NUTRICION

Elementos C Material celular O N H Material celular Aminoacidos Material celular agua Acidos nucleicos agua Respiracion aerobia coenzimas

P S

Acidos nucleicos Constituyente de cystena, methionina, glutathione Potencial de membrana

fosfolipidos coenzimas

coenzimas

coenzima

Ca

Componente de endosporos

Cofactor enzimatico

Mg

Catin inorgnico celular

cofactor enzimtico

Fe

Citocromos respiratorios

Componente de protidos

Cofactor enzimatico

NUTRICION
Tipo nutricional Fuente de energa Fuente de carbono Ejemplos Cianobacteria, algunas bacterias Verde y Prpura

Fotoautotrficos

Luz

CO2

Algunas bacterias Verde y Prpura

Algunas bacterias Verde y Prpura

Fotoheterotrficos

Luz

Componentes orgnicos

Quimioautotrficos o Litotrficos (Litoautotrficos)

Componentes inorgnicos, por ejemplo H2, NH3, NO2, H2S

CO2

Pocas bacterias y muchas Archaea

Quimioheterotrficos o Heterotrficos

Componentes orgnicos

Componentes orgnicos

La mayora de las bacterias, algunas Archaea

MEDIOS DE CULTIVO
MEDIO DE CULTIVO preparacin artificial, slida, semislida o lquida que suministra al m.o. cada una de las sustancias fundamentales, una fuente de energa y condiciones ambientales adecuadas para la sntesis y mantenimiento de su protoplasma.

CULTIVOS son las poblaciones de microorganismos que se obtienen en los medios de cultivo. Los cultivos pueden ser: puros o axnicos, cuando la poblacin est constituida por una nica clase de microorganismos. mixtos, cuando la poblacin est constituida por ms de una clase de microorganismos.

COMPOSICION QUIMICA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo est integrado por: Elementos energticos y constitutivos: a) Macroelementos (g/l): Fuente de carbono: CO2 compuestos carbonados orgnicos. Los hidratos de carbono se consideran fuente de carbono y energa: hexosas como glucosa, fructosa, galactosa; pentosas como arabinosa, xilosa, ramnosa; disacridos como lactosa, sacarosa, maltosa; trisacridos como rafinosa; polisacridos como almidn, glucgeno; alcoholes como glicerol, sorbitol, manitol; y glucsidos como salicina, y esculina

COMPOSICION QUIMICA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo est integrado por: Elementos energticos y constitutivos: a) Macroelementos (g/l): Fuente de nitrgeno
Los org. autotrofos NO3-, NH3 N2. formando aminocidos y a. nucleicos Los org. heterotrofos : aminocidos, bases pricas o pirimdicas. Los org. Quimioorganotrofos: peptonas, (productos de la hidrlisis cida o enzimtica de protenas de origen animal o vegetal (carne, soja, casena, gelatina, harina de maz y girasol).. 1.La hidrlisis cida puede ser realizada con HCl H2SO4 y presenta las siguientes desventajas: el triptofano se destruye se pierde el 10% de vitaminas presentes desaparecen casi completamente los polipptidos 2.Se prefiere la hidrlisis enzimtica que emplea diferentes proteasas actuando a pH especficos, ej. papana a pH 6.5, tripsina a pH 8.5, pepsina a pH 2. Las peptonas son fuente de nitrgeno y, en ausencia de hidratos de carbono cumplen la funcin de fuente de carbono y energa

COMPOSICION QUIMICA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo est integrado por: Elementos energticos y constitutivos: a) Macroelementos (g/l): Fuente de fsforo: fosfatos de Na K ( poder buffer (pH cercano a 7)). Fuente de azufre: se adiciona como SO4=, cisterna o metionina.

Fuente de calcio, magnesio y potasio: como sales inorgnicas. Fuente de sodio: sodio contribuira a equilibrar la presin osmtica del medio extracelular. Es un catin requerido por bacterias haloflicas. Se suele suministrar como NaCl.

COMPOSICION QUIMICA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

b) Microelementos o trazas (mg ug/ml): suelen estar presentes como contaminantes de los macroelementos. Frecuentemente esenciales: Mn: estimula el crecimiento, favorece la esporulacin. Fe: cofactor de enzimas para la funcin respiratoria en citocromos, catalasa y flavoprotenas. Co: interviene en la sntesis de vitamina B12. Cu: presente en oxidasa terminal de la cadena respiratoria. Esenciales en casos especiales: B, Al, Si, V, As, Se, Mo, Sn, Be, F, etc. Inhibidores del crecimiento: Au, Ag, Cd, Cr, Pb,

COMPOSICION QUIMICA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

2.Factores de crecimiento Son compuestos orgnicos especficos requeridos en muy bajas concentraciones que no pueden ser sintetizados por la clula que los necesita

COMPOSICION QUIMICA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

3.Agentes solidificantes Su agregado al medio de cultivo es opcional. El ms usado: EL AGAR, es un polisacrido cido derivado de algas marinas,. al 1.5-2% consistencia slida normal, al 0.2-0.3% consistencia semislida o blanda, al 5% en medios de consistencia muy firme para detener el crecimiento de grmenes muy mviles, al 0% cuando se preparan medios lquidos (caldos). caractersticas: Funde a 80-100C y permanece lquido hasta 50-55C. A 45-55C se pueden agregar suspensiones de clulas sin afectar la viabilidad (supervivencia) de las mismas. Permanece slido a 37C, temperatura de incubacin de la mayora de las bacterias patgenas del hombre. No es txico para las bacterias, ni es degradado por stas. Es transparente, lo que facilita la visualizacin de las colonias. Al solidificar, forma una trama suficientemente abierta para permitir la difusin de los nutrientes del medio de cultivo en todas direcciones, y suficientemente cerrada segn la concentracin empleadapara impedir la movilidad de los microorganismos. Otros solidificantes: Agarosa: Se usa intensamente en Inmunologa y Biologa Molecular. Silicagel: es silicato diluido en HCl. Gelatina: es una protena obtenida por hidrlisis del colgeno.. Albmina de huevo, suero: a 80C estas protenas coagulan y solidifican el medio

de cultivo.

COMPOSICION QUIMICA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

4.Agua
El agua representa (80-90%) del peso celular Fundamental en los procesos metablicos Funciones enzimticas Solvatacin de materiales orgnicos e inorgnicos Donacin de electrones para organismos fotosintticos. Los medios de cultivo se preparan en el laboratorio con agua destilada.

CONDICIONES FISICAS DE UN MEDIO DE CULTIVO

- temperatura: cada especie tiene su temperatura ptima de crecimiento. * mesfilos: 35-37C * psicrfilos: 15-20C * termfilos: 50-60C -presin osmtica: la mayora de las bacterias crece en 0.1 a 1% NaCl

CONDICIONES FISICAS DE UN MEDIO DE CULTIVO

-presencia de oxgeno: aerobios estrictas: requieren oxgeno para crecer. Metabolismo respiratorio. * microaerfilos: necesitan bajas tensiones de O2 y una atm enriquecida en CO2. Pueden realizar respiracin aerobia. *anaerobios obligados: el O2 les resulta txico. Crecen en medios muy reducidos (sin O2). Metabolismo fermentativo. anaerobios aerotolerantes: crecen en ausencia de O2 (metabolismo fermentativo) y cuando son expuestos al O2 no mueren. *anaerobios facultativos: pueden crecer en condiciones aerobias (metabolismo respiratorio) como anaerobias (metabolismo fermentativo

CONDICIONES FISICAS DE UN MEDIO DE CULTIVO

-humedad: Todas bacterias necesitan un ambiente hmedo. En condiciones ambientales adversas, algunas especies producen esporas

luz: es importante para los microorganismos fotosintticos.

-pH: la mayora de las bacterias crecen a pH (7 7.6). Excepciones son los lactobacilos (pH 5, acidfilos), Vibrio cholerae (pH 8.6,). Los hongos crecen a pH menor que 7

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

a) Por su consistencia -lquidos (no permiten el aislamiento de colonias) -slidos (permiten el aislamiento y observacin de colonias) b) Por su origen -sintticos: estrictamente definidos desde el punto de vista qumico, se usan para cultivar fototrofos y quimiolitotrofos. -naturales o complejos: composicin qumica no rigurosamente constante: Son aptos para el cultivo de quimioorganotrofos. Son los que prepararemos y usaremos en el Laboratorio de Microbiologa. c) Por su composicin: - comunes: permiten el crecimiento de microorganismos poco exigentes. - enriquecidos:. Permiten el crecimiento de m.o. exigentes

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

d) Por su funcin: - Medios de enriquecimiento: son medios lquidos que sembrados con poblaciones mixtas de microorganismos, favorecen la multiplicacin de ciertos grupos e inhiben el desarrollo de las especies restantes. Ej.: agua peptonada alcalina favorece el desarrollo de Vibrio cholerae tolerante a pH alto e inhibe otros microorganismos presentes en la misma muestra; caldo selenito contiene selenito de sodio que favorece la proliferacin de especies como Salmonella y Shigella pero inhibe otras enterobacterias; caldo EC a 44.5C, una temperatura que favorece a Escherichia coli y no a otras bacterias. - Medios selectivos: son medios slidos que sembrados con poblaciones mixtas de microorganismos, favorecen la multiplicacin de ciertos grupos e inhiben el desarrollo de las especies restantes. . Ej: - cambiando pH: para favorecer el desarrollo de Lactobacillus, un gnero implicado en la produccin de yogur, se puede agregar cido actico a los medios de cultivo para obtener un pH final de 5.4, totalmente inadecuado para muchas bacterias acompaantes. - altas concentraciones osmticas: en agar manitol salado con una concentracin de NaCl de 7.5% muy pocas bacterias pueden crecer, salvo las que presenten una elevada tolerancia a NaCl, como Staphylococcus aureus - agregando antispticos: colorantes como verde brillante, cristal violeta y eosina, se utilizan para inhibir grmenes Gram positivos mientras los Gram negativos desarrollan sin dificultad. Las sales biliares se usan con el mismo propsito. - agregando antibiticos: Unas clulas resisten al antibitico mientras las clulas acompaantes, sensibles a los antibiticos, no pueden crecer..

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

-Medios diferenciales: permiten demostrar caractersticas metablicas de un determinado grupo de microorganismos. -Medios de transporte: se usan cuando se transcurre cierto tiempo entre la toma de una muestra y su procesamiento. -Medios de prueba: -Medios para caracterizar bacterias: -Medios de mantenimiento: Medios slidos - reversibles a lquidos se ejemplifican con el agar nutritivo.