Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA ESCUELA DE QUIMICA BIOLGICA DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA BIOQUMICA QQ-2013

PROYECTO DE INVESTIGACIN

Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya (Carica papaya)

Castaeda Flores Lemus Letona Mendoza Racancoj Ramos Rosales Toledo

Franco Yaz Mndez Lee Castellanos Lpez Paz Prez Hernndez

Ana Rosa Lester Rony Eduardo Jonathan Julio Steebenss Alba

Guatemala de la Asuncin, 17 de Septiembre de 2013.

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INDICE Tabla de contenido

I. II. III. IV. 4.1

Pag

INTRODUCCIN ...................................................................................................................... 4 JUSTIFICACIN........................................................................................................................ 5 OBJETIVOS ........................................................................................................................... 6 MARCO TERICO ................................................................................................................ 7 EL CULTIVO DE LA PAPAYA: ....................................................................................... 7 Clasificacin taxonmica de la Papaya ....................................................................... 7 Condiciones de Crecimiento: ...................................................................................... 7 Generalidades sobre la Planta: .................................................................................... 8 Caractersticas Farmacobotnicas .................................................................................. 8

4.1.1 4.1.2 4.1.3 4.1.4 4.2

LAS SEMILLAS DE LA PAPAYA: ................................................................................ 10 Usos de la Semilla: .................................................................................................... 10 Composicin Qumica de las Semillas: ..................................................................... 10 Extraccin de aceite esencial ..................................................................................... 12 Aplicaciones del aceite esencial ................................................................................ 12 Funciones de las semillas: ......................................................................................... 13

4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.2.4 4.2.5 4.3

EL LTEX DE LA PAPAYA: ......................................................................................... 14 Usos del Ltex: .......................................................................................................... 14 Composicin Qumica del Ltex: .............................................................................. 14 Funciones del Ltex: ................................................................................................. 16

4.3.1 4.3.2 4.3.3 4.4

EL JUGO DE LA PAPAYA: ............................................................................................ 17 Usos del Jugo: ........................................................................................................... 17 Composicin Qumica del Jugo: ............................................................................... 17 Funciones del Jugo: ................................................................................................... 18 Valor Alimenticio:..................................................................................................... 18 Propiedades Curativas del Jugo:................................................................................ 18

4.4.1 4.4.2 4.4.3 4.4.4 4.4.5 V.

METODOLOGA ..................................................................................................................... 20 5.1 LAS SEMILLAS DE LA PAPAYA: ................................................................................ 20

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5.1.1 Extraccin de Aceite Esencial: ...................................................................................... 20 5.1.2 5.2 Extraccin con Cloroformo: ...................................................................................... 21

EL LTEX DE LA PAPAYA: ......................................................................................... 23 Extraccin del Ltex: ................................................................................................ 23 Secado a temperatura ambiente: ................................................................................ 24 Secado al Horno: ....................................................................................................... 24 Medicin de la Actividad Enzimtica: ...................................................................... 25 Liofilizacin de la Papana: ....................................................................................... 25

5.2.1 5.2.2 5.2.3 5.2.4 5.2.5 5.3

EL JUGO DE LA PAPAYA: ............................................................................................ 26 Medicin de la Cantidad de ADN: ............................................................................ 26

5.3.1 VI.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS .................................................................................. 27

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I.

INTRODUCCIN

Hoy en da el desarrollo tecnolgico de los alimentos es la principal aplicacin industrial que tienen la mayora de productos de origen natural (vegetales y frutas), dndole as una mayor relevancia a las investigaciones y trabajos que se realizan con estas materias primas. El presente proyecto de investigacin se basa en el desarrollo de diferentes metodologas y procedimientos a nivel de laboratorio para evaluar el uso tecnolgico de alternativas de la papaya, el cual se enfoca en tres aspectos generales del fruto los cuales son las semillas, el ltex y el jugo. El fruto de la papaya ha adquirido relevancia en lo ltimos aos debido a su buena calidad gustativa y a su alto valor nutricional. A pesar del creciente inters por este cultivo como una nueva alternativa para la exportacin, el mercado internacional contina siendo relativamente pequeo. Aunque existen varios manuales de produccin para la papaya a nivel nacional e internacional, los usos de desarrollo tecnolgico de este fruto, an estn en un proceso de estudio en el cual la informacin con que se cuenta es muy poca he aqu uno de los principales objetivos de esta investigacin en donde se pretende realizar diferentes metodologas a nivel de laboratorio que sean utilizadas como pilotos para realizar prximos procedimientos a nivel industrial. En la primera parte se dan a conocer algunas de las generalidades principales del fruto de papaya (Carica papaya) a travs de una revisin bibliogrfica que se expone en el marco terico, dndole un nfasis primordial a la evaluacin de los usos, la composicin qumica y algunas de las funciones de las semillas, el ltex y el jugo. Luego se exponen cada una de las metodologas que se trabajaran durante la parte experimental de este proyecto investigativo. Explicando paso a paso los procedimientos a realizar en los tres aspectos a trabajar (semillas, ltex y jugo).

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II.

JUSTIFICACIN

Esta investigacin es de inters puesto que las reas que se abordaran tales como extraccin de ltex y posterior purificacin de papana, utilizacin del jugo y semillas de la papaya (Carica papaya L.), brindar informacin de mucha importancia acerca de los usos y beneficios que se puede obtener al utilizar la papaya como materia prima. Las enzimas son de gran utilidad en diferentes reas como la alimentaria, textil, cosmtica, cervecera. Por consiguiente este estudio plantea la determinacin de diferentes propiedades y caractersticas de la papana con el fin de ofrecer una visin clara del uso que se le puede dar a esta enzima y de la manera que esta puede ser obtenida a partir del ltex con porcentajes considerablemente altos. Es de importancia puesto que al no existir suficiente informacin sobre este tipo de enzimas vegetales en el pas se contribuye con informacin de tipo cientfico-tcnica, la cual podra ser utilizada como una fuente bibliogrfica para futuras investigaciones. Las semillas de la papaya tienen aplicaciones desde la industria hasta la medicina, esto debido a la cantidad de analitos que pueden ser extraidos en la etapa de madurez. Siendo los ms numerosos aceites esenciales y protenas a los cuales se les puede utilizar como principio activo en productos de limpieza, cosmticos y aplicaciones en medicina. Por tal caso es de vital importancia caracterizar los metabolitos presentes en las semillas a fin de buscar nuevas aplicaciones que faciliten la vida diaria y que adems brinden pie a nuevas investigaciones sobre las propiedades de los metabolitos que se caractericen. Esta investigacin brinda una iniciativa para que en un futuro otras personas deseen seguir investigando y desarrollando nuevas temticas sobre distintos tipos de utilizacin tecnolgica de la papaya (Carica papaya L.) como materia prima, as mismo se podra mejorar las tcnicas que se plantean en esta investigacin para obtener mejores resultados, los cuales brindaran un futuro muy promisorio dentro del rea de la Bioqumica. .

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III.

OBJETIVOS

GENERAL: Realizar algunos procedimientos y tcnicas de trabajo en el laboratorio, para evaluar las alternativas de uso tecnolgico de la papaya (Carica papaya).

ESPECIFICOS: Extraer, purificar y evaluar la actividad enzimtica de la papana. Evaluar la factibilidad del procedimiento planteado para extraer papana purificada con las condiciones de trabajo que se cuentan en la Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia. Utilizar el jugo de papaya en la extraccin de ADN, como herramienta no destructiva. Evaluar la viabilidad y/o eficiencia de procedimientos qumicos y fsicos para extraer y purificar la papana con porcentajes altos de rendimiento. Utilizar extractos provenientes de las semillas de Carica papaya como insecticida. Analizar la actividad enzimtica de la papana, extrada del ltex de Carica papaya.

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IV. MARCO TERICO

4.1
4.1.1

EL CULTIVO DE LA PAPAYA:
Clasificacin taxonmica de la Papaya

Reino Subreino Divisin Clase Subclase Orden Familia Gnero Especie

Vegetal Embrobyonta Magnoliophyta Magnoliopsida Dillenidae Parietales Caricacea Carica papaya

La papaya es un miembro de la familia Caricaceae, una pequea familia Dicotilednea consistente de cuatro gneros y 31 especies. El gnero y el nmero de especies incluidos son Carica 22; Jarilla 1; Jacararia 6; Cylicomorpha 2. Los primeros rboles son originarios de Amrica Tropical, la ltima en frica. Hasta la fecha el nmero de cromosomas ha sido contado en solamente ocho especies de Carica, todas las especies contadas tienen 2n = 2X = 18 cromosomas (Storey, WB. Pp. 1-4).

4.1.2 Condiciones de Crecimiento: Es una planta arborescente de crecimiento rpido, con una vida relativamente corta de dos aos (aunque puede vivir hasta 20 aos), el tallo es sencillo o algunas veces ramificado, de 2 10 metros de altura, tallo recto, cilndrico, suave (esponjoso fibroso), jugoso, de color gris o caf grisceo y endurecido por la presencia de cicatrices grandes y prominentes. El tallo posee entre 10 30 centmetros de dimetro. La planta de papaya comienza a producir frutos entre los 9-10 meses de edad, continuando hasta los tres aos; luego de este perodo se reduce la cantidad y calidad del fruto. Es Proyecto de Investigacin Bioqumica QQ 2013
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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya aconsejable cosechar el fruto de papaya antes de su completa maduracin en forma directa del rbol debido al rpido deterioro del mismo. La papaya es cultivable desde una altitud de 0 hasta 600 msnm, con una precipitacin de 1500 2000 mm de lluvia, humedad relativa de 60 85% y clima clido. La planta requiere de agua durante todo el ao para asegurar una cosecha constante y para que los frutos alcancen un contenido de azcares ptimos, buen sabor y color. La papaya es una de las frutas tropicales ms conocidas y consumidas a nivel mundial desarrollndose en los pases tropicales y sub-tropicales; se aprovecha la fruta fresca y sus derivados debido a los altos niveles nutricionales que posee y a sus propiedades medicinales. De acuerdo a los niveles nutricionales, el fruto de la papaya contiene principalmente agua y carbohidratos como sacarosa, glucosa y fructosa; tambin posee vitaminas (vitamina A, complejo B y C); en menor proporcin contiene potasio, calcio y hierro.

4.1.3 Generalidades sobre la Planta: Se considera que el cultivo de la papaya es originario de Amrica tropical (5). La papaya es un rbol, pequeo de ramas palmadas, de madera blanda o suave, nativo de Centro Amrica (5). El historiador Ovidio citado por Storey (6), dice que se llevaron semillas a Panam y Santo Domingo, despus a Manila y que a mediados del siglo XVI la papaya se extendi rpidamente a frica y a la India, y en el siglo XVIII ya era muy conocida en el mundo.

4.1.4

Caractersticas Farmacobotnicas

a) Sistema radicular Muy superficial, lo que condiciona el laboreo del terreno. Es de forma engrosada y de color blancuzco en su interior. En suelos profundos y sueltos crece hacia abajo casi verticalmente hasta 60 cm. Produce unas 25 races secundarias de 2.5 5 cm de grueso. Las races secundarias permanecen cerca del tronco en un 80 %, formando un crculo de unos 45 cm de dimetro alrededor del tronco y un 90 % de ellas se desarrollan en un dimetro de 60 cm alrededor del tronco. Muy pocas races se extienden hasta 160 cm del tronco. Las terciarias tienen poca duracin y se extienden hasta 100 cm del tronco ( Tung, C., Garca, MA., Flores, EO.).

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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya b) Hojas Son alternas, aglomeradas en la parte distal del tallo, pecolo largo, conspicuas de 25 a 75 centmetros de dimetro, lisas, ms o menos profundamente palmeadas con venas medianamente robustas; la base es profundamente cordada con lbulos sobre puestos; hay de 7 a 11 lbulos grandes, cada uno con la base ancha o un tanto constreido y acuminado, pice agudo, pinatinervado e irregularmente pinatilobado. El haz es de color verde oscuro o verde amarillo, brillante, las venas reticuladas; en el envs son de color verde amarillento plido y opaco con nervaduras y venas prominentes, el peciolo es redondeado de color verde amarillento, hueco, teido con morado claro o violeta, frgil de 25 100 cm de largo y de 0.5 1.5 cm de dimetro (AGRICULTURA). c) Flores Pueden encontrarse plantas con flores femeninas, con flores hermafroditas y con flores masculinas. Las flores femeninas tienen un cliz formado por una corona o estrella de 5 puntos muy pronunciada y fcil de distinguir. Encima de este se encuentra el ovario, cubierto por los spalos; stos son cinco, de color blanco amarillento y, cuando muy tiernos son ligeramente de color violeta en la punta; no estn soldados. Los estigmas son cinco, de color amarillo y, tienen forma de abanico. Los frutos son globosos y grandes. No producen polen, por lo que para la fecundacin dependen del polen producido por flores masculinas o hermafroditas de otro rbol. Los frutos de estas flores son globosos y lobulados. Otro tipo de flor es la llamada hermafrodita elongata, posee 10 estambres colocados en dos grupos; la flor es alargada y de forma cilndrica, al igual que el ovario, produce frutos alargados. El ltimo tipo de flor es la intermedia o irregular, no es una flor bien constituida, produce frutos deformes. Las flores masculinas crecen en largos pednculos de ms de 50 centmetros de largo y en cuyos extremos se encuentran racimos constituidos por 15 20 flores. Las flores estn formadas por un largo tubo, con los ptalos soldados, en cuyo interior se encuentran 10 estambres, colocados en dos grupos de cinco cada uno. La flor posee un pequeo pistilo rudimentario y carece de estigmas. Estas flores no dan frutos, pero si lo hacen son frutos pequeos y de mala calidad. Este es el caso ms frecuente en papaya criolla, que incluyen individuos con los tres sexos. (AGRICULTURA). d) Fruto El fruto es una baya de tamao, peso y forma diferente, dependiendo del cultivar o seleccin, mide de 10 60 centmetros de largo y llega a pesar hasta varios kilos. El color de la pulpa tambin depende de la seleccin, normalmente es amarillo rojo anaranjada, de textura suave y de un espesor de 3 5 centmetros. La piel del fruto es suave y contiene un lquido lechoso y blanco (ltex) que se solidifica rpidamente al inicio de la maduracin del fruto, el ltex va desapareciendo gradualmente. El patrn de maduracin del fruto depende mucho del cultivar y de las condiciones ambientales, pero en general madura desde adentro hacia afuera. La cscara se torna verde oscuro a verde claro y se torna verde dorado. Las semillas estn en la cavidad interna del fruto. La planta puede producir unos 100 frutos por Proyecto de Investigacin Bioqumica QQ 2013
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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya ao; los frutos provenientes de las plantas femeninas son lisos y redondeados, grandes con muchas semillas y con una cicatriz pentagonal en la base del fruto. Los frutos producidos por plantas hermafroditas son elipsoides o alargados, con surcos en la superficie y con una cicatriz redondeada en la base. Son ms pequeos con ms pulpa, menos semilla y a veces menos sabor que aqullos provenientes de flores femeninas. Las plantas masculinas ocasionalmente producen frutos, pero stos casi nunca son comerciales. (AGRICULTURA).

4.2

LAS SEMILLAS DE LA PAPAYA:

4.2.1 Usos de la Semilla: Las semillas de la Carica papaya se encuentran en la parte interna del fruto en gran abundancia. Estas tienen la caracterstica de ser esferas pequeas de color negro con una apariencia rugosa que en algunas ocasiones pueden contener muclago (sustancia vegetal viscosa, coagulable en alcohol que proceden de la degradacin de la celulosa, calosa o lignina etc.) Entre las caractersticas morfolgicas de las semillas cabe destacar que miden entre 3.7 a 4.5 mm de largo, de 2 a 2.8 mm de ancho y de 2 a 2.5 mm de grueso, formando un tipo de esfera. Anatmicamente las semillas de papaya estn constituidas por 3 partes principales las cuales son: la cubierta seminal, el endospermo y el embrin. Las semillas de papaya alcanzan su madurez, cuando el fruto tambin la alcanza. Es en esta etapa donde se pueden obtener de las semillas la mayor cantidad de analitos tiles en diversos campos, desde la medicina hasta la industria.

4.2.2 Composicin Qumica de las Semillas: Las semillas de Carica papaya se caracterizan por contener diversos componentes estructurales. Muchos estudios han revelado que contienen una buena cantidad de biomoleculas, entre las cuales se puede destacar la presencia de lpidos (cidos grasos) protenas y carbohidratos en general. Un estudio presentado por el departamento de alimentos y nutricin de Parbhani India, presenta el siguiente perfil de componentes de la semilla de Carica papaya:

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Tabla No.1: Composicin qumica de la semilla de Carica papaya en % peso/peso

Como se puede evidenciar en la tabla No. 1 los componentes ms abundantes de la semilla de Carica papaya son los aceites esenciales, con un 30 % y las protenas. Por la naturaleza de la investigacin, se centrar la discusin en la parte lipdica de los componentes de la semilla de papaya, con el correspondiente perfil de cidos grasos. Estudios realizados con anterioridad coinciden en que el cido predominante en el aceite de semilla de papaya es el cido olico. Este cido graso pertenece a la serie omega 9 (esto quiere decir que tiene instauracin del tipo cis en el carbono 9 a partir del ltimo carbono) Otro cido graso presente en las semillas es el palmtico (con 16 carbonos) aunque en mucha menor proporcin en comparacin con el oleico. Un perfil ms detallado se encuentra en la tabla No.2 Tabla No.2: Perfil de cidos grasos en Carica papaya

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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya 4.2.3 Extraccin de aceite esencial Como se pudo ver con anterioridad la semilla de Carica papaya es rica en aceites esenciales, en especial cidos grasos con 18 carbonos. La extraccin de aceites esenciales de la semilla se hace entonces un proceso necesario, si se desean aprovechar al mximo todas las bondades de este fruto. La extraccin de aceite esencial para la semilla tiene bsicamente dos variantes, la primera una extraccin simple con solventes y la segunda una extraccin ms fina con equipo Soxhlet. En el proceso de extraccin simple se lleva a cabo mediante un secado previo de la semilla y llevando a esta a una molienda con el fin de dejarla como una fina harina. Luego se realiza una mezcla de la harina con solventes, macerando por un tiempo determinado con el fin de liberar aceites que luego son recuperados con la evaporacin del solvente. El segundo mtodo propuesto es la extraccin de aceite mediante equipo Soxhlet. En este mtodo tambin la semilla es llevada a harina, con la diferencia que esta se coloca sobre un cartucho poroso del equipo Soxhlet por donde pasar solvente caliente que arrastrar los aceites de la muestra. Al final de este proceso se obtiene un solvente saturado de analito (aceite), con una muestra agotada por el continuo paso de solvente. Tpicamente la separacin del aceite del solvente se lleva a cabo con el uso de un rotavapor que hace ms eficiente y rpida la separacin de solvente. De los dos mtodos propuestos, se tienen reportados rendimientos de extraccin de entre 24 a 30 % (extraccin simple) y hasta 90 % para el proceso con equipo Soxhlet. Es evidente como el uso de un equipo especializado optimiza la labor del solvente ya que aprovecha al mximo el poder de extraccin del mismo. Otro factor importante que se debe de tener en cuenta es la seleccin del solvente, ya que se tienen reportados diversidad de ellos entre los que se destacan el benceno, el sulfuro de carbono, etanol, tricloroetileno y hexano entre otros. A pesar de la diversidad existente, es un factor comn el encontrar extracciones de este tipo con hexano. La utilizacin de dicho solvente responde a una serie de factores entre los cuales se puede destacar, una alta eficiencia de extraccin, facilidad de separacin, un precio relativamente bajo y una baja toxicidad.

4.2.4 Aplicaciones del aceite esencial El aceite esencial de papaya como muchos otros aceites esenciales pueden ser utilizados como principio activo de productos de limpieza como jabones, lociones, shampoos as como en productos cosmticos como cremas con el fin de dar el olor caracterstico a tan Proyecto de Investigacin Bioqumica QQ 2013
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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya peculiar fruto. Esta sera la aplicacin tpica del aceite esencial como lo pueden hacer tambin otros aceites. Ahora bien existe una aplicacin innovadora para el aceite esencial de papaya la cual consiste en utilizarla como mtodo anticonceptivo ya que muchos estudios han revelado que este aceite puede reducir de manera eficiente la movilidad y la viabilidad de las clulas reproductoras masculinas. Estos estudios revelan que la viabilidad espermtica puede ser reducida hasta en un 40 % sin llegar a ser el extracto letal para la clula reproductora, con lo cual se puede tomar en cuenta como un mtodo anticonceptivo temporal. (Ramrez H. Andrea 2004). Siempre en el mismo mbito se han realizado pruebas en caninos callejeros, con el fin de reducir la poblacin de perros de manera alternativa y no letal. Estos estudios han comprobado que los componentes de cidos grasos del aceite esencial juegan un papel importante en la actividad supresora de la espermatognesis con lo cual se observ liquido seminal con escasa presencia de clulas reproductoras, y poca movilidad en las presentes. Esto se le atribuye en gran medida al cambio bioqumico que propician los cidos grasos en el fluido seminal. (Ortega P. Antonio 2010)

4.2.5 Funciones de las semillas: Semillas de papaya contienen fibrina, un nutriente esencial que se reduce el riesgo de cogulos de sangre y mejora la calidad de las clulas sanguneas. La fibrina es tambin vital para mantener el flujo apropiado de la sangre dentro del cuerpo. Este nutriente tambin puede proporcionar una proteccin derrame cerebral. Las enzimas que contienen fibrina son beneficiosas para las personas que estn haciendo trabajos que requieren largos periodos de estar sentado ya que reducen las posibilidades de formacin de cogulos de sangre en las piernas. (Plantas medicinales: la papaya) Las semillas de papaya tienen un rico contenido de antioxidantes nutrientes como las vitaminas A, C y E, flavonoides y carotenos. Estas semillas tambin forman parte de cido pantotnico, B vitaminas y tambin la minerales de magnesio y potasio. Todos estos nutrientes tienen fuertes propiedades antioxidantes que promueven un sistema cardiovascular sano funcionamiento. Por otra parte, estos antioxidantes en las semillas de papaya prevenir la gripe recurrente, infecciones del odo y resfriados. (Plantas medicinales: la papaya) Los efectos para combatir el cncer de semillas de papaya son causados por los carotenoides contenidos en estas semillas. El licopeno y beta caroteno son los ejemplos de los carotenoides presentes en las semillas de papaya. Estos dos antioxidantes son excelentes agentes para combatir el cncer. El licopeno reduce el riesgo de cncer de prstata mediante el fortalecimiento de las enzimas de proteccin, mientras que la Proyecto de Investigacin Bioqumica QQ 2013
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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya induccin de la muerte celular de las clulas cancerosas. (Beneficios de las semillas de papaya).En las prcticas mdicas tradicionales, es sin embargo que las semillas de la papaya ayudan a desintoxicar el hgado. En realidad, estas semillas son recomendadas por los mdicos a base de hierbas para el tratamiento de las complicaciones del hgado como la cirrosis. Al igual que los pltanos y aguacates, semillas de papaya contienen sustancias conocidas como quitinasas, que estn vinculados al sndrome de alergia al ltex. Las personas con alergia al ltex tambin son alrgicas a las semillas de papaya tambin. (Usos de las semillas de papaya).

4.3

EL LTEX DE LA PAPAYA:

4.3.1 Usos del Ltex: La especie Carica papaya es cultivada y explotada no solo para el consumo del fruto, sino tambin para la extraccin del ltex (Teixeira da Silva, y otros, 2007). Este ltimo posee una serie de propiedades qumicas y bioqumicas que lo hacen atractivo para aplicaciones sintticas, medicinales, nutricionales, farmacolgicas e industriales (Puig, Gil, & Snchez, 2008). De estas, las ms importantes derivan del contenido enzimtico del ltex cuando este se extrae del fruto no-maduro. La actividad enzimtica ha sido ampliamente estudiada y hoy da se conocen desde la funcin de cada enzima, hasta su estructura molecular (Azarkan, El Moussaoui, Van Wuytswinkel, Dehon, & Looze, 2003). 4.3.2 Composicin Qumica del Ltex: El latex de la papaya se extrae de los frutos inmaduros del arbusto. De este se ha podido determinar el contenido de especies qumicas, el cual se presenta en la tabla a continuacin. Tabla No. 3 Componentes del latex de Carica papaya. Nombre Calosa Hule o Caucho Quimiopapana A Quimiopapana B Quimiopapana C Glutamina Grasas cido Mlico N-acetilhexosaminidasa Glutamino ciclotransferasa Papana Resina Proyecto de Investigacin Contenido / ppm NaN 45,000 NaN NaN NaN NaN 24,000 4,400 NaN NaN 53,000 28,000 Bioqumica QQ 2013
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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya Peptidasa A NaN Peptidasa B o Proteinasa IV NaN Agua 750,000 Fuentes: (Duke, 1996) y (Boshra & Tajul, 2013) De las anteriores, la ms estudiada es la papana (Dubey, Pande, Singh, & Jagannadham, 2007). Esta se sabe que no es la enzima ms abundante en el ltex de la papaya, pero es quiz la ms importante en su contenido (Baines & Brocklehurst, 1982).

Imagen No. 1 Representacin en listn de la papana. Otra enzima muy estudiada es la quimiopapana. Esta es la que se encuentra en mayora dentro del ltex y presenta una actividad similar a la papana principalmente por sus similitudes estructurales (Baines & Brocklehurst, 1982).

Imagen No. 1. Representacin en listn de la quimiopapana A. Finalmente, la ltima enzima que ha sido estudiada en los ltimos 5 aos ha sido la glutamino ciclotransferasa. Esta enzima ha sido de inters por su alta resistencia a pH bajo y desnaturalizacin trmica (Zerhouni, y otros, 1998).

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Imagen No. 3. Representacin de listn de la glutamino ciclotransferasa. 4.3.3 Funciones del Ltex: El ltex se ha utilizado en muchos reas; desde la produccin de goma de mascar, hasta la produccin de caucho para productos de hule (Environment Directorate, 2005). El ltex, como material, tiene muchas propiedades muy apetecidas para usos tcnicos. Su baja transferencia de calor, si alta flexibilidad y su baja densidad lo hacen un material muy maleable y verstil (Sajeev, Joeju, & Rani, 2011). Uno de los usos ms comunes no es como material, sin embargo. Si es cierto que cada ao se producen miles de toneladas mtricas de ltex de papaya, su uso principal no es como material, sino la extraccin de las enzimas que contiene, que comprenden alrededor de un 40% del ltex (Azarkan, El Moussaoui, Van Wuytswinkel, Dehon, & Looze, 2003) (Environment Directorate, 2005). La funcin de las enzimas varan dependiendo del campo donde se utilicen. En medicina y farmacia se utilizan las quimiopapanas por la protelisis que catalizan. En medicina se utilizan para tratar quemaduras y hernias lumbares (Aravind, Debjit, Duraivel, & Harish, 2013). En farmacia, estas enzimas se utilizan para tratar trastornos digestivos, como analgsicos, antibacteriales, vermfugos, etc. (Boshra & Tajul, 2013) En la industria alimenticia, la papana se ha utilizado para la preparacin de alimentos para bebs y la produccin de protenas para consumo humano. Se utiliza como ablandador de carnes, como aclarador de cerveza (Monti, Basilio, Trevisan, & Contiero, 2000). Adems, se ha utilizado en la industria textil para el tratamie yto de sedas, lanas y cueros (Environment Directorate, 2005).

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4.4

EL JUGO DE LA PAPAYA:

4.4.1 Usos del Jugo: Los pediatras recomiendan el consumo de la fruta de papaya, en la dieta del infante desde los primeros meses y el consumo en forma de jugos, a partir de los 30 das de nacidos. Dentro de los usos que se le pueden dar en el cuerpo se pueden mencionar: Proteger al cuerpo de la oxidacin, por lo tanto previenen el cncer. Ayuda a regular los niveles de colesterol. Fomenta absorcin de hierro. Ayuda a la elaboracin y mantenimiento del colgeno, protena, que es la base para la unin de tejidos. Ayuda aliviar la respiracin asmtica. Ayuda a la recuperacin rpida por padecimiento de neumona, monucleosis, hepatitis y otras infecciones virales. Puede prevenir cncer del estmago, colon, recto, vagina pechos, boca, esfago crvix y pulmones. (Asociacin Mexicana de Secretarios de Desarrollo Agropecuario, A.C. 2011 p. 9)

4.4.2 Composicin Qumica del Jugo: El jugo de papaya est constituido principalmente por agua y carbohidratos como azucares con poco o nada de almidn; es adems de algunas del complejo B; en menor proporcin contiene minerales como potasio, calcio y hierro. Es bajo en caloras, sus color varia de amarillo plido a amarillo rojizo, la cantidad de fibrina esta cerca del 0.6%. Los azucares presentes en la papaya son la sacarosa, glucosa y fructosa. (Guillen, G. 2002. P. 6) Este jugo tiene un bajo contenido de cidos. Los principales cidos que contiene el fruto son el cido ascrbico (vitamina C), el cido ctrico, el cido mlico y el acetoglutarico. Tiene un pH entre 4.5 y 6.0. (Guillen, G. 2002. P. 6) Lobo, G. (1995) propuso en la introduccin: El jugo es dulce debido a que el contenido de azucares es ms alto que el de cidos, los azucares que ms predomina es sacarosa (48,3%), se guido de glucosa (29%) y fructosa (21%); y trazas de pseudoheptulosa. El jugo contiene vitamina C como un mximo de (55 mg/100g) de producto combustible. El sabor y aroma de la papaya est constituida por un gran nmero de compuestos voltiles, siendo el mayoritario el linalol, seguido del bencilisotiocinato (p.17).

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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya 4.4.3 Funciones del Jugo: Dentro de su composicin qumica debemos destacar su riqueza en vitaminas C y en provitamina A, en forma de carotenos dentro de las cuales tiene principalmente: betacarotenos, gamma carotenos, psilon carotenos y criptoxantina, un compuesto que adems de transformarse en vitamina A en nuestro organismo, presenta propiedad antioxidante, atribuyndosele accin preventiva frente al cncer y la enfermedad cardiovascular. Tambin destaca la presencia de vitaminas del grupo B como son vitamina B1, B2 y B3. En cuanto a los minerales, la papaya es rica en potasio y contiene cantidades apreciables de calcio, magnesio, fsforo y hierro. Tambin es una buena fuente de fibra (principalmente insoluble), que mejora el trnsito intestinal, evitando el estreimiento y protege frente al cncer de colon y la 10enfermedad cardiovascular .La papaya contiene una alta proporcin de agua, siendo por el contrario su contenido en nutrientes energticos (hidratos de carbono, protenas y grasa) muy bajo. (Arana, P. 2012. P 9) 4.4.4 Valor Alimenticio: La Papaya es una fuente muy rica en vitaminas pues contiene vitamina A, C, complejo B, potasio, magnesio, fibra, cido flico y pequeas cantidades de calcio y hierro. Adems es antioxidante y previene cnceres de pecho, vejiga, colon o cuello del tero. Las papayas son ricas en un componente llamado papana o papayotina. La papana es una enzima, con propiedades parecidas a la pepsina (enzima que forma parte de los jugos gstricos) o la tripsina (enzima que forma parte de los jugos pancreticos). Al igual que estos fermentos, ataca las protenas produciendo su destruccin. Este tipo de enzimas, que se conocen como encimas proteolticas tal como ocurre con la bromelina de la pia, la actidina del kiwi o la ficina de los higos, resultan muy interesantes en la alimentacin porque ayudan a disgregar las protenas y favorecen la digestin, evitando la gastritis y la formacin de gases. Por lo tanto, la papaya, adems de ser muy vitamnica, resulta altamente digestiva y resulta una fruta muy interesante para las personas mayores que suelen presentar problemas de digestin o para digerir las carnes despus de una comida muy abundante en grasas animales. 4.4.5 Propiedades Curativas del Jugo: Entera o en jugo, la papaya posee propiedades curativas efectivas y es un alimento rico en vitaminas que resulta muy beneficioso en los siguientes casos: Acta como un laxante suave y combate el estreimiento. Agiliza cicatrizaciones internas y externas. Ayuda a conservar la piel sana. Defiende al organismo ante alergias e infecciones. Digiere las protenas muertas, consiguiendo que no influyan en el funcionamiento de las dems. Proyecto de Investigacin Bioqumica QQ 2013
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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya El jugo como un cosmtico, elimina las pecas o manchas de color marrn debido a la exposicin a la luz solar y hace que la piel suave y delicada. El jugo de la papaya cruda ayuda con los trastornos de la piel, al ser un irritante, es til en varios desrdenes de la piel. Se aplica con resultados beneficiosos para prevenir la hinchazn de la formacin de pus o supuracin y callos, verrugas, granos de hornos, una excrecencia o una derivacin anormal de la piel y enfermedades de la piel. El t hecho a base de las hojas verdes del rbol de la papaya, ofrece alivio instantneo a los problemas digestivos. Es buena para el trastorno de la garganta, porque el jugo fresco de la papaya cruda mezclada con miel se puede aplicar con resultados beneficiosos sobre las amgdalas inflamadas de la difteria y otros trastornos de la garganta. Favorece el buen funcionamiento del hgado y el pncreas. La enzima digestiva, la papana en el jugo lechoso de la papaya verde es de gran alcance para los antihelmnticos (es decir, que tiene el poder de destruir) lombrices. La papaya es un gran auxiliar en las dietas, ya que ayuda a desintoxicar el organismo. Las papayas contienen la sper enzima papana, una ayuda digestiva muy efectiva que ayuda a digerir protenas. Debido a estas propiedades digestivas, la papaya ha sido usada como alivio contra la indigestin. La papana en la papaya crudo es altamente beneficiosa en la deficiencia de jugo gstrico, el exceso de moco insalubre en el estmago, en la dispepsia y la irritacin intestinal. Mejora el ritmo cardiaco. Reduce la inflamacin intestinal. Una papaya proporciona el 10 por ciento de las necesidades diarias de fibra y 10 por ciento del cido flico que nuestros cuerpos necesitan para mantener una buena salud.

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V.
5.1
5.1.1

METODOLOGA

LAS SEMILLAS DE LA PAPAYA:

Extraccin de Aceite Esencial:

Primera parte: lavado de semillas 1. Recepcin de materia prima, proveniente de lote de papayas del proyecto de laboratorio. 2. Separacin de las semillas por su presencia o no de muclago (si se desea comparar su produccin de aceite esencial) en caso no, colocarlas todas en un mismo recipiente. 3. Lavado de las semillas por tamizaje, utilizacin de diversos Mesh disponibles. 4. Lavar ahora con porciones de agua destilada. 5. Secar con papel mayordomo y colocar en recipiente hermtico adecuado. Segunda parte: Secado y molienda de semillas 1. Colocar semillas lavadas en bandeja adecuada para calentamiento. 2. Preparar horno de secado, regular la temperatura de este a aproximadamente
C.

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3. Realizar proceso de secado por espacio de 4 horas aproximadamente. Monitorear avance de secado en las semillas peridicamente. Si en caso se evidenciarn semillas totalmente secas antes del tiempo estipulado, suspender calentamiento. 4. Retirar semillas ya secas del horno. 5. Preparar mortero tamao considerable para las semillas, y un pistilo adecuado. Colocar semillas en mortero y moler las semillas. La molienda debe de realizarse a manera de obtener una fina harina de las semillas. 6. Ya con las semillas hechas harina, proceder al pesaje de la misma. Tomar dato ya que servir para el clculo de % de rendimiento de extraccin de aceite esencial. Tercera parte: Extraccin de aceite por equipo Soxhlet 1. 2. 3. 4. Preparacin de equipo Soxhlet. Colocar adecuada refrigeracin a tubo condensador. Colocar aproximadamente 15 gramos de harina en el cartucho del equipo Soxhlet. Montar equipo sobre estufa elctrica. Llenar baln del equipo Soxhlet con solvente adecuado, que en este caso deber ser hexano. El baln deber llevarse ms o menos a la mitad de su capacidad, para evitar mal funcionamiento del equipo. 5. Encender agitacin magnetica del la estufa. Proyecto de Investigacin Bioqumica QQ 2013
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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya 6. Encender calentamiento de la estufa, regular la perilla de calentamiento a manera que se logre reflujo de solvente. (Esto se logra a aproximadamente 70 C) 7. Mantener equipo en funcionamiento por espacio de 5 horas, al cabo de este tiempo se debera obtener un solvente cargado con aceite esencial. 8. Apagar equipo y desmontar de estufa elctrica. 9. Retirar solvente cargado con aceite esencial. Refrigerar en caso de no evaporar solvente de manera inmediata. Cuarta parte: Evaporacin de solvente de extraccin 1. Tomar baln de destilacin de equipo Soxhlet y colocarlo en equipo rotavapor. En caso no coincida numeracin de baln con equipo rotavapor, transferir a uno especial para el proceso. 2. Conectar baln con solvente a equipo rotavapor. Encender equipo. Asegurarse antes que exista una adecuada refrigeracin en el condensador del equipo. 3. Conectar vacio del equipo. 4. Empezar el proceso de evaporacin, para ello regular la temperatura a aproximadamente 35 C. Vigilar el proceso en todo momento evidencindose la evaporacin del hexano y la obtencin del aceite esencial. 5. El matraz que contiene hexano descartarlo. 6. Recolectar el aceite esencial, con cuidado transferirlo a una probeta medir su volumen final. 7. Guardar el aceite esencial en vial adecuado y mantenerlo en refrigeracin

5.1.2

Extraccin con Cloroformo:

Primera Parte: Secado al Sol por 15 Das 1. Colectar 4 libras de semillas, llevarlas cuidadosamente. 2. Extenderlas sobre una bandeja y dejar secar al sol por 15 das. 3. Volver a lavar, para eliminar cualquier resto de fruta, y secar por 2 das al sol

Segunda Parte: Trituracin de las Semillas 1. Pesar 2 libras de semillas limpias y secas. 2. Moler las semillas en una licuadora, hasta formar un polvo

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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya Tercera Parte: Preparacin del Extracto 1. En un matraz de 5 L. colocar las semillas molidas y agregar 2L de cloroformo 2. Calentar la mezcla a ebullicin por 4 horas, esperar a que baje un poco la temperatura y filtrar. 3. Trasvasar el producto a un rotavapor y evaporar por 1 hora, luego colocarlo a bao mara hasta evaporar el resto de solvente. Cuarta Parte: Separacin por Cromatografa en Columna 1. 2. 3. 4. Tomar muestra pequea del residuo y diluir en cloroformo. Preparar 3 placas de slica gel 60 sobre aluminio con dimensiones 3x10cm. Dibujar una lnea con lpiz a 1cm de uno de los extremos de la placa Preparar 3 soluciones (100mL) de cloroformo/acetato de etilo en las siguientes proporciones 5:1, 10:1, 20:1. 5. Verter 25mL de cada mezcla de solventes en 3 beackers de 40ml y taparlos con un vidrio de reloj. 6. Dejar los beackers saturarse de vapores por 10min. Mientras tanto sembrar la muestra de residuo en cada placa, por duplicado en cada placa. 7. Colocar las placas en los beakers y esperar a que el frente del solvente alcance una altura de 1cm por debajo del borde de la placa. Tomar tiempo. 8. Sacar las placas de la solucin marcar el frente del solvente y con una lmpara UV, marcar las manchas halladas 9. Medir el avance del solvente, de cada mancha y calcular el avance y los factores de retencin de cada mancha. 10. Identificar cul fase mvil provee la mayor resolucin y preparar 250mL de esa. 11. Preparar una columna cromatogrfica con slica gel y la fase mvil mencionada. 12. Colocar 0.5mL de la muestra de residuo y eluir con la fase mvil. 13. Sacar el eluato en fracciones de 2ml identificando debidamente cada tubo.

Quinta parte: Separacin por Cromatografa en Capa Fina 1. Hallar las fracciones con caractersticas similares y mezclarlas. 2. Reconcentrar las fracciones a presin reducida en un rotaevaporador. 3. Preparar ms fase mvil y otra placa cromatogrfica como se describe anteriormente. 4. Correr otra cromatografa en capa fina de cada una de las fracciones obtenidas de la cromatografa en columna. 5. Asociar los factores de retencin de la primera cromatografa con los de la segunda y al final con las fracciones obtenidas de la columna.

Sexta parte: Preparacin de Medio de Cultivo para Drosophila melanogaster Proyecto de Investigacin Bioqumica QQ 2013
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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya 1. Mezclar 2 g de smola de trigo, 5 g de azcar, 10 g se smola de maz, 4 g de levadura, 10 ml de cido actico glacial. 2. Disolver 4 g. de agar-agar en 320 ml de agua destilada, calentar y agitar vigorosamente, dejar enfriar hasta 50C 3. Mezclar la mezcla del paso 1, con el agar nutrientes con el agar, dejarlo enfriar a 40C y colocar 1 ml en cada frasco (24 frascos de compota), dejar enfriar a temperatura ambiente por 24 horas. Sptima parte: Bioensayo 1. En cada frasco preparado anteriormente, colocar una larva de Drsosophila melanogaster. 2. Con el extracto puro de semillas de papaya preparar soluciones con concentraciones de 24000 ppm, 16000ppm, 9600 ppm, 1600 ppm, 960 ppm, 400 ppm y 160 ppm 3. Agregar con un atomizador las soluciones anteriores, a las larvas contenidas en los frascos.

5.2

EL LTEX DE LA PAPAYA:

5.2.1 Extraccin del Ltex: 1. Sanitizar el rea de Trabajo limpiando con una toalla de tela, luego agregar jabn restregar con esponja y lavar con agua destilada. Por ltimo limpiar con algodn y alcohol al 95%, dejando actuar por 10 minutos y secar con toalla de tela. 2. Prepara todo el equipo y material que se utilizar durante el procedimiento de la extraccin del ltex 3. Colocar 2 mecheros alrededor del rea de trabajo para evitar la contaminacin. 4. Armar el equipo para colocar las papayas, colocando 3 trpodes junto a un anillo de metal a cada uno, y colocarlos a una altura aproximadamente de 10 cm sobre la mesa de trabajo. 5. Lavar los frutos de papaya, que con anterioridad fueron escogidos para la extraccin del ltex con abundante agua y jabn lavar las papayas; secarlas bien con papel mayordomo para evitar las contaminaciones. 6. Pesar las frutas de papaya, para determinar el rendimiento del ltex extrado una vez sea procesado. 7. Realizar las incisiones a los frutos de papaya, lavando primeramente con agua y jabn adems de esterilizar con alcohol al 95% el cuchillo de acero inoxidable que se utilizar para realizar las incisiones. Hacer los cortes verticalmente de 1 a 2 mm de espesor cada incisin (no ms de 4 cortes por fruto de papaya). 8. Recolectar el ltex en un beacker durante 2 horas, luego trasladar a tubos previamente esterilizados. Rotular los frascos de color ambar y luego guardar en refrigeracin a 0 C, hasta 3 das como mximo. Proyecto de Investigacin Bioqumica QQ 2013
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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya 9. Continuar con los procedimientos del secado del ltex (a temperatura ambiente y secado al horno).

5.2.2 Secado a temperatura ambiente: Tomado de: Lassoudiere, 1969, p. 11-12, disponibles.

adaptado a las condiciones de trabajo

1. Sacar el ltex del refrigerador y dejar atemperar a la temperatura ambiente. 2. Se tomara una caja de Petri se abre y tara una de las tapas de la misma, es indiferente si es la superior o inferior ambas tapas se utilizaran por separado, anotar el peso e identificarla. 3. El ltex ya atemperado, se transfiere a la tapa de la caja de Petri este se debe esparcir uniformemente dentro de la tapa, cuidado que el ltex no debe llegar al borde ni sobrepasar el mismo, al terminar de agregar el ltex se debe tarar nuevamente, anotar peso, tapar con papel parafilm y luego hacer 4-5 agujeros distribuidos en todo el papel parafilm que cubre la tapa. 4. El procedimiento anterior, numeral 3, deber repetirse cuantas veces sea necesario hasta agregar todo el ltex que se obtuvo de las papayas. 5. Cuando se tenga todo el ltex depositado en las cajas de Petri, debidamente identificadas, se expondrn al sol, en un lugar limpio y seguro. Secar por aproximadamente 2 horas. 6. Al terminar el periodo de secado, se retira el papel filtro y se taran nuevamente. 7. Determinar el porcentaje de humedad que se elimin durante el secado. 8. Transferir el ltex seco a un frasco mbar bien sellado, posteriormente se proceder a almacenar el ltex a 0C.

5.2.3 Secado al Horno: 1. Sacar el ltex del refrigerador y dejar atemperar a la temperatura ambiente. 2. Encender el horno de secado y llevarlo a 40 C. 3. Trasvasar aproximadamente 50 ml del ltex a una cpsula de porcelana (previamente pesada). 4. Una vez el ltex a utilizar es agregado a la cpsula, colocarlo en el horno por aproximadamente de 2 a 3 horas. 5. En el momento en el que el ltex no se pegue y este en forma granulada, esto quiere decir que el proceso de secado ha finalizado. 6. Pesar la cpsula de porcelana con el ltex ya seco. 7. Con un pistilo y mortero moler el ltex, hasta que los grnulos secos se pulvericen. 8. Colocar el polvo en recipiente de vidrio oscuro, sellado y etiquetado (cubrirlo con papel aluminio). Proyecto de Investigacin Bioqumica QQ 2013
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Alternativas de Uso Tecnolgico de la Papaya 9. Colocar el frasco en refrigerado, para un mejor mantenimiento de la enzima. 5.2.4 Medicin de la Actividad Enzimtica: 1. En una balanza analtica, pesar 15.5 g de leche de vaca en polvo y diluirla en 108 ml de agua en un beacker y calentar a 30C en bao de agua manteniendo esta temperatura utilizando una estufa. 2. Pesar ltex seco (0.0025, 0.005, 0.01 y 0.02 g) y agregar cada una de estar cantidades por cada ml de cido actico al 5% (en total 50 ml).
3. Medir 6 alcuotas de 10 ml de leche, y a cada una agregar 0.5, 1, 2, 4, 6 y 7 ml de la solucin de ltex seco diludo en cido actico. Realizar dichos proceso a temperatura ambiente 4. Mezclar a fondo y determinar el tiempo que demora hasta observar la formacin de cogulos 5. Registrar tiempo desde el momento en que se agrega la solucin de ltex en cido actico, hasta la formacin de cogulos en cada uno de los experimentos 6. Las diversas cantidades de muestra del polvo de ltex seco deben dar una gama de los tiempos de coagulacin entre 20 y 150 segundos para resultados ptimos.

5.2.5 Liofilizacin de la Papana: Tomado de: Mundo, J. y Serrano, D. 2012, p 75, adaptado a las condiciones de trabajo disponibles. 1. La papana se tendr en una solucin, esta solucin ser transferida a recipientes de 600ml, los frascos del aparato liofilizador, al estar en los frascos estos sern precongelados a una temperatura de aproximadamente -5 a 0C. 2. Las muestras ya pre-congeladas, se transfieren a una hielera provista con hielo y sal a manera de conservar la temperatura por debajo de los 0C, y se transportan con sumo cuidado al laboratorio de alimentos, T-11 saln 106. 3. Al llegar al laboratorio, se procede a encender el aparato liofilizador y calibrar a las condiciones de trabajo, -45C y o.o45mbar de presin. 4. Conectar los recipientes a las vlvulas del cilindro condensador del aparato liofilizador, cuidar que la presin no baje durante este proceso, abrir las vlvulas de vaci para comenzar la sublimacin de la muestra. 5. Dejar en funcionamiento el equipo por un periodo de 6 a 6 horas, hasta su total desecacin. 6. Almacenar la enzima en frascos viales previamente esterilizados.

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5.3
5.3.1

EL JUGO DE LA PAPAYA:
Medicin de la Cantidad de ADN:

1. Cortar en pequeos trozos una cebolla, colocarla en la licuadora y adiciona suficiente agua de manera que al cabo de 10 segundos de licuar, se obtenga una consistencia semilquida, de esta manera se tiene una mezcla en la cual se es fcil trabajar. 2. Trasvasar el licuado en un Beacker para que sea ms adecuado trabajar y utilizar un colador para separar algunas partes que no se hayan licuado lo suficiente, as se eliminan dichos pedazos que puede ser difcil trabajar con ellos en el avance del procedimiento de la investigacin. 3. Medir el licuado en el recipiente y aadir de detergente lquido del total del licuado y mezclarlos suavemente con ayuda de un agitador. 4. Aadir 1 cucharada de jugo de papaya. 5. Agitar con cuidado y lentamente por unos 5 minutos. Advertencia: Si se mezcla con demasiada rapidez o con mucha fuerza se corre el peligro de romper el ADN, con lo que no se podra ver. 6. Trasvasar nuevamente la mezcla en un Erlen Meyer de 250mL. 7. Ladear el recipiente y adiciona alcohol con mucho cuidado, evitando que se mezcle con el lquido de abajo, para observar una separacin de fases. 8. Luego de unos minutos se podr observar unos filamentos blancos dentro del alcohol y que se eleva de la mezcla de cebolla, detergente y enzimas.

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VI.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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