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4.
MTODOS DE DERMINACIN DE COMPUESTOS ORGNICOS
Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos
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4.1. DETERMINACIN DE SUSTANCIAS ORGNICAS PROCEDENTES DE VERTEDEROS

4.1.1. Mtodo para conocer la lixiviacin potencial de las sustancias Para conocer la lixiviacin potencial de las sustancias orgnicas peligrosas de estos vertederos se utiliza la prueba TCLP (Toxic Characteristics Leaching Procedure) recogido por el metodo EPA 1311. Los compuestos que considera el TCLP se muestran en la Tabla 4.1.1 El TCLP consta de una determinacin del porcentaje de slidos en el residuo, junto a la determinacin del pH, separacin de slidos de la fase lquida, reduccin del tamao de partculas de estos slidos, separacin de sustancias lixiviables del mismo mediante extraccin durante 18 horas, filtracin del extracto, combinacin del extracto con la fase lquida original, si existiese, y preservacin del extracto para su anlisis por los mtodos establecidos para ello (Tabla 4.1.2.). El procedimiento se muestra en el diagrama de flujo de la Fig. 4.1.1., el pH de la muestra determinar cul de los dos extractantes se utiliza. Para muestras cidas o neutras se recomienda el uso de una disolucin tampn cido actico-acetato sdico. Para materiales bsicos, se emplea una disolucin de cido actico. Estos extractantes imitan la sopa cida que se genera en los vertederos debido a
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la descomposicin de los residuos orgnicos. Los analitos voltiles deben separarse con un sistema de extraccin-filtracin especial (Zero Headspace Extractor- ZHE).
Tabla 4.1.1.- Sustancias con caractersticas txicas segn el TCLP Contaminantes Mximo nivel de contaminacin permitido en aguas potables (MCL) mg/L 0,005 0,002 0,1 0,1 0,075 0,005 0,007 0,002 0,004 0,002 0,001 0,0002 0,04 0,001 0,005 0,003 0,005 0,002 Nivel regulado con carcter general (mg/L) 5,0 0,03 100,0 6,0 200,0 200,0 200,0 200,0 7,5 0,5 0,7 0,13 0,02 0,008 0,13 0.5 3,0 0,4 10,0 200,0 2,0 100,0 5,0 0,7 0,5 0,5 400,0 2,0 0,2
Tetracloruro de carbono Clordano Clorobenceno Clorofomo o-Cresol m-Cresol p-Cresol Cresol1 1,4-Diclorobenceno 1,2-Dicloroetano 1,1-Dicloroetileno 2,4-Dinitrotolueno Endrin Heptaclor + Heptaclor epxido Hexaclorobenceno Hexaclorobutadieno Hexacloroetano Lindano Metoxiclor Metil etil cetona Nitrobenceno Pentaclorofenol Piridina Tetracloroetileno Toxafeno Tricloroetileno 2,4,5-Triclorofenol 2,4,6-Triclorofenol Cloruro de vinilo
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Se puede determinar el cresol total o los ismeros separadamente. En el primer caso, el nivel se regula a 200,0 mg/L, mientras que si se analizan los ismeros dicho nivel es de 200,0 mg/L para cada uno de ellos
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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.1.2.- Mtodos analticos requeridos para el ensayo de toxicidad TCLP (EPA 1311) Voltiles Semivoltiles Herbicidas Plaguicidas (EPA 8260B) (EPA 8270C) (EPA 8151A) (EPA 8081A) Benceno Cresoles 2,4-D Clordano Tetracloruro de 1,4-Diclorobenceno 2,4,5-TP (Silvex) Endrin carbono Clorobenceno 2,4-Dinitrotolueno Heptaclor (y el epoxido Cloroformo Hexaclorobenceno Lindano 1,2-Dicloroetano Hexaclorobutadieno Metoxiclor 1,1-Dicloroetileno Hexacloroetano Toxafeno Metil etil cetona Nitrobenceno Tetracloroetileno Pentaclorofenol Tricloroetileno 2,4,5-Triclorofenol Cloruro de vinilo 2,4,6-Triclorofenol Piridina
Fig.4.1.1.- Diagrama de flujo del ensayo de toxicidad TLCP (EPA 1311)
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4.1.2. Contaminacin a partir de lixiviados de vertederos urbanos. Vigilancia de las aguas subterrneas Un aspecto de inters creciente es la vigilancia de las aguas superficiales y subterrneas potencialmente contaminadas por lixiviados de vertederos municipales, que se originan, generalmente, por la percolacin de las aguas de lluvia, alcanzando los niveles subyacentes y las aguas subterrneas. Estos lixiviados pueden transportar compuestos orgnicos, siendo los ms usuales los que se muestran en la Tabla 4.1.3. Es conveniente llevar a cabo un estudio del aumento de contaminantes en los pozos del entorno del vertedero, especialmente los que se encuentran en una cota inferior. Si durante la etapa de vigilancia se detecta alguno de los compuestos de la Tabla 4.1.3., debe iniciarse un estudio auxiliar ms completo de las familias de analitos de la Tabla 4.1.4., en la que se introduce el mtodo EPA recomendado para su anlisis. Las Tablas 4.1.5. a 4.1.8. enumeran de manera ms exhaustiva los compuestos que se caracterizan con los mtodos de la Tabla 4.1.4.
Tabla 4.1.3.- Compuestos estudiados en la vigilancia de los lixiviados de vertederos municipales (Mtodo EPA 8260) Acetona Acrilonitrilo Benceno Bromodiclorometano Bromoformo Disulfuro de carbono Tetracloruro de carbono Clorobenceno Cloroetano Cloroformo Diclorometano 1,2-dibromo-3-cloropropano 1,2-dibromoetano 1,2-diclorobenceno 1,4-diclorobenceno trans-1,4-dicloro-2-buteno 1,1-dicloroetano 1,2-dicloroetano 1,1-dicloroeteno Cis-1,2-dicloroeteno trans-1,2-dicloroeteno 1, 2-dicloropropano cis-1,3-dicloropropeno trans-1,3-dicloropropeno Etilbenceno 2-hexanona Cloruro de metilo Bromuro de metileno Cloruro de metileno Metil etil cetona Ioduro de metilo 4-metil-2-pentanona Estireno 1,1,1,2-tetracloroetano 1,1,2,2-tetracloroetano Tetracloroeteno Tolueno 1,1,1-tricloroetano 1,1,2-tricloroetano Tricloroeteno Triclorofluorometano 1,2,3-tricloropropano Acetato de vinilo Cloruro de vinilo Xilenos
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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.1.4.- Grupos de analitos que completan la vigilancia de lixiviados de los vertederos municipales Grupo de analito Herbicidas clorados cidos Plaguicidas clorados PCB Compuestos orgnicos semivoltiles Compuestos orgnicos voltiles Nmero de analitos 4 19 6 112 61 Mtodo EPA recomendado 8151 8081 8082 8270 8260
Tabla 4.1.5.- Compuestos orgnicos voltiles que se analizan por el mtodo EPA 8260B Analito Acetona Acroleina Cloruro de alilo Bromoclorometano Bromoformo Tetracloruro de carbono Cloroetano Cloropreno 1,2-Dibromo-3-cloropropano 1,2-Diclorobenceno 1,4-Diclorobenceno Diclorodifluorometano 1,2-Dicloroetano cis-1,2-Dicloroeteno 1,2-Dicloropropano 2,2-Dicloropropano cis-1,3-Dicloropropeno Etilbenceno 2-Hexanona Metacrilonitrilo Clorometano Iodometano Metil isobutil cetona Cloruro de metileno Propionitrilo 1,1,1,2-Tetracloroetano Tetracloroeteno 1,1,1-Tricloroetano Tricloroeteno Acetato de vinilo Xileno PQL Pg/L 100 100 10 5 5 10 10 20 25 5 5 5 5 5 5 15 10 5 50 100 10 10 100 10 150 5 5 5 5 50 Analito Acetonitrilo Acrilonitrilo Benceno Bromodiclorometano Disulfuro de carbono Clorobenceno Cloroformo Dibromoclorometano 1,2-Dibromoetano 1,3-Diclorobenceno trans-1,4-Dicloro-2-buteno 1,1-Dicloroetano 1,1-Dicloroeteno trans-1,2-Dicloroeteno 1,3-dicloropropano 1,1-Dicloropropeno trans-1,3-Dicloropropeno Metacrilato de etilo Alcohol isobutlico Bromometano Metil etil cetona Metacrilato de metilo Bromuro de metileno Naftaleno Estireno 1,1,2,2-Tetracloroetano Tolueno 1,1,2-Tricloroetano Triclorofluorometano Cloruro de vinilo PQL Pg/L 200 5 5 100 5 5 5 5 5 100 5 5 5 5 5 10 10 100 10 100 30 10 5 10 5 5 5 5 10
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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.1.6.- Compuestos orgnicos semivoltiles que se analizan por el mtodo EPA 8270 Analito
Acenafteno Acetofenona 4-Aminobifenilo Benzo(a)antraceno Benzo(k)fluoranteno Benzo(a)pireno Bis(2-cloroetoxi)metano Bis(2-clooisopropil)eter 4-bomofenil fenil eter p-cloroanilina Clorobencilato 2-Clorofenol Criseno o-Cresol Dibenzofurano 1,2-Diclorobenceno 1,4-Diclorobenceno 2,4-Diclorofenol Ftalato de dietilo Dimetoato 7,12-Dimetilbenz(a)antraceno 2,4-Dimetilfenol m-Dinitrobenceno 2,4-Dinitrofenol 2,6-Dinitrotolueno Difenilamina Metasulfonato de etilo Fluoranteno Hexaclorobenceno Hexaclorociclopentadieno Hexacloropropeno Isodrin Isosafrol Metapirileno Metasulfonato de metilo Metil paration 1,4-Naftoquinona 2-Naftilamina 3-Nitroanilina Nitrobenceno N-Nitrosodietilamina N-Nitrosodifenilamina N-Nitrosometiletilamina N-Nitrosopirrolidina Paration Pentacloronitrobenceno Fenacetina Fenol Pireno 1,2,4,5-Tetraclorobenceno o-Toluidina 2,4,5-Triclorofenol
PQL Pg/L Analito

10 10 20 10 10 10 10 10 10 20 10 10 10 10 10 10 10 10 10 20 10 10 20 50 10 10 20 10 10 10 10 20 10 100 10 10 10 10 50 10 20 10 10 40 10 20 20 100 10 10 10 10 Acenaftileno 2-Acetilaminofluoreno Antraceno Benzo(b)fluoranteno Benzo(ghi)perileno Alcoho benclico Bis(2-cloroetil)eter Bis(2-etilhexil)ftalato Butil bencil ftalato 4-Clorofenil fenil eter m-Cresol p-Cresol Dibenzo(a,h)antraceno Di-n-butil fatalato 1,3-Diclorobenceno 3,3-Diclorobencidina 2,6-Diclorofenol Tionazina p-(Dimetilamino)azobenceno 3,3-Dimetilbencidina Ftalato de dimetilo 4,6-Dinitro-2-metilfenol 2,4-Dinitrotolueno Ftalato de Di-n-octilo Fluoreno Hexaclorobutadieno Hexacloroetano Indeno(1,2,3-cd)pireno Isoforona Kepona 3-Metilcolantreno 2-Metilnaftaleno Naftaleno 1-Naftilamina 2-Nitroanilina 4-Nitroanilina 2-Nitrofenol N-Nitroso-di-n-butilamina N-Nitrosodimetilamina N-Nitrosodipropilamina N-Nitrosopiperidina 5-Nitro-o-toluidina Pentaclorobenceno Pentaclorofenol Fenantreno p-Fenilendiamina Pronamida Safrol 2,3,4,6-Tetraclorofenol 1,2,4,-Triclorobenceno 2,4,6-Triclorofenol 1,3,5-Trinitrobenceno
PQL Pg/L
10 20 10 10 10 20 10 20 10 10 10 10 10 10 10 20 10 20 10 10 10 50 10 10 10 10 10 10 10 20 10 10 10 10 50 20 10 10 10 10 20 10 10 50 10 10 200 10 10 10 10 10
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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.1.7.- Plaguicidas organoclorados que se analizan por los mtodos EPA 8081A y 8082 Analito Aldrin E-BHC J-BHC 4,4-DDD 4,4-DDT Endosulfan I Sulfato de Endosulfan Endrin aldehido Heptaclor epxido PCB PQL Pg/L 0,05 0,05 0,05 0,1 0,1 0,1 0,5 0,2 1 50 Analito D-BHC G-BHC Clordano 4,4-DDE Dieldrin Endosulfan II Endrin Heptaclor Metoxiclor Toxafeno PQL Pg/L 0,05 0,1 0,1 0,05 0,05 0,05 0,1 0,05 2 2
Tabla 4.1.8.- Herbicidas clorados cidos que se analizan por el mtodo EPA 8151 Analito 2,4-D 2,4,5-TP PQL Pg/L Analito Dinoseb 10 2,4,5-T 2 PQL Pg/L 1 2
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4.2 DETERMINACIN DE COMPUESTOS ORGNICOS DE DEPSITOS SUBTERRNEOS

Existe un gran nmero de depsitos subterrneos en especial para almacenar productos derivados del petrleo. La caracterizacin analtica de este problema tienen una doble faceta, por un lado, el analito relacionado con el petrleo debe separarse de la matriz slida del suelo o del agua subterrnea, por otro, debe llevarse a cabo una determinacin cualitativa y cuantitativa de la sustancia en cuestin. Los mtodos analticos usuales para la determinacin de los productos del petrleo son la cromatografa de gases (GC) con diversos detectores y la espectrometra infrarroja (IR). El anlisis tradicional por cromatografa de gases en la industria del petrleo se ha concentrado en la caracterizacin del aceite en funcin del rango de ebullicin y el contenido de parafina, olefinas, naftalenos y aromticos. Las determinaciones cualitativas en el medio ambiente del petrleo va de la caracterizacin del contenido de aceite y grasa a la localizacin del origen del petrleo. Las determinaciones analticas que suelen ser necesarias en estos estudios son: hidrocarburos totales del petrleo (TPH), benceno total, tolueno, etilbenceno y xileno (BTEX), compuestos orgnicos de las gasolinas (GRO), compuestos orgnicos de diesel (DRO), aunque a veces es tambin necesario establecer una clasificacin en gasolina, diesel, keroseno, carburante de aviacin, etc. A veces se precisa tambin conocer la presencia de compuestos oxigenados, como etanol, metil tert-butil eter (MTBE), metil tert-amil eter (TAME) o etil tert-butil eter (ETBE). Excepto el etanol, los compuestos oxigenados pueden ser analizados por purga y atrapamiento GC o GC-MS. El etanol es miscible con el agua y puede determinarse ms eficientemente por inyeccin directa en GC-FID con una columna con empaquetamiento Pora-Pac Q o columna capilar PLOT. Los mtodos de extraccin ms usuales son la separacin lquidolquido en embudo de decantacin, o usando un extractor continuo, bao ultrasnico, sistema de purga y atrapamiento y espacio de cabeza. En la Tabla 4.2.1. se muestran algunos de los mtodos analticos propuestos para el estudio de estos parmetros.
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Tabla 4.2.1.-Mtodos analticos para la determinacin de productos del petrleo en entornos de depsitos subterrneos Parmetro BETEX TPH (agua) TPH (suelo) TPH (gasolina)GRO TPH (diesel) DRO PAH (agua) PAH (suelo) VOC PCB Mtodo EPA 602 5030/8020 para agua; 5030/8020 para suelos 418.1 Extraccin por 3540 3550 con Freon, anlisis similar al agua 5030/GC-FID 3510/GC-FID para agua; 3550/GC-FID para suelos 610, 625, 3510/8100, 8270 8310 3550/8100, 8270 8310 5030/8020 8260 3540 3550/8080 3510 3520/8080
4.2.1. Determinacin de hidrocarburos totales del petrleo (TPH) por IR El procedimiento que se comenta se basa en el propuesto por la EPA (418.1 y 9073) y se basa en el empleo del Freon 113 como extractante. Muestras acuosas: Se parte de una muestra de 1 L que se acidifica hasta pH < 2 con HCl, y se extrae tres veces con porciones de 30 ml de Freon 113. El disolvente se seca pasndolo por papel de filtro que contiene sulfato sdico a un matraz aforado de 100 ml. El matraz se llena hasta el enrase con Freon, eliminando entonces varios ml del disolvente. Se aaden 3 gramos de gel de slice, y se agita la mezcla con un agitador magntico durante varios minutos. La gel de slice elimina los componentes polares que se han incorporado al extracto como cidos grasos, aunque puede ser necesario aadir varias porciones de gel de slice para la eliminacin completa de dichos cidos grasos. La muestra se lee con un espectrofotmetro IR a 2950 cm-1 frente una curva patrn. Los patrones se preparan utilizando una mezcla de calibracin constituida por 15.0 ml de n-hexadecano, 15.0 ml de isooctano y 10.0 ml de clorobenceno. Esta mezcla patrn se elige por su proximidad al nmero y tipo de enlaces carbono-hidrgeno en los productos del petrleo, los cuales son una mezcla de hidrocarburos alifticos de cadena lineal y ramificada e hidrocarburos aromticos. Este procedimiento basado en la espectroscopa IR cuantifica el nmero de enlaces C-H en la muestra. Cuando se analizan
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sustancias puras como el hexadecano se pueden obtener resultados superiores a los reales. El nmero de uniones C-H en el patrn viene dado aproximadamente por el tanto por ciento de hidrgeno en la mezcla de calibracin, que se calcula como sigue:
Compuesto Frmula Peso molecular % hidrgeno Densidad Ml Masa calculada en la mezcla % en peso % en peso de H Hexadecano C16H34 226,43 15,13 0,773 15,0 11,595 35,09 5,3091 Clorbenceno C6H5Cl 112,55 4,48 1,107 10,0 11,070 33,50 1,5008 Isooctano C8H18 114,22 15,88 0,692 15,0 10,380 31,41 4,9882 Total
33,045 100 11,7981
Para una muestra de hidrocarburo pura, como sera el caso de una muestra de hexadecano, el % de hidrgeno es 15,13. Por lo que el anlisis de hexadecano puro usando la disolucin de calibrado antes descrita dara valores superiores: 15,13 -------------- = 1,280 11,7981 Ello ocurre con todos los hidrocarburos ligeros, mientras que con los hidrocarburos ms pesados se obtendrn resultados ms reducidos. Muestras slidas Se han propuesto variantes del procedimiento anterior empleando la extraccin soxhlet, con ultrasonidos o simplemente extraccin vigorosa manual durante 2 minutos con Freon 113 como extractante. La extraccin soxhlet se considera ms exhaustiva aunque el tratamiento es excesivamente largo. Se han propuestos otros disolventes en sustitucin del Freon 113, como el sulfuro de carbono, pero tiene el inconveniente de su mal olor y toxicidad. Por ello se ha propuesto un mtodo basado en la extraccin con dixido de carbono supercrtico para muestras slidas (EPA 3560). El extracto obtenido se transfiere a tetracloroeteno, para su anlisis por IR a 2950 cm-1 (EPA 8440). El tetracloroeteno no presenta problemas para la capa de ozono.
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4.2.2. Anlisis de BTEX y compuestos orgnicos en las gasolinas (GRO) por cromatografa de gases (GC) Se han propuestos varios procedimientos alternativos para la determinacin de BTEX y GRO: a) Cromatografa de gases con detectores FID-PID usando tcnicas de espacio de cabeza o de purga y atrapamiento (mtodo EPA 8021 modificado). b) Cromatografa de gases con detector de masas, GC-MS (mtodo EPA 8260) c) Microextraccin con metanol o hexadecano seguida por purga y atrapamiento o inyeccin directa en GC o GC-MS. En el anlisis de BTEX los picos individuales de benceno, tolueno, etilbenceno y xileno se suman para obtener el resultado final. En el anlisis de los GRO se utilizan diversos procedimientos para su cuantificacin, se propone sumar los 10 picos ms pronunciados del cromatograma de la gasolina, un procedimiento alternativo es sumar todos los picos de dicho cromatograma, referido en los casos a una gasolina estndar. 4.2.3. Anlisis de compuestos orgnicos en diesel (DRO) por cromatografa de gases Los compuestos orgnicos en diesel se pueden determinar por GCFID. El combustible diesel es una mezcla de hidrocarburos entre el decano y el pentacosano C10 C25. Para ello se han propuesto una gran variedad de procedimientos de extraccin y extractantes, como Freon 113, cloruro de metilo, disulfuro de carbono o hexano. Muestras de agua Para muestras de agua se emplean sistemas de extraccin discontinuos en embudos de extraccin y extractores lquido-lquido continuos. Para muestras slidas se ha propuesto el uso de extractores soxhlet, ultrasnicos o simplemente agitacin manual. La calibracin y cuantificacin puede basarse en todos los picos del cromatograma desde el decano al pentacosano o slo en diez compuestos indicadores que son los hidrocarburos saturados de nmero par de carbonos desde el decano al
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octacosano. Se suelen utilizar el pentacosano y el o-tertfenilo como patrones internos. Un procedimiento para llevar a cabo el anlisis descrito en el prrafo anterior consiste en aadir 1,00 ml de disolucin de los patrones internos (n-nonano y n-pentacosano) de 1000 Pl/ml en metanol a 1 L de muestra acuosa en un extractor/concentrador continuo lquido/lquido de membrana hidrofbica. La muestra se acidifica a pH < 2 con agua:H2SO4 1:1 y se extrae durante 4 h con 100 ml de cloruro de metileno que se concentra a 2 ml. El extracto se somete a una concentracin hasta 1 ml haciendo uso de una corriente de nitrgeno y calentamiento suave a 40 C en bao de agua. Muestras slidas Las muestras slidas se procesan en un dispositivo soxhlet usando 30 g de muestra que se mezcla con 30 g de sulfato sdico anhidro (secado en el horno a 550 C durante 4 h) y se coloca en el extractor entre dos tapones de lana de vidrio, se extrae en continuo en el extractor lquido-lquido durante 18 h empleando cloruro de metileno como extractante. A continuacin se aade a la muestra 1 ml de la disolucin de patrones internos antes descrita y se contina la extraccin durante 4 horas con cloruro de metileno (con 4-6 ciclos por hora). El extracto se seca con sulfato sdico anhidro (secado en horno) y se concentra con un dispositivo de Kuderna-Danish (K-D) hasta unos 2 ml, para finalmente reducir el volumen del extracto a exactamente 1,00 ml con corriente de nitrgeno y calentamiento simultneo a 40C en un bao de agua. El anlisis se lleva a cabo por GC-FID con una columna capilar de 30m x 0.32 mm id, con fase estacionaria de 95:5 metil:fenil silicona. La posicin relativa del conjunto de picos de DRO comparada con los patrones internos permite identificar los distintos tipos de combustibles tipo diesel, como keroseno, diesel#2, aceites minerales ligeros, JP-4 y otros. La cuantificacin del analito en estudio se lleva a cabo por el rea completa de todo el cromatograma por encima de la lnea base, utilizando una curva de calibracin de al menos 5 puntos. Como criterio de control de calidad del anlisis slo se consideran aceptables recuperaciones de los patrone internos de al menos el 45% de nonano y del 75 % para el pentacosano. El anlisis es muy crtico a la influencia del volumen de extracto final, el cual nunca debe ser inferior a 1,00 ml. Si el volumen se reduce a 0,75 ml se produce al mismo tiempo una reduccin drstica de las recuperaciones de nonano (0-6 %) y pentacosano (10-30 %), con reducciones comparables de las recuperaciones de los analitos estudiados.
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La mayor parte de los combustibles, disolventes y aceites derivados del petrleo pueden identificarse mediante GC-FID. La forma de identificarlos es usualmente el uso de los puntos de ebullicin o rango de destilacin. Los hidrocarburos saturados de cadena lineal pueden servir de patrones de calibracin a travs de sus puntos de ebullicin. La Tabla 4.2.2 rene los puntos de ebullicin de los patrones de hidrocarburos ms fcilmente disponibles.
Tabla 4.2.2.- Punto de ebullicin de hidrocarburos comunes
Hidrocarburo Propano n-butano n-pentano n-hexano Ciclohexano Benceno n-heptano Metilciclohexano Tolueno n-octano Etilbenceno p-xileno n-nonano n-decano Naftaleno n-undecano n-dodecano n-tridecano n-tetradecano Antraceno n-pentadecano n-hexadecano n-heptadecano n-octadecano n-nonadecano n-eicosano n-heneicosano n-docosano n-tricosano n-tetracosano n-pentacosano n-hexacosano n-heptacosano n-octacosano n-nonacosano n-triacontano n-hentriacontano Nmero de carbonos 3 4 5 6 6 6 7 7 7 8 8 8 9 10 10 11 12 13 14 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 PE C -42.1 -0,5 35-36 69 80,7 80 98 101 111 125-127 136 138 151 174 218 196 216 234 252-254 342 270 284 302 317 330 343 356 369 380 391 402 412 422 432 441 450 458
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4.3. ANLISIS DE COMPUESTOS VOLTILES. 4.3.1. Mtodos de muestreo y extraccin de los analitos El procedimiento tradicional de toma muestras de suelos para el anlisis de compuestos orgnicos voltiles (VOC), basado en rellenar con el suelo un recipiente de boca ancha con cierre de rosca adolece de varias deficiencias, ya que los analitos estn sujetos a la accin de las bacterias que pueden descomponerlos, pudiendo asimismo sufrir prdidas por volatilizacin. Estos procesos daban origen a bajas reproducibilidades en los resultados cuando se analizaban alcuotas del mismo recipiente o se llevaban a cabo diversos muestreos del mismo punto en estudio. Para evitar estos problemas se han propuesto diversas alternativas contenidas en el mtodo 5035 de la EPA, que utiliza sistemas cerrados para purgaatrapamiento y extraccin de los VOCs El mtodo EPA 5035 presenta diversas opciones de muestreo en funcin de la concentracin de voltiles en la muestra: a) Para bajas concentraciones de compuestos orgnicos voltiles, inferiores a 200 Pg/kg de compuesto individual. Se preparan anticipadamente en el laboratorio viales con la disolucin preservante (5 ml de disolucin de bisulfato sdico al 20 %), y se taran. Durante la operacin de muestreo se introduce una porcin de muestra slida en el vial para VOA de 40 ml, se enrosca con fuerza el cierre y se pesa la cantidad de muestra tomada en el vial con una balanza. El pH de la muestra de suelo preservada debe ser d 2, lo que debe comprobarse en una muestra separadamente. b) Para muestras con concentraciones elevadas se recogen en viales para VOA pesados previamente que contienen 10,0 ml de metanol. Para cada punto de muestreo deben tomarse varias muestras, al menos tres, ya que en cada punto se realiza un solo anlisis. Por otro lado, si se desconoce el rango de concentracin del analito, es necesario tomar una muestra adicional, para aplicar a ella el mtodo (b), para concentraciones elevadas, basado en la extraccin con metanol. Finalmente, es aconsejable tomar dos muestras ms para control de calidad de los anlisis, aadiendo a las mismas cantidades conocidas de los analitos (spikes), lo que eleva a seis o ms el nmero de viales de muestreo necesarios para cada punto.
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Los viales permiten preservar la muestra hasta 14 das desde el momento de la toma. No obstante hay que considerar que los viales estn cerrados con un septum de Tefln que no est en contacto con el suelo por lo que puede producirse cierta difusin y paso de los analitos al exterior, lo que a su vez origina contaminacin cruzada. Por ello, hay que tener la precaucin de no guardar muestras con baja y alta concentracin de VOCs en el mismo frigorfico, e introducir siempre en el mismo un vial blanco con 5 ml de disolucin acuosa de bisulfato sdico. El mtodo est diseado para llevar a cabo posteriormente los anlisis con un muestreador automtico, que introduce los patrones internos y lleva a cabo la purga perforando el septum una sola vez.
4.3.2. Anlisis de Compuestos Orgnicos Voltiles no halogenados. Inyeccin directa o purga-atrapamiento GC-FID Este procedimiento est basado en el mtodo 8015B de la EPA (tabla 4.3.1), que permite el uso de columnas empaquetadas o capilares, y permite el anlisis de numerosos compuestos incluidos los GRO y DRO. Se pueden aplicar adems diversas tcnicas de preparacin/introduccin de muestras como las de purga-atrapamiento (EPA 5035) y microdestilacin azeotrpica (EPA 5031) o extraccin con disolventes e inyeccin directa. Como patrones internos para la destilacin azeotrpica se sugieren el 2-cloroacrilonitrilo, hexafluoruro-2-propanol, hexafluoruro-2-metil-2propanol. Se sugiere el empleo de al menos uno o dos patrones de sustitucin (surrogates) durante el anlisis. En este sentido se han propuesto los tiempos de retencin del 2-metilpentano y 1,2,4-trimetilbenceno como intervalo para identificar los GRO y el n-decano (C10) y n-octacosano (C28) para los DRO. Estos compuestos se usan tambin para establecer los lmites de elucin para la cuantificacin.
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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.3.1.- Analitos estudiados por el mtodo EPA 8015B (Lmites de deteccin) Analito Acetona Acroleina Alcohol arlico Alcohol t-butlico Eter dietlico Etanol Etilenglicol Alcohol isobutlico Metanol Metil isobutil cetona (MIBK) Paraldehido 2-picolina Propionitrilo MDL (Pg/L) 48 13 nd 8 nd 18 nd 11 21 4 nd nd 10 Analito Acetonitrilo Acrilonitrilo Alcohol n-butlico Crotonaldehido 1,4-dioxano Acetato de etilo xido de etileno Alcohol isoproplico Metil etil cetona (MEK) N-nitroso-di-n-butilamina 2-pentanona Alcohol n-proplico Piridina MDL (Pg/L) 15 8 14 nd 12 9 8 18 4 nd 2 nd 11
4.3.3. Determinacin de compuestos voltiles clorados y aromticos. Cromatografa de gases capilar con detectores de conductividad electroltica (ELCD) y fotoionizacin (PID) en serie usando sistemas de introduccin por inyeccin directa o purga-atrapamiento Para el anlisis de estos compuestos se propone el mtodo EPA 8021B, ya que no precisa el empleo de equipos complejos como el GC-MS. Este mtodo es muy seguro para conocer si el analito esta ausente en la muestra, sin embargo su presencia hay que confirmarla por otro mtodo, ya que la identificacin por el mtodo EPA 8021B se basa en la comparacin de las respuestas de dos detectores y los tiempos de retencin en ellos de los patrones, lo que es bastante inseguro. Constituye por tanto un procedimiento orientativo de la presencia de estos compuestos, para confirmar se precisa de una segunda columna o confirmacin por GC-MS. Como patrones internos se proponen el fluorobenceno y el 2-bromo1-cloropropano. Los patrones de sustitucin (surrogates) que se proponen son el 1,4-diclorobutano y el bromoclorobenceno. Se precisa al menos cinco niveles de calibracin. El tratamiento de la muestra para extraer los analitos se lleva a cabo de forma anloga al procedimiento anterior.
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4.3.4. Determinacin de Compuestos Orgnicos Voltiles (VOC) mediante GC/MS con columna capilar. El uso del sistema GC/MS permite la confirmacin de la mayora de los compuestos orgnicos voltiles, de ah el inters de su uso. El procedimiento estndar ms empleado es el EPA 8260B, que puede aplicarse a 121 analito, la mayora de los cuales pueden aislarse de la muestra empleando el procedimiento de purga-atrapamiento antes descrito (EPA 5035) (Tabla 4.3.2). Aunque pueden usarse otros mtodos de preparacin/introduccin como la extraccin con hexadecano (EPA 3820), espacio de cabeza para slidos (EPA 5021), destilacin azeotrpica (EPA 5031), destilacin a vaco (EPA 5032), y los cartuchos de sorcindesorcin (EPA 5041A). Se ha sugerido una serie de configuraciones columna/instrumento para su uso en el mtodo EPA 8260B, as la columna capilar megabore VOCOL de 60 m x 0.75 mm ID con un programa de temperatura de 10C a 160C. Esta configuracin acepta la entrada de los compuestos de la trampa, pero puede sobrecargar el espectrmetro de masas y precisa un separador jet. Otra alternativa es la columna HP de 25 m x 0.20 mm ID, aunque requiere una divisin (split) del flujo procedente de la trampa, generalmente 50:1. Sin embargo, un flujo de columna de 1ml/min puede ser introducido directamente en el detector de masas. El uso de estas configuraciones, con un programa de presiones adecuado puede permitir el anlisis de ms de 80 analitos usando 7 patrones internos y patrones de sustitucin (surrogates) para la demarcacin de lmites de tiempos de retencin, con un desarrollo cromatogrfico total de 18 min. La Tabla 5 presenta una lista de compuestos analizados por este mtodo en orden de elucin y los lmites prcticos de cuantificacin empleando 5 ml de purga. La calibracin por el mtodo EPA 8260B requiere al menos 5 niveles de calibracin, situndose el punto ms bajo en las proximidades del lmite de deteccin. Los compuestos de referencia (surrogates), al igual que los analitos deben calibrarse a cinco niveles diferentes de concentracin.
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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.3.2.- Compuestos orgnicos voltiles que se analizan con los mtodos EPA 5035 y EPA 8260B. Tiempos de elucin1 y valores de lmites prcticos de cuantificacin Analito
Diclordifluorometano Clorometano Cloruro de vinilo Bromometano Cloroetano Triclorofluorometano Etanol Dietil eter Acroleina 1,1-dicloroeteno Acetona Acetonitrilo Iodometano Disulfuro de carbono Cloruro de alilo Cloruro de metileno Acrilonitrilo trans-1,2-dicloroeteno Metil-t-butil eter 1,1-dicloroetano Acetato de vinilo 2,2-dicloropropano cis-1,2-dicloroeteno 2-butanona Propionitrilo Acrilato de metilo Bromoclorometano Metacrilonitrilo Tetrahidrofurano Cloroformo 1,1,1-tricloroetano Dibromofluorometano 1-clorobutano Isobutanol
1
Tiempo de retencin (min)

1,24 1,39 1,48 1,75 1,84 2,08 2,09 2,39 2,51 2,60 2,68 2,69 2,75 2,81 3,03 3,19 3,54 3,54 3,58 4,18 4,32 5,02 5,05 5,11 5,19 5,26 5,37 5,37 5,43 5,53 5,71 5,74 5,88 5,90
PQL (Pg/L)
3 2 1 10 2 3 250 5 25 0,12 25 50 2 10 5 2 20 2 5 2 2 10 2 10 50 5 2 50 5 2 2 -10 250
Columna HP 624 con 25 m x 0.20 mm id 1,12 Pm, relacin de split 50:1, flujo constante de 1,00 ml/min, programa de temperatura: isoterma a 35 C durante 4 min rampa de 12,5 C/min hasta alcanzar 200C
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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.3.2. (continuacin).- Compuestos orgnicos voltiles que se analizan con los mtodos EPA 5035 y EPA 8260B. Tiempos de elucin1 y valores de lmites prcticos de cuantificacin Analito Tiempo de retencin PQL (min) (Pg/L)
Tetracloruro de carbono 1,1-dicloropropeno Benceno 1,2-dicloroetano Fluorobenceno 1,4-difluorobenceno Tricloroeteno 1,4-dioxano 1,2-dicloropropano Dibromometano Metacrilato de metilo Bromodiclorometano 2-nitropropano 2-cloroetilvinil eter cis-1,3-dicloropropeno 4-metil-2-pentanona Tolueno trans-1,3-dicloropropeno Metacrilato de etilo 1,1,2-tricloroetano Tetracloroeteno 1,3-dicloropropano 2-hexanona Dibromoclorometano 1,2-dibromoetano Clorobenceno 1,1,1,2-tetracloroetano Etilbenceno P+m-xileno o-xileno Estireno Bromoformo Isopropilbenceno Bromofluorobenceno Bromobenceno 1,1,2,2-tetracloroetano
1
5,92 5,94 6,20 6,24 6,57 6,74 7,03 7,15 7,30 7,44 7,52 7,66 7,94 8,06 8,20 8,41 8,57 8,86 9,01 9,07 9,20 9,25 9,39 9,51 9,61 10,20 10,31 10,35 10,48 10,94 10,96 11,16 11,38 11,54 11,70 11,75
2 2 1 2 --3 100 2 2 10 10 20 2 2 5 2 2 2 2 2 2 10 1 5 2 1 2 3 2 2 10 10 -2 2
Columna HP 624 con 25 m x 0.20 mm id 1,12 Pm, relacin de split 50:1, flujo constante de 1,00 ml/min, programa de temperatura: isoterma a 35 C durante 4 min rampa de 12,5 C/min hasta alcanzar 200C
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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.3.2. (continuacin).- Compuestos orgnicos voltiles que se analizan con los mtodos EPA 5035 y EPA 8260B. Tiempos de elucin1 y valores de lmites prcticos de cuantificacin Analito Tiempo de retencin (min) PQL (Pg/L)
1,2,3-tricloropropano 11,78 3 1,4-dicloro-2-buteno 11,81 5 n-propilbenceno 11,86 2 2-clorotolueno 11,94 2 4-clorotolueno 12,07 2 1,3,5-trimetilbenceno 12,07 2 p-isopropiltolueno 12,45 2 Pentacloroetano 12,45 10 2 tert-butilbenceno 12,45 1,2,4,-trimetilenceno 12,50 2 sec-butilbenceno 12,70 2 1,3-diclorobenceno 12,81 2 1,4-diclorobenceno 12,92 2 1,2-diclorobenceno 13,35 2 n-butilbenceno 13,36 2 Hexacloroetano 13,64 5 1,2-dibromo-3-cloropropano 14,27 10 Nitrobenceno 14,27 20 1,2,4-triclorobenceno 15,24 2 Hexaclorobutadieno 15,46 2 Naftaleno 15,52 5 1,2,3-triclorobenceno 15,81 2 1 Columna HP 624 con 25 m x 0.20 mm id 1,12 Pm, relacin de split 50:1, flujo constante de 1,00 ml/min, programa de temperatura: isoterma a 35 C durante 4 min rampa de 12,5 C/min hasta alcanzar 200C
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4.4. ANLISIS DE COMPUESTOS SEMIVOLTILES 4.4.1. Tcnicas de extraccin Extraccin lquido-lquido discontinua (EPA 3510C) En este mtodo se lleva a cabo un reparto de los analitos entre una matriz acuosa y una fase orgnica, generalmente CH2Cl2. Se emplea un embudo de decantacin de 2 L lo que hace que el procesado de un gran nmero de muestras sea un trabajo intensivo, aunque el mtodo, en general, es rpido. No obstante, el procedimiento presenta inconvenientes, que consumen tiempo cuando se forman emulsiones entre las fases. Una extraccin bsica neutra y cida (BNA) requiere de 300 a 500 ml de disolvente. El ajuste del pH durante la extraccin debe realizarse siguiendo las normas establecidas en la purificacin cido-base (Mtodo EPA 3650) descrita en el apartado que sigue (Tcnicas de purificacin)
Extraccin lquido-lquido en continuo (EPA 3520C) Con este mtodo se evita el problema de las emulsiones, sin embargo, la extraccin lquido-lquido en continuo precisa un perodo de extraccin de 18-24 horas. Sin embargo, no constituye un trabajo de laboratorio tan intensivo como en el caso anterior, y un laborante puede procesar un gran nmero de muestras. Se suele utilizar de 300 a 500 ml de disolvente, que puede ser ms ligero o ms pesado que el agua, dependiendo del diseo del extractor. Un pozo de disolvente se sita en el fondo de la cmara de extraccin cuando se emplea disolventes ms pesados que el agua como el CH2Cl2. Los analitos extrados se diluyen y se separan lentamente con la ayuda de un sifn. Los diseos ms modernos aaden una llave de cierre al sifn y un dispositivo Kuderna-Danish con columna Snyder al dispositivo de extraccin, lo que permite la concentracin del extracto sin transferirlo a otro dispositivo. Una tecnologa reciente aade una membrana hidrofbica en el fondo de la cmara de agua, lo que permite una separacin rpida y eficiente del disolvente de la fase acuosa. Si se precisa ajuste del pH, la muestra normalmente se acidifica y luego se alcaliniza, debido a que un tratamiento largo con bases provoca la hidrlisis de numerosas sustancias, como ocurre con los steres ftlicos, que se hidrolizan a sus respectivos alcoholes y cido ftlico. Ello hace tambin que la mayora de los patrones de sustitucin (surrogates) se aslen en la primera extraccin.
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Extraccin soxhlet para slidos Este mtodo (EPA 3540C) suele considerarse como un procedimiento exhaustivo para extraer los contaminantes a partir de las matrices slidas, y constituye el mtodo de referencia que valida cualquier otro mtodo de extraccin. El material slido se mezcla con sulfato sdico y se somete a extraccin soxhlet durante 16-24 h, siendo necesario usar unos 300 ml de disolvente. El disolvente puede ser menos o ms denso que el agua, pudiendo tambin emplearse mezclas. Cuando se emplean disolventes ms pesados que el agua como el Freon o el cloruro de metileno, debe colocarse un tapn de lana de vidrio recubriendo la parte superior de la muestra para evitar que sobrenaden partculas de muestra. La extraccin soxhlet tambin puede emplearse en continuo (EPA 3541).
Extraccin mediante sonicacin (EPA 3550B) La muestra se mezcla con sulfato sdico anhidro y se extrae tres veces con la mezcla de disolventes acetona: CH2Cl2 (1:1). El sistema de ultrasonidos debe tener una potencia superior a 300 vatios. La aplicacin de la tcnica debe validarse en funcin de la matriz y los analitos con la extraccin soxhlet, para verificar que la sonicacin no provoca la destruccin de los analitos. Extraccin con fluidos supercrticos (EPA 3560) La extraccin de fluidos supercrticos permite extraer una muestra slida a elevadas condiciones de presin y temperatura (por tanto de forma eficiente) empleando un extractante de que se elimina con facilidad como es el dixido de carbono (340 atm, 80C, flujo de 500-1000 ml/min). El fluido supercrtico se produce a una combinacin de presin y temperatura por encina del punto crtico. El fluido supercrtico es un excelente disolvente de analitos no polares incrementndose su poder solubilizante cuando lo hace la densidad, la cual a su vez depende de la presin. Para extraer analitos ms polares es necesario aadir modificadores del fluido como el metanol, acetonitrilo u otros disolventes comunes. Una vez que el proceso se concluye y se reduce la presin el dixido de carbono se vaporiza, dejando el analito concentrado en un disolvente apropiado. Los instrumentos de extraccin pueden acoplarse tanto a la cromatografa de gases (GC) como lquida (HPLC) para extraccin y anlisis automtico. La EPA ha propuesto un mtodo, aun no definitivo, el 3561, para la extraccin de hidrocarburos poliaromticos en suelos.
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4.4.2. Tcnicas de purificacin Los mtodos de purificacin reducen los compuestos interferentes presentes en el extracto de los analitos antes del anlisis. Ya que los suelos y en general las muestras medioambientales son matrices extraordinariamente complejas, para alcanzar los lmites de deteccin de los mtodos (MDL) que establecen las normativas es necesario eliminar la mayor cantidad posible de suciedad de los extractos que se analizan. La mayora de los MDL se obtienen de matrices muy simples dopadas con el analito, como agua o arena purificadas. De ah la necesidad de la purificacin cuando se abordan muestras reales. La mayora de los procedimientos de purificacin se basan en el uso de la extraccin slido-lquido en columna, habindose recomendado sorbentes slidos muy diversos en funcin de la naturaleza qumica de las sustancias que se quieren purificar. Columna de almina para la purificacin de steres de ftalatos, nitrosaminas y derivados del petrleo (EPA 3610B y 3611B) Este procedimiento de purificacin considera diversos grados de actividad y pH de la almina (Al2O3). La almina se prepara a partir del Al(OH)3, que se deshidrata y calcina a 900C en atmsfera de dixido de carbono. Las partculas de xido de aluminio resultante estn recubiertas de una capa de oxicarbonato de aluminio [Al2(OH)5]2CO3. Esto permite el ajuste del pH del sorbente a valores cidos, neutros y bsicos, que permiten aplicaciones diferentes. Por otro lado, la adicin de cantidades diferentes de agua permite desactivar la almina en mayor o menor proporcin, y sirve de catalizador activo para la descomposicin de compuestos anhidros. Esta columna esta indicada para la purificacin de steres de ftalatos y nitrosaminas (EPA 2610B). El mtodo de purificacin con almina puede adaptarse fcilmente para la purificacin de residuos del petrleo y su separacin en fracciones aliftica, aromticas y polares antes del anlisis (EPA 3611B). Columna de Florisil para la purificacin de residuos de plaguicidas (EPA3620B) El Florisil es una forma activada del silicato de magnesio. Tiene un carcter ms cido que la almina o el gel de slice pero aun puede considerarse como fase de carcter anftero. Suele emplearse para la purificacin de extractos que contienen plaguicidas, y es un adsorbente ms
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suave que la gel de slice o la alumina en relacin a la descomposicin de los compuestos. Se han propuesto procedimientos especficos para la purificacin de steres de ftalatos, nitrosaminas, compuestos nitroaromticos e hidrocarburos clorados. El Florisil presenta una capacidad adsortiva variable de unos lotes a otros, por lo que hay que estandarizarla con el cido laurico. De esta forma puede calcularse la cantidad de Florisil necesaria para llevar a cabo una separacin determinada. El valor de cido laurico se determina midiendo la cantidad del mismo en miligramos por gramo que se adsorbe en el Florisil utilizando una disolucin de hexano (ASTM, 1980). Segn los procedimientos propuestos por la EPA para la purificacin de plaguicidas organofosforados (EPA 614) y plaguicidas clorados y PCB (EPA 617), el tamao de la columna de Florisil se establece dividiendo el valor de cido laurico por 110 y multiplicando por 20 g. Columna de slica gel para purificar sustancias no polares (hidrocarburos del petrleo, PCB, PAH). EPA 3630C La slica gel es la forma precipitada del cido saliclico (H3SiO3) que se forma por adicin de cido sulfrico al silicato sdico. Forma puentes de hidrgeno muy fuertes con los materiales polares y puede ocasionar la descomposicin de los analitos. El material es algo soluble en metanol, que nunca debe usarse como disolvente de elucin. La slica gel permite eliminar cuantitativamente sustancias ligeramente polares de disoluciones de hexano y sirve para aislar los hidrocarburos del petrleo de sus interferencias en los procedimientos para anlisis de los DRO y los TPH por IR. El procedimiento puede tambin aplicarse en el anlisis de PCB, PAH y fenoles derivatizados. Columna de gel permeacin (GPC). Mtodo EPA 3640A El material que permite este tipo de purificacin es un copolmero entrecruzado de divinilbenceno y estireno (gel hidrofbico). Usando disolventes orgnicos puede usarse para separar selectivamente macromolculas como protenas, fosfolpidos, resinas, ligninas, cidos flvicos y hmicos del extracto de la muestra al favorecer su paso por el gel, reteniendo las molculas de menor tamao en los poros del gel. Los analitos estudiados se desplazan a travs del gel con un disolvente orgnico de menor tamao como cloruro de metileno. La columna debe calibrarse con una mezcla de aceite de maz, bis(2-etilhexil)ftalato, metoxiclor, perileno y azufre. Los eluyentes se detectan en el flujo con un detector UV. Hay que considerar que la mitad de la muestra se pierde en el proceso de purificacin debido a la introduccin en la columna con un loop de
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inyeccin automtico. Por tanto, si se emplea una GPC el control de calidad de los anlisis mediante dopado de la matriz (spike) y adicin de patrones de sustitucin (surrogates) debe hacerse en concentraciones dobles a lo normal. Este problema puede eliminarse mediante inyeccin directa en la GPC con una vlvula de cuatro vas con jeringa, o empleando un automuestreador sin loop de inyeccin. El empaquetamiento de la columna con el polmero de estirenodivinilbenceno no es completamente inerte y adsorbe en su superficie molculas orgnicas, especialmente anillos aromticos o sustituyentes ricos en electrones. Este efecto no es muy pronunciado al eluir con disolventes como cloruro de metileno o tolueno debido al elevado coeficiente de particin de los analitos a favor de estos eluyentes. Sin embargo, cuando se utiliza disolventes con menor poder de interaccin como el ciclohexano o el acetato de etilo, se produce un incremento sustancial de los tiempos de retencin de los PAH y PCBs. Este efecto resulta til cuando la purificacin va dirigida a analitos en matrices constituidas por hidrocarburos (Conrad et al, 1994). Purificacin por reparto cido-base (EPA 3650B) El procedimiento puede considerarse como una separacin lquidolquido en continuo y discontinuo. Se suele aplicar a muestras de aguas a las que se ajusta el pH a valores > 12 con hidrxido sdico, extrayndose los compuestos orgnicos bsicos y neutros con CH2Cl2. Esta fraccin se denomina base-neutra (BN). Cuando el pH se ajusta a valores < 2 con cido sulfrico la fraccin que se extrae de la muestra se denomina cida (A). Cuando la muestra se extrae con el sistema continuo se extrae primero la fraccin cida, ajustndose entonces el pH para la extraccin bsica. Purificacin para eliminar el azufre (EPA 3660B) La muestra se agita con polvo de cobre, mercurio metlico, o sulfito de tetrabutilamonio para eliminar las interferencias de azufre elemental. El ltimo reactivo es el ms suave y puede emplearse para extractos de plaguicidas organofosforados y organoclorados. El azufre es un contaminante muy comn, y ya que tiene carcter no polar es fcilmente cromatografiado en sistemas GC como sustancia semivoltil, por lo que puede dar una seal dominante en el extracto. El azufre puede tambin eliminarse por GPC.
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Purificacin mediante mezcla cido sulfrico/permanganato (EPA 3665A) Constituye una purificacin fuertemente oxidante que puede eliminar la mayora de las interferencias excepto los PCB, bencenos clorados y naftalenos clorados (ceras halogenadas). Algunos hidrocarburos clorados pueden tambin superar el tratamiento.
4.4.3. Tcnicas de determinacin Determinacin de acrilamida por derivatizacin y GC-ECD (EPA 8032A) Este mtodo se emplea para la determinacin de trazas de acrilamida monomrica (CAS No. 79-06-01) en matrices acuosas, aunque es aplicable a otras matrices empleando mtodos adecuados de extraccin. El mtodo se basa en la bromacin del doble enlace de la acrilamida. El producto de la reaccin (2,3-dibromopropionamida) se extrae de la mezcla de reaccin con acetato de etilo en presencia de sulfato sdico como agente de fuerza inica. Anlisis de aguas Se mezcla 50 ml de muestra con 7,5 g de KBr y se ajusta el pH de la disolucin con HBr a valores comprendidos entre 1 y 3. Se aade agua de bromo y se cierra el matraz de reaccin mantenindolo en la oscuridad durante una hora a 0C. El bromo origina la siguiente reaccin de derivatizacin
Reaccin de derivatizacin de la acrilamida
El exceso de bromo se reduce con tiosulfato sdico. Se aade entonces exceso de sulfito sdico y la mezcla se extrae dos veces con porciones de 10 ml de acetato de etilo durante 2 min. Los extractos combinados se secan con sulfato sdico y se aade dimetil ftalato como patrn interno y el volumen se lleva a 25,0 ml con acetato de etilo en un matraz protegido a la accin de la luz.
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Opcionalmente puede llevarse a cabo una etapa de purificacin con Florisil. El anlisis se lleva a cabo por GC con columna empaquetada libre de polisteres de cidos grasos (FFAP) y detector ECD. La identificacin de estos compuestos puede confirmarse con una segunda columna de diferente polaridad o mediante GC-MS. La calibracin debe realizarse con cinco puntos mediante factor de respuesta o empleando la propia curva, que debe probarse cada da. El lmite de deteccin del mtodo es 0,032 Pg/L de monmero de acrilamida. Anlisis de suelos /sedimentos La extraccin se lleva a cabo mediante un dispositivo soxhlet (EPA 3540C). Se debe descargar cualquier capa de agua que pueda recubrir la muestra y se mezcla cuidadosamente. Se mezclan 10 g de muestra slida con 10 g de sulfato sdico y se coloca en el sistema extractor. Se introducen en el mismo unos 300 ml de acetona/hexano (1:1) (v/v) en el matraz de fondo redondo, que una vez acoplado al extractor se pone en funcionamiento durante 16-24 horas con 4-6 ciclos/hora. El extracto se seca pasndolo por una columna con unos 10 cm de sulfato sdico anhidro. Recoger el extracto en un dispositivo de Kuderna-Danish para su concentracin, llevando a cabo entonces un cambio de disolvente aadiendo acetato de etilo en el mismo dispositivo y procediendo a concentrar de nuevo hasta el volumen necesario.
Determinacin de fenoles por GC-FID sin derivatizacin y por GC-ECD por formacin de derivados con bromuro de pentafluorobencilo (EPA 8041) El mtodo describe el uso de procedimientos cromatogrficos con columna capilar para el anlisis de fenoles utilizando dispositivos de columna simple y columna doble con doble detector. Las columnas se conectan mediante una pieza en t con dos detectores idnticos. Los fenoles pueden analizarse sin derivatizar con FID aunque la sensibilidad del mtodo no es adecuada para todos los casos. Para confirmar la presencia de los diversos compuestos, estos se derivatizan mediante metilacin para obtener los correspondientes anisoles o bien mediante bromuro de pentafluorobencilo (PFBBr), analizndose en este caso mediante GC-ECD, aunque los lmites de deteccin de mtodo
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con FID son superiores al GC-ECD. Existen tres fenoles que no se derivatizan con PFBBr como el 2,4-dinitrofenol, 2-metil-4,6-dinitrofenol y Dinoseb. Como patrones internos se aconsejan el 2,5-dibromotueno y el 2,2,5,5-tetrabromobifenilo. Como patrones de sustitucin (surrogates) se recomienda el uso de 2-fluorofenol y 2,4-dibromofenol. Los mtodos de extraccin propuestos por la EPA ya comentados previamente, como el 3510 y 3520 para muestras de agua con valores de pH d 2 con cloruro de metileno. Para muestras slidas la extraccin se lleva a cabo mediante el mtodo 3540 3550, y para muestras no acuosas el 3580. Si la extraccin se lleva a cabo mediante los mtodos 3540 3550 se recomienda una purificacin posterior empleando el mtod EPA 3650 de particin cidobase.
-Reaccin de derivatizacin de los fenoles-
Si la determinacin de los fenoles se lleva a cabo sin derivatizacin previa al anlisis cromatogrfico, el disolventes debe sustituirse por 2propanol. La Tabla 4.4.1. muestra los fenoles ms frecuentemente estudiados con el mtodo que se propone.
Tabla 4.4.1.- Fenoles y MDLs que se estudian por el mtodo EPA 8041 Analito 2-sec-butil-4,6-dinitrofenol 4-Cloro-3-metilfenol 2-Clorofenol Cresoles (metilfenoles) 2-Ciclohexil-4,6-dinitrofenol 2,4-Diclorofenol 2,6-Diclorofenol 2,4-Dimetilfenol 2,4-Dinitrofenol MDL Pg/L -0,36 0,31 --0,39 -0,32 13,0 Analito 2-Metil-4,6-dinitrofenol 2-Nitrofenol 4-Nitrofenol Pentaclorofenol Fenol Tetraclorofenoles Triclorofenoles 2,4,6-Triclorofenol MDL Pg/L 16,0 0,45 2,8 7,4 0,14 --0,64
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Determinacin de steres de ftalatos (EPA 8061) El mtodo permite el anlisis de diversos sters de ftalatos en matrices acuosas y slidas, incluyendo aguas subterrneas, lixiviados, suelos, fangos y sedimentos. Los anlisis se llevan a cabo mediante GC con dos columnas capilares y detectores ECD, utilizando un simple inyector con un separador en T. Como columnas se sugieren las DB-5 y DB-1701. Se lleva a cabo una calibracin interna (empleando como patrn el benzoato de bencilo) con una curva de calibrado de cinco puntos, empleando factores de respuesta o lectura directa en la curva. El calibrado se realiza diariamente. Como patrones de sustitucin se sugieren el ftalato de difenilo, el isoftalato de difenilo y el ftalato de dibencilo. Si la muestra es lquida se ajusta el pH a 5-7 y se extrae con cloruro de metileno mediante los mtodos EPA 3510 3535. El mtodo 3520 no se recomienda para la extraccin de muestras acuosas porque los steres de cadena larga (dihexil ftalato, bis-(2etilhexil)ftalato, di-n-octil ftalato y dinonil ftalato) tienden a adsorberse en el material de vidrio y las recuperaciones son inferiores al 40 %. Las muestras slidas pueden extraerse con mezcla cloruro de metileno/acetona (1:1) o hexano/acetona (1:1) empleando los procedimientos EPA 3540 3550. Para la purificacin los mtodos 3610 y 3620 con columnas de almina o cartridges de Florisil. De esta forma se recuperan cuantitativamente el bis(2-metoxietil) ftalato, bis(2-etoxietil) fatalato y bis(2-n-butoxietil) ftalato. Si las muestras tienen ceras o lpidos se pueden eliminar mediante cromatografa de gel permeacin (mtodo EPA 3640). Con los extractos se lleva a cabo un cambio de disolvente a hexano o acetonitrilo antes del anlisis por GC La tabla 4.4.2. muestra los ftalatos usualmente estudiados con el mtodo propuesto.
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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.4.2.- Ftalatos y MDLS que se estudian con el Mtodo EPA 8061 Analito Dimetil ftalato Dietil ftalato Diisobutil ftalato Di-n-butil ftalato Bis(4-metil-2-pentil) ftalato Bis(2-metoxietil) ftalato Diamil ftalato Bis(2-etoxietil) ftalato Hexil-2-etilhexil ftalato Dihexil ftalato MDL Pg/L 0,64 0,25 0,12 0,33 0,37 0,51 0,11 0,27 0,13 0,068 Analito Butil bencil ftalato Bis(2-n-butoxietil) ftalato Bis(2-etilhexil) ftalato Diciclohexil ftalato Di-n-octil ftalato Dinonil ftalato Difenil ftalato (surrogate) Difenil isoftalato (surrogate) Dibencil ftalato (surrogate) Benzoato de bencilo (patrn interno) MDL Pg/L 0,042 0,084 0,27 0,022 0,049 0,022 nd nd nd nd
Determinacin de plaguicidas clorados por GC-ECD o GC-ELCD con columna capilar (EPA 8081A) Este mtodo incluye los PCB junto a los plaguicida clorados como analitos susceptibles de anlisis, no obstante los PCB deben analizarse empleando el mtodo EPA 8082, que considera procedimientos especficos par la purificacin y cuantificacin de los PCB. Por tanto si se espera la presencia de PCB el extracto de la muestra puede dividirse en dos antes de llevar a cabo las etapas de purificacin, asignado cada una de ellas para cada mtodo: el 8081 para plaguicidas clorados y el 8082 para PCB. La identificacin de los compuestos debe confirmase con una segunda columna, o emplear el Mtodo EPA 8270 basado en el sistema GC/MS para llevar a cabo la confirmacin, si la sensibilidad lo permite. El mtodo utiliza calibracin mediante patrn interno con pentacloronitrobenceno (PCNB) y decaclorobifenilo (DCB) y 2,4,5,6tetracloro-m-xileno (TCMX) como patrones de sustitucin (surrogates). Cada muestra se dopa (spike) con las sustancias de referencia antes de llevar a cabo la extraccin. Las muestras de agua se extraen a pH neutro con cloruro de metileno mediante extraccin lquido-lquido discontinua (EPA 3510) o continua (EPA 3520). Para muestras slidas se emplea la mezcla hexano:acetona (1:1) y extraccin soxhlet (EPA 3540 3541), extraccin con fluidos presurizados (EPA 3545) o extraccin con ultrasonidos (EPA 3550). Al dopar muestras slidas deben mezclarse con las sustancias de dopaje durante 1 2 min dejndolas entonces en reposo durante una hora antes de la extraccin.
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Se han propuesto diversos mtodos de purificacin en funcin de la serie de analitos que se estudien. Los plaguicidas y PCBs pueden separarse usando un fraccionamiento con gel de slice (mtodo EPA 3630). Para eliminar steres de ftalatos puede emplearse el mtodo EPA 3610 (almina), para separar compuestos alifticos, aromticos y nitrogenados el mtodo EPA 3620 (florisil). El azufre elemental puede eliminarse con el mtodo 3660 antes comentado. El DDT y el endrin son particularmente sensibles a las condiciones del inyector GC y la columna. Las condiciones de la columna deben controlarse cada da inyectando un patrn de calibracin de concentracin media conteniendo DDT y endrin. El DDT se degrada a DDD y DDE. El endrin se degrada a endrin aldehdo y endrin cetona. Si la rotura de cualquiera de ellos excede el 15 % el sistema debe ser corregido. Los clculos necesarios para ello se muestran a continuacin: rea de pico [DDD + DDE] % de rotura de DDT = -------------------------------------------------- x 100 rea de pico [DDD + DDE + DDT]
rea de pico [aldehdo + cetona] % de rotura de endrin = ----------------------------------------------- x 100 rea de pico [endrin + cetona + aldehdo] La calibracin se lleva a cabo con una curva de cinco puntos empleando factores de respuesta o la propia curva de calibracin. La identificacin del analito se confirma con una segunda columna de polaridad diferente de la columna analtica. Esto suele realizarse colocando las columnas en paralelo con inyectores y ECDs. Las mezclas multicomponentes como clordano, estrobano (camfenos y pirenos clorados) y el toxafeno estn sujetos a alteraciones, por eso la cuantificacin se lleva a cabo midiendo el rea del conjunto completo de picos por encima de la lnea base. Algunos analistas usan picos especficos como el D-clordano y el J-clordano como respuesta a la presencia de dicho compuesto. Esta tcnica es muy til cuando algn analito no buscado coextrae de la matriz, como los combustibles del petrleo. La Tabla 4.4.3. muestra los compuestos normalmente estudiados mediante este procedimiento.
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Tabla 4.4.3.- Plaguicidas clorados en orden de elucin que se analizan con el Mtodo EPA 8081A con dos columnas Analito Trifluralin TCMX Hexaclorobenceno D-BHC J-BHC E-BHC Heptaclor G-BHC Aldrin Isodrin Heptaclor epxido J-Clordano D-Clordano Endosulfan I 4,4-DDE Dieldrin Endrin Toxafeno (pico principal) 4,4-DDD Endosulfan II 4,4-DDT Endrin aldehdo Endosulfan sulfato DCB 4,4-Metoxiclor Endrin cetona Octacloronaftaleno DBC RT (min) DB 608 3,49 4,25 5,73 6,14 7,40 7,63 8,51 8,92 9,69 11,54 11,84 12,47 13,13 13,20 14,21 14,46 15,95 16,29 16,51 16,71 17,75 18,10 18,61 19,90 21,49 21,81 28,15 28,22 RT (min) DB 1701 6,24 4,86 6,55 7,50 8,84 11,51 9,58 12,46 10,95 12,31 13,14 14,40 14,62 14,21 15,00 15,65 16,46 17,34 18,17 18,41 18,84 20,11 21,14 21,60 21,35 23,10 27,24 27,40
Determinacin de bifenilos policlorados (PCB) por cromatografa capilar (GC-ECD o ELCD (EPA 8082) Existen 206 PCB individuales que se dividen en homlogos (series de PCB con el mismo nmero de cloros, como los hexaclorobifenilos) y congneres (PCB individuales con el mismo nmero de cloros). Tambin puede establecerse una divisin entre PCBs planares y no planares. Los PCBs que poseen una configuracin planar tienen ambos anillos en el mismo plano y se supone que mimetizan los efectos txicos de las dioxinas. Los PCB planares se denominan tambin PCB txicos. Los PCB se comercializan en
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mezclas denominadas Aroclor, que difieren segn el procedimiento de fabricacin. El mtodo EPA 8082 que utiliza la cromatografa de gases con detector ECD no posee suficiente resolucin para identificar especficamente congneres individuales de PCB. Para el anlisis de congneres individuales se precisa combinar la cromatografa de gases con el detector de masas de alta resolucin, siendo por tanto necesaria una resolucin semejante al anlisis de las dioxinas. La identificacin de analitos con gran multiplicidad de picos, como el clordano, toxafeno y los PCB se puede llevar a cabo mediante un combinacin de reconocimiento de pautas (pattern recognition) y los tiempos de retencin. Los diferentes Aroclors (Tabla 4.4.4) se identifican por los intervalos de los tiempos de retencin de los diversos congneres presentes en los mismos. La cuantificacin se basa en el empleo de picos indicadores que generalmente estn presentes en ms de una mezcla de PCB. Para cada Aroclor se eligen seis picos y cada pico se calibra para representar el Aroclor. De esta forma se obtienen ficheros de calibracin para los PCB 1016, 1221, 1232, 1242, 1248, 1254 y 1260. El cromatograma de la muestra se procesa respecto a cada fichero de calibracin (Figs. 4.1.2. a 4.1.4.). Si los seis picos del fichero de calibracin proporcionan aproximadamente el mismo valor, se puede asegurar que el Aroclor es una mezcla simple y no una mezcla de mezclas. El procedimiento de calibrado puede aplicarse a la mayora de los Aroclors porque no estn sujetos a variacin en la distribucin de congneres en el proceso de manufactura (aunque hay dos patrones del 1254 ligeramente diferentes), adems estos compuestos son muy estables y no sufren cambios importantes en el medio ambiente, y las posibles interferencias se eliminan de forma eficiente mediante tratamiento con mezcla cido sulfrico/permanganato, como se ha descrito previamente
Tabla 4.4.4.- Mezclas de PCBs que se analizan por el mtodo EPA 8082
Mezcla de PCB Aroclor 1016 Aroclor 1221 Aroclor 1232 Aroclor 1242 N CAS 12674-11-2 11104-28-2 11141-16-5 53469-21-9 Mezcla de PCB Aroclor 1248 Aroclor 1254 Aroclor 1260 N CAS 12672-29-6 11097-69-1 11096-82-5
La extraccin de los compuestos se lleva a cabo a partir de la muestra de suelo mediante tratamiento soxhlet con hexano:acetona (1:1) (como se ha descrito previamente, EPA 3540 3541), tratando el extracto resultante con cido sulfrico concentrado (EPA 3560 y 3565) que elimina la mayora de los plaguicidas clorados incluidos el clordano y el toxafeno. Los naftalenos policlorados (PCN) y terfenlicos (PCT), y los compuestos bromados anlogos pueden superar el ataque con sulfrico y originar interferencias sustanciales en el anlisis de PCB.
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Fig.4.1.2.- PCB 1016, 1242, y 1248
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Fig. 4.1.3.- PCB 1221, 1232, y 1242
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Fig. 4.14.- PCB 1248, 1254 y 1260
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Hidrocarburos clorados mediante cromatografa de gases capilar y detector ECD (EPA 8121) El procedimiento permite la determinacin de hidrocarburos clorados en muestras medioambientales, empleando un sistema cromatogrfico de columna-detector simple o columna-detector doble. Las columnas son de distinta polaridad y estn conectadas a una T de inyeccin y dos detectores idnticos. La extraccin de muestras acuosas se lleva a cabo generalmente a pH neutro o tal como se reciben con cloruro de metileno mediante los mtodos de extraccin lquido-lquido discontinuo (EPA 3510) o continuo (EPA 3520). Las muestras de matrices slidas se extraen mediante extraccin soxhlet (EPA 3540 3541) o con ultrasonidos (EPA 3550) con mezcla cloruro de metileno/acetona (1:1). La purificacin de las muestras se lleva a cabo con Florisil (EPA 3620) y/o permeacin sobre gel (EPA 3640). Cuando se aprecie interferencia de azufre se recomienda el procedimiento EPA 3660. Antes del anlisis cromatogrfico el disolvente debe cambiarse a hexano usando un concentrador Kuderna-Danish, ya que cualquier rastro de cloruro de metileno origina un pico de disolvente muy ancho. Los patrones de sustitucin que se aconsejan en la determinacin con el mtodo de columna simple son el D,2,6-triclorotolueno, 1,4dicloronaftaleno y 2,3,4,5,6-pentaclorotolueno, y como patrones internos se aconsejan el 2,5-dibromotolueno, 1,3,5-tribromobenceno y D,Ddibromo-m-xileno. La Tabla 4.2.5. muestra los compuestos normalmente estudiados mediante este procedimiento.
Tabla 4.4.5.- Hidrocarburos clorados, con sus MDL, por el mtodo EPA 8121 Compuesto Compuesto MDL Pg/L MDLs Pg/L
Cloruro de bencilo Triclorobenceno Cloruro de bencilo 2-Cloronaftaleno 1,2-Diclorobenceno 1,3-Diclorobenceno 1,4-Diclorobenceno Hexaclorobenceno Hexaclorobutadieno D-BHC E-BHC 2-5 6,0 180 1300 270 250 890 5,6 1,4 11 31 J-BHC G-BHC Hexaclorociclopentadieno Hexacloroetano Pentaclorobenceno 1,2,3,4-Tetraclorobenceno 1,2,4,5-Tetraclorobenceno 1,2,3,5-Tetraclorobenceno 1,2,4-Triclorobenceno 1,2,3-Triclorobenceno 1,3,5-Triclorobenceno 23 20 240 1,6 38 11 9,5 8,1 130 39 12
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Compuestos organofosforados por cromatografa de gases (EPA 8141A) Esta tcnica hace uso especfico del detector fotomtrico de llama (FPD) en el modo de anlisis de fsforo o el detector de nitrgeno-fsforo (NPD). El FPD contiene una llama que quema la muestra e ioniza cualquier tomo de fsforo que exista en el eluyente. El fsforo ionizado se detecta en el fotodetector. El corazn del detector NPD es una perla de cermica recubierta por una sal de un material fcilmente ionizable, generalmente rubidio. El calor crea una plasma superficial sobre la perla. Los compuestos de nitrgeno y o fsforo se ionizan y originan una corriente entre los polos cargados del dispositivo. Ambos detectores poseen una gran selectividad para las molculas que contienen fsforo y/o nitrgeno. Los analitos ms usuales que se estudian con estos detectores son los plaguicidas fosforados, aunque algunos disolventes de uso industrial muy frecuentes tambin se estudian con este sistema. Existe una gran diferencia entre los analitos de procedencia industrial y los plaguicidas ya que estos ltimos son muy lbiles. Las marcadas propiedades letales de estos compuestos, que lo hacen tiles como plaguicidas, se deben precisamente a la reactividad qumica de estas sustancias. Debido a ello el uso de procedimientos de tratamiento de muestra muy enrgicos como el empleo de cido o bases fuertes, adsorbentes muy activos en columna, o el empleo de condiciones extremas de sonicacin o de temperatura puede destruir la molcula de analito. Se puede emplear un procedimiento con columna dual/detector dual para el anlisis de extractos relativamente limpios. La extraccin de las muestras de agua se lleva a cabo con cloruro de metileno a pH neutro (EPA 3510 3520). Las muestras slidas se tratan con mezcla cloruro de metileno: acetona (1:1) (EPA 3540 3541). La purificacin de los extractos depende de la muestra que se analice. El empleo del Florisil (EPA 3620) origina recuperaciones inferiores al 85 % para algunos de los compuestos organofosforados y no es muy recomendable. Resultados aun peores se obtienen al emplear la purificacin mediante permeacin sobre gel (GPC), que est completamente desaconsejada. No obstante el empleo del detector FPD elimina en muchas circunstancias la necesidad de purificacin. Antes del anlisis cromatogrfico, debe llevarse a cabo una sustitucin de disolvente a hexano. Para el anlisis de estas sustancias se aconsejan diversos patrones de sustitucin, como el fosfato de tributilo y el
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fosfato de trifenilo, aunque estos compuestos son muy estables y no reflejan ningn tratamiento extremo que haya podido introducirse durante la preparacin de la muestra. No obstante son muy empleados. La Tabla 4.4.6. muestra los compuestos organofosforados que se analizan por este mtodo, junto a sus tiempos de retencin y valores de PQL.
Tabla 4.4.6.- Compuestos organofosforados, con tiempos de retencin y PQL, que se analizan por el mtodo EPA 8141A
Compuesto
Diclorvos 1-Bromo-2-nitrobenceno (IS) Mevinfos Demeton-O Etoprop Fosfato de tributilo (Surr) Sulfotepp Forato Naled Demeton-S Dimetoato Diazinon Disulfoton Metil paration Ronnel Merfos Tricloronato Paration Clorpirifos Fention Tokution
Stirofos
Bolstar Fensulfotion Famfur Fosfato de trifenilo (Surr) Metil azinfos Cumafos Surr: patrn de sustitucin
RT /SPB608 4,76 5,85 6,98 9,11 9,36 9,40 9,88 10,02 10,02 10,36 10,38 11,13 11,20 12,06 12,38 13,01 13,01 13,01 13,29 14,32 14,67 14,76 15,46 15,85 15,96 16,52 17,65 18,74
RT/DB-5 4,54 7,76 11,40 11,84 11,90 12,89 13,08 12,46 13,70 13,90 15,19 15,35 17,08 17,59 21,37 19,28 18,86 18,81 18,81 22,09 21,96 24,28 23,55 24,67 25,70 27,37 28,95
PQL Pg/L 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
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Determinacin de herbicidas clorados mediante GC con columna capilar y deteccin ECD (EPA 8151 A)(Tabla 4.4.7) Estos compuestos se producen en varias formas qumicas (cidos, sales, steres, etc), por lo que el mtodo describe un paso de hidrlisis que puede emplearse para convertir los steres de los herbicidas en cidos antes del anlisis. Estos steres de herbicidas tienen generalmente una vida media inferior a una semana en los suelos. Cuando hay que analizar muestras poco conocidas, la identificacin de los compuestos debe hacerse mediante una tcnica cualitativa adicional, como puede ser la cromatografa de gases con detector de masas, que permite confirmar cualitativamente los compuestos. Se recomiendan dos procedimientos de extraccin para muestras slidas: la extraccin ultrasnica y la extraccin con agitacin. Si las muestras deben analizarse para steres y cidos de herbicidas, el extracto de la misma debe hidrolizarse Muestras slidas Extraccin con ultrasonidos: Se tratan 30 g de la muestra con HCl concentrado hasta que el pH de la misma se ajuste a 2, o con 85 ml disolucin cida de tampn fosfato 0.1 M (pH = 2.5), y se aade los patrones de sustitucin, agitando a continuacin con barra agitadora. La extraccin con ultrasonidos debe optimizarse para cada tipo de muestra. Con objeto de incrementar la eficiencia del extractor ultrasnico, la muestra no debe formar grumos al aadir el disolvente. Para suelos con alto contenido de arcilla debe aadirse sulfato sdico anhidro acidulado (generalmente 1:1), hasta lograr una mezcla suficientemente plstica. Aadir 100 ml de mezcla cloruro de metileno/acetona (1:1 v/v) y llevar a cabo la extraccin durante 3 min. Llevar a cabo la extraccin con ultrasonidos dos veces ms usando 10 ml de cloruro de metileno bajo las mismas condiciones ultrasnicas. Se combinan los tres extractos orgnicos y se centrifugan durante 10 min para separar las partculas finas. El extracto se seca con sulfato sdico y se concentra con un dispositivo de Kuderna-Danish (K-D).
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Si es necesario determinar tanto los herbicidas cidos como sus steres se incorpora una etapa de hidrlisis, para lo que se aaden 5 ml de hidrxido potsico acuoso al 37% y 3 ml de agua al extracto, y se somete a reflujo a 60-65 C en el sistema K-D hasta que se completa la hidrlisis (de 1 a 2 h). La disolucin acuosa hidrolizada se extrae tres veces con cloruro de metileno, se elimina la fase de cloruro de metileno y la disolucin acuosa bsica contendr las sales de los herbicidas. Se ajusta el pH a un valor inferior a 2 con cido sulfrico fro (4C) (1:3) y se extrae una vez con 40 ml de dietileter y dos veces con porciones de 20 ml de eter. Se combinan los extractos y se pasan por una columna desecante con 7 a 10 cm de sulfato sdico anhidro. A continuacin se recoge en un erlenmeyer con 10 g de sulfato sdico anhidro agitando peridicamente durante 2 h. Es necesario la derivatizacin de los compuestos con diazometano (siguiendo para ello las recomendaciones del mtodo EPA 515.1) o bromuro de pentafluorobencilo antes del anlisis por GC-ECD. Se emplea como patrn interno 4,4-dibromooctalfluorobifenilo y como patrn de sustitucin (cido 2,4-diclorofenilactico). Se lleva a cabo una calibracin con cinco puntos, que debe repetirse cada da. Todos los compuestos que se detecten deben confirmarse con una segunda columna de polaridad diferente. Extraccin de muestras acuosas 1 L de muestra se mezcla con 250 g de NaCl, ajustando el pH a un valor > 12 con NaOH 6 M y dejando la mezcla en reposo durante 1 h con agitacin ocasional. La disolucin se extrae tres veces con CH2Cl2, disolvente que se elimina. El pH se ajusta entonces a un valor < de 2 con H2SO4 y se extrae tres veces con dietileter. Los extractos se combinan y secan con sulfato sdico durante un mnimo de dos horas, o mejor durante toda la noche. Los extractos secos se concentran sin llegar a sequedad. Se aade isooctano y metanol si se quiere metilar la muestra, o acetona si se derivatiza con bromuro de pentafluorobencilo.
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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.4.7.- Herbicidas clorados que se analizan por el mtodo EPA 8151 A, incluyendo los valores de PQLs Analito Dalapon DCAA (surr) MCPP Dicamba MCPA Dicloroprop 2,4-D Pentaclorofenol 2,4,5-TP 2,4,5-T Dinoseb 2,4-DB Picloram Surr: patrn de sustitucin RT 608 3,76 9,46 9,68 9,86 10,20 10,61 11,26 12,10 12,28 13,09 13,26 13,75 14,70 RT 1701 4,29 9,77 10,28 10,11 10,69 11,19 11,74 12,20 12,93 13,63 15,40 14,32 16,40 PQL Pg/L 25 1000 1 1000 10 10 10 1 1 5 10 10
Compuestos orgnicos semivoltiles mediante cromatografa de gases con columna capilar y detector de masas (GC/MS; EPA 8270C) La gran eficiencia de las columnas capilares sobre las empaquetadas permite el anlisis de un gran nmero de analitos. Por otro lado, los procedimientos son muy similares para los distintos tipos de analito en cuanto a la preparacin de la muestra y su purificacin, ajuste del detector MS (Tabla 4.4.8), compuestos de comprobacin de las caractersticas analticas del mtodo (SPCC) (Tabla 4.4.9.), compuestos de comprobacin de la calibracin (CCC) (Tabla 4.4.10.), patrones de sustitucin y patrones internos (Tabla 4.4.11) y recuperaciones de sustancias dopadas (spikes) en la matriz (Tabla 4.4.12). La calibracin se lleva a cabo con cinco puntos para calcular los factores de respuesta (RF) o construyendo la recta de regresin. El factor de respuesta (RF) debe ser de al menos el 15%. Los lmites de cuantificacin estimados (EQL) (Tabla 4.4.13) corresponden a aguas subterrneas (la evaluacin se lleva a cabo con una columna 30 m x 0.25 mm i.d. Restek-5, con un flujo constante de 1 mL/min, con el siguiente programa de temperatura: 40C durante 4 min, seguido de rampa de 15C/min hasta 160C, seguido de otra rampa de 20C/min hasta 310C durante 6.5 min; el tiempo total del barrido cromatogrfico es de 26.5 min). Los EQLs para suelos/sedimentos son 33 veces superiores. Preparacin de la muestra
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Las muestras se preparan normalmente extrayendo los analitos de las siguientes matrices con los mtodos descritos por la EPA, antes del anlisis por GC/MS: Matriz Aire Agua Suelo/sedimento Residuo Mtodo de extraccin EPA 3542 3510, 3520, 3535 3540, 3541, 3545, 3550, 3560, 3561 3540, 3541, 3545, 3550, 3560, 3561, 3580
La purificacin recomendada es la siguiente: Analitos de inters Mtodos de purificacin EPA Anilina y sus derivados 3620 Fenoles 3630, 3640, 8041 steres de ftalatos 3610, 3620, 3649 Nitrosaminas 3610, 3620, 3640 Plaguicidas organoclorados y PCBs 3610, 3620, 3630, 3665 Nitrosaminas y cetonas cclicas 3620, 3640 PAH 3611, 3630, 3640 Haloteres 3620, 3640 Hidrocarburos clorados 3620, 3640 Plaguicidas clorados 3620 Residuos del petrleo 3611, 3650 Contaminantes bsicos, cidos y neutros 3640
Tabla 4.4.8.- Ajuste del detector MS basado en DFTPP* para el mtodo EPA 8270C Relacin M/z Criterio de relativa abundancia del DFTPP 51 30-60 % del pico base 68 < 2 % de masa 69 70 < 2 % de masa 69 127 40-60 % de masa 198 197 < 1 % de masa 198 198 Pico base 100 % de abundancia relativa 199 5-9 % de masa 198 275 10-30 % de masa 198 365 > 1 % de masa 198 441 Presente y < masa 443 442 >40 % de masa 198 443 17-23 % de masa 442 * DFTPP: decafluorotrifenilfosfina
147
Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.4.9.- SPCC para el mtodo EPA 8270 C SPCC N-nitroso-di-n-propilamina 2,4-Dinitrofenol RF mnimo 0.050 0.050 SPCC Hexaclorociclopentadieno 4-nitrofenol RF mnimo 0.050 0.050
Tabla 4.4.10.- Compuestos de comprobacin de la calibracin (CCC) para el mtodo EPA 8270 C Acenafteno N-Nitrosofenilamina 4-Cloro-3-metilfenol Fenol 1,4-Diclorobenceno Di-n-octil fatalato 2,4-Diclorofenol Pentaclorofenol Hexaclorobutadieno Benzo(a)pireno 2-Nitrofenol 2,4,6-Triclorofenol Fluoranteno Tabla 4.4.11.- Patrones internos y patrones de sustitucin para el mtodo EPA 8270 C Patrones Internos Patrones de sustitucin 1,4-Diclorbenceno-d4 Fenol-d6 Acenafteno-d10 2,4,6-Tribromofenol Criseno-d12 2-Frluorobifenilo Naftaleno-d8 2-Fluorofenol Fenantreno-d10 Nitrobenceno-d5 Perileno-d12 p-Trefenilo-d14 Tabla 4.4.12.- Compuestos utilizados para comprobar las recuperaciones de las matrices (spikes) en el mtodo 8270 C 1,2,4-Triclorobenceno Pireno Pentaclorofenol 4-cloro-3-metilfenol Acenafetno N-Nitroso-di-n-propilamina Fenol 4-Nitrofenol 2,4-Dinirotolueno 1,4-Diclorobenceno 2-Clorofenol
148
Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.4.13.- Analitos, tiempos de retencin y EQLs que se analizan por el mtodo EPA 8270C Analito Tiempo de EQL (Pg/L) retencin Piridina 3.85 50 N-Nitrosodimetilamina 3.98 10 2-Picolina 5.41 10 N-Nitrosometiletilamina 5.81 20 Metanosulfonato de metilo 6.45 20 2-Fluorofenol (Surr) 6.63 -N-Nitrosodietilamina 7.09 10 Metanosulfonato de etilo 7.69 20 Anilina 8.31 10 Fenol-d5 (Surr) 8.32 Fenol 8.35 10 Bis(2-cloroetil)eter 8.43 10 2-Clorofenol 8.45 10 1,3-Diclorobenceno 8.66 10 1,4-Diclorobenceno-d4 (IS) 8.73 -1,4-Diclorobenceno 8.76 10 1,2-Diclorobenceno 9.06 10 Alcohol benclico 9.08 10 2-Metilfenol 9.30 10 Bis(2-cloroisopropil)eter 9.31 10 Acetofenona 9.50 10 Hexacloroetano 9.55 10 Pentacloroetano 9.55 10 3.Metilfenol + 4-Metilfenol 9.57 10 N-nitrosopirrolidina 9.58 20 o-Toluidina 9.58 20 N-Nitroso-di-n-propilamina 9.60 10 N-Nitrosomorfolina 9.61 10 -Nitrobenceno-d5 (Surr) 9.76 Nitrobenceno 9.79 10 N-nitrosopiperidina 10.05 20 Isoforona 10.16 10 2-Nitrofenol 10.30 10 2,4-Dimetilfenol 10.41 10 Bis(2-cloroetoxi)metano 10.56 10 O,O,O-Trietilfosforotioato 10.57 20 2,4-Diclorofenol 10.67 10 1,2,4-Triclorobenceno 10.79 10 Naftaleno-d8 (IS) 10.86 -cido benzoico 10.86 50 Naftaleno 10.90 10 a,a-Dimetilfenetilamina 10.93 30 2,6-Diclorofenol 11.05 10 4-Cloroanilina 11.07 10 Surr.- Patrn de sustitucin IS.- Patrn interno 149
Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.4.13. (continuacin).- Analitos, tiempos de retencin y EQLs que se analizan por el mtodo EPA 8270C Analito Tiempo de EQL (Pg/L) retencin Hexacloropropeno 11.08 30 Hexaclorobutadieno 11.19 10 N-Nitrosodibutilamina 11.66 10 1,4-Fenilendiamina 11.68 10 4-Cloro-3-metilfenol 11.87 20 Isosafrol 11.93 10 2-Metilnaftaleno 12.03 10 1,2,4,5-Tetraclorobenceno 12.37 10 2,4,5-Triclorofenol 12.60 10 2-Fluorobifenilo (Surr) 12.67 -Safrol 12.74 50 2-Cloronaftaleno 12.80 10 2-Nitroanililna 13.07 50 1,4-Naftoquinona 13.12 10 Dimetil ftalato 13.40 10 Acenaftileno 13.44 10 2,6-Dinitrotolueno 13.50 20 Acenafteno-d10 (IS) 13.66 -3-Nitroanililna 13.70 50 Acenafteno 13.72 10 2,4-Dinitrofenol 13.82 50 4-Nitrofenol 13.94 50 Dibenzofurano 13.95 10 1,3-Dinitrobenceno 13.95 10 4-Bromofenil fenileter 13.98 10 Pentaclorobenceno 13.98 10 2,4-Dinitrotolueno 14.07 20 2-Naftilamina 14.07 10 1-Naftilamina 14.09 10 Oxido de 4-Nitroquinolina 14.11 10 2,3,4,6-Tetraclorofenol 14.19 10 Dietil ftalato 14.40 10 Fluoreno 14.43 10 4-Clorofenil fenileter 14.44 10 Tionacina 14.50 20 4,6-Dinitro-2-metilfenol 14.59 50 4-Nitroanilina 14.60 50 Difenilamina 14.64 10 5-Nitro-o-toluidina 14.64 10 10 N-Nitrosodifenilamina 14.64 Difenilhidracina 14.65 10 2,4,6-Tribromofenol (Surr) 14.79 -Sulfotep 14.99 20 Forato 15.08 20 1,3,5-Trinitrobenceno 15.15 10 150
Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.4.13. (continuacin).- Analitos, tiempos de retencin y EQLs que se analizan por el mtodo EPA 8270C Analito Tiempo de EQL (Pg/L) retencin Fenacetina 15.17 100 Hexaclorobenceno 15.29 10 Dimetoato 15.36 20 4-Aminobifenilo 15.48 10 Pentaclorofenol 15.53 50 Pronamida 15.61 10 Pentacloronitrobenceno 15.65 10 Fenantreno-d10 (IS) 15.69 -Fenantreno 15.73 10 Disulfoton 15.76 10 Dinoseb 15.78 20 Anatraceno 15.79 10 Metil paration 16.26 10 Di-n-butil ftalato 16.51 10 Paration 16.75 10 Metapirileno 16.88 10 Isodrin 17.06 20 Fluoranteno 17.25 10 Bencidina 17.40 80 Pireno 17.53 10 Terfenilo-d14 (Surr) 17.73 -Dimetilaminoazobenceno 17.93 10 Clorobencilato 18.00 50 3,3-Dimetilbencidina 18.35 10 Fanfur 18.36 20 Butil bencil ftalato 18.38 10 2-Acetilaminofluoreno 18.71 10 Metoxiclor 18.97 10 Benzo(a)antraceno 19.02 10 3,3-Diclorobencidina 19.03 10 Criseno-d12 (IS) 19.05 -Bis(2-etilhexil)ftalato 19.08 10 Criseno 19.09 10 Di-n-octil-ftalato 19.80 10 Benzo(b)fluoranteno 20.38 10 7,12-Dimetilbenzo(a)antraceno 20.39 10 Benzo(k)fluoranteno 20.41 10 Hexaclorofeno 20.65 100 Benzo(a)pireno 20.81 10 Perileno-d12 (IS) 20.88 -3-Metilclorantreno 21.36 10 Indeno(1,2,3-cd)pireno 22.70 10 Dibenzo(a,h)antraceno 22.72 10 Benzo(g,h,i)perileno 23.22 10 Surr.- Patrn de sustitucin IS.- Patrn interno 151
Hidrocarburos aromticos policclicos (PAH) por HPLC con deteccin UV y fluorescente (EPA 8310) El mtodo es similar al EPA 610 con los requerimientos adicionales de usar una calibracin externa con cinco puntos y el decafluorobifenilo como patrn de sustitucin. La muestra se extrae por los mtodos EPA 3510 o EPA 3520 a pH 7 para lquidos y el EPA 3540 EPA 3550 para slidos. La purificacin se puede llevar a cabo mediante columna de slice (Mtodo EPA 3630). Formaldehdo y acetaldehdo mediante HPLC con deteccin UV (EPA 8315 A) El formaldehdo y/o acetaldehdo tienen caractersticas txicas por lo que se aslan por lixiviacin (EPA 1311) con una mezcla de NaOH y cido actico glacial, agitando la mezcla en un volteador durante 18 h a 30 rpm. El extracto se filtra con papel de fibra de vidrio y se almacena a 4C, la relacin masa-volumen en la extraccin debe ser de 1:20. de las matrices slidas. El lixiviado se somete a una etapa de purificacin slo en el caso que se trata de matrices poco limpias. Para determinadas muestras si se precisa una etapa de purificacin. En estos casos debe comprobarse que la recuperacin de formaldehdo a partir de una muestra dopadas mayor del 85%. Recuperaciones inferiores se deben, generalmente, a la formacin de emulsiones. En muestras complejas, esta debe centrifugarse a 2500 rpm durante 10 min, decantar el sobrenadante, filtrarlo por un filtro de fibra de vidrio y derivatizarlo y extraerlo mediante procedimientos lquido-slido o lquidolquido. El lixiviado o la muestra acuosa en estudio se tampona a pH 5.0 con tampn acetato y se derivatiza con 2,4-dinitrofenilhidrazona. La hidrazona formada se asla por extraccin en fase slida, usando cartuchos C18 o extraccin lquido-lquido con CH2Cl2. El anlisis se lleva a cabo mediante HPLC isocrtica (metanol: agua 3:1)sobree una columna de fase reversa con deteccin UV a 360 nm. Se debe llevar a cabo una calibracin externa con al menos cinco puntos. Los lmites de deteccin son de 7.2 Pg/L para el formaldehdo y 171Pg/L para el acetaldehdo. La confirmacin de los compuestos puede hacerse por GCMS o empleando otra columna de polaridad diferente.
152
-Reaccin del formaldehdo con la 2,4-DNP-
Acrilamida, acrilonitrilo y acroleina por HPLC (EPA 8316) Esta es una tcnica de inyeccin directa en el HPLC con una columna de fase reversa C18 y una fase mvil de agua con deteccin UV a 195 nm. Se lleva a cabo una calibracin externa con cinco puntos. Los MDLs son 10 Pg/L para la acrilamida, 20 para el acrilonitrilo y 30 para la acroleina. N-Metil carbamatos por HPLC (EPA 8318) Las muestras acuosas se extraen con CH2Cl2 y las muestras slidas con acetonitrilo. El extracto se concentra entonces con etilen glicol para sustituir el disolvente. Los extractos concentrados se diluyen con metanol y se purifican con cartuchos C18. Se ha propuesto una calibracin externa con cinco puntos. El HPLC est equipado con una unidad de derivatizacin post-columna con excitacin a 340 nm y emisin >418 nm. La separacin se lleva a cabo en columna de fase reversa con un gradiente binario no lineal constituido por agua acidificada y 1: 1 metanol:acetonitrilo.
Reaccin de derivatizacin post columna para la deteccin por fluorescencia de Nmetilcarbamatos
153
Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos Tabla 4.4.14.- Analitos analizados por el mtodo EPA 8318 Compuesto Aldicarb sulfona Metomil 3-Hidroxicarbofuran Dioxacarb Aldicarb Propoxur Carbofuran Carbaril Matiocarb Promecarb MDL en agua Pg/L 1.9 1.7 2.6 2.2 9.4 2.4 2.0 1.7 3.1 2.5 MDL en suelo Pg/L 44 12 10 >50 12 17 22 31 32 17
4.5 RESUMEN DE LOS MTODOS DE ANLISIS Finalmente en las tablas 4.5.1 a 4.5.5 se indica a modo de resumen los mtodos de anlisis recomendados por la EPA para los compuestos orgnicos que se han seleccionado en esta memoria. Tabla 4.5.1. Mtodos analticos EPA para la determinacin de derivados del petrleo.
TPH suelo GRO Aromtica EC6-EC9 BTEX Aromtica EC>9-EC16 Benceno Etilbenceno Tolueno Xileno Acenafteno Acenaftileno Naftaleno 1,2,5-Trimetilbenceno Antraceno Benzo (a) antraceno Benzo (a) pireno Benzo (b) fluoranteno Benzo (k) fluoranteno Criseno Dibenzo (a,h) antraceno Fluoranteno Fluoreno Indeno (1,2,3-c,d) pireno Pireno 3560 8021 y 8260 8021 y 8260
8270 8270 5035 y 8260b
Aromtica EC16-EC35 PAH
Purificacin: 3611, 3630c y 3640 Determinacin: 8270 y 8310
154
Tabla 4.5.2. Mtodos analticos EPA para la determinacin de fitosanitarios

Aldrn/Dieldrn Clordano Clorpirifos Clorofenoles DDD DDE/DDT Endosulfn Endrn HCH (D) HCH (E) HCH (J) (Lindano) Heptaclor Heptaclor epxido Hexacloroetano Metilparatin Metoxiclor Toxafeno 8081a 8041
8081a
8270c 8041 8081a
Tabla 4.5.3. Mtodos analticos EPA para la determinacin derivados clorados

Bifenilos policlorados (PCB) 1,2-dicloropropano 1,3-dicloropropeno 8082, 3540, 3541, 3560 y 3565 5035 y 8260B
Tabla 4.5.4. Mtodos analticos EPA para la determinacin otros compuestos seleccionados por sus caractersticas toxicolgicas y no englobados en los grupos anteriores.
Acetona Acrilonitrilo Acrolena 1,2-dibromoetano Estireno Fenol Ftalatos Di-n-Butil ftalato Dietilftalato 8316 5035 y 8260B 835 y 8260B 841 y 8270C 8061
155
156

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4.

MTODOS DE DERMINACIN DE COMPUESTOS ORGNICOS

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

4.1. DETERMINACIN DE SUSTANCIAS ORGNICAS PROCEDENTES DE VERTEDEROS

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Fig.4.1.1.- Diagrama de flujo del ensayo de toxicidad TLCP (EPA 1311)

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

PQL Pg/L Analito

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

4.2 DETERMINACIN DE COMPUESTOS ORGNICOS DE DEPSITOS SUBTERRNEOS

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

33,045 100 11,7981

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Tiempo de retencin (min)

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Reaccin de derivatizacin de la acrilamida

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

-Reaccin de derivatizacin de los fenoles-

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Fig.4.1.2.- PCB 1016, 1242, y 1248

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Fig. 4.1.3.- PCB 1221, 1232, y 1242

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Fig. 4.14.- PCB 1248, 1254 y 1260

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

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Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

-Reaccin del formaldehdo con la 2,4-DNP-

Reaccin de derivatizacin post columna para la deteccin por fluorescencia de Nmetilcarbamatos

8270 8270 5035 y 8260b

Aromtica EC16-EC35 PAH

Purificacin: 3611, 3630c y 3640 Determinacin: 8270 y 8310

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

Tabla 4.5.2. Mtodos analticos EPA para la determinacin de fitosanitarios

8270c 8041 8081a

Tabla 4.5.3. Mtodos analticos EPA para la determinacin derivados clorados

Mtodos de determinacin de compuestos orgnicos

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