15/03/2010

Espectrofotometra E f
Daniel Olave
Tecnologa Mdica 2007

INTRODUCCIN Espectrofotometra
Es la medida de la cantidad de energa radiante absorbida por las molculas a longitudes de onda especficas. La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones biolgicas.

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Tipos de Espectrofotometra
La espectrofotometra de absorcin de infrarrojos La espectrofotometra por resonancia magntica nuclear (RMN) l La espectrofotometra de fluorescencia. La espectrofotometra de emisin atmica La espectrofotometra absorcin atmica La espectrofotometra de masas p La espectrofotometra de fluorescencia de rayos X

Espectrofotmetro
El espectrofotmetro es un instrumento usado en la fsica ptica f i ti que permite comparar la radiacin it l di i absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia en funcin de la longitud de onda

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Los componentes esenciales de un espectrofotmetro son :

Una fuente estable de energa radiante Un sistema de lentes, espejos y aberturas (Slits ), que definan, colimen (hagan g paralelo) y enfoquen el haz de radiacin y un monocromador que separe la radiacin de bandas estrechas de longitud de onda. Un componente transparente a la radiacin que contenga la muestra Un detector de radiacin o transductor que recibe la seal de radiacin electromagntica y la convierte en una seal elctrica de magnitud proporcional a la intensidad de la radiacin recibida. Un sistema amplificador que produzca o genere una seal elctrica mucho mayor a la seal recibida Un sistema de lectura tal como: Una escala de aguja, un registrador, un sistema de dgitos o una computadora, que transforme la seal elctrica en una seal que el operador pueda interpretar.

Espectrofotmetro

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Esquema de un espectrofotmetro de un solo haz y de doble haz

CELDAS

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Diagrama de funcionamiento del espectrofotmetro de un solo haz.

Mtodos Espectroscpicos
Los mtodos espectroscpicos de anlisis se basan en la medida de la radiacin electromagntica emitida o absorbida por la materia. Los mtodos de emisin utilizan la radiacin emitida cuando un soluto es excitado por energa trmica, elctrica, o energa radiante.

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Mtodos Espectroscpicos
Los mtodos de absorcin, por el contrario, estn basados en la disminucin de la potencia (o atenuacin) de la radiacin electromagntica como i ) d l di i l i consecuencia de la absorcin que se produce en su interaccin con el soluto. Los mtodos de absorcin poseen la considerable ventaja de producir poca o ninguna alteracin en el prod cir ning na sistema estudiado.

Mtodos Espectroscpicos
Los mtodos espectroscpicos se consideran como una de las mejores y ms utilizadas tcnicas instrumentales a disposicin del cientfico, para la adquisicin de informacin tanto cuantitativa como cualitativa.

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Los mtodos espectroscpicos se clasifican segn la regin del espectro electromagntico que est implicada; i d las importantes l regiones d i li d siendo l ms i las i de: rayos X, ultravioleta, visible, infrarroja, infrarroja microondas Radiofrecuencia.

El Espectro Electromagntico

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Color de la sustancia
El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas l it d de onda de la luz blanca b b i t longitudes d d d l l bl que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida

COLORES DE LA LUZ VISIBLE

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Leyes Fundamentales de la Absorcin

Se denomina absorcin al proceso por el cual una especie, en un medio transparente, capta selectivamente ciertas frecuencias de la radiacin electromagntica.

Leyes Fundamentales de la Absorcin

Ley de Lambert: cuando un haz de luz atraviesa un medio absorbente de concentracin constante, la cantidad de energa luminosa absorbida por el medio vara en forma directamente proporcional a la distancia recorrida. Energa absorbida b

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Leyes Fundamentales de la Absorcin

Ley de Beer: cuando un haz de luz atraviesa un y Beer: medio absorbente de espesor constante, la cantidad de energa luminosa absorbida por el medio varia en forma directamente proporcional a la concentracin del absorbente en el medio Energa absorbida [C]

Transmitancia
es la fraccin de radiacin insidente transmitida por l solucin, por l general l transmitancia se la l i lo l la i i expresa en porcentaje. Esta definida por la ecuacin: T= P / P0 T= 10-A 10%T= T * 100

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Absorbancia
Es la medida de la energa radiante que es absorbida por un material o una superficie como b bd l f funcin de la longitud de onda de dicha energa. A diferencia de la transmitancia, la absorbancia de una solucin que aumenta la atenuacin del haz esta definida por la ecuacin: A= Log P0 / P A= Log 1/T

Absorvatividad y Absorvatividad Molar

la absorbancia es directamente proporcional a la trayectoria de la radiacin a travs de la solucin y a la concentracin de la especie que produce la absorbancia. Esta definida por la ecuacin: A= abC ( g/lt ) a= A/bC

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Donde: a: constante de proporcionalidad llamada absorvatividad. Cuando se expresa l concentracin b ti id d C d la t i en moles / litro y la trayectoria a travs de la celda en cm., la absorvatividad se denomina absorvatividad molar y se representa con el smbolo . En consecuencia cuando b se expresa en cm. y C en moles/ lit l / litro. A= bC (mol/lt) = A/ bC C= A/ b

Curva Estandar
7 6 Absorbancia 5 4 3 2 1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Concnetracin (moles/lt)

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