SEPARACIN DE PIGMENTOS VEGETALES MEDIANTE CROMATOGRAFA EN PAPEL

INTEGRANTES CABALLERO SILVA ITAVIKO KIREHI MORALES LUNA SANDY ELIZABETH SANTOS CRUZ SELENE GUZMAN GONZALEZ LETICIA CAMBRON RIVERA FEDERICO VZQUEZ ESLAVA JOSE ANTONIO MAETRO: MIGUEL A. RODRIGUEZ MATERIA: BIOQUIMICA

FECHA DE ENTREGA: 5-NOV-08

SEPARACIN DE PIGMENTOS VEGETALES MEDIANTE CROMATOGRAFA EN PAPEL Objetivo: Extraer los pigmentos fotosintticos y separarlos mediante una tcnica sencilla de cromatografa en papel. Introduccin: Los cloroplastos deben su color verde a un pigmento denominado clorofila. Sin embargo, lo que en realidad existe en los cloroplastos es una mezcla de pigmentos representados principalmente por dos tipos de clorofila (clorofila a, que da un color verde intenso, y clorofila b de color verde), por b caroteno con una coloracin amarillenta clara y por xantofila que proporciona una coloracin amarillo anaranjado, en diferentes proporciones. Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad, lo cual permite su separacin cuando una solucin de la misma asciende por capilaridad por una tira de papel poroso (papel de filtro), ya que las ms solubles se desplazarn a mayor velocidad, pues acompaarn fcilmente al disolvente a medida que ste va ascendiendo. De esta forma, al cabo de cierto tiempo, a lo largo del papel de filtro se irn situando los distintos pigmentos en forma de bandas coloreadas, tanto ms desplazadas cuanto ms solubles sean los pigmentos a que pertenecen y tanto ms anchas cuanto mayor sea la abundancia de estos en la mezcla. La clorofila b se diferencia de la clorofila a solamente por estar sustituido el grupo metilo (--CH3 ) del carbono 3 en el segundo anillo pirrlico, por un grupo aldehido (--CHO). Esta diferencia es suficiente para causar un cambio notable en la coloracin como tambin en el espectro de absorcin de esta molcula.

En el espectro de absorcin se manifiestan las partes de la radiacin visible absorbidas por las clorofilas y cual es la relacin de este proceso con las estructuras descritas. En los espectros de absorcin de las clorofilas a y b los dos mximos de absorcin indican que la radiacin roja y azul es fuertemente absorbida, mientras que la verde o la roja oscura son poco absorbidas. La clorofila a es verde azulada, la clorofila b es de color verde amarillento. Esta diferencia se manifiesta en el espectro de absorcin, en la b, ambos mximos de absorcin presentan una tendencia o son desplazados hacia la parte verde, es decir, el mximo en la parte roja es desplazado hacia ondas mas cortas y el mximo en la parte azul hacia ondas mas largas. Tambin es notoria la diferencia en los mximos de absorcin los cuales varan entre las diferentes clorofilas Desarrollo Material: Mortero Tijeras Espinacas u hojas verdes Embudo con papel filtro Tubo gradilla de ensayo en ter etlico Alcohol metlico puro Cpsulas de Petri o vaso de precipitados Capilar o micropipeta Tira de papel

cromatogrfico Waltman MTODO: Extraccin de pigmentos: Colocar en un mortero trozos de hojas lavadas (quitando las nerviaciones ms gruesas) junto con 10 o 15 cc. de ter etlico. Triturar sin golpear hasta que el lquido adquiera una coloracin verde intensa. (Utilizar campana de gases a lo largo de toda la prctica).

Filtrar en un embudo con papel de filtro y recoger en un tubo de ensayo. Colocar en la tapadera de una caja de Petri metanol absoluto hasta una altura de 0.5 a 1 cm. Poner con el capilar en el papel de cromatografa entre 5 y 10 gotas de solucin de pigmentos, espaciadas en el tiempo con el fin de que vaya secndose el alcohol etlico y aumente la cantidad de pigmentos. Las gotas se ponen siempre en el mismo sitio situada a unos 2 cm por encima del borde inferior del papel. Se coloca un papel de filtro doblado en ngulo sobre la solucin y se deja en reposo el tiempo necesario.

Dejar 30 minutos. Resultados:

Cuestiones y resultados La solubilidad en alcohol de los pigmentos, de mayor a menor: carotenos, clorofila a, clorofila b y xantofila. Qu pigmentos corresponden a cada banda? Por qu empleamos ter etlico para extraer la clorofila? porque es un solvente orgnico y la clorofila es un compuesto orgnico. Qu pigmentos son los ms abundantes? Por encima de las clorofilas aparece ms de una banda?, qu significado tiene?