Fluorometra M. C. Luis Raul Chvez Garibay Facultad de QFB-UMSNH TEORA.

En condiciones definidas, la energa absorbida por los tomos de una substancia puede ser emitida como energa radiante en forma de luz visible. A este fenmeno se le llama luminiscencia y puede ser:

Quimioluminiscencia, si se debe a energa qumica causada por ciertas reacciones. Por ejemplo, el oxalato de difenilo es un ster lquido que al oxidarse y reaccionar con una substancia apropiada ("colorante") produce luz. Las molculas de la substancia colorante pasan del estado basal al excitado (*=estado excitado) y al regresar al estado basal emiten luz a una longitud de onda que depende de su estructura, ej. el tetraceno produce una luz amarillo-verdosa.

Imagen modificada del original en Wikipedia. Figura 1. Oxidacin del Cyalume (mr)

Aplicacin prctica cotidiana: barras de luz para excursionismo y adornos luminosos. Figura 2. Barra de luz Aplicaciones analticas.- principalmente en Bioqumica, Gentica y Biologa Molecular, para deteccin de biomolculas.

Fotoluminiscencia, cuando la emisin se debe a que se absorbi energa radiante.

En algunas substancias, cuando se les aplica energa radiante en forma de luz ultravioleta sus electrones pasan del estado basal al estado excitado absorbiendo parte de sta; al regresar al estado basal, liberan la energa sobrante en forma de fotones de longitud de onda mayor que la original. Esto ocasiona que el espectro de emisin de la substancia siempre est desplazado a la derecha con respecto al de los rayos de excitacin.

Si la emisin de luz contina algn tiempo despus de que se deja de aplicar energa a este fenmeno se le llama fosforescencia. Si la emisin cesa inmediatamente, se llama fluorescencia.

Imagen por Hannes Grobe (Hgrobe 06:16, 26 April 2006 (UTC)) redistribuida bajo los trminos de licencia del autor. Fuente: Wikipedia. Figura 3. Minerales fluorescentes vistos con luz ultravioleta.

Fuente: Wikipedia. Figura 4. Polvo fosforescente visto con luz visible, luz ultravioleta y en la obscuridad total. Fosforescencia. El interruptor de la pared sigue emitiendo luz al retirar la fuente de excitacin, en ste caso un apuntador lser violeta. La emisin ocurre slo en los puntos en que el lser toc al interruptor. De todos los tipos de luminiscencia mencionados, la fluorescencia producida por la aplicacin de energa radiante es la de uso ms difundido con fines analticos. Mtodo visual.- Consiste en aplicar luz ultravioleta con una lmpara especial. Se usa para hacer visibles algunas substancias tras separarlas mediante cromatografa en capa fina. En muchos casos, la naturaleza de la substancia puede determinarse por el color de la luz emitida. Por ejemplo, algunos alcaloides presentan el fenmeno produciendo un color caracterstico: cocana (azul claro), codena (amarillo claro), nicotina (violeta obscuro). Entre las substancias inorgnicas estn algunas sales de uranio (amarillo verdoso).

Figura 5. Visualizacin de substancias fluorescentes en cromatografa en capa fina mediante luz ultravioleta. El mtodo cualitativo ms preciso es a partir del espectro de emisin de la substancia, ya que puede darse el caso de que el color aparente de la emisin sea el mismo. Cual de las siguientes substancias produce una luz naranja si se usa como colorante en una reaccin de quimioluminiscencia con oxalato de difenilo? Principio del formulario Tetraceno

5,12-Bis(feniletinil)-naftaceno

9,10-Difenilantraceno

9,10-Bis(feniletinil)antraceno Final del formulario Factores de los que depende la intensidad de la fluorescencia. La intensidad de la fluorescencia F est dada por: (1)

Donde

es el rendimiento cuntico (eficiencia de la fluorescencia, el nmero de fotones absorbidos que se

convirtieron en fluorescencia) y los dems trminos son los mismos de la ley de Bouguer-Lambert y Beer. siempre es menor de uno y depende del tipo de substancia, de la longitud de onda de la luz ultravioleta aplicada y de la temperatura:

If = Intensidad de luz emitida, Ia = Intensidad de luz absorbida Si la concentracin es alta, el producto abc se hace grande y 10-abc tiende a cero; en ese caso, la ecuacin (1) nos queda: Como e I0 son constantes, F se vuelve constante; es decir, al aumentar la concentracin no cambiar la lectura. Por otra parte, si la concentracin es baja (abc< 0.01) la ecuacin (1) puede reordenarse as:

(3)

Es decir, a bajas concentraciones la intensidad de la fluorescencia es directamente proporcional a la concentracin. Esta ecuacin slo se aplica hasta algunas ppm de concentracin, se requiere que se transmita al menos el 92% de la luz UV. A concentraciones altas, a medida que la concentracin aumenta la intensidad de la fluorescencia disminuye (el producto abc aumenta). El motivo es el siguiente: en soluciones diluidas, la absorcin es uniforme en toda la solucin. Pero en soluciones concentradas la primera parte de la solucin en el trayecto del flujo luminoso absorber ms, lo que disminuye I0 para las molculas posteriores. En otras palabras, ninguna molcula recibir la misma cantidad de luz y, como la intensidad de la fluorescencia depende de este factor, la emisin ya no ser proporcional a la concentracin (las molculas en la entrada de la luz ultravioleta emitirn ms luz visible que las de la salida).

Figura 6. Distribucin de la emisin de las molculas a distintas concentraciones. Una curva de calibracin que incluya soluciones muy concentradas queda as:

Figura 7. Fluorescencia vs. concentracin. Algunos autores consideran que la regin no lineal empieza cuando la absorbancia vale 0.05; despejando de A=abc, nos queda:

Donde Cmax es la mxima concentracin que podemos medir por fluorometra antes de que la curva de calibracin deje de ser una linea recta.

Como en fluorometra se mide la cantidad de luz emitida, los mtodos son de 1000 a 10,000 veces ms sensibles que la colorimetra, donde se mide la absorcin. Su desventajas son que depende de la temperatura en muy alto grado y la intensidad de la emisin est en relacin a la intensidad de la excitacin (si vara la intensidad de la lmpara de luz ultravioleta vara la lectura).

Cual ser la mxima concentracin que podemos determinar mediante fluorometra para una substancia que tiene una absortividad de 5 cuando las unidades de concentracin son mg/lt, si usaremos una celda de 1 cm? Principio del formulario 0.01 mg/lt

0.05 mg/lt

0.5 mg/lt

0.001 mg/lt

Factores estructurales que intervienen en la fluorescencia de las molculas orgnicas.

Los enlaces .- Para presentar fluorescencia, una substancia debe tener enlaces conjugados con alto grado de estabilidad por resonancia (substancias aromticas). Si la molcula slo tiene enlaces , no presentar fluorescencia. La fluorescencia aumenta por: La presencia de anillos bencnicos. En los compuestos aromticos, la fluorescencia depende principalmente de los substituyentes, del nmero de anillos y del grado de condensacin. Por ejemplo, el antraceno es ms fluorescente que el naftaleno y este, a su vez, ms que el benceno.

 Los substituyentes donadores de electrones en el anillo aromtico.

La rigidez estructural. En el siguiente ejemplo el difenilo tiene libertad de giro, pero no el fluoreno:

La fluorescencia disminuye por: Los sustituyentes con deficiencia de electrones en el anillo bencnico. Por ejemplo, el nitrobenceno no es fluorescente. Los compuestos heterocclicos simples (pirrol, furano, tiofeno y piridina) no presentan fluorescencia, pero fusionados a un anillo de benceno si.

Tabla 1: fluorescencia relativa del benceno y algunos bencenos sustituidos. Compuesto Fluorescencia relativa Longitud de onda de la fluorescencia (nm) 270-310 270-320 310-405

Benceno n-propilbenceno Anilina

10 17 20

In anilinio cido benzoico Nitrobenceno

0 3 0

310-390 -

Bibliografa para esta pgina: Skoog/Leary (1994), Anlisis Instrumental, 4a. edicin. Ed. McGraw-Hill; captulo 9. Elige cual de las siguientes substancias puede ser analizada por fluorometra:

Principio del formulario D

Equipo de medicin Fluormetro (monocromador=filtros) o espectrofluormetro (monocromador=rejilla de difraccin) Funcin de las Partes. Fuente de luz.- Sirve para proporcionar la energa de excitacin (luz ultravioleta). La mayora del equipo comercial usa una lmpara de arco de xenn a alta presin, los fluormetros de filtro usan una lmpara de vapor de mercurio a baja presin. Puedes ver los espectros de emisin de ambas oprimiendo aqu. Figura 9. Lmpara de arco de xenn.

Avances recientes. En la actualidad se han desarrollado diodos emisores de luz que emiten en el UV (365395) nm y en el azul (465-485 nm). Se usan en algunos instrumentos que permiten hacer anlisis de ADN, ARN y proteinas usando tcnicas con marcadores fluorescentes especiales. Como la luz emitida es prcticamente monocromtica no es necesario el monocromador primario. Este tipo de instrumento usa un fotodiodo en vez de un fotomultiplicador en el fotmetro.

Monocromador primario.- Sirve para seleccionar la longitud de onda de excitacin. (aquella a la que la substancia de inters presenta su mxima emisin). Celda.- Puede ser de vidrio o plstico (metacrilato), si la longitud de onda de excitacin es de 340 nm en adelante; si es inferior, debe ser de cuarzo. Monocromador secundario.- Sirve para dejar pasar slo la longitud de onda de la luz emitida por la substancia de inters (visible). Fotmetro.- Se le llama as a la combinacin de detector, amplificador y dispositivo de lectura; sirve para medir la cantidad de luz emitida por la muestra y como detector se usa un tubo fotomultiplicador, algunos instrumentos recientes de bajo costo usan un fotodiodo. En el fluormetro (llamado tambin fluormetro) los monocromadores son filtros y el dispositivo de lectura hasta fechas recientes era de punto nulo, actualmente son digitales. Los instrumentos ms avanzados usan rejillas de difraccin en vez de filtros y reciben el nombre de espectrofluormetro. Los problemas que pueden causar los filtros en un fluormetro es que las longitudes de onda ms largas del filtro primario pueden pasar a travs de los filtros secundarios de longitudes de onda ms corta. Los fabricantes generalmente incluyen las caractersticas (espectro) de transmisin de los filtros en los manuales del equipo.

Figura 10. Espectrofluormetro Vas a medir la fluorescencia de una substancia que emite luz roja, Cual de las siguientes sera una longitud de onda adecuada para el monocromador secundario? Interv alo de longit udes de onda (nm) 493571 465493 400465 617780 580617

571580

Principio del formulario 690 nm

540 nm

400 nm

Aplicaciones. ANLISIS CUALITATIVO.- Es posible slo si se tiene un espectrofluormetro; se hace por comparacin del espectro de emisin de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El mtodo visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningn instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANLISIS CUANTITATIVO.- Sirve principalmente para substancias orgnicas que tengan dobles enlaces conjugados, de preferencia con carcter aromtico. Una de sus aplicaciones es el anlisis de vitaminas. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentracin de substancias que no lo son.

Que es? Un mtodo de anlisis basado en la medicin de la intensidad de la luz visible emitida por la muestra al someterla a la luz ultravioleta. Como funciona? Se aplica luz ultravioleta a la muestra; si la longitud de onda es la adecuada, ocurrirn transiciones electrnicas en la muestra. Al regresar al estado basal, el exceso de energa se emite en forma de fotones de longitud de onda mayor. Esta emisin ocurre siempre en la regin visible. Fundamento del anlisis cuantitativo.- a bajas concentraciones, la cantidad de luz emitida es directamente proporcional al nmero de molculas emisoras. Fundamento del anlisis cualitativo.- las longitudes de onda en las que ocurre la emisin son caractersticas de cada substancia. En que reas se utiliza? Qumica Analtica, Medicina y Bioqumica. Para que sirve? En general: Anlisis cuantitativo de molculas orgnicas con anillos aromticos o altamente insaturadas presentes en concentraciones muy bajas (trazas), especialmente en muestras biolgicas o ambientales Puede aplicarse en gran variedad de compuestos orgnicos e inorgnicos mediante reacciones que dan productos fluorescentes (marcadores qumicos) Usos comunes:

 Determinacin de constituyentes traza en muestras biolgicas y ambientales. Deteccin del paso de substancias en algunos mtodos de separacin (cromatografa lquida de alta presin, electroforesis) Pruebas inmunolgicas para detectar constituyentes especficos en sistemas biolgicos. Anlisis in situ en sistemas biolgicos como clulas aisladas; diferenciacin de clulas (citometra) Secuencia de ADN Estudios de fenmenos qumicos ultra-rpidos Cuales son los requisitos para la muestra? Estado: slido, lquido o gaseoso. Los slidos requieren un recipiente especial. Si la muestra presenta mucha turbidez puede ocasionar dificultades. Cantidad: pueden ser extremadamente pequeas; se han desarrollado tcnicas para nanolitros. Preparacin: Puede ser necesario convertir la substancia a un derivado fluorescente o aadir un marcador fluorescente. Es indispensable el uso de solventes de alta pureza y material de laboratorio extremadamente limpio. Las mezclas complejas pueden requerir separacin y purificacin extensiva. Las muestras turbias pueden requerir filtracin para minimizar la dispersin (interfiere). Se deben evitar los solventes que absorben la luz ultravioleta, tales como el tolueno. La presencia de substancias coloreadas puede interferir absorbiendo la luz emitida. El oxgeno disuelto disminuye la fluorescencia, probablemente por oxidacin de los enlaces \pi. Estructura: Las substancias que son buenos candidatos para el anlisis por sta tcnica son las que presentan enlaces \pi conjugados,preferentemente aromticos. Los substituyentes que deslocalicen los electrones \pi (NH2, OH, F, OCH3, etc.) tienden a aumentar la fluorescencia, mientras que los grupos que atraen electrones como Cl, Br, I, NO2 o COOH tienden a disminuirla o suprimirla. Cuales son sus limitaciones? Depende en alto grado de la temperatura. Slo sirve para soluciones diluidas

Fotometra de flama. La energa para que los tomos emitan de luz se suministra mediante una flama (energa trmica). La muestra generalmente es una solucin acuosa que se mezcla en forma de aerosol con un gas combustible mediante un atomizador. Cuando un electrn recibe un cuanto de energa trmica pasa a un orbital ms alto y ms energtico pero menos estable (estado excitado); a causa de la inestabilidad, el electrn regresa rpidamente a su orbital anterior (estado basal) y emite la energa recibida en forma de fotones con una longitud de onda particular. Por ejemplo, el sodio emite principalmente a 589 nm (amarillo), junto con otras emisiones menos intensas a otras longitudes de onda.

Puedes observar la emisin de los elementos en este sitio: simulador de espectros. Por omisin se muestra el espectro de absorcin, elige la opcin del lado derecho y vers el espectro de emisin del elemento que escojas en la tabla peridica. Si deseas ver el espectro con una escala de longitud de onda en la parte inferior, puedes encontrarlo en Spectra of Gas Discharges. El elemento se selecciona casi al final de la pgina, se muestra con un espectro continuo de fondo con fines de referencia. Si deseas conocer las longitudes de onda exactas y la intensidad de la emisin, puedes obtenerlas aqu: NIST Atomic Spectra Database Lines Form. Colors of Elements in a Flame. Contiene fotografas de las pruebas de coloracin de flama para algunos elementos. Flame tests, table de colores de flama y espectros de emisin de varios elementos, con otros detalles que ayudan a identificarlos.

La intensidad de la emisin depende de los siguientes factores:

1. El tipo de elemento. De acuerdo a su emisin los elementos pueden ser emisores fuertes (Na, K, Li, Ca) o emisores dbiles (los otros elementos metlicos). 2. La temperatura de la flama. Es el factor ms importante. A mayor temperatura mayor emisin, excepto para los elementos que se ionizan fcilmente como Na, K o Li. Si se calientan demasiado estos elementos se ionizan en vez de excitarse, porque los electrones de valencia saltan a estados de energa cada vez ms altos hasta que se desprenden del tomo por completo para formar un ion. Como los electrones se pierden, no regresan al estado basal y no ocurre la emisin.

La temperatura de la flama depende de: a) El tipo de combustible (el gas natural produce baja temperatura y el acetileno alta), del oxidante (aire u oxgeno) b) La cantidad de gas que se quema por segundo; este ltimo factor se controla regulando la presin.

La temperatura ms alta posible se obtiene usando cantidades estequiomtricas de combustible y oxidante; cualquier exceso de uno de ellos diluye la flama y baja la temperatura.

imagen de dominio pblico. Fuente: Wikipedia. Figura 1. Flamas de mechero Bunsen a distintas combinaciones de gas/aire 3. La cantidad de tomos del elemento emisor presentes en la flama. Depende de su concentracin en la muestra y de la cantidad de muestra que se enva a la flama por unidad de tiempo. Ya que para anlisis cuantitativo se requiere que la intensidad de la emisin dependa nicamente de la concentracin, los requisitos principales para la medicin son: 1.- La temperatura de la flama debe ser constante. 2.- La velocidad de flujo de la muestra hacia la flama debe ser constante. Al llegar la solucin a la flama se evapora el solvente y despus las sales, las cuales se disocian por la accin de la temperatura y producen tomos neutros. Los tomos neutros en forma de vapor son excitados por la energa trmica y se produce la emisin. En una flama tpica, slo alrededor del 1% de los tomos sufren esta transformacin. La ecuacin de Scheibe-Lomakin describe la intensidad de la emisin del elemento en una flama de temperatura constante:

Donde I = intensidad de la emisin de la lnea espectral, k = constante de proporcionalidad caracterstica del elemento (depende de la temperatura de la flama y la longitud de onda de la emisin), c = concentracin del elemento y n= constante que depende de la concentracin. En la parte lineal de la curva de calibracin n vale aproximademente 1.

Cual flama de mechero Bunsen de las mostradas arriba tiene mayor temperatura? Principio del formulario

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La #3

La #1

La #4

La #2

1) Evaporacin del solvente. Generalmente es agua, en este paso se introduce vapor de agua a la flama. Al finalizar quedan los solutos que venan en la muestra, puede haber una combinacin de materia orgnica e inorgnica. 2) Incineracin de la materia orgnica.En este paso tambin se puede generar humo. 3) Atomizacin. Es el paso de las substancias inorgnicas a tomos libres ("vapor atmico") y es un requisito para que ocurra la emisin. En este paso puede ocurrir la formacin de compuestos refractarios (resistentes al calor)

La formacin de compuestos refractarios interfiere con el anlisis cuantitativo?

No o si

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Funcin de los Componentes Quemador.- sirve para proporcionar la energa trmica para que se presente el fenmeno de emisin de fotones que se explic anteriormente. Caracterstica principal: La flama debe tener temperatura constante. Esto se logra manteniendo constante el flujo de los gases (combustible y oxidante) mediante mecanismos reguladores de presin.

Combustible=H2, oxidante = O2

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Las flamas de baja temperatura son ms grandes que las anteriores (ej.: la de un mechero Bunsen). Utilizan aire comprimido y propano o gas natural. La presin se controla mediante vlvulas y con la ayuda de un manmetro. Este tipo de quemador es el ms difundido, se encuentra en los flammetros para muestras biolgicas (flammetro clnico). Como muchos elementos tienen emisiones de baja intensidad, esto limita las aplicaciones del equipo, sobre todo en muestras biolgicas, a los elementos emisores fuertes: sodio, potasio, litio y calcio. Un flammetro clnico slo permite medir Na, K y Ca.

Atomizador.- Sirve para enviar la muestra a una cmara donde se mezcla con el combustible, de manera uniforme y finamente dividida en forma de aerosol. Est formado por un tubo capilar metlico por el que fluye la muestra, contenido en otro por el que pasa gas a alta presin; la mezcla sucede en el orificio de salida. Caractersticas principales: el flujo de muestra debe ser uniforme, as como la dispersin. Problemas causados por el atomizador.- Las sales provenientes del agua al evaporarse, as como la suciedad, pueden taparlo con relativa facilidad. Esto produce lecturas errticas o ninguna lectura. Monocromador.- Como los fotones liberados por el elemento de inters tienen una longitud de onda especfica, se usan filtros para dejar pasar nicamente esta y remover todas las dems. Los filtros son casi siempre de interferencia, por la propiedades que tienen: ancho de banda angosto, alta transmisin de luz y la posibilidad de fabricarlos para cualquier longitud de onda. Algunos instrumentos (espectrofotmetro de emisin de flama) utilizan prismas o rejillas de difraccin para tener la posibilidad de seleccionar una lnea de emisin en particular. Tipos de Flammetro. Directo.- Se mide la emisin de un slo elemento (el de inters). Limitaciones.- este mtodo presenta el inconveniente (mencionado en los quemadores y el atomizador) de que si por algn motivo se afecta la estabilidad del flujo del gas o de la muestra se afecta tambin la estabilidad de la lectura. Estndar interno.- Se mide la emisin del elemento de inters y se compara contra la de un elemento de referencia (litio). Este mtodo cancela la inestabilidad causada por las irregularidades en el flujo del gas y dentro de ciertos lmites las del flujo de la muestra, ya que al afectarse la emisin del elemento que se est determinando se afecta tambin la emisin del elemento de referencia. Limitaciones: La inestabilidad causada por las diferencias de flujo de la atomizacin no se compensa; esto se debe a que se requiere mayor o menor calor para evaporar la mayor o menor cantidad de solucin que llega a la flama. Este flammetro no permite hacer determinaciones de litio y el standard es especfico para cada marca y modelo.

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La curva de emisin vs temperatura del litio no es idntica a la del sodio o la del potasio, por lo que ste mtodo compensa solamente las variaciones pequeas en el flujo del gas y la atomizacin de la muestra pero no las grandes.

Los fabricantes de equipo suelen clasificarlos de acuerdo a la aplicacin: Flammetro clnico.- estn optimizados para leer cantidades de sodio y potasio a las concentraciones clnicamente normales y mostrar la lectura en mmol/lt, usando diluciones 1:100 o 1:200 de suero sanguineo. Usan flama de baja temperatura. El error puede aumentar fuera de ese intervalo de concentraciones. Flammetro industrial.- estn diseados para intervalos ms amplios de concentracin que los clnicamente normales, el error puede ser mayor que en un flammetro clnico si se usa como sustituto. Puede usar flama de baja o alta temperatura. Acabas de terminar de usar un fotmetro de emisin de flama. Como lo apagaras? Principio del formulario pongo como muestra agua destilada y dejo pasar unos segundos, luego la retiro, cierro la llave del gas y por ltimo oprimo el interruptor de encendido-apagado.

cierro la llave del gas y despues oprimo el interruptor de encendido-apagado.

pongo un poco de muestra y dejo pasar unos segundos, luego la retiro, cierro la llave del gas y por ltimo oprimo el interruptor de encendido-apagado.

pongo como muestra agua desionizada y dejo pasar unos segundos, luego la retiro, cierro la llave del gas y por ltimo oprimo el interruptor de encendido-apagado. Son de 3 tipos: espectrales, fsicas y qumicas. Interferencias Espectrales Suceden cuando una lnea de emisin de otro elemento presente en la muestra est muy prxima a la del elemento que se est analizando. Por ejemplo, la emisin del Ca (naranja) interfiere con la del Na (amarilla) a 590 nm. Otras interferencias espectrales son: Emisin de fondo.- Como los elementos del combustible y oxidante en la flama tambin emiten, ya que estn sometidos a la misma energa trmica, su emisin puede interferir. Esta se elimina ajustando el instrumento a lectura cero aplicando el solvente puro a la flama, o bien restando la lectura del solvente a la de la muestra. Autoabsorcin.- Si se aplica energa luminosa de la misma longitud de onda de la emisin a los tomos en la flama y esta proviene de una fuente de temperatura ms alta, los tomos la absorben. Como la temperatura del interior de una flama es mayor que la del exterior, esto puede suceder en flamas de alta temperatura (ej. acetileno) en las que la diferencia entre el interior y el exterior de la flama es muy grande y originar desviaciones en la curva de calibracin. Interferencias Qumicas En la flama ocurren reacciones que pueden dar lugar a cambios de longitud de onda o de intensidad en el espectro de emisin. Ionizacin.- Una flama de alta temperatura puede ionizar a los metales alcalinos y alcalino-trreos:

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El espectro de emisin del tomo neutro es diferente del ionizado y se producir una desviacin en la curva de calibracin, comnmente una concavidad hacia arriba al inicio. Esta interferencia puede eliminarse agregando un segundo elemento ionizable, para que haya exceso de electrones en la flama y el equilibrio se desplace a la izquierda. En flamas de baja temperatura esta interferencia es insignificante. Presencia de aniones en la flama.- Los cidos y sus sales producen disminucin de la emisin en cantidades relativamente altas. Si la concentracin es menor de 0.1M prcticamente no hay interferencias; si es mayor, los cidos sulfrico, ntrico y fosfrico principalmente hacen borrosa la emisin de los metales. Los fosfatos, aluminatos y similares atenan fuertemente la emisin del Ca y otros metales alcalino-trreos, porque forman un producto menos voltil lo cual disminuye la cantidad de tomos en estado gaseoso en la flama. Estas interferencias pueden eliminarse agregando agentes quelantes; el quelato del elemento ya no reacciona y si se usa un quelante adecuado (ej. EDTA) se descompone rpidamente en la flama. Interferencias Fsicas. Las propiedades fsicas de la solucin alteran la velocidad del flujo y la eficacia de la atomizacin de la muestra y por lo tanto se altera el nmero de tomos emisores en la flama. La presin de vapor, la viscosidad y la tensin superficial son los factores ms importantes. La tensin superficial alta produce gotas ms grandes y viceversa, por lo que cualquier cosa que baje la tensin superficial ayuda. Algunos solventes orgnicos la aumentan y por tanto interfieren. La viscosidad afecta la velocidad del flujo y su efecto se elimina haciendo que la viscosidad de la muestra sea similar a la de las soluciones patrn, por ejemplo usando el mismo solvente. Vas a medir concentraciones bajas de sodio usando un filtro de 589 nm en una muestra que contiene cantidades elevadas de magnesio. Esto podra dar lugar a una posible interferencia? Para responder se requiere que consultes las longitudes de onda donde emiten ambos elementos, puedes hacerlo aqu: Spectra of gas discharges. Los enlaces a la informacin estn al fondo de esa pgina. Que es? Un mtodo cuantitativo utilizado principalmente para la determinacin de Na, K y Ca. Como funciona? La muestra se enva a una flama mediante un atomizador. Al llegar a la flama se evapora el solvente, se quema la materia orgnica y los tomos emiten luz por efecto de la energa trmica. Cuales son sus aplicaciones? Diagnstico clnico. El Na, K y Ca son importantes para el metabolismo. Anlisis de medicamentos, por ejemplo soluciones salinas isotnicas. Anlisis de alimentos, por ejemplo calcio en la leche. Cuales son sus limitaciones? Permite determinar la concentracin total de los elementos a los que es sensible pero no da informacin sobre las molculas de las que forman parte. Por ejemplo, si se tiene una mezcla de NaCl y NaOH, se obtiene la concentracin total de sodio pero no es posible saber cuanto est como NaCl y cuanto como NaOH Espectroscopa de Absorcin Atmica

RESUMEN. Que es? Un mtodo de anlisis cuantitativo basado en medir la absorcin de luz de los elementos en estado gaseoso. Para que sirve?

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Para el anlisis cuantitativo para casi 70 elementos metlicos o de transicin. En que reas se usa? Industria metalrgica, farmacutica y de alimentos. Higiene industrial y estudios ambientales. Qumica forense y toxicologa.

Que ventajas tiene? Mide concentraciones en el orden de .001 partes por milln. El equipo de medicin requiere poco volumen de muestra (microlitros).

Como funciona? Los tomos de los elementos presentes en la muestra se llevan a estado gaseoso ("vapor atmico") descomponindola mediante una flama o un horno elctrico de grafito. Se hace pasar luz de la longitud de onda absorbida por el elemento a travs del vapor atmico y se mide la absorbancia. La absorbancia sigue la ley de Bouguer-Lambert y Beer. Que muestras se utilizan? En qumica forense y toxicologa: Muestras biolgicas, mdicas y clnicas como sangre, orina y otros fluidos corporales, tejido, uas, pelo, etc. Muestras ambientales (agua, suelos) Cuanto tiempo requiere el anlisis? Depende principalmente del tiempo de preparacin de la muestra. Una vez calibrado el instrumento, la medicin suele durar de 10 segundos (flama) a 2 minutos o un poco ms (horno de grafito). Cuales son sus limitaciones? No da informacin sobre el tipo de substancia, slo concentraciones de elementos. Slo es posible obtener la concentracin total del elemento; este mtodo no distingue entre las substancias que lo contienen. Destructiva Limitada a los metales y metaloides Se requiere una lmpara distinta para cada elemento. Existen lmparas multi-elementos (para 2 o 3) pero tienen un tiempo de vida ms corto, ya que uno de ellos se agota antes que los dems.

Marca la afirmacin correcta. Por absorcin atmica podemos... Principio del formulario ... determinar la concentracin de plomo en la sangre humana.

... determinar concentraciones de cloruros Espectroscopa de Absorcin Atmica

Fundamento. Es idntico en principio a la espectrofotometra de absorcin visible y ultravioleta. La absorbancia depende de la cantidad de tomos en el trayecto del haz de luz y, en condiciones adecuadas, los tomos absorben luz a las mismas longitudes de onda que la emiten.

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Figura 1. Espectros de emisin y absorcin. El espectro continuo se obtiene si la luz es producida al calentar gases densos, slidos o lquidos(1). El espectro discontinuo de emisin atmica es producido por gases a baja presin, en los cuales los tomos experimentan pocas colisiones. El espectro de absorcin atmica se obtiene cuando la luz proveniente de una fuente de alta temperatura pasa por un gas que se encuentra a temperatura mucho menor. Es en estas condiciones cuando los tomos del gas absorben luz a las mismas longitudes de onda que la emiten.

Diferencias con... Espectrofotometra de absorcin visible y ultravioleta. Sirve para analizar cualitativa y cuantitativamente iones y molculas orgnicas e inorgnicas. La absorcin atmica slo permite obtener concentraciones de los elementos metlicos o de transicin. Espectrofotometra de emisin de flama. Sirve para analizar principalmente Na, K, Ca y Li porque las emisiones de los dems elementos metlicos en el tipo de flama ms comn son muy dbiles para ser medidas. La absorcin atmica permite analizar todos esos elementos, llamados "emisores dbiles". En los mtodos de emisin de flama se mide la poblacin en estado excitado; en la espectrofotometra de absorcin atmica se mide la poblacin en estado basal, lo que la hace ms sensible. En una flama siempre habr mayor cantidad de tomos en el estado basal que en el excitado; para el sodio a 2000 grados, la relacin (estado excitado)(estado basal) es 9.9x10-6. Algunos elementos como el Zn requieren mucha energa de excitacin y sus transiciones ocurren en el ultravioleta, adems de disminuir la relacin (7.3x10-15 a 2000 grados). La cantidad de tomos en estado excitado depende de la temperatura, y la cantidad de tomos en estado basal es prcticamente el 100% y poco afectada por la temperatura. Referencias (1) Origin of Continuum, Emission, and Absorption Spectra. Astronomy 162, UT Astrophysics

El mejor mtodo para medir concentraciones de sodio en muestras biolgicas (ej. sangre) es ...? Principio del formulario La emisin de flama, los resultados son bastante precisos y el equipo es ms barato.

La espectrofotometra de absorcin atmica, como es ms sensible tendr resultados ms precisos que con la emisin de flama. Figura 2. Espectrofotmetro de absorcin atmica. Consta de una fuente de energa luminosa (lmpara), una celda (la flama), un monocromador y un detector.

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La solucin con la muestra es aspirada y se enva a una fuente de energa trmica (flama u horno elctrico), donde se vaporiza.

Figura 3. Diagrama a bloques. Los elementos pasan a estado gaseoso; algunos son excitados por la temperatura y emiten, pero la mayora queda en estado basal. Estos ltimos pueden absorber la energa radiante proveniente de una lmpara especial (lmpara de ctodo hueco), que emite luz slo a las longitudes de onda caractersticas del elemento. La emisin interfiere, porque ocurre a las mismas longitudes de onda que la absorcin. Para distinguirlas, la luz continua de la lmpara de ctodo hueco se convierte en intermitente por medio de un dispositivo ptico giratorio, de modo que produzca una seal intermitente en el detector. La emisin en la flama da una seal continua y se puede eliminar electrnicamente. El nmero de tomos absorbentes en el trayecto del haz de luz depende de: El espesor de la flama. La velocidad de flujo de la muestra hacia la flama. La concentracin del elemento en la muestra. Y es directamente proporcional a los tres; manteniendo constante el espesor de la celda (la flama) y la velocidad de flujo de la muestra, la absorbancia depender slo de la concentracin del elemento. Para que sirve la lmpara de ctodo hueco? Principio del formulario Para evitar las interferencias

Para iluminar la muestra

Emite luz monocromtica a las longitudes de onda caractersticas del elemento Lmpara de ctodo hueco Como la linea de absorcin es muy angosta (comnmente 0.005 nm) se requiere que la luz aplicada tenga igual o menor ancho de banda; de otra manera se absorber slo un pequeo porcentaje y no habr cambio apreciable en la lectura:

donde: %Abs=porcentaje de luz absorbido, ABl=Ancho de banda de la linea, ABm=ancho de banda del monocromador.

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Para un monocromador con ancho de banda de 1 nm, slo se absorbera el 0.5% de la luz. La fuente luminosa es una lmpara de ctodo hueco. El ctodo es hueco y est hecho de o contiene el elemento que se desea analizar. Entonces la luz que emite es especfica para ese elemento y tiene un ancho de banda menor que la linea de absorcin (por estar a menor temperatura y presin que la flama), de modo que se absorbe toda. D.R. 2009 Luis Raul Chvez Garibay Figura 5. Lmparas de ctodo hueco Su construccin es como sigue:

D.R. 2009 Luis Raul Chvez Garibay Figura 6. Lmpara de ctodo hueco. El nodo es de tungsteno y tiene una ventana de cuarzo, porque muchas lineas de inters ocurren en el ultravioleta; se encuentra rellena de un gas inerte a baja presin (argn o nen). Se aplica alto voltaje entre los electrodos y ste hace que el gas se ioniza en el nodo. Los iones positivos son atrados por el ctodo negativo y al chocar con l vaporizan parte del metal, a causa de la alta energa que acarrean. El metal vaporizado sufre transiciones electrnicas a causa de las colisiones con los iones del gas y al regresar al estado basal emite a sus longitudes de onda caractersticas. El gas tambin emite, pero sus longitudes de onda generalmente estn alejadas de las del elemento y no interfieren. La longitud de onda que ms se absorbe es generalmente la correspondiente a la transicin electrnica del estado basal al estado excitado mas bajo, y se llama la linea de resonancia. Que pasara si la ventana de la lmpara de ctodo hueco fuera de vidrio? No servira para nada, porque muchas lineas de inters ocurren en el ultravioleta Servira parcialmente, slo podra hacerse el anlisis a partir de 330 nm. Quemadores Hay dos tipos; el de consumo total y el de flujo laminar. El de consumo total recibe su nombre porque el 100% de la muestra llega a la flama. Caractersticas. Las sensibilidades de ambos son similares. El de consumo total usa toda la muestra, pero sta recorre un camino ms corto y las gotas ms grandes no se vaporizan en la flama o lo hacen parcialmente, dejando partculas slidas. Ambas cosas dispersan la luz y se registrarn como absorbancia. Adems, son afectados por ms factores que los de flujo laminar. Sus ventajas consisten en que pueden aspirar muestras viscosas y altas en slidos con mayor facilidad (por ejemplo, suero y orina sin diluir); tambin permite el uso de flamas de baja y alta velocidad de ignicin. Se usa ms en fotometra de flama y rara vez en absorcin atmica.

D.R. 2009 Luis Raul Chvez Garibay Figura 7.

El de flujo laminar slo permite flamas de baja velocidad. Aunque no toda la muestra llega al quemador, tiene mayor eficiencia para producir vapor atmico (porque las gotas son ms pequeas). Este es el de uso ms comn.

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Figura 8. Quemador de flujo laminar Tipos de flama Las ms ampliamente usadas son la de aire-acetileno y la de xido nitroso-acetileno. Su papel es proporcionar la energa trmica para volatilizar la muestra. Atomizadores electrotrmicos. Son un horno elctrico en miniatura, donde una gota de muestra primero se seca y despus se vaporiza. Se usan como alternativa a la atomizacin de la muestra en una flama como medio de obtener vapor atmico, ya que sta requiere de varios ml. de muestra y tiene baja eficiencia (0.1%). En un atomizador electrotrmico el volumen de muestra tpico es de 5-20 (o unos pocos de slido) y la eficiencia se aproxima al 100%, de modo que los lmites de deteccin mejoran de 100 a 1000 veces comparados con los mtodos de flama. Sus desventajas son: Las interacciones entre los elementos de la muestra son ms pronunciadas La absorcin del fondo es mayor, especialmente con muestras biolgicas o ambientales (debido a la materia orgnica residual o la presencia de sales). El tipo ms utilizado es el horno de grafito, que consiste en un tubo horizontal de grafito. La absorbancia se mide haciendo pasar la luz de la lmpara de ctodo hueco a travs del tubo. Este se calienta haciendo pasar una corriente elctrica a travs de l y el calentamiento se hace en varias etapas: 1. Secado, se aplica una temperatura de 105-130oC durante 10-20 segundos para evaporar el solvente y eliminar la humedad. 2. Tratamiento trmico (Pirolisis), se aplica una temperatura de 350-1200oC durante 10 a 20 segundos; las substancias voltiles inorgnicas y la materia orgnica que produce humo se eliminan, de modo que no ocurrir dispersin de la energa radiante de la lmpara de ctodo hueco. El humo se elimina con una corriente de argn. En el horno queda la parte inorgnica (cenizas) de la muestra como residuo slido. La temperatura debe ser lo bastante alta para que remueva los compuestos voltiles pero no tanto que elimine a la substancia que se va a analizar. 3. Atomizacin, se aplica alta temperatura (1200-2800oC, 10-20 segundos) para que las cenizas de la muestra se conviertan rpidamente en vapor atmico, que se difunde en el tubo del horno. Si la velocidad de vaporizacin es rpida y la de difusin constante, la absorbancia ser proporcional a la cantidad de substancia en el tubo. 4. Limpieza, se aplica alta temperatura (2000-2800oC, 2-5 segundos) para eliminar los residuos de la muestra y dejar el tubo preparado para la siguiente. Algunos hornos de grafito tienen una plataforma en su interior, para provocar un pequeo retardo en el tiempo de vaporizacin de la muestra; esto hace ms eficiente la evaporacin. De otra manera, la vaporizacin empieza cuando la temperatura en el horno an est aumentando y la velocidad de vaporizacin ser lenta. Detalles prcticos. Para evitar la oxidacin del grafito se aplica un flujo de argn durante su operacin, que tambin sirve para evitar la formacin de xidos refractarios y para limpieza. Tambin se aplica a la muestra un modificador de matriz, que sirve para aumentar la diferencia de volatilidad entre las interferencias y la substancia deseada (en qumica analtica se le llama matriz al resto de las substancias que componen la muestra). Por ejemplo, el acetato de amonio se agrega a las muestras que contienen NaCl (que es difcil de remover y causa interferencias muy severas) para formar acetato de sodio y cloruro de amonio; estos se volatilizan a menos de 600oC mientras que el NaCl requiere 1400oC. Como se modific la matriz, este es un modificador de matriz. Alternativamente, se puede hacer menos voltil al elemento de inters con un modificador de analito. Por ejemplo, el cadmio se volatiliza a 250oC; la adicin de NH4H2PO4 permite que soporte hasta 600oC. El modificador de Pd/Mg afecta al Cu, Ag, Au, Cd, Hg, Ga, In, Tl, Ge, Sn, Pb, As, Sb, Bi, Se y Te. La muestra se introduce al equipo mediante una micropipeta o un muestreador automtico. Cuando cambia la concentracin de las substancias en la matriz cambia tambin la altura y la forma de la banda de absorcin.

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En este caso la mejor precisin se obtiene en ocasiones integrando la seal para obtener su rea, en vez de medir la altura mxima. La calibracin del equipo requiere mayor cuidado que con los instrumentos de flama. Interferencias. Interferencias espectrales. La dispersin de luz por partculas slidas, gotas del solvente sin evaporar o molculas en la flama causan interferencia, sobre todo a longitudes de onda menores de 300 nm cuando soluciones de alto contenido de sales son aspiradas, porque la sal puede no ser desolvatada por completo o sus molculas no se disocian completamente en tomos. A esto se le llama absorcin de fondo, y puede corregirse midiendo la absorbancia de una linea cercana a la del elemento que se analiza, pero que no sea absorbida por ste. La interferencia ocurre dentro de un intervalo de longitudes de onda y su absorbancia ser prcticamente la misma a varios Angstrm de diferencia de la linea del elemento. La linea usada para la correccin puede ser una del gas de relleno de la lmpara de ctodo hueco, una del mismo elemento pero a una longitud de onda distinta a la de resonancia y que no sea absorbida por la muestra o una linea cercana de una segunda lmpara de ctodo hueco. Esta tcnica requiere de dos mediciones separadas y se usa raramente. Otro mtodo ms popular de correccin de fondo es a partir de la absorcin en una banda ancha; puede efectuarse en la regin del UV (donde muchos elementos absorben y el problema de la absorcin de fondo es ms serio) con una lmpara de hidrgeno o deuterio; funciona mejor abajo de 360 nm y hasta 1 de absorbancia. Para el visible, se puede usar una lmpara de tungsteno. El monocromador de la lmpara se coloca a la misma longitud de onda que la linea de resonancia, cuyo ancho de banda tpico es 0.005 nm. La absorcin de la linea de resonancia se considera despreciable comparada con la absorcin del fondo en el ancho de banda del monocromador; entonces, para corregir la absorcin del fondo se resta (automticamente) la absorbancia obtenida con esta lmpara de la obtenida con la de ctodo hueco. Esta es la base de los correctores de fondo comerciales. Por ltimo, est la correccin por efecto Zeeman. El efecto Zeeman consiste en que si se aplica un campo magntico intenso, las lineas espectrales se dividen en sus componentes magnticos. Cuando el campo magntico se aplica perpendicular a la radiacin, la linea se divide en tres: un componente central (p) y dos laterales (s), que adems estn polarizados (las ondas luminosas tienen un plano de vibracin definido) en distinta direccin. La separacin entre ellos depende de la intensidad del campo magntico. La luz polarizada en un sentido ser absorbida por el vapor atmico, mientras que la polarizada en el otro no se absorbe. La correccin del fondo se hace por substraccin electrnica de las absorbancias de ambas seales. Interferencias por ionizacin. Si la muestra contiene cantidades apreciables de elementos alcalinos o algunos otros, puede ocurrir la ionizacin en flamas de alta temperatura. Como lo que se mide son los tomos sin ionizar las seales de absorcin (tambin las de emisin) decrecen en intensidad. Esto a su vez da lugar en disminuciones en la sensibilidad o la linealidad. Por otra parte, la presencia de otros elementos ionizados en la muestra agrega electrones a la flama y se produce un aumento en la absorcin (o emisin) y una interferencia positiva. La ionizacin se detecta porque la curva de calibracin tendr una desviacin positiva (una curvatura hacia arriba al aumentar la concentracin), porque a bajas concentraciones se ioniza una fraccin mayor de los tomos. Para corregirla, se agrega la misma cantidad del elemento que interfiere a la solucin patrn, o grandes cantidades a la muestra y al standard, con el fin de que el aumento sea constante. Formacin de compuestos refractarios. La muestra puede contener una substancia, generalmente un anin, que forme un compuesto refractario (estable al calor) con el elemento que se analiza en la flama. Por ejemplo, el fosfato reacciona con los iones de calcio para producir pirofosfato de calcio (Ca2P2O7). Esto causa una reduccin en la absorbancia, porque el calcio debe estar en forma atmica para absorber. Generalmente este tipo de interferencia puede eliminarse o reducirse qumicamente. En el ejemplo anterior, una concentracin alta (aproximadamente 1%) de cloruro de estroncio o nitrato de lantano puede agregarse a la muestra; el fosfato reacciona preferentemente con cualquiera de ellos y se evita la reaccin con el calcio. Otro mtodo sera agregar una concentracin alta de EDTA para que se forme un quelato con el calcio. Esto evita la reaccin con el fosfato, y en la flama el quelato se disocia liberando al calcio. Este tipo de interferencia ocurre en flamometra y en absorcin atmica. Tambin puede eliminarse usando una flama de alta temperatura. Una situacin ms seria ocurre cuando la substancia reacciona con los gases de la flama. Por ejemplo, el aluminio, titanio, vanadio y molibdeno reaccionan con los O y OH presentes en la flama para dar xidos e hidrxidos metlicos trmicamente estables los cuales slo se pueden descomponer usando flamas de alta temperatura. Tambin depende de los gases que se usen como combustible; con una flama de aire-acetileno

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estos elementos no presentan absorcin apreciable y resulta ms til una flama de acetileno-xido nitroso. Esta flama se usa en condiciones reductoras (rica en combustible) en las que se produce una regin grande de color rojo, la que se debe a la presencia de radicales CN, NH y otros altamente reductores, los cuales combinados con la alta temperatura y la falta de especies con oxgeno en la flama previenen la formacin de xidos refractarios o los descomponen. Interferencias fsicas. Los parmetros que afecten la velocidad a que llega la muestra al quemador o la eficiencia de la atomizacin se consideran interferencias fsicas. Entre ellas estn las variaciones de viscosidad de la muestra debidas a la temperatura o el tipo de solvente, contenido de slidos o la temperatura de la flama. Estas pueden corregirse mediante calibracin frecuente. Sensibilidad y lmite de deteccin La sensibilidad nos indica la variacin de la seal para una variacin dada en la concentracin y en espectroscopa de absorcin atmica est definida como la concentracin en picogramos requerida para dar una variacin del 1% en la absorcin (0.0044 unidades de absorbancia); tambin se le llama masa caracterstica. Es una medida de la pendiente de la curva de calibracin, pero no dice nada de la relacin seal/ruido (la amplitud de la seal dividida entre la amplitud del ruido). El lmite de deteccin est definido como la concentracin requerida para dar una seal igual al triple de la desviacin standard de la seal del blanco. La variacin en la seal del blanco se debe en gran parte al ruido de los circuitos electrnicos del instrumento. Por lo general, la espectrofotometra de absorcin atmica tiene un lmite de deteccin mas bajo en la regin del ultravioleta. En el visible, generalmente la flamometra da mejores resultados. La exactitud de la determinacin depende de la complejidad de la matriz. Una solucin homognea a una concentracin 5-10 veces por encima del lmite de deteccin dar una exactitud mejor del 1%; cerca o alrededor del lmite de deteccin disminuye al 1-3%. El intervalo lineal de la curva de calibracin es tpicamente de 2 3 rdenes de magnitud por encima del lmite de deteccin. Puede extenderse mediante programas de computadora, pero no se recomienda; es preferible diluir la muestra.Final del formulario Final del formulario

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Es idntico en principio a la espectrofotometra de absorcin visible y ultravioleta. La absorbancia depende de la cantidad de tomos en el trayecto del haz de luz y, en condiciones adecuadas, los tomos absorben luz a las mismas longitudes de onda que la emiten.Final del formulario

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Enlaces externos: cuantificacin de sodio por fotometra de flama, contiene un protocolo de laboratorio y se muestra la curva de calibracin.Que es? Un mtodo cuantitativo utilizado principalmente para la determinacin de Na, K y Ca. Como funciona? La muestra se enva a una flama mediante un atomizador. Al llegar a la flama se evapora el solvente, se quema la materia orgnica y los tomos emiten luz por efecto de la energa trmica. Cuales son sus aplicaciones? Diagnstico clnico. El Na, K y Ca son importantes para el metabolismo. Anlisis de medicamentos, por ejemplo soluciones salinas isotnicas. Anlisis de alimentos, por ejemplo calcio en la leche. Cuales son sus limitaciones? Permite determinar la concentracin total de los elementos a los que es sensible pero no da informacin sobre las molculas de las que forman parte. Por ejemplo, si se tiene una mezcla de NaCl y NaOH, se obtiene la concentracin total de sodio pero no es posible saber cuanto est como NaCl y cuanto como NaOH Enlaces externos: cuantificacin de sodio por fotometra de flama, contiene un protocolo de laboratorio y se muestra la curva de calibracin.Las propiedades fsicas de la solucin alteran la velocidad del flujo y la eficacia de la atomizacin de la muestra y por lo tanto se altera el nmero de tomos emisores en la flama. La presin de vapor, la viscosidad y la tensin superficial son los factores ms importantes. La tensin superficial alta produce gotas ms grandes y viceversa, por lo que cualquier cosa que baje la tensin superficial ayuda. Algunos solventes orgnicos la aumentan y por tanto interfieren. La viscosidad afecta la velocidad del flujo y su efecto se elimina haciendo que la viscosidad de la muestra sea similar a la de las soluciones patrn, por ejemplo usando el mismo solvente. Vas a medir concentraciones bajas de sodio usando un filtro de 589 nm en una muestra que contiene cantidades elevadas de magnesio. Esto podra dar lugar a una posible interferencia? Para responder se requiere que consultes las longitudes de onda donde emiten ambos elementos, puedes hacerlo aqu: Spectra of gas discharges. Los enlaces a la informacin estn al fondo de esa pgina.Final del formulario

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La s flamas de baja temperatura son ms grandes que las anteriores (ej.: la de un mechero Bunsen). Utilizan aire comprimido y propano o gas natural. La presin se controla mediante vlvulas y con la ayuda de un manmetro. Este tipo de quemador es el ms difundido, se encuentra en los flammetros para muestras biolgicas (flammetro clnico). Como muchos elementos tienen emisiones de baja intensidad, esto limita las aplicaciones del equipo, sobre todo en muestras biolgicas, a los elementos emisores fuertes: sodio, potasio, litio y calcio. Un flammetro clnico slo permite medir Na, K y Ca.Las flamas de baja temperatura son ms grandes que las anteriores (ej.: la de un mechero Bunsen). Utilizan aire comprimido y propano o gas natural. La presin se controla mediante vlvulas y con la ayuda de un manmetro. Este tipo de quemador es el ms difundido, se encuentra en los flammetros para muestras biolgicas (flammetro clnico). Como muchos elementos tienen emisiones de baja intensidad, esto limita las aplicaciones del equipo, sobre todo en muestras biolgicas, a los elementos emisores fuertes: sodio, potasio, litio y calcio. Un flammetro clnico slo permite medir Na, K y Ca.

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Hay 2 tipos de flama: flamas de alta temperatura y flamas de baja temperatura. Las flamas de alta temperatura son pequeas y su temperatura es del orden de los 3000oC (ej. la de un soplete de oxiacetileno). Utilizan oxgeno mezclado con hidrgeno, acetileno o propano. Permite el anlisis de 46 elementos, incluyendo muchos emisores dbiles como Mg, Al, etc. Si

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Fin al del formulario En la actualidad se han desarrollado sistemas de medicin llamados optodos, formados por una fibra ptica de dimetro muy pequeo (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Aplicaciones. ANLISIS CUALITATIVO.- Es posible slo si se tiene un espectrofluormetro; se hace por comparacin del espectro de emisin de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El mtodo visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningn instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANLISIS CUANTITATIVO.- Sirve principalmente para substancias orgnicas que tengan dobles enlaces conjugados, de preferencia con carcter aromtico. Una de sus aplicaciones es el anlisis de vitaminas. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentracin de substancias que no lo son. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medicin llamados optodos, formados por una fibra ptica

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de dimetro muy pequeo (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Aplicaciones. ANLISIS CUALITATIVO.- Es posible slo si se tiene un espectrofluormetro; se hace por comparacin del espectro de emisin de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El mtodo visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningn instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANLISIS CUANTITATIVO.- Sirve principalmente para substancias orgnicas que tengan dobles enlaces conjugados, de preferencia con carcter aromtico. Una de sus aplicaciones es el anlisis de vitaminas. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentracin de substancias que no lo son. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medicin llamados optodos, formados por una fibra ptica de dimetro muy pequeo (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Aplicaciones. ANLISIS CUALITATIVO.- Es posible slo si se tiene un espectrofluormetro; se hace por comparacin del espectro de emisin de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El mtodo visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningn instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANLISIS CUANTITATIVO.- Sirve principalmente para substancias orgnicas que tengan dobles enlaces conjugados, de preferencia con carcter aromtico. Una de sus aplicaciones es el anlisis de vitaminas. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentracin de substancias que no lo son. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medicin llamados optodos, formados por una fibra ptica de dimetro muy pequeo (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Aplicaciones. ANLISIS CUALITATIVO.- Es posible slo si se tiene un espectrofluormetro; se hace por comparacin del espectro de emisin de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El mtodo visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningn instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANLISIS CUANTITATIVO.- Sirve principalmente para substancias orgnicas que tengan dobles enlaces conjugados, de preferencia con carcter aromtico. Una de sus aplicaciones es el anlisis de vitaminas. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentracin de substancias que no lo son. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medicin llamados optodos, formados por una fibra ptica de dimetro muy pequeo (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Aplicaciones. ANLISIS CUALITATIVO.- Es posible slo si se tiene un espectrofluormetro; se hace por comparacin del espectro de emisin de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El mtodo visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningn instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANLISIS CUANTITATIVO.- Sirve principalmente para substancias orgnicas que tengan dobles enlaces conjugados, de preferencia con carcter aromtico. Una de sus aplicaciones es el anlisis de vitaminas. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentracin de substancias que no lo son. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medicin llamados optodos, formados por una fibra ptica de dimetro muy pequeo (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Aplicaciones. ANLISIS CUALITATIVO.- Es posible slo si se tiene un espectrofluormetro; se hace por comparacin del espectro de emisin de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El mtodo visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningn instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANLISIS CUANTITATIVO.- Sirve principalmente para substancias orgnicas que tengan dobles enlaces conjugados, de preferencia con carcter aromtico. Una de sus aplicaciones es el anlisis de vitaminas. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentracin de substancias que no lo son.

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En la actualidad se han desarrollado sistemas de medicin llamados optodos, formados por una fibra ptica de dimetro muy pequeo (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Aplicaciones. ANLISIS CUALITATIVO.- Es posible slo si se tiene un espectrofluormetro; se hace por comparacin del espectro de emisin de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El mtodo visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningn instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANLISIS CUANTITATIVO.- Sirve principalmente para substancias orgnicas que tengan dobles enlaces conjugados, de preferencia con carcter aromtico. Una de sus aplicaciones es el anlisis de vitaminas. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentracin de substancias que no lo son. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medicin llamados optodos, formados por una fibra ptica de dimetro muy pequeo (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Aplicaciones. ANLISIS CUALITATIVO.- Es posible slo si se tiene un espectrofluormetro; se hace por comparacin del espectro de emisin de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El mtodo visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningn instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANLISIS CUANTITATIVO.- Sirve principalmente para substancias orgnicas que tengan dobles enlaces conjugados, de preferencia con carcter aromtico. Una de sus aplicaciones es el anlisis de vitaminas. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentracin de substancias que no lo son. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medicin llamados optodos, formados por una fibra ptica de dimetro muy pequeo (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Aplicaciones. ANLISIS CUALITATIVO.- Es posible slo si se tiene un espectrofluormetro; se hace por comparacin del espectro de emisin de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El mtodo visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningn instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANLISIS CUANTITATIVO.- Sirve principalmente para substancias orgnicas que tengan dobles enlaces conjugados, de preferencia con carcter aromtico. Una de sus aplicaciones es el anlisis de vitaminas. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentracin de substancias que no lo son. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medicin llamados optodos, formados por una fibra ptica de dimetro muy pequeo (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Aplicaciones. ANLISIS CUALITATIVO.- Es posible slo si se tiene un espectrofluormetro; se hace por comparacin del espectro de emisin de fluorescencia del problema contra el de las substancias puras que se sospecha puede ser. El mtodo visual basado en el color de la luz emitida no requiere ningn instrumento y se hace aplicando "luz negra" (luz ultravioleta de onda larga) a la muestra. ANLISIS CUANTITATIVO.- Sirve principalmente para substancias orgnicas que tengan dobles enlaces conjugados, de preferencia con carcter aromtico. Una de sus aplicaciones es el anlisis de vitaminas. Se han desarrollado marcadores fluorescentes que permiten determinar la concentracin de substancias que no lo son. En la actualidad se han desarrollado sistemas de medicin llamados optodos, formados por una fibra ptica de dimetro muy pequeo (micras) en cuyo extremo se deposita un reactivo que forme un producto fluorescente al encontrarse una substancia en particular.Final del formulario

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