Aislamiento por cultivo Se pueden considerar dos casos: Productos no contaminados.

Si proceden de lesiones localizadas (abscesos, artritis, osteomielitis, meningitis), se prctica una siembra en agar-sangre, que permitir observar las caractersticas de las colonias y la presencia de pigmentos y de hemlsis (fig. 27-3). No debe emplearse sangre humana por la presencia de anticuerpos y de inhibidores no especficos. En el caso de procesos generalizados se obtienen 5-10 ml de sangre aspticamente durante el perodo febril, que se siembran en un frasco de hemocultivo. Productos contaminados (esputos, orina, heridas, abscesos y lesiones abiertas). Es conveniente cultivar el producto en un medio selectivo que permita el desarrollo de losestafilococos e inhiba los grmenes acompaantes. Para ello se utiliza la propiedad que tienen los estafilococos de crecer en concentraciones hipertnicas de CINa, sembrando el producto en el medio de Chapman o medio manitol salado, que slo permite el desarrollo de los estafilococos y. adems, por la fermentacin del manitol puede indicar su carcter patgeno. Tambin se emplea el medio de Baird Parker (con huevo y telurito potsico), donde los estafilococos forman colonias de color negro rodeadas de un halo claro debido a la accin de una lipoproteasa.

El Agar Sal y Manitol es utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos a partir de muestras clnicas y diversos materiales. El Agar Sal y Manitol fue formulado por Chapman para obtener el aislamiento de estafilococos, inhibiendo el crecimiento de otras bacterias al utilizar una alta concentracin de sal. Al adicionar cloruro de sodio al7.5% al Agar Rojo de Fenol y Manitol, observ un abundante crecimiento de cepas patgenas deestafilococos (coagulasa positivos) que formaban colonias y halos amarillos a diferencia de las cepas no patgenas que dan colonias pequeas de color rojo y sin cambio en el color del medio. En este medio las peptonas y el extracto de carne proporcionan la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales. El D.manitol es el carbohidrato. La alta concentracin de cloruro de sodio inhibe elcrecimiento de flora acompaante. El rojo de fenol acta como indicador de pH. El agar es adicionado como agente solidificante. Digerido Pptico de Tejido Animal

5.0 Cloruro de Sodio 75.0 Digerido Pancretico de Casena 5.0 D-Manitol 10.0 Extracto de Carne 1.0 Rojo de Fenol 0.025 Agar Bacteriolgico 15.0 pH 7.4 0.2 Mtodo: Suspender 111 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50C y vaciar en placas de Petri estriles. Procedimiento: 1. Inocular las placas por el mtodo de estra. 2. Incubar las placas a 35 2 C durante 24 a 48 horas y observar el desarrollo. Tiempo de cultivo.
Tiempo de cultivo en Sal-manitol

24 h

Recomendado para los cultivos de muestras no contaminadas

24-48 h

Usado en cultivos mixtos/contaminados. Recomendado para conseguir colonias de tamao adecuado para microscopa y pruebas.

72 h

Puede ser necesaria para aumentar la sensibilidad de las pruebas.

Interpretacin: La degradacin del manitol con produccin de cido cambia el color del medio, de rosado a amarillo. Las colonias de estafilococos no patgenas aparecen de tamao pequeo y rodeadas de una zona roja; en cambio, las colonias de estafilococos patgenos fermentados de manitol, dan colonias ms grandes y rodeadas de una zona amarilla.

Dos diferentes especies de Estafilococo creciendo en agar sal manitol (MSA). MSA es selectivo porque contiene 7,5% de saluna alta concentracin de sal que promueve el crecimiento de algunos organismos al desalentar el crecimiento de otros. MSA es un medio diferencial ya que contiene el azcar manitol y el indicador de pH rojo de fenol. Los organismos que pueden fermentar el manitol dan productos secundarios cidos, que causan cambio del color. El rojo de fenol tiene un color rojo cereza cuando el pH esta arriba de 8.5, vira de amarillo a rojo entre los pH 6,9 a 8,5 y es amarillo brillante a pH 6,9 o ms bajo. Aunque ambos Staphylococcus

epidermidis y Staphylococcus aureus pueden tolerar un alto contenido de sal de MSA , slo S. aureus puede fermentar el manitol, causando que el rojo fenol en el medio se torne amarillo.