Anticuerpo monoclonal Un anticuerpo monoclonal es un anticuerpo homogneo producido por una clula hbrida producto de la fusin de un clon de linfocitos

B descendiente de una sola y nica clula madre y una clula plasmtica tumoral.

Los anticuerpos monoclonales (en acrnimo mAB, de la frase en ingls con idntico significado que en espaol: monoclonal antibody), son anticuerpos idnticos porque son producidos por un solo tipo de clula del sistema inmune, es decir, todos los clones proceden de una sola clula madre. Es posible producir anticuerpos monoclonales que se unan especficamente con cualquier molcula con carcter antignico. Este fenmeno es de gran utilidad en bioqumica, biologa molecular y medicina. Produccin de anticuerpos monoclonales Si una sustancia extraa (antgeno) se inyecta en el cuerpo de un ratn o un humano, alguna de las clulas B de su sistema inmune se transformarn en clulas plasmticas y empezarn a producir anticuerpos que se unirn a ese antgeno. Cada clula B produce un solo tipo de anticuerpo, pero diferentes linfocitos B producirn anticuerpos estructuralmente diferentes que se unen a distintas partes del antgeno. Esta mezcla fisiolgica natural de anticuerpos es conocida como Antisuero policlonal.

Para producir anticuerpos monoclonales, primero se extraen clulas B del bazo de un animal que ha sido expuesto al antgeno. Estas clulas B son fusionadas en presencia de PEG (polietilenglicol) con clulas tumorales de mieloma mltiple (un tipo de cncer) que pueden crecer indefinidamente en cultivo celular. Esta fusin hace a las membranas celulares ms permeables. Estas clulas fusionadas hbridas, llamadas hibridomas pueden multiplicarse rpida e indefinidamente, puesto que son clulas tumorales despus de todo y pueden producir gran cantidad de anticuerpos. Los hibridomas son suficientemente diluidos y cultivados para obtener un nmero diferente de determinadas colonias, las cuales producen slo un tipo de anticuerpo. Los anticuerpos de diferentes colonias son analizados para conocer su capacidad de unirse a un antgeno determinado, por ejemplo con un tipo de test llamado ELISA, y para seleccionarse y aislarse de la manera ms efectiva.

El proceso de produccin de anticuerpos monoclonales es complejo. Primero se disgrega el bazo del ratn inmunizado, donde se acumulan los linfocitos B que tienen una escasa viabilidad en cultivo, y se fusionan con clulas de mieloma deficientes en enzimas implicados en la sntesis del nuevo ADN como la timidina quinasa (TK) o la hipoxantina guanina fosforibosil transferasa (HGPRT). Los productos de la fusin celular (hibridomas) son cultivados en medio HAT (de hipoxantina, aminopterina y timidina) donde las clulas mielmicas son eliminadas. Solamente pueden crecer en el medio de cultivo HAT las clulas que son producto de la fusin entre un linfocito y una clula de mieloma. Las clulas hbridas obtenidas tras el proceso de fusin contienen un nmero elevado de cromosomas (72 del mieloma y 40 del linfocito B) que en las sucesivas divisiones celulares se irn perdiendo hasta oscilar entre los 70 y los 80 cromosomas. Como consecuencia de dicho proceso, algunas clulas pierden la capacidad de secrecin de anticuerpos o bien funciones bsicas para la viabilidad celular. Por ello tan pronto como se identifica como positivo un pocillo se somete a un proceso de clonacin para evitar el crecimiento de clulas no productoras que al ser metablicamente ms eficientes acabaran por dominar el cultivo.

Los anticuerpos monoclonales pueden ser producidos en cultivos celulares o en animales. Cuando las clulas de un hibridoma son inyectadas en cultivos de tejidos como el peritoneo (cavidad peritoneal), produce tumores que sintetizan un fluido rico en anticuerpos llamado lquido asctico.

Se conoce la tecnologa necesaria para la produccin de anticuerpos en ausencia de inmunizacin del animal. Es la denominada tecnologa de los anticuerpos recombinantes. Los avances en la tecnologa gnica han facilitado en gran medida la manipulacin gentica, produccin, identificacin y conjugacin de fragmentos de anticuerpos recombinantes, obtenindose nuevos anticuerpos multivalentes y multiespecficos.

Estas tecnologas han permitido desarrollar estrategias de screening de anticuerpos monoclonales fuera del cuerpo humano. Para ello es necesario disponer, en primer lugar de enormes libreras de genes de anticuerpos, habitualmente mediante amplificacin PCR de cADN de linfocitos, o, alternativamente, mediante sntesis in vitro de genes usando cebadores randomizados ("randomized wobble"). El mtodo de 'screening' de estas libreras debe tener una eficiencia comparable a la del sistema inmune, lo que se puede conseguir exponiendo en la superficie de microorganismos los anticuerpos producidos. Ejemplos de los microorganismos empleados son los fagos filamentosos como M13 o bacterias. Esta presentacin en superficie permite establecer un enlace fsico entre la funcin de unin al antgeno y el gen del anticuerpo, de forma que la afinidad al antgeno permite aislar el microorganismo portador del gen del anticuerpo de inters entre millones de otros. Una vez aislado el clon especfico se amplifica para la produccin del anticuerpo de inters por ejemplo en E. coli.1 Descubrimiento de los anticuerpos monoclonales Los investigadores Niels K. Jerne, Georges Khler y Cesar Milstein, describieron la tcnica que permita el cultivo de hibridomas o clulas hbridas de linfocitos B con clulas plasmticas tumorales de mieloma mltiple. Con esta fusin de dos clulas, una programada para producir un anticuerpo especfico pero que no se multiplica indefinidamente (linfocito) y otra inmortal con gran capacidad de crecimiento pero que no produce inmunoglobulina (clula de mieloma), se combina la informacin gentica necesaria para la sntesis del anticuerpo deseado y una capacidad de sntesis proteica, permitiendo su multiplicacin indefinida tanto in vitro como in vivo. Por esta aportacin a la ciencia Jerne, Klher y Milstein recibieron el premio Nobel de Medicina en 1984.

En el ao 2010, los anticuerpos monoclonales han cumplido 30 aos desde su invencin dejando de ser una curiosidad biolgica para ser una forma de tratamiento y diagnstico muy importante en diversas enfermedades. Existen ms de 17 anticuerpos monoclonales aprobados por la FDA, pero el nmero de anticuerpos monoclonales en fase de ensayo clnico es elevado y representan un 30 por ciento de todos los compuestos en investigacin en el 2005. Muy importante para tratamientos de distintas enfermedades como artritis reumatoide, distintos canceres, enfermedad de Crohn...

Aplicaciones de los anticuerpos monoclonales

Una vez que se han producido anticuerpos monoclonales que se unen a determinadas sustancias, estos pueden ser usados para detectar la presencia y cantidad de esta sustancia, gracias a la prueba de Western blot, que detecta una sustancia en una solucin o con una prueba de inmunofluorescencia, que detecta una sustancia en una clula entera. Los anticuerpos monoclonales tambin son usados para purificar una sustancia con tcnicas llamadas inmunoprecipitacin y cromatografa.

Los anticuerpos monoclonales muestran una serie de ventajas sobre los anticuerpos policlonales como:

Mayor homogeneidad. Reproductibilidad de sus efectos, como consecuencia de su homogeneidad. Mayor capacidad potencial de seleccionar los mejores anticuerpos en afinidad, tipo de reconocimiento. Los anticuerpos monoclonales se utilizan en muchos campos como:

La investigacin biomdica, como la identificacin y clonacin de genes, la identificacin y aislamiento de protenas, la activacin de enzimas, conocimiento de la estructura molecular y morfognesis. Diagnstico: En medicina, gracias a la gran especificidad y capacidad prcticamente ilimitada de los anticuerpos monoclonales para reconocer cualquier estructura qumica, permite la deteccin de hormonas, vitaminas, citocinas; la monitorizacin de drogas, deteccin de enfermedades infecciosas en microbiologa; la deteccin de alergenos en alergia, hematologa, marcadores tumorales e infartos de miocardio, aplicaciones forenses, inmunoescintografa. En las tnicas diagnsticas se emplean diversas herramientas de biologa molecular como ELISA, EIA, citometra, inmunohistoqumica, inmunofluorescencia. Los anticuerpos monoclonales son unas de las sustancias ms utilizadas en los laboratorios de diagnstico. Catlisis: Los anticuerpos monoclonales se han utilizado como catalizadores de mltiples reacciones qumicas. Biosensores: Los anticuerpos monoclonales acoplados a transductores electrnicos pueden detectar tanto molculas orgnicas como inorgnicas como la contaminacin de metales pesados en alimentos y agua, deteccin de gases txicos, etc. Un biosensor es un instrumento analtico formado por un material biolgico inmovilizado como una enzima, anticuerpo, clula entera, orgnulo o combinaciones de los mismos, en ntimo contacto con un sistema transductor adecuado que convierta la seal bioqumica en una seal elctrica cuantificable. Tratamiento: Las aplicaciones teraputicas constituyen el campo ms importante de los anticuerpos monoclonales, ya que son capaces de destruir clulas, incluidas las tumorales, mediante distintos mecanismos. Se emplean en el tratamiento de diversas enfermedades autoinmunes como la artritis reumatoide, el cncer o para evitar el rechazo tras un trasplante. Existen varios anticuerpos monoclonales aprobados para su uso en determinadas enfermedades.1 Anticuerpos monoclonales quimricos y humanizados[editar editar fuente] Los anticuerpos monoclonales de ratn o murinos, pese a ser perfectamente vlidos para todos los usos teraputicos, no son tiles para su empleo en seres humanos, especialmente en terapias que requieran tratamientos prolongados, ya que el sistema inmune los identifica como cuerpos extraos y reacciona para destruirlos, por lo que su eficacia teraputica se ve claramente disminuida. Adems pueden presentar posibles efectos secundarios como nefrotoxicidad, reacciones anafilcticas, etc. Por ello se debera obtener anticuerpos monoclonales humanos.

Se han desarrollado diferentes tcnicas para ofrecer soluciones a la inicial imposibilidad de obtener anticuerpos monoclonales enteramente humanos, entre las que destacan la transformacin de linfocitos B humanos en cultivo mediante el virus de Epstein-Barr, la utilizacin de ratones con inmunodeficiencia severa combinada, el uso de ratones transgnicos, o tcnicas de ADN recombinante. Todas estas tcnicas han presentado distintos inconvenientes que han imposibilitado el desarrollo final de los anticuerpos monoclonales humanos.

Sin embargo, se ha obtenido una segunda generacin de anticuerpos monoclonales, basada en la humanizacin de los anticuerpos monoclonales de ratn mediante ingeniera gentica, evitando as el rechazo del sistema inmune al ser introducidos en el organismo. Son los llamados anticuerpos quimricos. Un anticuerpo quimrico es creado de tal manera que incorpora parte animal y parte humana. La parte animal o hipervariable (un 30%) es indispensable para que el anticuerpo reconozca la sustancia extraa (antgeno) y la parte humana (un 70%) es responsable de que el sistema inmunitario pueda contribuir a aadir efectividad a su accin. De este modo es posible modificar los anticuerpos monoclonales, casi de manera infinita para dotarlos de propiedades efectoras y de reconocimiento diferentes a las originales y minimizar la posibilidad de generar respuesta inmune frente al propio anticuerpo teraputico.

Un anticuerpo monoclonal humanizado significa que contiene un 90% de material humano, lo que reduce la inmunogenicidad de los anticuerpos, es decir, el rechazo del sistema inmunitario. La humanizacin es una tcnica que se basa en la estructura terciaria del sitio de combinacin con el antgeno, el paratopo, donde existen unas regiones responsables de la unin al antgeno mientras que otras zonas slo sirven de soporte estructural al paratopo. Por lo tanto las regiones estructurales se obtienen de un anticuerpo humano mientras que las regiones responsables de la unin al antgeno proceden del anticuerpo del ratn.

Anticuerpos monoclonales aprobados para uso teraputico

Cada vez son ms los anticuerpos monoclonales que tienen utilidad teraputica en muchas enfermedades como el cncer, el rechazo de trasplantes de rganos, enfermedades autoinmunes y alrgicas. Anticuerpos monoclonales usados en la clnica Anticuerpo monoclonal Abciximab Antgeno Glicoprotena Gpllb/llla Mecanismo de accin Indicaciones Antitrombtico en intervenciones coronarias y angioplsticas Enfermedad de Crohn, Artritis Adalimumab TNF-alfa Inhibe el efecto proinflamatorio de TNF-alfa reumatoide, Espondilitis anquilopoytica, Psoriasis Alemtuzumab CD52 ADCC( Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity), CDC Inhibe la activacin de linfocitos T mediada por CD25 Leucemia linfoide crnica B Prevencin del rechazo agudo en trasplante de rin.

Inhibe la agregacin plaquetaria

Basiliximab Bevacizumab

CD25 VEGF-A

Inhibe el efecto proangiognico del VEGF-A Cncer colorrectal Bloquea la unin de EGF a su receptor en

Cetuximab

EGFR

las clulas tumorales y su proliferacin ADCC, CDC

Cncer colorrectal

Daclizumab

CD25

Inbibe la activacin de linfocitos T mediada por CD25

Prevencin del rechazo agudo en trasplante de rin Osteoporosis en mujeres

Denosumab

RANKL

Inhibicin de los osteoclastos

posmenopausicas con alto riesgo de fracturas

Edrecolomab

EpCAM, ADCC, CDC CD11a CTGB

Inhibe receptores de factores de crecimiento Cncer colorrectal Inhibe la adhesin de linfocitos T al endotelio y su activacin Inhibe los niveles del factor de crecimiento

Efalizumab FG-30192

Psoriasis, Retirado del mercado Fibrosis pulmonar

de tejido conectivo Gemtuzumab Ibritumomab Ignasimab CD33 CD20 CD36 Efecto citotxico por dao alADN y apoptosisapoptosis Radioterapia, ADCC, CDC, apoptosis Radioterapia, Receptor Bistu Leucemia mieloide aguda Linfoma no Hodgkin Sndrome Manent Enfermedad de Crohn, Artritis Infliximab TNF-alfa Inhibe el efecto proinflamatorio de TNF-alfa reumatoide, Espondilitis anquilopoytica, Psoriasis Muromonab CD3 Inmunosupresor; anergia y apoptosis de linfocitos T tras su activacin Tratamiento del rechazo agudo en trasplante Leucemia linftica crnica, Linfoma no Ofatumumab CD20 Produce apoptosis Hodgkin folicular, ,artritis reumatoide y esclerosis mltiple Omalizumab IgE Disminuye los niveles de IgE en circulacin, bloquea la unin a sus receptores Asma de origen alrgico Profilaxis enfermedad virus sincitial respiratorio en nios Degeneracin macular asociada a la edad de tipo exudativo Linfoma no Hodgkin, Leucemia linftica crnica

Palivizumab

VSR protena F Inmunoterapia pasiva

Ranibizumab

VEGF CD20, ADCC, CDC

Inhibe el efecto proangiognico del VEGF

Rituximab

Produce apoptosis Radioterapia, ADCC, CDC, muerte

Tositumomab

CD20

dependiente de lisosomas y adhesin homotpica, no apopttica ni autofgica

Linfoma no Hodgkin

Trastuzumab

ErbB2/neu

Inhibe la proliferacin de clulas tumorales mediada por ErbB2 y ADCC

Cncer de mama metastsico