BIOTECNOLOGA

La biotecnologa es el conjunto de procesos industriales que se sirve de microorganismos o de clulas procedentes de animales o vegetales para obtener determinados productos comerciales o para realizar importantes transformaciones qumicas. La biotecnologa se ocupa, entre otros, de procesos tan diferentes como la clonacin, la terapia gnica, la inseminacin in vitro, la obtencin de bebidas alcohlicas, etc. Aunque el trmino es moderno, rene tcnicas y mtodos conocidos desde la antigedad. Por ejemplo, la fabricacin del pan, que ya realizaban los antiguos egipcios, la mejora de las razas de animales y la obtencin de plantas con mayor produccin de frutos. El trmino biotecnologa se comenz a usar a finales de los aos setenta, tras la aparicin de la ingeniera gentica, que se basa en la manipulacin del material gentico de las clulas. En la actualidad, con la expansin de la biotecnologa y los mtodos de manipulacin gentica, los microorganismos han sido modificados para fabricar productos tiles que los microorganismos no producen de manera natural.

I.

MICROORGANISMOS UTILIZADOS EN BIOTECNOLOGA

Hay tres grupos de microorganismos que tienen inters biotecnolgico: Bacterias, levaduras y mohos.

Bacterias. Aunque se utiliza una gran diversidad de ellas en distintos procesos industriales y biotecnolgicos destacan: o las bacterias lcticas (Streptococcus, Lactobacillus) y acticas (acetobacter) utilizadas respectivamante en la obtencin de derivados lcteos y vinagre. o Actinomycetes y Bacillus son utilizados en la produccin de antibiticos. o Pseudomonas, bacilos utilizados en biorremediacin (eliminacin de manchas de petrleo. o Eschericia coli el principal organismo utilizado en la produccin de protenas y pptidos recombinantes en ingeniera gentica. Hongos. o Las levaduras se utilizan en procesos de fermentacin para la obtencin de bebidas alcohlicas (como el gnero Sacharomyces para la cerveza), pan etc. o Los mohos (como Penicillium se emplean en la fabricacin de diversos antibiticos).

II.

TCNICAS DE INGENIERA GENTICA

La universalidad de los componentes moleculares de los organismos vivos permite trasladar la informacin gentica de unos a otros mediante la tecnologa del ADN recombinante La tcnica del ADN recombinante se utiliza en estudios sobre la regulacin de la expresin gnica, en la regulacin de la produccin comercial de sntesis de protenas como la Insulina o la hormona del crecimiento, en el desarrollo de organismos transgnicos y en la amplificacin del ADN, es decir, en obtener un gran nmero de copias de un gen determinado. En este ltimo caso, existe una tcnica mejor, denominada con las siglas PCR. La tcnica consiste en introducir el gen seleccionado
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en el interior de un vector y ste, a su vez, dentro de una clula, denominada clula anfitriona. Aprovechando la maquinaria celular, el gen se expresa, sintetizndose as la protena codificada en el gen. Adems, al dividirse la clula, las nuevas clulas formadas contienen ese gen que tambin sintetizan esa protena. Se genera un grupo celular que contiene un genoma distinto.

A. Tecnologa del ADN recombinante

Uno de las herramientas fundamentales utilizadas son los llamados enzimas de restriccin, que son enzimas que cortan las cadenas de ADN en determinadas secuencias (palindrmicas) especficas para cada tipo de enzimas, de forma que cuando se somete una molcula de ADN a la accin de estos enzimas, resulta fragmentada en trozos (tanto ms numerosos cuanto ms larga sea la molcula). Las etapas en la produccin de ADN recombinante son las siguientes: 1. Preparacin de la secuencia del ADN para su clonacin Es la parte esencial del proceso, ya que el ADN debe separarse y concentrarse. Partimos de clulas con ncleo, que deben ser lisadas (rotas). Las protenas estructurales, enzimas, ARN y restos moleculares deben separarse del ADN. El ADN obtenido se concentra y se fragmenta por accin de las enzimas de restriccin. Se asla el ADN que se desea clonar. 2. Preparacin de un vector de clonacin El vector es el portador de la secuencia de ADN que se desea clonar. Puede ser un plsmido o un virus como el fago . Las etapas del proceso consisten en: 1. Cortar el vector con enzimas de restriccin, las mismas enzimas que se utilizaron para cortar el ADN que se quiere insertar. 2. Unir el vector y el ADN que se va a clonar. Una vez que el ADN ha sido introducido en el vector se denomina ADN inserto, o simplemente, inserto. 3. Formacin del ADN recombinante En esta etapa se produce la unin covalente del vector y el ADN inserto mediante una ligasa. As se realiza el sellado de la llamada Mella, Muesca o Nick. 4. Introduccin del ADN recombinante en la clula anfitriona Para la clonacin (replicacin del ADN recombinante) se necesita la maquinaria celular. Por ello, hay que introducir el ADN recombinante en una clula anfitriona. Los tipos de clulas anfitrionas son: Clulas bacterianas: son las ms utilizadas, ya que tienen una alta velocidad de replicacin, un bajo coste de mantenimiento de las colonias y son fcilmente manipulables. Clulas eucariotas: aunque las clulas eucariotas son, en general, difciles de mantener se usan levaduras y clulas tumorales: o Levaduras: se utilizan en procesos relacionados con la investigacin de la expresin y la regulacin gnica y la sntesis de protenas eucariotas. o Clulas tumorales: apropiadas en procesos de clonacin, ya que la velocidad de replicacin es muy alta y se mantienen los caracteres sin producirse cambios, pues son muy estables.
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Clulas vegetales o animales en caso de que se desee obtener plantas o animales transgnicos, o bien emplear terapia gnica. Los mtodos para la introduccin del ADN recombinante facilitan la entrada de grandes fragmentos de ADN, puesto que la membrana celular es selectiva y no permitira la penetracin de grandes molculas.

B. Tcnicas de amplificacin de cidos nucleicos

La clonacin acelular o amplificacin del ADN es un tipo de clonacin de molculas de ADN o ARN sin la intervencin de una clula. Mediante esta tcnica se amplifica un gen o fragmento de ADN, es decir, que se produce un gran nmero de copias. Tambin puede realizarse una amplificacin de ARN utilizando un ADN complementario de ARN. Para este proceso se necesita la accin de la enzima transcriptasa inversa. La amplificacin se hace por la tcnica de la Reaccin en Cadena de la Polimerasa o PCR (Polimerase Chaine Reaction). Las aplicaciones de esta tcnica son, por ejemplo, la clonacin de ADN, la deteccin de secuencias sin purificar, la bsqueda de mutaciones, el diagnstico de enfermedades, estudios evolutivos, resolucin de problemas forenses, etc. La tcnica consiste en poner en disolucin en un tubo especial la cadena de ADN a amplificar, y se aaden secuencias cebadoras, desoxinucletidos trifosfato (dNTP) un tipo de ADN polimerasa resistente a altas temperaturas (Taq polimerasa). Mediante alta temperatura se separan las dos hebras de la cadena de ADN. Una vez separadas los cebadores se unen espontneamente a cada hebra y la
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polimerasa aade los dNTP hasta replicar toda la cadena. Este proceso se repite cclicamente 30 o 40 veces, obtenindose finalmente millones de copias de la cadena original.

C. Organismos transgnicos
Los organismos genticamente modificados se crean introduciendo uno o ms genes, pertenecientes a otros seres, o quitando uno o ms genes, pertenecientes al organismo. Estos organismos son conocidos vulgarmente con el sobrenombre de transgnicos. Sin embargo, organismo transgnico es una clase especfica de organismo genticamente modificado. Los organismos transgnicos estn genticamente modificados, pero con genes pertenecientes a otros organismos muy distintos a ellos (distinta especie). Por ejemplo, un organismo genticamente modificado podra ser una rata con genes de otra rata. Un organismo transgnico sera una merluza modificada con genes de un salmn. Los organismos genticamente modificados han sido desarrollados para facilitar la mejora animal y vegetal, ya que acortan los tiempos de espera en la depuracin de la especie por seleccin de individuos. Tambin, se ha investigado en su desarrollo con otro fin distinto, el de crear organismos que, de otro modo no se formaran en la Naturaleza, como por ejemplo permitir la incorporacin de ADN de otra especie. Las aplicaciones de los organismos genticamente modificados son muy variadas. Se pueden destacar las siguientes:

En investigacin: para el estudio de la expresin de genes y la creacin de genotecas. En medicina: para la obtencin de frmacos o protenas cuya sntesis es difcil conseguir "in vitro". Tambin, para la obtencin de tejidos u rganos, o la reparacin de anomalas genticas en humanos. En agricultura y ganadera: para la mejora (no de forma tradicional) de plantas y animales. En la industria alimentaria: para la mejora de procesos biotecnolgicos de elaboracin de alimentos (pan, vino, cerveza, yogur, etc.) y para la creacin de alimentos nuevos.

III.

PRINCIPALES APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGA

A. Biotecnologas aplicadas al sector agrcola y ganadero

1. Sector agrcola Las nuevas tcnicas de ingeniera gentica han abierto amplias expectativas tanto en la potenciacin de caractersticas deseables como en la creacin de variedades y especies nuevas, superando al tradicional sistema de seleccin. Estos avances se han producido fundamentalmente en dos sentidos: Aumento del rendimiento de los cultivos: a partir de cultivos de clulas vegetales se pueden crear clones de plantas genticamente idnticas en las que se han introducido genes con alguna resistencia deseada.
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Tambin se pueden clonar plantas ya resistentes o con mayor capacidad productiva. o Resistencia a heladas o Resistencia a la sequa o Aumento de la produccin Resistencia a herbicidas Resistencia a plagas por hongos, virus, bacterias o artrpodos. En este ltimo caso se han creado, a partir de genes transferidos por la bacteria Bacillus thuringiensis, variedades de tomate, patata, algodn y trigo que fabrican molculas txicas para diversas especies de gusanos, mosquitos, escarabajos etc.

2. Sector ganadero Con las tcnicas de ingeniera gentica se busca evitar ciertas patologas y aumentar la produccin de carne o leche sin necesidad de utilizar antibiticos u hormonas. En cuanto al aumento de la produccin los mayores xitos se han obtenido en acuicultura, donde se ha conseguido que especies como el salmn, lubina o carpa tengan un crecimiento rpido ya que incorporan la hormona del crecimiento de otras especies. Tambin se han logrado salmones resistentes al fro mediante el transplante de genes que codifican protenas anticongelantes de especies de mares fros. Estas impiden la formacin de cristales de hielo en el plasma sanguneo.

B. Biotecnologas aplicadas a la mejora del medio ambiente.

Diversas tcnicas biotecnolgicas permiten resolver, de diferentes y novedosas maneras, el problema de la contaminacin ambiental. Se pueden utilizar diversos microorganismos para afrontar problemas de tratamiento y control de la contaminacin qumica de distintos ecosistemas. La ingeniera gentica permite combinar las caractersticas de estos microorganismos para aumentar su eficacia o generar microbios recombinantes con nuevas caractersticas. Aunque muchos microorganismos diferentes juegan un papel esencial en los equilibrios ambientales, la mayora de las aplicaciones biotecnolgicas actuales se realizan con ciertos tipos de bacterias. Algunas de las aplicaciones de la biotecnologa a la mejora del medio ambiente son las siguientes: Eliminacin de metales pesados. Eliminacin de mareas negras. Obtencin de energa no contaminante. Tratamiento de residuos urbanos e industriales. Tratamiento de diferentes tipos de contaminacin asociados a la industria del petrleo. Tratamiento de la contaminacin producida por herbicidas, pesticidas e insecticidas. Depuracin de aguas residuales. Control de mareas negras Se llama marea negra al vertido masivo de petrleo debido a un accidente durante el transporte del petrleo en grandes barcos. Es posible utilizar bacterias que digieren los hidrocarburos que forman el petrleo y los transforman en sustancias qumicas nada o menos contaminantes. Aunque generalmente cada tipo de bacteria utiliza una clase de hidrocarburo, se intenta combinar las caractersticas de varias bacterias para conseguir una bacteria recombinante capaz de transformar muchos hidrocarburos diferentes.
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C. Biotecnologas aplicadas a la mejora de la salud.

La biotecnologa tiene en la salud humana, entre otros, los siguientes campos de aplicacin: Prevencin de enfermedades hereditarias. Terapia gnica mediante la insercin de genes correctos en clulas del organismo con defectos genticos, o genes que inducen la muerte celular en clulas tumorales. Produccin de vacunas, introduciendo genes codificantes de pptidos vricos en bacterias para fabricarlos masivamente. Obtencin de anticuerpos monoclonales e interferones por formacin de clones de clulas procedentes de la fusin de linfocitos B especficos para un antgeno y clulas tumorales que proporcionan la capacidad de replicacin indefinida. Produccin de hormonas (por ejemplo insulina y hormona del crecimiento). Produccin de antibiticos y otros productos farmacuticos.

Antibiticos La palabra antibitico designa a aquellas sustancias que, producidas por determinados microorganismos, pueden acabar con la vida de otros. En 1929, Alexander Fleming descubri estas sustancias. Estaba trabajando con Staphylococcus aureus y su cultivo se contamin con un hongo del gnero Penicillium, de forma que las colonias rodeadas por ste moran. Fleming supuso que el hongo produca alguna sustancia antibacteriana, por lo que hizo un filtrado, descubriendo as, la penicilina. Fue incapaz de purificarla, dado que era qumicamente inestable, lo que se hizo aos ms tarde, gracias al desarrollo de un proceso industrial adecuado. Desde 1945 se han aislado cientos de antibiticos producidos por hongos del gnero Penicillium y bacterias de los gneros Bacillus y Streptomyces. El gran problema de la actualidad es que han comenzado a desarrollarse a un ritmo alarmante cepas de patgenos resistentes a antibiticos e, incluso, cepas multirresistentes a varios antibiticos simultneamente, por lo que hay que encontrar otros nuevos, o modificar los existentes para que recobren su eficacia, lo que constituye el gran reto de la biotecnologa. Hormonas Las personas que sufren diabetes mellitus deben inyectarse insulina varias veces al da. Hasta 1983 la insulina que utilizaban las personas diabticas era insulina de cerdo purificada (diferente de la humana). Desde esa fecha se utiliza insulina obtenida por ingeniera gentica: se ha introducido el gen de la insulina humana en la bacteria Escherichia coli, que la produce en cantidades masivas y con las mismas caractersticas. La insulina es la primera protena fabricada por ingeniera gentica y comercializada. Tambin por ingeniera gentica se obtiene la hormona del crecimiento. Otras hormonas como la testosterona y progesterona, hormonas sexuales masculina y femenina, utilizada sta ltima en la fabricacin de frmacos anticonceptivos se obtienen de la fermentacin de ciertas levaduras.

D. Biotecnologa de los alimentos.

El hombre desde la antigedad ha obtenido productos alimenticios con la intervencin de los microorganismos, a pesar de desconocer su existencia. Hoy da gracias al conocimiento de sus caractersticas y metabolismo, son explotados industrialmente en la fabricacin de numerosos alimentos y bebidas. Por ejemplo: Pan. Yogur. Queso. Mantequilla. Vinagre. Vino. Cerveza. Encurtidos. Produccin de protenas para piensos de animales domsticos. Sntesis de vitaminas que se aaden a los alimentos o en compuestos farmacuticos. (Por ejemplo la vitamina B12 es producida industrialmente a partir de bacterias y la riboflavina es producida por diversos microorganismos como bacterias y hongos). Sntesis de aminocidos que se utilizan como aditivos alimentarios. (Ejemplos de aminocidos producidos por fermentacin microbiana son el cido glutmico, la lisina, la glicina, la metionina y la alanina).

Fabricacin del yogur Se utiliza leche, que fermenta mediante determinadas cepas de las bacterias Lactobacillus y Streptococcus que transforman la lactosa en cido lctico. El cido lctico es el causante de la precipitacin de las protenas de la leche. Ambos microorganismos necesitan una temperatura de 45C para desarrollarse al mximo, por eso la leche se envasa en caliente para que despus siga el proceso de fermentacin en la estufa a dicha temperatura. El pH del yogur (despus del enfriamiento a 4 C) es alrededor de 4, este medio cido impide el crecimiento de otras bacterias. Actualmente la produccin de yogures se ha especializado en gran cantidad de sabores e incluso en el enriquecimiento de nuevas bacterias. Fabricacin de cerveza Es un proceso que se conoce desde antiguo, ya que, al parecer, los babilonios fueron los primeros en elaborar la cerveza. Se basa en la fermentacin alcohlica que realizan las levaduras del gnero Saccharomyces. La cerveza se obtiene por fermentacin de la cebada realizada por las levaduras S. cerevisae o S. carlsbergensis. Los granos de cebada se ponen a remojo, de forma que germinan y generan amilasas suficientes que hidrolizan el almidn. Despus se secan, lo que constituye la malta, la cual se puede almacenar hasta su uso. Con la malta se obtiene el mosto de cerveza, al cual se adiciona el lpulo, encargado de dar a la cerveza el sabor amargo y de conservarla del crecimiento bacteriano. Es entonces cuando se aade el inculo, que fermenta durante cinco a diez das a temperatura y pH adecuados.