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&61.*?=@@;B6-
La cromaLografla en papel es un Llpo de $.*/01*2.0340 ?5 "570.1*, en donde los
componenLes de una mezcla se separan en base a una dlsLrlbucln dlferenLe enLre la fase mvll
y la fase esLaclonarla. Ll movlmlenLo relaLlvo de las moleculas a lo largo del slsLema
cromaLogrflco es el resulLado de un equlllbrlo enLre las fuerzas de Lransmlsln o arrasLre
e[ercldo por la fase mvll en su desplazamlenLo sobre la fase esLaclonarla y las fuerzas que
Llenden a frenar dlcho desplazamlenLo. Las fuerzas de frenado pueden ser LanLo de reparLo
(basado en crlLerlos de solubllldad) como de adsorcln.
La Leorla de la cromaLografla de reparLo se basa en que, en general, sl dos fases
lnmlsclbles se encuenLran en conLacLo una con oLra y sl una de las dos fases conLlene un soluLo,
esLe se dlsLrlbulr enLre ambas de acuerdo con sus solubllldades relaLlvas. ulcho fenmeno se
denomlna reparLo.
Ln la cromaLografla de reparLo se suelen uLlllzar dlversos maLerlales como soporLes: almldn,
celulosa, gel de slllce, xldo de alumlnlo, eLceLera. Aunque en Leorla se conslderan lnerLes,
pueden generar dlferenLes procesos de adsorcln, por lo que la separacln ocurrlr Lamblen, en
parLe, debldo a la lnLeraccln enLre las moleculas a separar con dlcho soporLe, la cual acLuarla
como fuerza de frenado. 1anLo la cromaLografla en papel como su anloga en capa flna esLn
comprendldas en la descrlpcln de $.*/01*2.0340 56 C*< C;/56<;*65<, debldo a las dos
dlmenslones espaclales que son el ancho y el largo que son caracLerlsLlcas de una $.*/01*2.0340
56 !806*.

D=6?0/561*-
Ll uso de la cromaLografla en papel para la separacln e ldenLlflcacln de amlnocldos
es de gran lmporLancla desde que fue lnLroduclda por MarLln
1
en 1944, la fase mvll empleada
generalmenLe es una mezcla de 2:buLanol/cldo aceLlco/agua o dllucln acuosa de fenol (polar y
clda), esLas comblnaclones de fases mvlles poseen densldad mayor que oLros slsLemas de
solvenLes y requlere de por lo menos de 2 a 3 horas para que el frenLe del solvenLe alcance una
dlsLancla prudenLe en una placa relaLlvamenLe larga. Sln embargo en un experlmenLo descrlLo
por Cabrlel
2
en 1968 se esLudlo la alLernaLlva de emplear aceLonlLrllo y un buffer (polar y clda
o alcallna dependlendo el pP del buffer) obLenlendose buenos resulLados en el Llempo de
desarrollo (40 mlnuLos) sln necesldad de que se preequlllbre el papel
1
.
Sl blen, el empleo de aceLonlLrllo reduce el Llempo experlmenLal, esLe lncremenLa la Loxlcldad y
por lo LanLo deben emplearse las medldas perLlnenLes. Ll empleo de las soluclones Lampn o
buffer se asocla a que las caracLerlsLlcas qulmlcas de los amlnocldos camblan con el valor de
poLenclal de hldrgeno de Lraba[o, de esLa manera esLos pueden desplazarse ms cuando las
condlclones de la fase mvll (cuyo efecLo es predomlnanLe) asl se lo permlLen.
Lo anLerlormenLe expuesLo llusLra como los procesos cromaLogrflcos LanLo
lnsLrumenLales como no lnsLrumenLales (en cualqulera de sus varlanLes) son recepLlvos a nuevas
alLernaLlvas meLodolglcas y conLlnuamenLe sufren camblos que beneflclen en aspecLos como
resolucln, separacln, empleo de recursos y Llempo por menclonar algunos.

1
Actualizada por Jorge Reyes y William Quiroa.
Lea acerca de la qulmlca de los amlnocldos en el fundamenLo de la prcLlca de Anllsls
CuallLaLlvo de Amlnocldos por LlecLroforesls de esLe manual y vlslLe la Labla relaclonada en la
seccln de Apendlces.

EAF51;>*<-
1. Lmplear la Lecnlca de cromaLografla en papel para separar y alslar amlnocldos.
2. LsLudlar alLernaLlvas meLodolglcas que permlLan opLlmlzar Llempo y recursos.
3. Comprender los mecanlsmos y prlnclplos lmpllcados en la cromaLografla en papel.


G015.;085<-
apel fllLro WaLman CuallLaLlve no.3 o no.1.
Cmara CromaLogrflca (puede ser un beacker, cuando sea necesarlo).
Capllares adelgazados para apllcar muesLras.
1l[eras.
LsLufa elecLrlca o plancha para apllcacln de calor.
apel pP escala 1 a 14.
lpeLas asLeur.
8ulbo para plpeLas asLeur.
robeLa de 100 y 10 mL.

"50@1;>*<-
Amlnocldos (proporclonados por el lnsLrucLor).
AceLaLo de Amonlo.
AceLonlLrllo.
cldo AceLlco 30.
nlnhldrlna en solucln: 1 mg nlhldrlna /mL AceLona(roLeger de la luz solar)

!.*@5?;/;561*-
!.570.0@;B6 ?5 D0<5 GB>;8+
1. reparar 100 mL de una solucln de aceLaLo de amonlo 0.1 M. a parLlr de reacLlvo slldo
y agua. Ll peso molecular del aceLaLo de amonlo es 77.08 g/mol.
2. Ln reclplenLes debldamenLe roLulados haga mezclas de aceLonlLrllo/aceLaLo de amonlo
0.1 M 7:3, (fase mvll A), agregar a fase A 1 mL de cldo AceLlco Claclal y relacln 6:4
(fase mvll 8), agregar a fase A 1 mL de cldo AceLlco Claclal. verlflque el pP de las
soluclones y reprLelo al lnsLrucLor.
3. Separe en dos porclones las fases mvlles A y 8 y camble el pP de una de cada una
usando unas cuanLas goLas de cldo aceLlco glaclal o dlluldo. Ahora cuenLa con 4 lases
mvlles. Su lnsLrucLor le dlr como organlzarse en equlpos de Lraba[o.
4. L[ecuLe lnmedlaLamenLe la reparacln de Cmara de uesarrollo que se descrlbe ms
adelanLe.

!.570.0@;B6 ?5 D0<5 H<10@;*60.;0+
1. Sobre un Lrozo de papel WaLman no. 3 de 8 x 8 cm se Lraza con un lplz una recLa
paralela a uno de los bordes y a una dlsLancla de esLe de 1 cm.
2. Sobre esLa llnea se pone 6 punLos equldlsLanLes enLre sl y sobre los bordes.
3. Ln cada punLo (ldenLlflcados con el nombre de cada uno de los amlnocldos) se
apllcarn Lres goLas de la solucln de amlnocldos y solucln problema (un amlnocldo
en cada punLo y en el ulLlmo la solucln problema). Se uLlllza un capllar para apllcar la
muesLra goLa a goLa (hacerlo con mucho culdado). Se seca con un secador de pelo
despues de haber apllcado cada goLa. Se marca con lplz, y en el exLremo opuesLo de la
placa, algun lndlcaLlvo del grupo que reallza la cromaLografla.

!.570.0@;B6 ?5 $:/0.0 ?5 C5<0..*88*+
1. Coloque 10 ml de lase Mvll denLro de la cmara (beacker 100 mL) y Lpelo por medlo
de una pleza de papel alumlnlo que no permlLa la sallda de los vapores.
2. ue[e reposar la cmara duranLe 13 mlnuLos anLes de proceder al uesarrollo
CromaLogrflco que se descrlbe ms adelanLe.






!.*@5?;/;561* ?5 I5/A.0?* 56 $.*/01*2.0340 56 70758-
1. Llevar a cabo la Lecnlca correspondlenLe al sembrado en la pglna de la seccln de
Lecnlcas complemenLarlas al lnlclo de esLe manual.
2. lda a su lnsLrucLor la muesLra desconoclda MuAA01 y slembrela en el papel.

C5<0..*88* $.*/01*2.:3;@*-
1. Colocar el papel culdadosamenLe denLro de la cmara de desarrollo a manera Lal que se
sumer[a unlformemenLe denLro del solvenLe y no un exLremo prlmero.
2. ue[ar que la fase mvll Lrepe por el papel hasLa que alcance a un clculo esLlmado de 1
cm del borde del papel.
3. Cuando lo anLerlor suceda saque el papel y marque el frenLe del solvenLe con un lplz.
Luego seque el papel y rocle por medlo de un aLomlzador el reacLlvo nlnhldrlna de
manera que se cubra compleLamenLe la placa.
4. or medlo de una esLufa seque el papel (sln de[ar que se queme) hasLa que se hagan
vlslbles las marcas de amlnocldos (algunas veces cafe y por lo regular purpura)
3. LfecLue las marcas perLlnenLes para el clculo de los facLores correspondlenLes.

"5<=810?*<-
1. Pallar los valores de facLor de reLencln para cada amlnocldo.
2. Calcular el facLor de reLencln relaLlvo para aquellas muesLras a las que se le compare
con un paLrn de referencla.

'6:8;<;< ?5 "5<=810?*<-
Lxpllcar el desplazamlenLo de los compuesLos uLlllzando desde el punLo de vlsLa de la
aflnldad a la fase esLaclonarla y mvll de cada compuesLo y Lomando algunas de las
caracLerlsLlcas flslcas y qulmlcas de las moleculas, Lales como la solubllldad, polarldad,
efecLo de poLenclal de hldrgeno, enLre oLros que consldere perLlnenLes.

$=5<1;*60.;*-
1. Los amlnocldos son susLanclas que dependlendo del valor del poLenclal de hldrgeno
se comporLan de manera dlferenLe. Cul es el valor del poLenclal de hldrgeno de la
fase mvll?
2. Ln que forma se encuenLran los amlnocldos en el poLenclal de hldrgeno de Lraba[o?
3. Ls poslble expllcar la elusln de los amlnocldos en funcln de su peso molecular?
4. Ls poslble llevar a cabo esLa Lecnlca por cromaLografla en papel?
3. LxlsLen oLros reveladores aparLe de la nlnhldrlna para revelar las poslclones de los
anallLos anallzados en esLa prcLlca?

J;A8;*2.0340-
1. Pelmer, L. . !ournal of Chemlcal LducaLlon vol. 49, number 8, AugusL 1972. pg. 347
2. Cabrlel, 1. l. !ournal of ChromaLography. vol. 36 1968. pg. 318
3. avla, u.L., Lampman, C.M., krlz, C.S. and Lngel, 8.C. "lnLroducLlon Lo Crganlc
LaboraLory 1echnlques - a Mlcroscale Approach", 2nd Ld., Saunders ubllshers (1993).
asLo, u., !ohnson, C. and Mlller, M. "LxperlmenLs and 1echnlques ln Crganlc ChemlsLry,
1sL Ld., renLlce Pall (1992).
4. Skoog, u. A., Poller, l. !. & nleman, 1. A. 7#1241.1$5 +, 02381515 ;25'#<%,2'&89 3La Ldlcln
McCraw-Plll/lnLeramerlcana de Lspana, S. A. Lspana, 2001, xxv + 1028