MECANISMOS GENERALES DE COMUNICACIN CELULAR

Durante el desarrollo de los organismos multicelulares complejos como los eucariotas superiores, grupos de clulas adquirieron funciones diferenciadas y establecieron relaciones entre ellos que permitieron el funcionamiento armnico y coordinado del organismo como un todo. Para que esto ocurriese, debi establecerse un dilogo fluido entre los diferentes grupos celulares, en el que cada grupo tena la capacidad de comunicarse con otro, lo que permiti coordinar sus funciones. Como en todo proceso de comunicacin, en este dilogo existe un emisor, es decir una clula que elabora un mensaje (como la denominada molcula seal), y un receptor, una clula sobre la que esta molcula ejerce un efecto, generando una respuesta biolgica.

Cules son las etapas del proceso de comunicacin celular?

La comunicacin celular involucra las siguientes etapas: 1) Ante un estmulo, una determinada clula (clula emisora) sintetiza y/o libera una molcula seal o mensajero qumico; 2) El mensajero qumico difunde o se transporta por la sangre u otro fluido extracelular a la clula blanco (clula receptora); 3) En la clula blanco o clula receptora, el mensajero qumico se une a un receptor (de membrana o intracelular); 4) La unin del mensajero qumico a su receptor desencadena una respuesta que puede ser el cambio en alguna funcin, en el metabolismo o en el desarrollo en la clula receptora; 5) La seal cesa y la respuesta termina Qu tipos de comunicacin entre clulas existen? La comunicacin puede establecerse entre clulas a travs diversas modalidades. Se denomina comunicacin autcrina cuando la clula receptora es del mismo tipo que la emisora; comunicacin parcrina si son clulas diferentes o juxtcrina si la molcula seal no se separa de la clula emisora

endcrina

parcrina

autcrina

juxtcrina

Las clulas tambin pueden comunicarse an cuando se encuentren a distancias considerables, lo que se denomina comunicacin endcrina y est mediada por hormonas. La comunicacin nerviosa es un tipo especial de comunicacin entre clulas, dado que en este caso la clula emisora extiende prolongaciones hacia las clulas receptoras y libera una molcula seal (neurotransmisor) en la vecindad de la clula receptora (sinapsis). Se trata de un tipo particular de comunicacin parcrina. La velocidad de transmisin del mensaje depender del tipo de comunicacin utilizada y obviamente, la comunicacin entre clulas vecinas es ms rpida que entre clulas alejadas. La

transmisin de la seal desde el cuerpo de la neurona al terminal nervioso es muchsimo ms rpida que la comunicacin hormonal. neurotransmisor Neurona presinptica receptor neurona postsinptica

Qu tipo de molculas participan en esa comunicacin? La comunicacin intercelular se realiza mediante una gran variedad de molculas seal. Entre ellas, se incluyen protenas, pptidos pequeos, aminocidos, esteroides, retinoides, derivados de cidos grasos y gases disueltos (como el monxido de carbono y el xido ntrico). Cmo se produce la liberacin de la molcula seal en la clula emisora? Dependiendo de su naturaleza qumica, las molculas seal pueden abandonar la clula emisora difundiendo a travs de la membrana plasmtica o por exocitosis, o quedar expuestas en la membrana plasmtica permitiendo la interaccin con las clulas receptoras (como en algunos tipos de respuesta inmune).

En todos los casos, la seal es informacin detectada por receptores especficos y convertida en una respuesta celular, que siempre involucra un cambio biolgico. Esta transformacin de informacin en un cambio biolgico, es decir la transduccin de la seal, es una propiedad universal de las clulas vivas. Hay tres sistemas principales de sealizacin en el organismo que utilizan mensajeros qumicos: el sistema nervioso, el sistema endcrino y el sistema inmune. El sistema nervioso secreta dos tipos de mensajeros: pequeas molculas neurotransmisoras, y neuropptidos. En el primer grupo se encuentran molculas nitrogenadas que pueden ser aminocidos o derivados de aminocidos (por ej. acetilcolina y -aminoburitato (GABA)). Los neuropptidos son pptidos pequeos secretados por las neuronas en las sinapsis o transportados en la sangre como neurohormonas. Los mensajeros del sistema endcrino se denominan hormonas y son aquellos compuestos secretados por clulas endcrinas que se transportan por sangre hacia clulas blanco. Clsicamente se divide a las hormonas de acuerdo a su estructura en las siguientes categoras: hormonas polipeptdicas (como la insulina), catecolaminas (como la adrenalina), hormonas esteroideas (que derivan del colesterol) y hormonas tiroideas (que derivan de la tirosina). Muchas de estas hormonas tambin pueden actuar en forma autcrina o parcrina. Compuestos como los retinoides (derivados de la vitamina A) y la vitamina D (derivada del colesterol) actan como hormonas pero no son sintetizados en clulas endcrinas. En el sistema inmune, los mensajeros qumicos se denominan citoquinas y son protenas pequeas que regulan un conjunto de respuestas destinadas a eliminar patgenos invasores. Los diferentes tipos de citoquinas (interleuquinas, factores de necrosis tumoral, interferones y factores estimulantes de colonias) son sintetizados en clulas del sistema inmune y generalmente actan sobre otras clulas del sistema inmune induciendo la expresin de protenas involucradas en la respuesta inmune.

Los eicosanoides que derivan del cido araquidnico (como prostaglandinas, tromboxanos y leucotrienos) controlan diversas funciones, como la respuesta a la injuria. Estos compuestos son producidos por casi todas las clulas del organismo y actan en forma autcrina o parcrina. Por ej. las clulas del endotelio vascular secretan prostaciclina que acta sobre las clulas del msculo liso vascular, produciendo vasodilatacin. Los factores de crecimiento son polipptidos que estimulan la proliferacin celular. Por ej. las plaquetas que se encuentran en el sitio de injuria en un vaso producen PDGF (factor de crecimiento derivado de plaquetas) que estimula la proliferacin de las clulas del msculo liso que eventualmente forman una placa que cubre el sitio daado.

EL RECONOCIMIENTO DE LA SEAL EXTRACELULAR POR LA CLULA RECEPTORA Por qu una molcula seal interacta con un tipo de clulas en particular y no con otro? Pueden diferentes molculas seal transmitir su mensaje a la misma clula receptora? Qu ocurre con la molcula seal luego de la recepcin del mensaje? Estas son algunas de las preguntas que vamos a ir respondiendo a continuacin... Interaccin de la molcula seal con la clula receptora Las clulas blanco detectan a la molcula seal a travs de receptores que son macromolculas de naturaleza proteica localizadas en la membrana plasmtica (para aquellas seales que no pueden atravesarla) o en el interior celular (para las que s lo hacen). La unin del receptor a la molcula seal (que tambin se denomina ligando) se produce mediante uniones qumicas dbiles (no covalentes) y es transitoria. Esta interaccin inicia un camino de sealizacin intracelular que lleva a la ejecucin de una respuesta biolgica. La respuesta de una clula a la molcula seal est supeditada a la presencia de un receptor especfico para ese ligando y provoca cambios en la clula receptora que pueden ser rpidos (como variaciones en la concentracin de iones) o ms lentos (como cambios en los niveles de expresin de genes). En trminos generales, la afinidad de los receptores por sus ligandos especficos es mayor para las hormonas (que llegan a la clula blanco diluidas en la sangre) que para los neurotransmisores (que se liberan en altas concentraciones en la sinapsis). Dnde estn ubicados los receptores en la clula blanco?

1. Receptores intracelulares Cuando un ligando es hidrofbico, puede difundir a travs de la membrana plasmtica e interactuar con un receptor intracelular produciendo su activacin. El complejo ligando-receptor se une al ADN y acta como factor de transcripcin que regula la expresin de genes especficos. ste es el caso de los receptores de hormonas esteroideas, como los glucocorticoides (que regulan la respuesta al estrs), los mineralocorticoides (que controlan el equilibrio hidrosalino) y las hormonas sexuales (como la progesterona, los estrgenos y los andrgenos), del receptor de vitamina D y de los receptores de hormonas tiroideas y cido retinoico. Dado que estos compuestos son insolubles en agua, se transportan por la sangre unidos a albmina o a protenas transportadoras especficas. Los receptores para estas hormonas tienen una estructura similar y pertenecen a la superfamilia de receptores para hormonas esteroideas y tiroideas. Todos presentan un dominio (una unidad modular de una protena que lleva a cabo una determinada funcin) a travs del cual se unen al ADN, otro dominio que reconoce al ligando y otro/s dominio/s mediante los que interactan con otras protenas (por ej. coactivadores).

Algunos receptores intracelulares se encuentran en el citoplasma unidos a protenas denominadas chaperonas, que los mantienen en una conformacin inactiva pero con la capacidad de interactuar con el ligando. ste es el caso de los receptores de glucocorticoides y mineralocorticoides. Luego de la unin de la hormona, el receptor sufre un cambio conformacional, el complejo se desprende de las chaperonas, se transloca al ncleo, y se asocia con otro complejo similar formando un dmero. Estos dmeros son los que interactan con las secuencias especficas del ADN (elementos de respuesta a hormonas). La mayora de los receptores intracelulares se encuentra principalmente en el ncleo y algunos, como los receptores de hormonas tiroideas o de retinoides se encuentran unidos al ADN, an en ausencia del ligando. Sin embargo, no presentan actividad tanscripcional y estn unidos a protenas inhibitorias. Los cambios conformacionales producidos como consecuencia de la unin de la hormona, modifican su actividad y su capacidad de asociarse y disociarse del ADN. Una vez que los complejos dimricos se unen a secuencias especficas del ADN, reclutan a otras protenas llamadas coactivadores, que facilitan el acceso de la ARN polimerasa II, responsable de la transcripcin del gen. A pesar de que muchas clulas tienen los mismos receptores intracelulares, la combinacin adecuada de protenas coactivadoras y complejos ligando-receptor es la que determina que en cada clula se activen determinados genes y no otros.

2. Receptores de membrana Los mensajeros qumicos hidrosolubles se unen a receptores localizados en la membrana plasmtica. Todos estos receptores tienen caractersticas comunes: un dominio extracelular al que se une el ligando, uno o ms dominios que atraviesan la membrana plasmtica y un dominio intracelular que inicia la transduccin de la seal. La activacin de estos receptores puede producir dos tipos de efectos: 1) rpidos (cambios en la permeabilidad a iones y activacion/inhibicin de enzimas); 2) lentos (cambios en la velocidad de expresin gnica). Una misma va puede producir ambos tipos de efectos.

2.a. Receptores de membrana asociados a canales inicos Un tipo particular de receptores de membrana son los receptores ionotrpicos que forman parte de canales inicos y estn involucrados en la sealizacin entre clulas elctricamente excitables. La unin de ligandos a estas protenas con mltiples dominios transmembrana, produce la apertura o cierre de un canal, permitiendo el pasaje de iones a travs de la membrana en forma transitoria. En ausencia de estmulo, los canales inicos se abren y cierran con baja frecuencia, permitiendo el pasaje de determinados iones. La unin del ligando a su receptor produce cambios en la estructura del canal que cambian su frecuencia de apertura, alterando transitoriamente el potencial elctrico de la membrana. Esta variacin del potencial elctrico desencadena la respuesta biolgica. En la membrana plasmtica existen canales selectivos para iones, como Cl-, Na+, K+ y Ca2+. Los receptores asociados a canales inicos estn involucrados en el control de la contraccin muscular y en la transferencia de informacin nerviosa. Un ejemplo de receptor con funcin de canal inico (particularmente de Na+) es el receptor de acetilcolina denominado receptor nicotnico por su gran afinidad para la nicotina. Las subunidades de este receptor atraviesan completamente la membrana plasmtica y se asocian formando una flor cuyo interior hidroflico constituye el canal propiamente dicho. La unin de acetilcolina aumenta la frecuencia de apertura del canal, permitiendo una mayor entrada de iones Na+ al interior celular. La entrada de especies cargadas positivamente produce la despolarizacin de la membrana de la clula receptora.

2.b. Receptores de membrana asociados a enzimas Otro tipo de receptores de membrana son aquellos asociados a enzimas, que existen en distintas modalidades: Receptores con actividad enzimtica intrnseca: Son aquellos que al activarse por la unin del ligando funcionan directamente como enzimas. Receptores que activan enzimas citoplasmticas: Son los que luego de la unin del ligando, interactan con enzimas a las que activan del lado interno de la membrana plasmtica.

Receptores con actividad enzimtica intrnseca

Receptores asociados a protenas con actividad enzimtica

Protenas intracelulares con actividad enzimtica Todos estos receptores son protenas que atraviesan una sola vez la membrana plasmtica. Presentan un sitio extracelular para la unin del ligando y un dominio con actividad cataltica o el sitio de unin para enzimas del lado citoplasmtico. La actividad enzimtica asociada a la gran mayora de estos receptores es de protena quinasa (es decir, catalizan la fosforilacin de un determinado sustrato), aunque tambin existen receptores que presentan otras actividades enzimticas, como la de guanilato ciclasa, por ejemplo. Las protenas quinasas catalizan la transferencia de grupos fosfato del ATP a grupos hidroxilo de las cadenas laterales de tirosina, serina o treonina de protenas (formando enlaces fosfoster). La fosforilacin de protenas provoca cambios en su conformacin que influyen directamente sobre su actividad. Cmo es la transmisin de la seal en los receptores asociados a protenas quinasas? La caracterstica comn de estos receptores es que su dominio intracelular (o una protena asociada a l) es una protena quinasa que se activa cuando el ligando se une al dominio extracelular del receptor. Luego de la unin del ligando se produce la asociacin de varios complejos ligandoreceptor en la membrana. Esta oligomerizacin acerca los dominios catalticos de los receptores y permite la fosforilacin recproca en residuos de tirosina (para los receptores con actividad de tirosina quinasa) o de serina/treonina (para los receptores con actividad de serina/treonina quinasa) del propio receptor o de protenas asociadas. El mecanismo de autofosforilacin de los receptores, por un lado incrementa su actividad de quinasa y por otro, permite la unin de molculas de sealizacin citoslicas. Es decir, recluta molculas que se unen especficamente a los dominios intracelulares de los receptores slo cuando estn fosforilados, y que transmiten el mensaje al interior celular. El mensaje se propaga a travs de protenas transductoras de la seal que se unen al complejo ligando-receptor activado (fosforilado). En la actualidad se conocen ms de 50 miembros de la familia de receptores con actividad de tirosina quinasa, entre los que se encuentran los receptores de factores de crecimiento (epidrmico: EGF-R, de fibroblastos: FGF-R y derivado de plaquetas: PDGF-R), que estn vinculados con el control de la proliferacin celular. Veamos un ejemplo: La unin del EGF a su receptor produce su dimerizacin y su autofosforilacin. Los sitios fosfotirosina del receptor son sitios de unin para protenas transductoras de la seal. Estas protenas presentan un dominio con una estructura tridimensional especfica (conocido como dominio SH2) que reconocen a esos sitios fosfotirosina del receptor. La protena Grb2 mediante un dominio SH2, se une a las fosfotirosinas del receptor de EGF. La unin al receptor produce un cambio conformacional en Grb2 que desencadenar una serie de eventos que provoca la activacin de una protena G pequea (denominada Ras) y de la va de MAP quinasas, como veremos ms adelante.

El receptor de insulina tambin pertenece a esta familia, pero a diferencia de otros miembros de la familia, este receptor existe en la membrana como un dmero preformado. Luego de la unin de la hormona, los dominios con actividad de tirosina quinasa del receptor se autofosforilan y tambin fosforilan a la protena IRS (sustrato del receptor de insulina) en mltiples sitios. La protena IRS fosforilada presenta sitios de unin para protenas con dominios SH2 (como Grb2) produciendo tambin la activacin de Ras y de la va de MAP quinasas. En otros sitios fosfotirosina de IRS se unen y se activan enzimas como la fosfatidilinositol 3 quinasa (PI3 quinasa) y la fosfolipasa C (PLC). Otras protenas se anclan directamente en fosfotirosinas del receptor de insulina. Cada una de estas protenas es intermediaria en la transmisin del mensaje al interior celular. Por ejemplo, la activacin de la PI3 quinasa provoca la activacin de la protena quinasa B, una serina-treonina quinasa que media muchos de los efectos de la insulina por un mecanismo que veremos en detalle cuando analicemos la regulacin del metabolismo.

Entre los receptores con actividad de serina/treonina quinasa se encuentra el receptor del factor de crecimiento tumoral (TGF-) que tambin activa factores de transcripcin.

Otros receptores presentan actividad de guanilato ciclasa (cataliza la sntesis de GMPc) que se activa luego de la unin del ligando. El pptido natriurtico atrial (ANP) se une a un receptor de este tipo en el msculo cardaco, estimula la secrecin renal de Na+ y agua, induce la relajacin del msculo vascular liso y disminuye la presin sangunea.

Receptores que activan enzimas citoplasmticas En el grupo de receptores asociados a protenas con actividad enzimtica se encuentran los receptores de citoquinas (mensajeros del sistema inmune). Por ejemplo, el receptor de interfern est asociado con protenas quinasas de tirosina como la quinasa JAK (por Janus activated kinase) an en ausencia de ligando. La unin del interfern a su receptor y la oligomerizacin de los complejos producen la activacin de las protenas quinasas asociadas. Entre otros sustratos, estas quinasas activas catalizan la fosforilacin de los factores de transcripcin llamados STAT (signal transducers and activators of transcription). Las protenas STAT fosforiladas forman dmeros y se translocan al ncleo donde se unen a secuencias especficas del ADN, modulando la transcripcin de determinados genes.

Receptores asociados a protenas G heterotrimricas Estos receptores pertenecen a la familia de los denominados receptores de siete dominios transmembrana (7TMS) que estn constituidos por un nico polipptido que atraviesa siete veces la membrana plasmtica. Luego de la unin del ligando, este grupo de receptores activa indirectamente (a travs de protenas adaptadoras) a otras protenas de la membrana, que pueden ser enzimas (que sintetizan mediadores intracelulares), o canales inicos. Las protenas adaptadoras que participan de este mecanismo son las protenas heterotrimricas de unin a GTP llamadas protenas G. El ligando interacta con el extremo amino de la protena receptora mientras que el extremo carboxilo que es intracelular, interacta con una protena G.

Una gran cantidad de molculas interacta con este tipo de receptores. Entre ellas se cuentan protenas, pptidos pequeos y derivados de aminocidos y de cidos grasos. Pertenecen a este grupo, el receptor -adrenrgico (cuyo ligando es la adrenalina) y el receptor de glucagon, as como los de las hormonas hipofisarias adrenocorticotrofina (ACTH, que estimula la liberacin de glucocorticoides), hormona luteinizante (LH, que estimula la liberacin de progesterona y la consecuente formacin del cuerpo lteo), hormona folculo estimulante (FSH, que estimula la maduracin del folculo ovrico al inducir la sntesis de estradiol) y el de la angiotensina II (que estimula la sntesis y liberacin de aldosterona). Desensibilizacin de los receptores La exposicin prolongada de un receptor a su ligando puede promover una disminucin de la respuesta de la clula al estmulo. La unin del ligando al receptor puede inducir su endocitosis y posterior degradacin lisosomal, con la consecuente disminucin del nmero de receptores en la membrana (down regulation). En otros casos, los receptores pueden desensibilizarse por un mecanismo de fosforilacin posterior a la activacin del receptor. Cmo se transmite la informacin de los receptores de membrana al interior celular? La informacin que llega a los receptores acoplados a protenas G o a enzimas se transfiere al interior de la clula mediante molculas de sealizacin pequeas (segundos mensajeros) y/o grandes (protenas de sealizacin). Un grupo de estas protenas de sealizacin son las protenas G, que unen GTP y cambian de un estado inactivo (con GDP unido) a un estado activo (con GTP unido). Estas protenas poseen actividad de GTPasa, por lo que se inactivan rpidamente luego de transmitida la seal. Existen dos grupos de protenas de unin al GTP: las heterotrimricas (que transmiten la seal de los receptores asociados a protenas G) y las monomricas (protenas G pequeas). Cmo actan las protenas G heterotrimricas?

Las protenas G heterotrimricas (tres subunidades: , y ) interactan con el dominio citoplasmtico de los receptores de membrana. En condiciones basales, la subunidad de la protena G lleva GDP unido y es inactiva. La interaccin con el complejo ligando-receptor produce el intercambio de GDP por GTP. El cambio conformacional ocasionado induce la disociacin del trmero en dos componentes, la subunidad y el complejo . La subunidad puede interactuar con otras protenas. El complejo no cambia su conformacin pero la zona que antes estaba enmascarada por la subunidad queda libre lo que le permite interactuar con otras protenas. La separacin del heterotrmero es transitoria porque la subunidad posee actividad de GTPasa intrnseca y una vez que esto ocurre, se reasocian las subunidades y se reconstituye la protena G inactiva. Ligando

Las protenas G se clasifican de acuerdo al grupo de protenas con las que interactan y al efecto que producen. Podemos encontrar protenas G estimulatorias (Gs) que activan a la enzima adenilato ciclasa (cataliza la sntesis de AMPc a partir de ATP); protenas G inhibitorias (Gi), que inhiben la actividad de adenilato ciclasa; protenas Gq, que activan fosfolipasas (catalizan la hidrlisis de fosfolpidos de membrana) y protena Gt o transducina (que activan una fosfodiesterasa). Cualquier compuesto que bloquee la funcin de la subunidad puede afectar la transduccin de la seal. Por ejemplo, la toxina producida por la bacteria Vibrio cholerae inhibe la actividad GTPasa de la subunidad s. De esa forma, an en ausencia de seal, la adenilato ciclasa se encuentra activada y produce AMPc en forma continua. En las clulas del intestino, esto produce prdida de agua y cloruro que es caracterstica de esta infeccin bacteriana (Enfermedad del Clera). Otro ejemplo es la toxina producida por la bacteria Bordetella pertussis que causa la tos convulsa. Esta toxina modifica estructuralmente a la subunidad i impidiendo la asociacin de la protena G al complejo ligando-receptor y bloqueando la transduccin de esa seal. Dado que la subunidad i permanece en su estado inactivo, unida a GDP, la adenilato ciclasa permanece activa, manteniendo as elevados niveles de AMPc.

Estmulo Glucagon-adrenalinaLH-PTH-ACTH Vasopresina, TSH, angiotensina Adrenalina, acetilcolina, dopamina, serotonina Luz .

Tipos de subunidades G Gs Gq Gi Gt

2 mensajeros AMPc IP3, DAG AMPc (disminucin) GMPc (disminucin)

Efecto Estimula la adenilato ciclasa Activa la fosfolipasa C Inhibe a la adenilato ciclasa Activa la fosfodiesterasa

Qu son los segundos mensajeros? Se denomina segundos mensajeros (cul es el primer mensajero?) a las molculas pequeas de sealizacin intracelular. Los segundos mensajeros se generan rpidamente en respuesta a la activacin de un receptor de membrana y transmiten la seal al interior celular donde interactan con protenas. La activacin de una enzima que cataliza la sntesis de un segundo mensajero, generar grandes cantidades de este mensajero, lo que permite amplificar notablemente la respuesta. Qu tipos de segundos mensajeros existen? Nucletidos cclicos El primer segundo mensajero identificado como tal, fue el nucletido adenosina monofosfato cclico (AMPc), una molcula soluble y resistente al calor, cuya sntesis es catalizada por la adenilato ciclasa y su degradacin por una fosfodiesterasa.

Los niveles del nucletido disminuyen al ser transformado en un metabolito inactivo, el 5AMP por una fosfodiesterasa, cerrando as el ciclo de sealizacin. La estimulacin de determinados receptores produce un incremento transitorio de ms de 20 veces en los niveles de AMPc, en unos pocos segundos. La adenilato ciclasa es una protena integral de la membrana plasmtica que se activa por la subunidad s de la protena Gs y se inhibe por la subunidad i de la protena Gi. La mayor parte de las vas de sealizacin en las que participa el AMPc involucran tambin a la protena quinasa A (PKA), que es una quinasa de serina/treonina. La holoenzima consta de dos subunidades regulatorias y dos subunidades catalticas. En el estado basal, las subunidades regulatorias bloquean el sitio cataltico y la enzima es inactiva. La unin de dos molculas de AMPc a cada una de las subunidades regulatorias produce un cambio conformacional que provoca la liberacin de las subunidades catalticas, que pueden fosforilar a sus sustratos.

R2C2 + 4 AMPc 2 C + R2(AMPc)4 Los sustratos de la PKA incluyen enzimas clave de vas metablicas como la glucgeno sintetasa y la piruvato quinasa, as como canales inicos. La fosforilacin de enzimas es un ejemplo de regulacin rpida del metabolismo, ya que esta modificacin covalente produce un cambio conformacional en las protenas que afecta su actividad. La activacin de la PKA tambin tiene efectos a largo plazo, dado que induce la transcripcin de genes especficos. En este caso, la PKA cataliza la fosforilacin del factor de transcripcin CREB (cAMP response element binding protein) que se dimeriza e interacta con el ADN en una secuencia especfica llamada CRE (cAMP response element) que est presente en los promotores de ciertos genes. Sin embargo, la fosforilacin de CREB no es suficiente para que se produzca la activacin de la transcripcin. Para ello, otras protenas (coactivadoras) que remodelan la estructura de la cromatina deben unirse a CREB, permitiendo la unin de la ARN polimerasa II al promotor.

Otro nucletido cclico con funcin de segundo mensajero es el GMPc que es sintetizado por la enzima guanilato ciclasa a partir de GTP. Los niveles de GMPc tambin son regulados por fosfodiesterasas que catalizan su transformacin en un metabolito inactivo, el 5-GMP. Existen fosfodiesterasas especficas para AMPc, para GMPc y otras que hidrolizan ambos nucletidos.

El GMPc activa una protena quinasa denominada protena quinasa G (PKG), que es muy similar a la PKA salvo que sus regiones regulatorias y catalticas forman parte del mismo polipptido.

El aumento de los niveles de protenas fosforiladas (enzimas o canales) es un evento transitorio, dado que existen protenas fosfatasas que catalizan la remocin de los grupos fosfato y permiten retornar a la situacin original (estado no fosforilado) una vez transmitida la seal. Muchas de estas fosfatasas se regulan por mecanismos similares a los descriptos. Ion calcio El in calcio (Ca2+) participa como segundo mensajero en diversos procesos biolgicos, como la contraccin muscular, la liberacin de neurotransmisores, la endocitosis y exocitosis y la regulacin del metabolismo. Un estmulo puede inducir un incremento transitorio en los niveles citoplasmticos de Ca2+ desde aproximadamente 10-8 M a concentraciones mayores a 10-6 M, (es decir un aumento de 100 veces en la concentracin de Ca2+). Este aumento puede deberse a la apertura de canales de la membrana plasmtica, lo que permite la entrada del in desde el medio extracelular o bien a la liberacin de Ca2+ desde depsitos intracelulares como los del retculo endoplsmico. El calcio llega al citoplasma celular a travs de canales, cuya apertura puede depender de la unin de un ligando (como es el caso de los receptores acoplados a canales inicos) o de cambios en el potencial de membrana (canales operados por voltaje). Los canales de Ca2+ del retculo endoplsmico son activados por inositol trifosfato (IP3), producto de la reaccin catalizada por la fosfolipasa C, como veremos ms adelante.

Cmo puede un aumento de la concentracin de calcio en el citosol activar vas de sealizacin? Para poder transmitir el mensaje, el calcio debe unirse y modificar protenas especficas. Sin embargo, no todas las protenas que pueden unir calcio participan de la transduccin de seales. Las protenas involucradas en la transduccin deben poder sensar los cambios localizados y temporarios producidos en la concentracin del in. Entre las protenas que cumplen esta funcin se encuentra la calmodulina. Si bien la calmodulina no tiene actividad enzimtica, el complejo Ca2+-calmodulina es capaz de regular la actividad de ms de 100 enzimas diferentes. La calmodulina funciona como un receptor intracelular de calcio que une cuatro iones calcio por molcula. La unin del Ca2+ modifica la conformacin de la calmodulina y le permite la interaccin con otras protenas. La calmodulina puede interactuar con la adenilato ciclasa, la xido ntrico sintasa, protenas del citoesqueleto, y protenas quinasas como la fosforilasa quinasa (metabolismo de glucgeno), la quinasa de la cadena liviana de miosina (contraccin muscular) y quinasas multifuncionales llamadas quinasas dependientes de Ca2+-calmodulina (CAMK).

Cuando los niveles de calcio citoslicos son bajos, la CAMK no tiene actividad enzimtica porque una zona autoinhibitoria de la enzima bloquea el acceso del sustrato al sitio cataltico. Cuando los niveles de calcio aumentan, el complejo Ca2+-calmodulina se une a la enzima desbloqueando el sitio cataltico. La unin de Ca2+-calmodulina a la enzima permite su autofosforilacin, lo que incrementa an ms su actividad de quinasa. Entre las protenas que son sustrato de CAMK II se encuentra el factor de transcripcin CREB descripto anteriormente.

Lpidos Otro grupo de segundos mensajeros son producidos a partir de fosfolpidos de la membrana plasmtica. En particular, la ruptura del fosfatidil inositol difosfato permite la liberacin de inositol trifosfato (IP3) y de diacilglicerol (DAG). La enzima que cataliza la escisin del fosfolpido se denomina fosfolipasa C.

Algunas isoformas de la fosfolipasa C pueden activarse por protenas Gq y otras por receptores con actividad de tirosina quinasa. La liberacin de IP3 y DAG provoca la activacin del siguiente eslabn de la cadena de sealizacin: la protena quinasa C (PKC), una quinasa de serina/treonina que participa en la proliferacin celular. Esta enzima consta de un nico polipptido con dos regiones, la cataltica y la regulatoria, que une DAG, lpidos de membrana y Ca2+. En estado inactivo, la regin cataltica se encuentra bloqueada por una regin llamada pseudo-sustrato. Como ya vimos, el IP3 permite la liberacin de Ca2+ desde los depsitos intracelulares al citosol. El Ca2+ se une directamente a la PKC, que a su vez se ancla a la membrana plasmtica al unirse al DAG. Esta interaccin aumenta la afinidad de la PKC por el fosfolpido fosfatidilserina. La PKC unida a la membrana plasmtica, cambia su conformacin y se desbloquea la regin cataltica al separarse de la regin de pseudosustrato.

Todas las protenas G son heterotrimricas? Existe un grupo de protenas G que unen nucletidos de guanina, presentan actividad de GTPasa, pero son monomricas y pequeas (aprox 21 kDa). En este grupo de protenas G pequeas se encuentran: Ras, que est involucrada en el control de procesos de proliferacin y diferenciacin

celular, y otras como Rho, Rab y Ran. La desregulacin de estas protenas G est involucrada en una gran variedad de enfermedades humanas como el cncer o la infeccin por patgenos.

GEF

Al igual que las protenas G heterotrimricas, las protenas G pequeas se activan al intercambiar GDP por GTP, lo que slo ocurre mediante la interaccin con factores intercambiadores de nucletidos de guanina (GEFs) que se unen por un lado al complejo ligandoreceptor y por el otro a la protena G pequea. Para que ocurra la hidrlisis del GTP a una velocidad apreciable se requiere la participacin de activadores de GTPasa. De esta forma se retorna a la situacin inicial. La protena Ras transmite la seal al interior celular a travs de la activacin de una cascada de protenas quinasas (MAPKs).

Factor de crecimiento

Membrana plasmtica

Protenas nucleares y citoplasmticas

Otros tipos de transmisin del mensaje Activacin de cascadas de quinasas Como vimos desde el inicio de esta clase, muchas vas de sealizacin involucran la fosforilacin y desfosforilacin como forma de regulacin de la actividad de protenas (enzimas o no). O sea, la mayora de los mensajes que se transmiten al interior celular producen cambios en la actividad de protenas quinasas. Estas quinasas son activadas por segundos mensajeros (como vimos en el caso de PKA, PKG, PKC y CAMK II) o bien por fosforilacin mediante una cascada de activacin de quinasas. Un ejemplo de este ltimo mecanismo son las quinasas activadas por mitgenos (MAPKs), que pueden ser activadas por fosforilacin dual en residuos de serina/treonina y de tirosina. Se han descripto hasta el momento tres familias de MAPKs: la familia ERK (extracelullar signal regulated protein kinase) que media efectos mitognicos y seales de diferenciacin y las familias de JNK (Jun kinase) y de p38 quinasa, que estn asociadas con las respuestas celulares al estrs y a citoquinas inflamatorias. En estado de reposo, las MAPKs se encuentran en el citoplasma, pero ante un estmulo adecuado se fosforilan y se translocan al ncleo. Los sustratos efectores de las MAPKs son generalmente factores de transcripcin, como el factor AP-1.

Activacin de quinasas de lpidos La enzima fosfatidil inositol 3-quinasa (PI-3 quinasa) es activada por receptores con actividad de tirosina quinasa y por otros receptores de membrana incluyendo algunos asociados a protenas G. A diferencia de las protenas quinasas, esta enzima fosforila al fosfolpido de membrana fosfatidil inositol. Este fosfolpido sirve de punto de anclaje para la protena quinasa B (PKB) que es a su vez fosforilada y en esa forma es activada y liberada de la membrana plasmtica. La PKB, entre otros efectos, promueve la supervivencia celular a travs de la fosforilacin e inactivacin de protenas involucradas en la muerte celular programada o apoptosis.

Interaccin entre las distintas vas de sealizacin Puede una determinada molcula seal regular la respuesta biolgica de una clula a travs de ms de un camino de transduccin de la seal? Si bien a lo largo de esta clase hemos analizado las principales vas de transduccin de seales como si fueran cadenas lineales a travs de las cuales fluye la informacin desde el exterior al interior celular, existen puntos potenciales de interseccin entre los distintos eslabones de la cadena, que permiten que se establezca un dilogo cruzado entre dos o ms vas de transduccin de seales. Cada clula tiene distintos tipos de receptores y est constantemente recibiendo seales en forma simultnea, de esta manera, la respuesta celular est conformada por la sumatoria de la activacin de ms de un camino de sealizacin. Adems, la activacin de un mismo receptor puede activar diferentes vas de sealizacin. Un ejemplo de ello es el factor de crecimiento de fibroblastos, que al interactuar con su receptor activa la va de tirosina quinasas, la va de STAT y una tercera va que involucra el metabolismo de lpidos y aumenta los niveles de calcio intracelular. Si bien an no es claro como una clula individual produce una respuesta especfica a tantas seales extracelulares diferentes, una estrategia posible es el uso de protenas de armazn alrededor de las que se organizan los grupos de protenas que participan en la transmisin de la seal. Esta organizacin incrementa la precisin, velocidad y eficiencia de la comunicacin. En algunos casos, estos complejos son transitorios y se desarman luego de cumplir una funcin. Cmo se termina la transmisin de la seal? Algunas seales como las que modifican las respuestas metablicas o las que tansmiten impulsos nerviosos, necesitan apagarse rpidamente cuando no se produce ms hormona. Otras seales, como las que estimulan la proliferacin se apagan ms lentamente. De hecho, las seales que regulan la diferenciacin pueden persistir indefinidamente. Muchas enfermedades crnicas son causadas por una falla en la terminacin de una respuesta en el momento adecuado. El primer nivel de terminacin es el mensajero qumico. Cuando la clula que lo produce ya no es estimulada, el mensajero no se produce y el que existe se degrada. Por ejemplo, hormonas polipeptdicas como la insulina, son captadas por el hgado y degradadas. Otro ejemplo es la degradacin de acetilcolina por la acetilcolinesterasa. Dentro de cada va de transduccin de seales, la seal puede apagarse en sitios determinados. El receptor se puede desensibilizar, y las protenas G, monomricas o heterotrimricas terminan su funcin cuando hidrolizan el GTP. La terminacin tambin se logra por la degradacin

de los segundos mensajeros. Otra forma de interrumpir el mensaje es mediante la activacin de fosfatasas de protenas, que puede ser especficas para tirosina o serina/treonina. Patologas asociadas a defectos en vas de sealizacin Como hemos visto, las respuestas biolgicas tienen un alto grado de complejidad y es por ello que alteraciones en distintas etapas de la misma pueden producir la muerte de la clula, su proliferacin o su transformacin de un fenotipo normal a uno canceroso. Se han identificado mutaciones en una gran cantidad de protenas involucradas en distintos caminos de sealizacin. En muchos tumores mamarios se han encontrado mutaciones en la protena Ras, relacionadas con un dficit en su actividad GTPasa. En ese caso, la protena Ras permance en forma activa y contina estimulando el crecimiento celular.