimas, cuando cualquiera de los reaccionantes estn en exceso no se pueden formar grandes agregados antgeno-anticuerpo.

Reaccin de precipitacin

Aglutinacin Cuando un antgeno particulado reacciona con su anticuerpo especfico (divalente por lo menos) se observa la formacin de grumos o agregados de estas partculas, esto se conoce como aglutinacin. En estas reacciones el determinante antignico est sobre la superficie de una partcula o de una clula. Estas reacciones son ms sensibles que las de precipitacin para detectar pequeas cantidades de anticuerpos, debido a que relativamente pocas molculas de anticuerpo pueden unir efectivamente un gran nmero de partculas de antgeno en grumos gruesos macroscpicamente visibles. Es por esto que cuando queremos aumentar la sensibilidad de una reac-

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cin de un antgeno soluble con su anticuerpo especfico, se transforma el antgeno soluble en particulado adsorbiendolo o unindolo qumicamente a estructuras particuladas tales como esferas de ltex o arcilla coloidal y de esta manera pueden ser detectados los anticuerpos por reacciones de aglutinacin, estos ensayos se conocen como ensayos de AGLUTINACION PASIVA. Tambin se pueden aglutinar glbulos rojos y este fenmeno se conoce como HEMAGLUTINACION. Los anticuerpos pueden reaccionar con antgenos de los glbulos rojos, u otros antgenos que se pueden adsorber a los glbulos rojos y observarse hemaglutinacin cuando se una el anticuerpo especfico.

Apariencia de clulas bacterianas aglutinadas por anticuerpos contra (a) Antgenos somticos (b) Antgenos flagelares Inmunofluorescencia Es una tcnica donde las molculas de anticuerpos son convertidos en sustancias fluorescentes, unindoles qumicamente a compuestos orgnicos fluorescentes tales como isotiocianato de fluorescencia o rodamina B Esto no altera la especificidad del anticuerpo pero hace posible su deteccin cuando est unido a clulas o tejidos usando un microscopio para fluorescencia. Los anticuerpos fluorescentes son de considerable utilidad en microbiologa diagnstica.

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Preparacin de anticuerpos fluorescentes acoplando el colorante fluorescente isotiocianato de fluorescena al anticuerpo Para demostrar la presencia de antgenos o clulas bacterianas utilizando anticuerpos fluorescentes, existen dos procedimientos: el mtodo directo y el indirecto. En el mtodo directo, el anticuerpo marcado es especfico contra el antgeno .

Inmunofluorescencia. Mtodo directo

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En el mtodo indirecto, la presencia del anticuerpo especfico sobre la superficie de la clula es detectado por el uso de otro anticuerpo fluorescente dirigido contra el anticuerpo especfico.

Complemento Adems de las reacciones antgeno-anticuerpo ya descritas, existen otros tipos de reacciones de gran importancia en inmunidad donde participa el Complemento. El complemento acta junto con los anticuerpos especficos para llevar a cabo varios tipos de reacciones antgeno-anticuerpo que de otra manera no podran ocurrir, tales como: lisis de clulas bacterianas, muerte de clulas bacterianas, hemlisis, etc. El complemento no es un anticuerpo (por lo tanto no aumenta con la inmunizacin), sino una serie de enzimas que se encuentran en el suero normal y que atacan a las clulas bacterianas u otros agentes extraos. Estas enzimas, que se encuentran an en individuos no inmunizados, son normalmente inactivas, pero se activan cuando ocurre una reaccin antgeno-anticuerpo.Una de las principales funciones del anticuerpo es reconocer las clulas invasoras y activar el sistema del complemento para que acte. Ciertos componentes del complemento son muy termolbiles, se destruyen por calentamiento a 56C por 30 minutos, por otra parte los anticuerpos son termoestables. Acciones del complemento Entre las principales acciones del complemento tenemos: Lisis de los glbulos rojos (hemlisis) Si un antisuero contra glbulos rojos se mezcla con una suspensin de glbulos rojos y se le aade suero normal como fuente de complemento ocurre la lisis a los 30 minutos de incubacin a 37C. La hemlisis se usa a menudo como prueba de la presencia de complemento en sueros desconocidos o para medir la fijacin de complemento.

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Lisis bacteriana Especialmente de bacterias Gram negativas, cuando los anticuerpos especficos se combinan con el antgeno de la superficie bacteriana en presencia de complemento. Muerte microbiana En ausencia de lisis ocurre la muerte microbiana cuando los anticuerpos especficos se combinan con los antgenos de la superficie bacteriana en presencia de complemento. Promocin de la accin fagocitaria: Cuando se combinan bacterias capsuladas con el anticuerpo especfico en presencia de complemento se promueve la accin fagocitaria Este proceso en el cual los anticuerpos especficos ms complemento hacen una clula susceptible a la fagocitosis se llama OPSONIZACION. Prueba de fijacin de Complemento Una propiedad importante del sistema del complemento es que sus componentes son enzimticamente alterados durante la reaccin, de modo que no reaccionarn en una nueva secuencia de reacciones, es decir si el complemento es consumido durante las reacciones antgeno-anticuerpo esto es llamado FIJACION DE COMPLEMENTO y ocurre cuando un anticuerpo de tipo IgG o IgM reacciona con el antgeno en presencia de complemento, an cuando ste no sea requerido en la reaccin. La prueba de fijacin de complemento se lleva a cabo en dos fases. En la fase primera se mezclan el suero del paciente (previamente calentado a 56C) y el antgeno en presencia de una cantidad determinada de complemento; esta mezcla es generalmente incubada durante 30 minutos a 37C. Si se forman los complejos antgeno-anticuerpo, el complemento es fijado. En la segunda fase se aade el sistema indicador que consiste en glbulos rojos de carnero y anticuerpos contra glbulos rojos de carnero. La ocurrencia de hemlisis indica que el complemento no fue utilizado por lo tanto, en la fase 1 no se ha producido una reaccin Ag-Ac especfica. En cambio, la ausencia de hemlisis, indica que el complemento ha sido fijado y por lo tanto que en la fase 1 se ha producido una reaccin Ag-Ac, en este caso se considera una reaccin de fijacin del complemento positiva, mientras que en el primer caso se considera negativa la reaccin de fijacin de complemento. (Fig. 11.16). Utilizando un antgeno conocido, esta tcnica puede ser empleada para detectar y medir anticuerpos presentes en sueros. Al ocurrir la reaccin del antgeno con los anticuerpos del suero, sta reaccin Ag-Ac se puede poner de manifiesto mediante una prueba de fijacin de complemento.

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Fijacin de complemento positiva

37C x 30

Incubacin

No hay hemlisis

Fijacin de complemento negativa

37C x 30

Incubacin

Hay hemlisis

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BIBLIOGRAFA Madigan M.T, Martingo J. M. y Jack Parker. 2004. Dcima Edicin. Brock Biologa de los Microorganismos Prentice Hall Tortora G. J., B. R. Funke and Ch. L. Case 2007. Introduccin a la Microbiologa 9na Edicin. Editorial Mdica Panamericana.

Magaly Pedrique de Aulacio Norma De Castro. Universidad Central de Venezuela Facultad de Farmacia Departamento de Microbiologa y Parasitologa Marzo 2000 Revisin 2008 ACTIVIDADES ADICIONALES Qu se conoce como mtodo ELISA?. Seal dos aplicaciones. Qu se conoce como anticuerpos monoclonales? Cite algunas aplicaciones. Haga un esquema donde seale la ubicacin del timo, bazo, y principales ganglios linfticos. Busque en un diccionario de ingls tcnico la traduccin al espaol de las siguientes palabras: Abscess Agranulocyte Attack Barrier Blood vessel Burns Chemotaxis Cytokine Damaged cells Erytrocite

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Harmful Injury Insect bites Lymph nodes Mast cell Platelet Skin Spleen Tissues Tonsil

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