TEMAS DE INFECTOLOGA AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS 1.

El diagnstico de laboratorio correcto y oportuno depende del cuidado con que se realice la toma, manejo y envo de muestras siguiendo al detalle las instrucciones al respecto. 2. La interpretacin del resultado del laboratorio debe estar apoyado por un buen diagnstico clnico y los antecedentes epidemiolgicos del caso. 3. La muestra para aislamiento de agentes infecciosos debe ser tomada de instaurar la terapia con antimicrobianos. !"E#

EXPECTORACION (ESPUTO) Toma$ En frasco de pl%stico, con capacidad de 3& a '& mL, de boca anc(a y est)ril, se recogen unos ' mL de e*pectoracin del paciente. +ara el aislamiento de agentes microbianos de infeccin respiratoria aguda, la muestra debe satisfacer un control de calidad consistente en el recuento celular a seco d)bil de 2' campos, en busca de la presencia promedio de no m%s de 1& c)lulas epiteliales y m%s de 2' polimorfonucleares por campo, en caso de no cumplir con estos valores se solicita otra muestra. En los casos de sospec(a de tuberculosis slo (ay que cuidar que la muestra sea mucopurulenta y est) libre de saliva, se toman 3 muestras$ una es cuando se produce tos, otra se toma en la ma-ana cuando despierta el paciente y una m%s al (acer la entrega de las muestras en el laboratorio. Las muestras se protegen del calor e*cesivo. #i no se procesa durante la jornada, refrigerar ./0o1 EXUDADO CUTANEO Toma$ 1on un (isopo de algodn 2o dacrn3 se toma una porcin del e*udado, evitando que sea muy superficial. 4nmediatamente se siembra en medios de cultivo adecuados 2agar sangre, agar c(ocolate, + 4, etc3 o se inocula en el medio de transporte de #tuart. Las muestras se protegen del calor e*cesivo. #i no se procesa, colocar en refrigeracin EXUDADO FARINGEO Toma$ #e pide al paciente que se siente y coloque su cabe5a (acia atr%s. #e ilumina bien la cavidad orofarngea y con un abatelenguas se empuja la lengua (acia abajo para facilitar el acceso a la parte posterior de la faringe. 1on un (isopo de algodn o dacrn (ace un raspado de las %reas (iper)micas, purulentas o necrticas, as como de las membranas o manc(as anormales, las presenta. HISOPADO NASAL, FARINGEO Y OTROS$ "omar el palillo del (isopo en forma est)ril 2con guantes3, (umedecerlo con el medio de transporte, reali5ar el (isopado e introducirlo nuevamente en el tubo de pl%stico, sumergido en el medio de transporte, (asta que permita el cierre (erm)tico, con tapa a rosca. EXUDADO NASOFARINGEO Toma$ #e pide al paciente que se siente y coloque su cabe5a (acia atr%s. #e introduce un (isopo de alginato de calcio, dacrn o nylon 2nunca de algodn en

caso de sospec(ar Bordetella3 por las fosas nasales (asta la nasofaringe, sin tocar los cornetes y tratando de producir un acceso de tos. El (isopo se mantiene in situ de 1&/1' segundos durante el acceso de tos, despu)s de lo cual se retira r%pidamente. #i la muestra no se va a procesar de inmediato, el (isopo se mantiene en un medio de transporte y refrigera 2./0 o13 Agentes !"a#es$ El (isopo con la muestra se introduce en un tubo de tapn de rosca con &.' mL de solucin salina isotnica est)ril. #e rompe la varilla de madera a la altura del tapn y se tapa (erm)ticamente. Agentes $a%te"!anos$ El (isopo con la muestra se introduce en un tubo de tapn de rosca con medio de mies o de #tuart. #e rompe la varilla de madera a la altura del tapn y se tapa (erm)ticamente.

EXUDADO URETRAL Toma$ #e recomienda al paciente que no orine por lo menos una (ora antes de tomar la muestra. En casos de gonorrea, cuando se produce un e*udado abundante, se presiona ligeramente la uretra con el fin de que lo e*pulse y )ste se recoge con un (isopo de alginato est)ril el cual se deposita en el medio de transporte de #tuart. 1uando se sospec(a de una infeccin por c(lamydia, se emplea un (isopo de alginato de calcio adecuado para toma de muestras en varones, el cual se introduce unos 2 a . cm en la uretra y se frotan las paredes (aciendo girar el (isopo durante ' a 1& segundos, con esta muestra se deben (acer de inmediato frotis en portaobjetos limpios que se fijan con acetona. #embrar lo antes posible EXUDADO &AGINAL Y ENDOCER&ICAL Toma$ #e utili5a un espejo vaginal para revisar el c)rvi*. En caso de gonorrea no se (ace ning6n tipo de limpie5a y se recoge una muestra de e*udado con ayuda de un (isopo, la muestra se debe sembrar de inmediato en la placa de agar de "(ayer 7artin. #i no es posible, se puede transportar en medio de #tuart. 1uando se sospec(a de infeccin por c(lamydia, se limpia el e*oc)rvi* con un (isopo de algodn para eliminar el moco y el e*udado, se introduce el (isopo 2de alginato de calcio o de dacrn, nunca de algodn3 o el cepillo unos 2 a . cm dentro del canal endocervical y se rota cuidadosamente presionando contra la pared, evitando el contacto con las superficies vaginales. 1on esta muestra se deben (acer de inmediato frotis en portaobjetos limpios que se fijan de inmediato con acetona. !o es necesario refrigerar la muestra.

FROTIS SANGUINEO Toma$ #e limpia la yema del dedo o el lbulo de la oreja con una torunda de algodn empapada en alco(ol etlico al 8&9 y se deja secar. 1on una lanceta est)ril se (ace una puncin firme y profunda y se limpia la primera gota de sangre con un algodn limpio y seco. #e comprime de nuevo la yema o el lbulo (asta que se forme una gota esf)rica. #e toca la parte superior de la gota con un portaobjetos muy limpio y con un e*tremo de otro portaobjetos, se e*tiende la sangre para (acer un frotis 2puede utili5arse una gota de sangre si se tom en tubo para citometra (em%tica . La sangre se deja secar a temperatura ambiente y en posicin (ori5ontal. 1ada laminilla se protege individualmente y se ti-e con t)cnica de :rigte

GOTA GRUESA Toma$ #e limpia la yema del dedo o el lbulo de la oreja con una torunda de algodn empapada en alco(ol etlico al 8&9 y se deja secar. 1on una lanceta est)ril se (ace una puncin firme y profunda y se limpia la primera gota de sangre con un algodn limpio y seco. #e comprime de nuevo la yema o el lbulo (asta que se forme una gota esf)rica, la cual se (ace depositar sobre el centro de un portaobjetos limpio. 1on ayuda de una arista de un portaobjetos se e*tiende sobre una superficie de apro*imadamente &.' a 1cm. La gota se deja secar a temperatura ambiente

HEMOCULTI&O Toma$ #e limpia el sitio de la puncin con una torunda de algodn impregnada con etanol al 8&9 o solucin de yodo al 29, tipo asepsia quir6rgica y se requiere tener cerca un mec(ero encendido. #i se trata de un adulto, se toman de ' a 0 mL de sangre total, sin anticoagulante, o de 2 a 3 mL si se trata de un ni-o. ;e inmediato la sangre se inyecta a trav)s del tapn 2previamente desinfectado con

alco(ol3 de un frasco con medio bif%sico para (emocultivo. El frasco del (emocultivo se empaqueta bien en un recipiente con doble cubierta para evitar su ruptura. !o (ay que refrigerarlo HISOPO RECTAL Toma$ La muestra se toma introduciendo la punta de un (isopo de algodn (umedecido en solucin salina o medio de transporte en el recto y (aci)ndolo rotar ligeramente. Estar% bien tomada si observamos un ligero color caf) en el (isopo. <na ve5 tomada la muestra se introduce el (isopo (asta el fondo en un tubo con medio de transporte 1ary/=lair que debe estar bien tapado 2tapn de rosca3. +ara estudios bacteriolgicos se enva inmediatamente despu)s de (aberse tomado. En caso de ser para estudios virales mandarlo en refrigeracin, aunque no se recomienda usar (isopo para el caso de virus. #i se trata de estudios bacteriolgicos no (ay que refrigerar el paquete, pero s en el caso de estudios virales. LI'UIDO CEFALORRA'UIDEO (LCR) Toma$ La obtencin de la muestra es responsabilidad e*clusiva del m)dico quien la tomar% bajo rigurosas condiciones de asepsia. #e deben recuperar unos ' mL los cuales se conservan en tubos de vidrio est)riles con tapn de rosca. 1uando se trate de estudios virolgicos, la muestra se refrigera. #i se sospec(a de una infeccin bacteriana, la muestra no debe refrigerarse, ni acompa-arse de (ielo. LI'UIDO PLEURAL Toma$ La obtencin de la muestra es responsabilidad e*clusiva del m)dico, quien la tomar% bajo condiciones rigurosas de asepsia. #e obtiene una muestra de apro*imadamente ' mL en tubos de vidrio est)riles con tapn de rosca. #i se estudia el material e*trado de centesis terap)utica debe enviarse el volumen en su totalidad, sobre todo en investigacin de = > o c)lulas neopl%sicas En (o$ El tubo se enva lo antes posible al laboratorio acompa-ado de refrigerante. MATERIA FECAL Toma$ Las muestras fecales pueden ser obtenidas en recipientes limpios de boca anc(a y con tapa (erm)tica que permitan su f%cil transporte, de preferencia que no sean de vidrio. Las (eces obtenidas del suelo, e*cusado o del pa-al no son satisfactorias, debido a que pueden contaminarse con orina u otro material e*tra-o. La muestra se debe enviar de inmediato al laboratorio o colocar en refrigeracin 22/0 o13, lo que conserva (uevecillos o larvas, no as trofo5oitos.

Estudios virales$ el tiempo de envo debe ser menor a los tres das y en condiciones de refrigeracin, con la cantidad de 1& gramos. #i se trata de (isopo rectal en solucin salina, Estudios bacteriolgicos$ se inocula en un medio de transporte 21ary =lair o mies3 y se enva a temperatura ambiente Estudios parasitolgicos$ se adiciona formol al 1&9 v?v neutrali5ado y se (omogeni5a bien. El envo se (ace a temperatura ambiente. Estudios para determinacin de coproantgenos por EL4# $ el tama-o que se enva es similar al una nue5 independientemente de la consistencia. Estudios parasitoscpicos $ tres muestras consecutivas 2de diferente da3, el envo se (ace a temperatura ambiente. 1uando la muestra presente sangre y?o moco de preferencia mandar de esa parte.

UROCULTI&O Toma$ #e usa un recipiente est)ril, de boca anc(a con tapa de rosca. unque el sondeo vesical es la forma ideal para evitar la contaminacin, debido a la posibilidad de e*tender la infeccin en el paciente, se utili5a en casos muy e*cepcionales en el (ospital. +or esto, la miccin espont%nea es la t)cnica m%s aconsejable$ despu)s de una cuidadosa limpie5a de la regin urogenital con agua y jabn, enjuagando con abundante agua para evitar contaminacin del jabn. #e instruye al paciente para que desec(e la primera parte de la miccin y se colecta el c(orro medio. #lo en caso de sospec(ar par%sitos, se usa la primera parte de la miccin. SANGRE TOTAL PARA IN&ESTIGACI)N DE ANTICUERPOS Toma$ La toma deber% (acerse en un lugar perfectamente iluminado y con el paciente cmodamente sentado. #e locali5a una vena adecuada en el bra5o del paciente y se coloca el torniquete. #e desinfecta el %rea de puncin con un algodn impregnado de alco(ol al 8&9, se introduce la aguja con el bisel (acia arriba. #i la muestra necesaria es sangre total (ay que utili5ar el anticoagulante adecuado seg6n el proceso que vaya a seguirse, ya que el efecto del mismo puede ser irreversible. #i la sangre no fluye espont%neamente y se est% utili5ando una jeringa, se jala el )mbolo y se aspira con suavidad, si se est% empleando equipo al vaco 2vacutainer3 se presiona el tubo de ensaye (acia arriba. l empe5ar a fluir la sangre el torniquete se retira y (asta que se (aya obtenido la cantidad de sangre que se requiere se retira la aguja y se coloca una torunda con alco(ol sobre el sitio de puncin ejerciendo presin para detener la (emorragia. #i la toma se (i5o con jeringa, la sangre se vierte de la misma y sin aguja sobre un tubo est)ril dej%ndola resbalar lentamente por la pared para evitar (emlisis. El tubo se tapa cuidadosamente evitando tocar la sangre

SUERO Toma$ #e debe seguir la misma t)cnica que para la obtencin de sangre total pero sin anticoagulante 2tubo tapa roja3. El co%gulo formado se separa de las paredes del tubo con un aplicador de madera. #e debe esperar el tiempo necesario para que se retraiga el co%gulo y el suero2.'/@& segundos3 se separa

por centrifugacin a 2,'&&/3,&&& rpm. El suero no debe mostrar indicios de (emlisis, ni debe estar lip)mico y si no se procesa en la jornada, se debe conservar refrigerado o congelado. ctualmente e*iste un equipo comercial de tubos al vaco con un gel especial, con este sistema se puede separar el suero directamente en los tubos centrifugando a 3,&&& rpm por ' minutos. El suero se conserva en los mismos tubos por varios das. Este procedimiento tiene la ventaja de que no se destapan los tubos en ning6n momento, as el contenido se conserva est)ril y adem%s representa un riesgo mnimo para quien procesa las muestras. AISLAMIENTO DE &IRUS "A;A 7 "E>4 L ;E#"4! ;A 4!BE#"4C 14A! B4>ALAC41 ;E=E> A="E!E>#E ;E!">A ;E L +>47E> #E7 ! ;E E!DE>7E; ;. En caso contrario, disminuye la posibilidad del diagnstico Las muestras deben ser tomadas y transportadas, respetando estrictamente las normas de bioseguridad, evitando que el e*terior de los recipientes est) contaminado con el material biolgico. Los tubos deben ser de pl%stico con tapa a rosca y su cierre (erm)tico. 1ada recipiente con material biolgico deber% identificarse con los datos del paciente e indicando el tipo de material y fec(a de obtencin.

+ara determinacin de 4g7 especfica, puede enviarse una sola muestra de suero 22/3 ml3 en la etapa aguda de la enfermedad, con e*cepcin de sarampin y rubela para las que son necesarias 2 muestras, la primera al momento de la consulta y la segunda a los 1& / 1' das de la primera.

LCR, ORINA, SUERO, LI'UIDO PLEURAL, PERICARDICO, U OTROS LI'UIDOS ORGANICOS$ Enviar, en tubo de pl%stico est)ril, con tapa a rosca. !A ;4L<4> 1A! 7E;4A# ;E "> !#+A>"E. 1ualquiera que sea el sndrome clnico, cuando e*ista %om*"om!so ne+"o#,g!%o enviar L1> para estudio. TEMAS DE INMUNOLOG-A

La t)cnica EL4# 2En5yme LinEed 4nmunoabsorvent ssay3 se basa en la deteccin de un antgeno inmovili5ado sobre una fase slida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reaccin cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser medido por espectrofotometra. #u mayor utilidad clnica es en investigacin de anticuerpos contra componentes de virus o al propio antgeno

AYUNO: No ingerir alimentos slidos ni lquidos por lo menos durante 8 hs previas a la realizacin del anlisis. ! " # hs para per$il de lpidos. No ingerir caramelos% chiclets o &e&idas azucaradas. 'n$ormar al la&oratorio si se toma alg(n medicamento que pueda inter$erir con los resultados. O)'NA *O+,-./A: 0e colectarse en un recipiente 1 su tapa per$ectamente lavados con detergente 1 &ien en2uagados con a&undante agua corriente. ,ara neonatos utilizar colector peditrico de polietileno3 introducir los genitales del ni4o por el ori$icio 1 cuidar que no se mezcle con heces. O)'NA 0. !# 5O)A6: .nviar la totalidad de la orina emitida. Un da anterior al anlisis% a las 7:88 hs orinar u desechar esa miccin. A continuacin colectar las micciones su&secuentes 9/O0A6:% hasta las 7:88 hs del da siguiente% inclu1endo la orina de esta hora. 6e sugiere un solo colector aunque pueden ser varios% de pre$erencia envase de agua mineral. .l la&oratorio de&e indicar si se necesita conservador o envase o&scuro. 0'./A: ,ara calciuria evitar ingerir leche 1 derivados 1 medicamentos que contengan calcio. U)O*U-/';O : 6in medicamentos anti&iticos o suspenderlos #8 hs antes de la recoleccin. )ecoger la a. Orina de la ma4ana% chorro medio% previo aseo de la zona genital con agua 1 2a&n% sin desin$ectantes. )ecolectar la muestra en $rasco est<ril. )emitir al -a&oratorio lo antes posi&le o re$rigerar 9no ms de # hs:. ,A)A6'/O-=>'*O 0. +A/.)'A ?.*A-: 6uprimir las grasas en la alimentacin 6olicitar $rasco con conservador *olectar muestra durante @ das *antidad igual a una cucharadita si es lquida o del tama4o de una nuez si es slida 6i se o&serva alg(n parsito colocarlo en otro recipiente con agua /apar per$ectamente el recipiente

Duente =ibliogr%ficas$

INSTITUTO DE DIAGNOSTICO Y REFERENCIA EPIDEMIOLOGICOS (InDRE) EL LABORATORIO EN EL DIAGNSTICO CLNICO. Jonh Bernar !enr"
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