Dra Cecilia M Galosi

Ctedra de Virologa Facultad de Ciencias Veterinarias Universidad Nacional de la Plata

Qu es un virus ?

Virus: generalidades ms pequeos que las clulas Los virus son mucho
procariontes o eucariontes. Tienen una estructura simple y esttica. Tienen genoma ADN o ARN. No tienen sistema metablico propio y para su replicacin dependen de la maquinaria de la clula huesped (parsitos intracelulares estrictos). Estn entre los organismos replicativos pequeos. No se ven a microscopa ptica. ms

Son agentes filtrables: atraviesan filtros.

Tipos de virus

VIRUS ANIMALES VIRUS DE LAS PLANTAS

BACTERIOFAGOS (Virus que infectan bacterias)

Ej: Coliphago infecta a bacterias E.coli.

Poxviruses (Poxviridae)

The Pharaoh Ramses V died of smallpox (variola virus) in 1157 B.C. In 1520: 22 - 3.5 million Aztecs died Last case in Somalia on 26th October 1977 Sept.11variola virus as a bioterrorism weapon? Dont confuse with chickenpox (varicella)

Secuelas de poliomielitis en el antigo Egipto

Virosis en tulipanes

Avances comparativos en el conocimiento de los microorganismos

Bacterifago

Tamao relativo de los virus

Estructura viral
GENOMA: contenido de cido nucleico CPSIDE: Cubierta o estructura proteica que rodea el cido nucleico. Formada por mltiples copias de una o ms tipos de protenas. Estas protenas pueden ensamblarse formando unidades estructurales llamadas cpsmeros NUCLEOCPSIDE: Acido nucleico y cpside. CORE: cido nucleico ms protena formando una subestructura discreta. En algunos casos es sinnimo de nucleocpside. ENVELOPE: Membrana o bicapa lipdica derivada de membranas celulares que lleva protenas codificadas por el genoma viral. Espculas o peplmeros VIRION: Partcula viral infecciosa

Genoma

ADN

ARN

Tipos de cidos nucleicos virales

Circular

Lineal
Segmentado

Simetra

Helicoidal

Icosadrica

Compleja

Virus icosadricos

Cpside Ac. nucleco

N U C L E O C A P S I D E

Envoltura

Glicoprotenas complejas

Virus helicoidales

Virus Complejos

Resumen de estructura viral

Familias de virus ADN

Familias de virus ARN

Propiedades fsico-qumicas

Clasificacin Caracterizacin de nuevos aislamientos Preparacin de antgenos Elaboracin de vacunas

Propiedades fsico-qumicas
Tamao (S, M, L) Morfologa (simetra)

Tipo de acido nucleico

Estructura proteica

Peso molecular
Densidad de flotacin

Coeficiente de sedimentacin
Sensibilidad a los solventes de lpidos

ACCIN DE LOS AGENTES FISICOS Y QUIMICOS SOBRE VIRUS.

Agentes Fsicos 1. Temperatura: Los virus envueltos son ms sensibles que desnudos. La congelacin/descongelacin provocan prdida de infectividad (procesar rpidamente) 2. Radiaciones: alteran los cidos nucleicos. Los virus monocatenarios suelen ser ms sensibles que los de doble cadena Agentes qumicos 1. 2. Solventes de lpidos Desinfectantes

ACCIN DE LOS AGENTES FISICOS Y QUIMICOS SOBRE VIRUS.

PROTEINAS LIPIDOS

Detergentes Alcohol

Temperatura pH Sales Hipoclorito Ox. de etileno Ozono

ACIDOS NUCLEICOS

Radiaciones Ozono Ox. de etileno Colorantes

SI SOY VETERINARIO PARA QUE DEBO SABER ESTO???

Que importancia tiene???

Taxonoma viral
Identificacin, clasificacin y agrupamiento sistemtico en categoras que revelan mutua vinculacin mediante relaciones que a su vez indican el orden en que fueron apareciendo en la naturaleza: evolucin y la filogenia.

Comit Internacional de Taxonoma Viral (ICTV) (1973) http://www.ictvdb.org/

CLASIFICACION DE LOS VIRUS

Tamao Tipo de cido nucleico Simetra Con o sin envoltura

Con o sin espculas o peplmeros

Sitio de replicacin (citoplasma o ncleo) Tipo de Efecto sobre la clula husped.

Hoy en da se clasifican de acuerdo a la

secuencia de su material gentico. Clasificacin de Baltimore

Taxonoma viral
* Orden (Herpesvirales)
Superfamilia (?)

* Familia (Herpesviridae) * Subfamilia (Alphaherpevirinae) * Gnero (Varicellovirus) * Especie (EHV-1)

Subespecie (?)

* Cepa (AR8) * Variante

REPLICACIN VIRAL
Parsitos intracelulares obligados Las clulas proveen:

Enzimas y maquinaria para la sntesis del

cido nucleico y protenas. Energa.

Los virus poseen la informacin gentica para:

Asegurar la replicacin de su propio genoma

Asegurar el ensamblaje de su cido nucleico en la cpside

Alterar la estructura y la funcin de la clula hospedera

CLASIFICACIN DE BALTIMORE
I: DNA doble cadena (Adenovirus; Herpesvirus; Poxvirus, etc)
II: DNA simple cadena de sentido positivo (Parvovirus)

III: RNA doble cadena(Reovirus; Birnavirus)

IV: RNA simple cadena de sentido positivo (Picornavirus; Togavirus, Flavivrus) V: RNA simple cadena de sentido negativo (Orthomixovirus, Rhabdovirus, etc)

VI: RNA simple cadena com ADN intermediario (Retrovirus)

VII: DNA doble cadena com RNA intermediario (Hepadnavirus)

ETAPAS DEL CICLO DE REPLICACION DE UN VIRUS

Adsorcin, unin o anclaje a las clulas hospederas (receptores) Penetracin Desnudamiento o decapsidacin Replicacin del cido nucleico y sntesis de protenas Maduracin, ensamblaje Pasaje a otras clulas, liberacin

ADSORCIN

ADSORCIN

Interaccin en receptores de la clula hospedera La especificidad de la interaccin define el tipo de clula que puede ser infectada. Dao en estos receptores (ej. desinfectantes, calor) o el bloqueo de los mismos por anticuerpos especficos pueden
impedir la infectividad de un virus.

PENETRACION POR FUSION

Herpesvirus, Paramyxovirus, HIV

PENETRACION POR ENDOCITOSIS

CITOPLASMA

17

PENETRACIN Y DESNUDAMIENTO
ENDOCITOSIS FUSION DE MEMBRANAS

DIFERENTES ESTRATEGIAS DE REPLICACION

SNTESIS DEL ACIDO NUCLEICO VIRAL Y DE LAS PROTEINAS

Muchas estrategias La sntesis del cido nucleico puede realizarse en el ncleo o en el citoplasma La sntesis de las protenas es SIEMPRE en el citoplasma

Clase I: DNA doble cadena (Adenovirus; Herpesvirus; Poxvirus; Papovavirus)

Dos grupos:
Replicacin exclusivamente nuclear ( Adenovirus, Papovavirus, Herpesvirus). Replicacin citoplasmtica (Poxvirus). Poseen todos los genes necesarios para la transcripcin y para la replicacin.

mRNAs son necesarios para la sntesis de protenas

Utilizan la RNA polimerasa dependiente de DNA y las protenas de las clula hospedera Replican su propio DNA

Clase II: DNA simple cadena sentido positivo (Parvovirus)

La replicacin ocurre en el ncleo y comprende la formacin de uma cadena de sentido negativo que sirve de molde para sntesis de las cadenas genmicas positivas

Clase III: RNA de doble cadena (Reovirus)

El genoma de los miembros de esta familia viral es segmentado. Cada segmento se transcribe en forma independiente para producir un ARNm.

VIRUS RNA +
Cuando el genoma viral ya es un mRNA ?

PICORNAVIRUS (Ej: Aftovirus) TOGAVIRUS (Ej: Encefalomielitis equina) FLAVIVIRUS ( Ej: Dengue) RETROVIRUS (Ej: AIE)

AAA

mRNA de sentido positivo

REPLICACIN DEL RNA+

RNA polimerasa viral (replicasa) Factores proteicos del hospedador involucrados como accesorios de replicacin Nuevas cadenas deRNA positivo sirven para:
Ensamblaje viral Moldes para replicacin Moldes para mas traduccin

Clase IV: RNA cadena simple de sentido positivo

Clase V: RNA de simple cadena de sentido negativo

Segmentados : el primer paso de la replicacin es la transcripcin a RNA + a travs de la RNA polimerasa para producir RNA monocistrnicos que son traducidos y sirven de molde para la replicacin del genoma viral se sentido negativo. Ej: Orthomixovirus.

Clase V: RNA de simple cadena de sentido negativo

No segmentados:

RNA polimerasa debe estar empaquetada con el RNA Ej: Rhabdovirus

mRNA de senso positivo

AAA

RNA de senso negativo

Clase VI: RNA de simple cadenas sentido positivo y con DNA intermediario (Retrovirus)

El genoma ARN positivo no sirve como mRNA sino como molde para la transcripcin reversa

Classe VII: DNA de doble cadena com RNA intermediario (Ej:Hepadnavirus)

La retrotranscripcin ocurre durante el proceso de maduracin viral

LIBERACION
BROTACION LISIS CELULAR

SALIDA

EXOCITOSIS

CICLO DE REPLICACION VIRAL

PATOGENESIS VIRAL

La base de evolucionario

la

patognesis

es

un

conflicto

Tanto el virus como el husped buscan una ventaja reproductiva. nuevos virus estn evolucionando continuamente la seleccin natural favorece a virus con baja patogenicidad/virulencia (ninguno destruira a su propio husped) - la mayora de las infecciones virales son asintomticas

- la enfermedad es una consecuencia inusual de la infeccin viral.

DEFINICIONES
Patgeno: organismo capaz de causar enfermedad
Patogenicidad [Gr.:pathos:dolor]: habilidad para causar enfermedad

Patognesis: medio por el cual un organismo produce enfermedad en el husped a consecuencia de:
dao a pequeas poblaciones celulares

en particular a rganos
produciendo signos de enfermedad en un hospedador

Virulencia: capacidad de causar enfermedad

FACTORES DEPENDIENTES DEL VIRUS

La capacidad de producir enfermedad est determinada por: Dosis viral

Puerta de entrada
Eficiencia de replicacin

FACTORES DEPENDIENTES DEL AMBIENTE

FACTORES DEPENDIENTES DEL HUSPED

RAZA, SEXO; ESTADO NUTRICIONAL; ESTADO INMUNE Receptores Virales - genticamente determinados

1. HIV-1: ej: El receptor celular primario y los cofactores de entrada (CCR5,CXCR4) para HIV-1 (CD4) se halla solo en cells T helper y monocitos,) Gente con dos copias de un alelo mutante de CCR5 tienen susceptibilidad reducida a la infeccin por HIV-1. 2. Rinovirus. El receptor ICAM-1 de rinovirus se halla en el epitelio del tracto respiratorio superior y no en otro lado

FACTORES DEPENDIENTES DEL HUSPED

Edad
1) Ciertas infecciones son mas severas en personas adultas o mayores. Ej.: Influenza

2) Menos severas antes de la pubertad,

Ej.: infecciones por EBV (mononucleosis), sarampin, VZV (varicela) y polio

- madurez del sistema inmune

- influencias hormonales

Estado metablico.

1) Malnutricin generalizada o deficiencia de Vitaminas A incrementan la susceptibilidad y severidad de ciertas infecciones (ej, sarampin)
2) Embarazo (con sus cambios asociados en el balance hormonal) puede llevar a susceptibilidad alterada a ciertos virus. Respuesta inmune Alterada Disminuida 1. Determinada genticamente, ej. agammaglobulinemia 2. Adquirida como consecuencia de la infeccin, ej. HIV

3. Iatrognicamente (teraputicamente) adquirida, ej. Postransplante

Aumentada

ESTRATEGIAS DE INTERACCION VIRUS-HUSPED

1- FUENTES DE CONTAGIO

II- MECANISMOS DE TRANSMISIN

II a: transmisin vertical: de madre a hijo (placenta, calostro) II b: transmisin horizontal

Directos: Con contacto fsico (papiloma) Sin contacto fsico (aerosoles)

Indirectos: Vehculos (agua, alimentos) Vectores: Mecnicos (tabnidos en AIE) Biolgicos (West Nile)

ESTRATEGIAS DE INTERACCION VIRUS-HUSPED

Puerta de Entrada (virus y receptores) Piel Tracto respiratorio Tracto gastrointestinal Tracto genito-urinario Conjuntiva

REPLICACIN PRIMARIA (sitio de entrada rgano blanco)

INFECCIONES LOCALIZADAS

INFECCIONES SISTMICAS O DISEMINADAS

Papiloma Raspiratorias

Via sangunea (viremia) Neural Transplacentaria Contigidad (canal de parto) Leche materna

VIREMIA

NEURAL

MODELOS DE INFECCION VIRAL El perodo de incubacin termina con el comienzo de los sntomas:

Oncovirus

PATOGENIA A NIVEL CELULAR

EFECTO CITOPATOGNICO (ECP)

LISIS CELULAR CAMBIO MORFOLOGICOS Por la detencin de la sntesis de macromolculas de la clula por algunas protenas virales o el acumulo de productos virales.

PATOGENIA A NIVEL CELULAR

EFECTO CITOPATOGNICO (ECP)

FUSION CELULAR : SINCICIOS

PATOGENIA A NIVEL CELULAR

EFECTO CITOPATOGNICO (ECP)

EXPRESION DE ANTIGENOS

PATOGENIA A NIVEL CELULAR

EFECTO CITOPATOGNICO (ECP)

CUERPOS DE INCLUSION

PATOGENIA A NIVEL CELULAR

EFECTO CITOPATOGNICO (ECP)

PROLIFERACION CELULAR Y ONCOGENESIS Retrovirus (LEUCOSIS BOVINA, Leucemia felina)

ALTERACIONES CROMOSMICAS

COMO SE ESTUDIAN LOS VIRUS

Diagnstico virolgico en Veterinaria Remisin de muestras

Los mtodos de diagnstico de las infecciones virales estn enfocados a: * Demostrar la presencia del virus, e identificar alguno de los elementos constituyentes de la partcula viral (antgenos o genoma) * Detectar la presencia de anticuerpos especficos en el individuo infectado.

Mtodos Directos

Mtodos Indirectos

Actualmente, la tendencia en el diagnstico virolgico consiste en emplear nuevas tecnologas, ms sensibles, para la deteccin de antgenos y de cidos nucleicos con el propsito de lograr un diagnstico viral ms rpido. Si bien el veterinario clnico no necesita poseer un conocimiento profundo sobre el desarrollo de dichas tcnicas diagnsticas, consideramos que s debe saber qu resultados puede esperar de cada una de ellas.

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO DIRECTOS

IDENTIFICACIN DEL AGENTE
PARTICULA COMPLETA DETECCIN DE COMPONENTES DE LA PARTCULA VIRAL

INDIRECTOS
DETECCION DE ANTICUERPOS

MICROSCOPIA ELECTRONICA

ACIDOS NUCLEICOS

PROTEINAS VIRALES (Ag))

SERONEUTRALIZACION

TCNICAS MOLECULARES

INH. HEMAGLUTINACION

AISLAMIENTO VIRAL

PCR (Amplificacin)

SDS PAGE

INMUNODIFUSION

INMUNO BLOTTING SOUTHERN BLOT (ADN)

TECNICAS INMUNOENZIMATICAS

NORTHERN BLOT (ARN)

DIAGNSTICO VIROLGICO

AISLAMIENTO VIRAL
Tcnica de oro para el diagnstico de las enfermedades producidas por virus.

Mtodo directo de diagnstico virolgico

AISLAMIENTO VIRAL
Conocer las condiciones para la toma de las muestras, transporte y procesamiento de las mismas para realizar un aislamiento viral. Interpretar y transferir los resultados.

AISLAMIENTO VIRAL
MUESTRA

SUSTRATO

AISLAMIENTO VIRAL MUESTRA

VETERINARIO

* Informacin Anamnesis * Obtencin apropiada * Preservacin transporte adecuado * Transferir al propietario

VIRLOGO

* Procesamiento correcto * Leer y transmitir el resultado

AISLAMIENTO VIRAL MUESTRA

(ELECCIN Y OBTENCIN)

SIGNOS CLNICOS PATOGNESIS DEL AGENTE VIRAL SOSPECHADO

ESTADO DEL PACIENTE

( MUESTRAS CLNICAS - NECROPSIA)

AISLAMIENTO VIRAL Tiempo de la toma de las muestras

(RELACIONADOS AL PERODO DE LA ENFERMEDAD)

PERIODO Incubacin Comienzo

AISLAMIENTO ANTICUERPOS VIRAL (Deteccin) Raro No Frecuente Ocasionalmente

Fase aguda
Recuperacin Convalescenci a

Frecuente
Raro Muy raro

Frecuentemente
Generalmente Generalmente

MOMENTOS PTIMOS PARA LA RECOLECCIN DE LAS MUESTRAS

virus

anticuerpos

Das de infeccin viral 0

S2 S1 IncubacinCuadro clnico Convalescencia 10 20 30

S1 y S2 son los momentos ptimos para obtener las muestras para serologa. Se comparan los ttulos de Ac. de S1 y S2. Si el ttulo de Ac. de S2 es superior al de S1, en al menos dos diluciones, se considera que hubo estimulacin del sistema inmune por actividad viral en el organismo. Esto se denomina CONVERSIN SEROLGICA

AISLAMIENTO VIRAL MUESTRAS

SIMPLES COMBINADAS

COMPLEMENTARIAS
SEROLOGA - HISTOPATOLOGA

AISLAMIENTO VIRAL MUESTRA (TOMA Y TRANSPORTE)

Esterilidad

AISLAMIENTO VIRAL

SUSTRATOS PARA EL CULTIVO DE VIRUS

ANIMALES DE LABORATORIO

HUEVOS EMBRIONADOS

CULTIVOS CELULARES

AISLAMIENTO VIRAL MUESTRA (TOMA Y TRANSPORTE)

Rtulo- Planilla de datos- Remitente !!!!!! Temperatura adecuada

-Sensibles a Ta y 1 da a 4C -Congelar a 70C

-No congelar a 20C

Medios de transporte adecuados*

AISLAMIENTO VIRAL MUESTRAS

Lquidos vesiculares, LCR
(puncin) Costras o lesiones en piel (raspado)

Sangre

AISLAMIENTO VIRAL MUESTRAS

Sangre (Heparina: 20-50 UI/ml)

Heces (recoleccin directa, h. ampolla rectal)

AISLAMIENTO VIRAL MUESTRAS

Hisopados

Saliva (con pipeta o apsitos estriles)

Orina ( sonda) , Semen

rganos de necropsia No ms de 4 hs: autlisis Tamao

AISLAMIENTO VIRAL MUESTRA (TOMA Y TRANSPORTE)

Recipientes hermticos y adecuados

AISLAMIENTO VIRAL
MUESTRA (MEDIOS DE TRANSPORTE)
Buffer de fosfatos (PBS) + 2% SFB + ATB+AM
MEM + 2% SFB+ ATB+AM PBS + TPB + 0,5% gelatina + ATB + AM.

PBS + Glicerina 50% + ATB + AM

ATB : Gentamicina 20 g/ml, Penicilina 1000-2000 UI /ml, Estreptomicina: 0,2-2 mg/ml, AM : Nistatina 100-150 U/ml / Fungizone 2,5 g/ ml

AISLAMIENTO VIRAL
MUESTRA (MEDIOS DE TRANSPORTE)

EL MEDIO DE TRANSPORTE DEBE CUBRIR AL

ALGODN O EL TROZO DE TEJIDO !!!!!! VELOCIDAD !!!!!! CONTROL DE TEMPERATURA !!!!!

CABINA DE FLUJO LAMINAR

El manejo de los cultivos celulares, el cultivo de virus y el procesamiento de muestras para aislamiento viral debe realizarse en cabinas de seguridad.

AISLAMIENTO VIRAL (Procesamiento de la muestra I)

ESTUFA DE CULTIVO
Los cultivos celulares infectados con la muestra se mantienen en estufas de cultivo a 37 C, con atmsfera de CO2 y humedad.

Fuente de luz

MICROSCOPIO PTICO INVERTIDO

Mediante el microscopio invertido se controla diariamente el crecimiento de los cultivos celulares. Tambin se lo utiliza para visualizar el ECP de los virus sobre las clulas.

OBSERVACION MICROSCPICA
Objetivos

OBSERVACION DE LOS CULTIVOS DE CELULAS INOCULADOS

En caso de no observarse ECP en el cultivo: Se descarta inmediatamente la posibilidad de presencia viral en el cultivo?

2.- Qu se hace en este caso?

Deteccin por inmunomarcacin

Microscopa electrnica: partculas de herpesviru

Tcnica de PCR

PLATELIA TEST (test de ELISA para diagnstico)

Test serolgicos

Sustrato + Muestra (1er pasaje) D. Negativa Sustrato (2do pasaje) D. Negativa Sustrato (3er pasaje) SIN AISLAMIENTO VIRAL NEGATIVO????

Deteccin Positiva

Deteccin Positiva

IDENTIFICACION FINAL

Deteccin Positiva

AISLAMIENTO VIRAL
Tcnica de oro para el diagnstico de las enfermedades producidas por virus.

FAMILIA HERPESVIRIDAE
Herpe: srpigo

Infectan a numerosas especies

Virus grandes (200-250 nm) Producen cuerpos de inclusin LATENCIA

HERPESVIRUS (ESTRUCTURA Y COMPOSICIN QUMICA)

CORE: Estructura proteica toroidal +Genoma ADN lineal de doble cadena. PM 100-150 x 106 D CAPSIDE: icosadrica. 162 capsmeros TEGUMENTO: actividad enzimtica ENVOLTURA: glicoprotenas lipoprotenas

Envuelta Tegumento

Cpside ADN

SUBFAMILIA ALPHAHERPESVIRINAE Amplio rango de hospedadores naturales Rpido desarrollo en cultivos celulares Neto ECP ltico. CI Establece infecciones latentes en ganglios nerviosos HSV-1, HSV-2 EHV-1, 3 y 4, BHV-1 y 5, SHV-1, FHV-1 y CHV-1 Enfermedad de Marek

SUBFAMILIA BETAHERPESVIRINAE

Rango de hospedadores restringido Desarrollo lento en cultivos celulares Establece infecciones latentes en glndulas secretorias, clulas linforeticulares, riones y otros tejidos CMV humano HHV-6, HHV-7

SUBFAMILIA GAMMAHERPESVIRINAE

Limitado rango de hospedadores naturales Desarrollo in vitro en clulas linfoblsticas Establece infecciones latentes en clulas linfoideas HHV-4 (Epstein Barr), EHV-2

RINOTRAQUEITIS INFECCIOSA BOVINA (BoHV1.1)

VULVOVAGINITIS PUSTULAR INFECCIOSA (BoHV1.2)- BALANOPOSTITIS

Mieloencefalitis por BoHV-5

RINONEUMONITIS EQUINA (EHV-4) Y ABORTO EQUINO (EHV-1)

SINDROME NEUROLOGICO (EHV-1)

ENFERMEDAD DE AUJESZKY (SUHV-1)

HERPESVIRUS CANINO - 1 CaHV-1

HERPESVIRUS FELINO - 1 (RINOTRAQUEITIS FELINA)

Virus neutralizacin Una de las tcnicas ms importantes de uso en virologa Alta especificidad, menor sensibilidad Fundamento: neutralizacin de la infectividad de un virus por accin de anticuerpos especficos presentes en un suero problema
Virus se adsorbe al receptor

Tcnica de Neutralizacin de la infeccin viral

Virus penetra por endocitosis

Virus libera el AN

Ac bloquea la unin al receptor

MOMENTOS PTIMOS PARA LA RECOLECCIN DE LAS MUESTRAS

virus

anticuerpos

Das de infeccin viral 0

S2 S1 IncubacinCuadro clnico Convalescencia 10 20 30

S1 y S2 son los momentos ptimos para obtener las muestras para serologa. Se comparan los ttulos de Ac. de S1 y S2. Si el ttulo de Ac. de S2 es superior al de S1, en al menos dos diluciones, se considera que hubo estimulacin del sistema inmune por actividad viral en el organismo. Esto se denomina CONVERSIN SEROLGICA

ELISA

Alta sensibilidad Menor especificidad

Familia Poxviridae
Pox: pstula Infectan a vertebrados e invertebrados Virus ms grandes (lmite de observacin MO)

Familia Poxviridae

Estructura compleja (ladrillo o bacilar) Core: ADN doble cadena + protenas Cuerpos laterales (proteicos) Con envoltura - Estructuras tubulares irregulares (ortopox) - Tbulos cruzados regulares (parapox) Tamao: 300-400 nm Peso molecular 130-240 x 106 daltons Produce cuerpos de inclusin

 Parapoxvirus

Familia Poxviridae

ORTOPOXVIRIDAE

AVIPOXVIRUS

PARAPOXVIRUS

PARAPOXVIRUS

Familia Poxviridae

Viruela bovina ovino

Ectima contagioso

Parvo: pequeo Infectan a vertebrados e invertebrados Virus mas pequeos

Protrusin (Pas) Eje Depresin (can)

 Core:

ADN monocatenario lineal (-) Simetra icosadrica 3 protenas de la cpside muy estables (60 capsmeros) Desnudo Tamao: 20-25 nm Solo 5000 nucletidos Abundantes G-C en las terminales genmicas que se pliegan formando horquillas (U-Y) Sin enzimas asociadas al virin Muy resistentes al medio ambiente Dependientes de funciones celulares provistas en fase S de multiplicacin o de virus asociados (Dependovirus)

 Ncleo Necesitan

clulas en fase S Transcripcin a DNA bicatenario ( partir de extremos horquillados)

 Parvovirus

canino Panleucopenia felina Parvovirus porcino Virus Kilham de la rata Virus diminuto del ratn B-19 (Eritrovirus)

Enteritis hemorrgica-Parvovirus canino

Enteritis hemorrgica-Parvovirus canino

Enteritis hemorrgica-Parvovirus canino

Parvovirus porcino (Aborto-momificacin)

Deteccin por hemoaglutinacin

RETROVIRUS

RETROVIRUS
80-100 nm RNA + diploide Cpside icosadrica Envueltos TRANSCRIPTASA INTEGRASA

El Virus de la Leucosis Bovina o VLB pertenece a la familia RETROVIRIDAE, Subfamilia Oncornavirinae (Tipo C) y gnero Deltaretrovirus
gp 30 gp 51 Cpside CA (p24) Doble cadena de ARN 9KB +Transcriptasa reversa +Integrasas +Proteasas Ncleo cpside(p12) Matriz (p15) Envoltura
170

 RETROVIRUS

(Replicacin)

http://www.johnkyrk.com/virus.html

Provirus
ADN celular ADN proviral ADN celular

Linfocito B Citoplasma Existen entre 1-5 copias de ADN proviral por linfocito B siendo Material gentico afectados el 30% de los linfocitos circulantes. Ncleo

172

Transmisin Viral

Transmisin vertical

Transmisin horizontal

173

Presentacin de la LEB
Forma Aleucmica (AL)
1. Se presenta en un 70% de los bovinos VLB+

2. Caracterizada por la presencia de anticuerpos contra gp51 y p24.

3. Nmero de linfocitos dentro de los valores normales (menor de 10.000 linf/l)

174

Presentacin de la LEB
Linfocitosis Persistente (LP)
1. Se presenta en un 30-35% de los bovinos VLB+ 2. Aumento del nmero de linfocitos circulantes (10.00 linf./l).

175

Presentacin de la LEB
Linfosarcoma
1. Menos del 5% de los bovinos VLB+
2. Mayor predisposicin de animales con LP

3. Infiltracin tumoral en diferentes rganos: hgado, corazn ojos, piel entre otros
4. La sintomatologa clnica depende de la ubicacin de los tumores 5. El signo ms especfico es la linfoadenopata bilateral de los ganglios linfticos explorables.
05/10/2012 176

Linfosarcoma

177

Diagnstico del VLB

1. Serolgico: a-Doble Inmunodifusin en gel de Agar
b- ELISA

2. Molecular: PCR-anidada

178

Leucosis Enzotica Bovina

N=217
Puncin venosa yugular

Kit de Inmunodifusin

Sin EDTA

Con EDTA

Extraccin de ADN y Estudios hematolgicos

Wizard Genomic ADN Purification Kit

4 ml
Con EDTA

Laboratorio Central: estudios hematolgicos

1 ml
180

Exmen Serolgico y Molecular para VLB

n=191 VLB+ n=26 VLB181

ANEMIA INFECCIOSA EQUINA

Fiebre de los Pantanos, Anemia perniciosa, Fiebre lenta

Lentivirus
80 a 120 nm Genoma RNAss(+) , dos copias no complementarias Posee transcriptasa reversa. Cuasiespecies. Nucleocpside rodeada por envoltura lipoproteica Dos glicoprotenas de superficie GP90 y GP45 Cuatro protenas extructurales internas, p9, p11, p15, p26 Infecta a clulas que no estn en divisin (macrfagos) Produce enfermedad lenta PERSISTENCIA

Es el SIDA de los equinos??? NOEspecies Infecta Sintoma Primario

AIE FIV HIV caballos macrofagos gatos celulas T humanos celulas T anemia inmunosupresion inmunosupresion

Estado comparativo de la enfermedad

FIV y HIV mayor % de Mt

AIE 30% de Mt
Aos de infeccin

Transmisin
NO ES UNA ENFERMEDAD CONTAGIOSA !!! transmisin intrauterina / posparto - coitomordeduras - excreciones o secreciones ES UNA ENFERMEDAD INFECCIOSA TRANSMISIBLE -vector mecnico-La transmisin se produce a travs de la picadura de tbanidos (Stomoxys)

-Diseminacin ms frecuente durante el perodo

estival, en climas hmedos y regiones pantanosas. - Mano del hombre: iatrognica (agujas), equipos,

Transmisin

1 Que el tbano no concluya su alimentacin en el equino infectado. 2 Que el virus no pierda su capacidad infectante (sobrevive en la boca de los insectos entre 15 a 30 min hasta 4h) 3 Que el nivel de virus en la sangre del reactor sea alta
(ej. con presencia de signos clnicos)

4 Que la carga de insectos vectores sea muy alta 5 Que existan animales hacinados, poca distancia entre e

Patogenia
PI: 1-3 semanas (hasta 3 meses- 1 ao?)
TROPISMO: tejidos ricos en macrfagos, tambin en monocitos (Bazo, Hgado, Pulmn, Ndulos linfticos)
Destruccion de GR: partculas virales se adhieren a los GR y los CD8 citotxicos los destruyen Eritrofagocitosis : Ac fijan complemento y el C3 se adhiere a los GR, se estimula el reconocimiento por macrfagos y su Se bloquea la maduracin de las clulas precursoras de los glbulos destruccin. rojos

Glbulos rojos maduros son destruidos por el sistema inmune

Manifestaciones clnicas
Crnica asintomtica o inaparente
Patognesis de la infeccin crnica
anemia Virus multiplica Complejos En leucocitos inmunes Cambio antignico trombocitopenia Fases infecciosas Fiebre y viremia

Manifestaciones clnicas
Crnica asintomtica o inaparente Carrier asintomtico

Fase infecciosa

Viremia

Estrs o corticoides

Infeccin crnica
Hiptesis del Caballo de Troya El virus infecta y replica en clulas del sistema inmune (monocitos/macrfagos)

Clulas del sistema inmune infectadas transportan el virus a otros sistemas

Virus no es eliminado o detectado por el sistema inmune

Diagnstico Actual
OIE: prueba oficial es el test de Inmunodifusin en gel de Agar (Test de Coggins 1972)

cELISA

Test de ELISAc

Lectura e interpretacin de las bandas de precipitacin

1,3,5 Controles

2,4,6

Sueros problemas

1 1

Familia Rhabdoviridae
Familia Rhabdoviridae
Del griego rhabdos = bastn - bala
Del snscrito rabhas = agresin Del latn rabidus = loco

Familia Rhabdoviridae Taxonoma - Clasificacin

Orden Mononegavirales
Familia Rhabdoviridae Gneros: Vesiculovirus (VSV) Lyssavirus (R) Ephemerovirus (BEFV) Novirhabdovirus (Peces) Cytorhabdovirus (Vegetales) Nucleorhabdovirus (Vegetales)

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/Ictv/fs_rhabd.htm

Rhabdovirus
80 nm

Estructura
8 nm

180-300 nm

ARNss (-) 3,5 a 4 x 106 D (1214Kb)

NS

Simetra helicoidal

Familia Rhabdoviridae Genoma

Familia Rhabdoviridae
Propiedades fsico qumicas, biolgicas y antignicas

Composicin: 4% AN , 65% protenas, 20% lpidos, 10%

hidratos de carbono Sensibles a solventes orgnicos. L: termolbil. VSV: mas resistente a Ta Resiste por das a 4C y pH 5-10 a 4C

Tropismo por diferentes tejidos

Neurotropismo. Neurovirulencia. Neuroinvasividad

Familia Rhabdoviridae Replicacin (VSV-R)

Penetracin: receptores con cido silico, acetilcolina. Dependiente de clatrina. Endosoma.

Desnudamiento: pH cido del endosoma, fusin de la membrana (gpG). Liberacin de la nucleocpside . Activacin de la polimerasa (L)

Familia Rhabdoviridae Replicacin

Transcripcin del ARN: L (P) localiza su promotor, sintetiza secuencia leader y se ocupa de formar Cap y poli A. Transcripcin secuencial de ARN monocistrnicos (Start/Stop o transcripcin atenuada). Gradiente de transcripcin Traduccin: Gradiente de produccin de protenas. N y NS acumuladas regulan Tr

Replicacin: L no reconoce Stop. Se sintetiza ARN (+) y luego ARN (-) genmico

Familia Rhabdoviridae
Replicacin Destino de las protenas neoformadas
G (anclaje por COOH)

Lyssavirus N y NS

Familia Rhabdoviridae
Replicacin Brotacin- Salida de la progenie viral

Familia Rhabdoviridae Virus de la Fiebre efmera bovina

Africa, Oriente, Australia

No est presente en Argentina

Alta morbilidad, baja mortalidad.

Signos: fiebre sbita, prdida del apetito e incluso aversin al agua.

Afagia por inflamacin de los msculos de la faringe y edema de la regin, ataxia y cojeras. Rpida recuperacin. Sin secuelas

Familia Rhabdoviridae Virus de la estomatitis vesicular

1era descripcion: 1926 en caballos luego en bovinos y cerdos Arbovirus? Aislado de moscas e insectos - Tipo Indiana (Amrica) Ind 2- Salto Argentina /63 Ind 3- Alagoas Brasil/64 Ind 3- Espinosa Brasil/77 - Tipo New Jersey (Amrica) - Tipo Cocal (equinos, vacas y cerdos, Brasil)

- Tipos Pyri, Chandipura, Isfahan, etc) (Africa, Asia, Europa)

Aproximadamente 35 serotipos

Familia Rhabdoviridae Estomatitis vesicular

Pi: 1-5 das
Fiebre. Salivacin excesiva

Vesculas blanquecinas elevadas o abiertas de distintos tamaos y zonas de la cavidad bucal, lengua y labios: Porcinos: hocico, lesiones en los pies Lesiones en los pies de los equinos y los ovinos no son excepcionales Lesiones de los pezones en el ganado lechero
Curso: 7-10 d sin secuelas

Familia Rhabdoviridae Estomatitis vesicular

Alta morbilidad, baja mortalidad Cclico: 5-10 aos No se demostr viremia (excepto en cerdos) Diagnstico: AV (alta carga viral en lesiones) Inoc. ratones lactantes ELISA de bloqueo (LP-ELISA) Diferencial con FA (ELISA)

Hombre: estado gripal

Lyssavirus RABIA

Familia Rhabdoviridae Lyssavirus

Genotipos y serotipos (gpG)

V. de la Rabia (Mundial excepto Antrtida)(G1 ST1) V. Lagos-bat (Centro y Sudfrica)(G2 ST2) V. Mokola (Africa Central)(G3 ST3) V. Duvenhague (Sur de frica)(G4 ST4) V. EBL 1 y 2 (Murcilago europeo)(G5 y 6)

V. ABL (Murcilago australiano) (G7)

Encefalitis en hombre y animales

Variantes antignicas y genticas del virus de la Rabia en Argentina

5 linajes o variantes gnicas
Tipificacin con anticuerpos monoclonales dirigidos contra la NP (11 VAg) Argentina VAg 1 y 2 (perro, gato. Hombre. Rabia urbana VAg 3 (murcilagos hematfagos. Bovino) Rabia paresiante. Desmodus rotundus VAg 4 (murcilagos insectvoros. Zorro, lobos, mapaches, chacales) Rabia silvestre. Tadarida brasiliensis VAg 6 (murcilago no identificado)

A1 (VAg 3) A A2 a 5 (VAg 4) A B B1 (VAg 2) B B2 (VAg 1)

Cisterna y col. Virus Res.2005

Rabia - Zoonosis
La rabia en humanos ha estado presente desde tiempos remotos. Es una de las enfermedades mas antiguas (2500 AC) La transmisin al humano por mordida de perro fue documentada en el codigo Eshnunna de la Mesopotamia que predeci a Hammurabi 1546 - Descripcin de un(23 AC). humano caso en 1769 - Morgagni especula que el virus se disemina por los nervios

1804 - Se demostr fehacientemente el contagio a travs de la saliva de un animal

Rabia
1880- Pasteur sugiri a un virus como agente etiolgico. Atenuacin por pasaje por cerebro 1885- Pasteur inmuniza por primera vez a un nio quien sobrevive

Rabia
Rabia es una enfermedad donde diagnosticarla afecta directamente el tratamiento en el humano

El diagnstico rpido y confiable es esencial para la profilaxis pos-exposicin del paciente

RABIA EN EL MUNDO

RABIA EN AMERICA DEL SUR

Rabia urbana en Argentina

Argentina libre de rabia????

Virus de la Rabia
Virus de calle
Cepas de virus salvaje recin aisladas. Patgeno por va perifrica Inoc IC mata entre 5-20 das Periodo de incubacin de 10 das a varios meses. Produce Corpsculos de Negri

Virus fijo (Pasteur 1882)

Cepas de laboratorio transferidas en serie en cerebro. Apatgeno por va perifrica Patgeno inoc. IC Inoc IC mata entre 5-7 das Periodo de incubacin corto de 4- 6 das. Ausencia de Corpsculos de Negri

(Patgenas) 333 Arg cambia a (No patgenas) Iso, Gli, Asp

Patogenia de la Rabia
Fuente de infeccin: mordedura (Aergena. Transplantes)

Pi: variable 10-20 das / 1 ao

Factores condicionantes: Cantidad de partculas virales, Virulencia, Zona de inoculacin, Inervacin de la zona, Refugio del virus, Inmunizacin pos exposicin

RABIA : SIGNOS CLINICOS

1. periodo mudo Con cambio de conducta, luego agitacin, irritabilidad, trastornos respiratorios, alteracin del apetito , gusto, dificultad y dolor en deglucin que produce negativa del animal a comer y beber (de aqu el nombre de hidrofobia). 2. periodo furioso con sntomas ms intensos, furor violento, agresividad, alteracin de la voz (por parlisis de los nervios farngeos). 3. periodo paraltico, puede comenzar a los 3-4 das de manifestarse la enfermedad, sobreviene parlisis de los msculos del tronco y los miembros, comenzando por el tercio posterior y muerte. En los rumiantes falta o tiene muy corta duracin el periodo furioso, sin embargo en el cerdo los fenmenos de irritabilidad son muy violentos

RABIA : Diagnstico
ESPECIMEN TEST ante mortem biopsia de piel; repetir hasta IF test en cortes congelados obtener el diagnostico RT-PCR DETECCION Deteccin de Ag RNA viral Aislamiento viral Aislamiento viral RNA viral

saliva, lagrima, reaspados Cultivo de tejido corneales Inocular en ratn lactante (x28 d) LCR; repetir hasta obtener el RT-PCR diagnostico Sin vacuna; test inmediatamente suero Vacunado; guarde y compare LCE unos das despus test inmediatamente con suero postmortem Cerebro, Astas de Ammon, IF test de improntas Cerebelo, Visualizacion de Corpsculos de Bulbo raqudeo Negri Piel, glndulas salivales, Inocular en ratn lactante (x28d) RT-PCR Diagnostico retrospectivo Mtodos enzimticos

deteccin anticuerpos Deteccin de anticuerpos seroconversin deteccin anticuerpos Deteccin de Ag

Aislamiento viral RNA viral

Deteccin de Ag En tejidos fijados en formalina

Alta concentracin de anticuerpos en el LCE se considera como diagnstico ms all de la vacunacin.

RABIA : Diagnstico Interpretacin

Corpsculos de Negri (+) IF (+) INOC: IC ratones lactantes (+) Corpsculos de Negri (-) IF (-) RABIA RABIA RABIA NO SE DESCARTA RABIA NO SE DESCARTA RABIA

INOC. ic ratones lactantes (-) CON IF (-) NO ES RABIA

RABIA : Diagnstico

IFd Positiva IHQ Positiva

IFd Negativa

RABIA : Diagnstico

100x

200x

Tincin de Seller

RABIA : Diagnstico
Reaccin en cadena de la polimerasa (RT-PCR) Amplificacin y deteccin basada en gel

Diagnstico de Anticuerpos por ELISA

R E D NOR T E

100 90 80 70

P R OP OR C ION

60 50 40 30 20 10 0 V A C UNA DO S P R O TE G IDO S

90,91 62,34 37,66 9,09

NO V A C UNA DO S NO P R O TE G IDO S

PLATELIA TEST (test de ELISA para diagnstico)

ELISA para deteccin de anticuerpos

RABIA : Profilaxis y Control

Acciones inmediatas Tratamiento
Rabia urbana
Limpiar muy bien la herida con agua y jabn, H2O2.

Consultar al servicio de salud para determinar el tratamiento correspondiente. Informar a las autoridades de salud sobre las caractersticas del animal atacante (tipo, tamao y color) para facilitar su localizacin. Mantener bajo vigilancia al animal atacante por espacio de diez das: Animal sin sntomas. Sin tratamiento

Animal con signos de rabia. Se confirma con laboratori. Tratamiento

RABIA : Tratamiento
CATEGORIA TIPO DE CONTACTO CON ANIMAL SOSPECHOSO O RABICO TRATAMIENTO

Tocar o alimentar animal. Lameduras piel intacta

No se dispone de informacin confiable

II

Mordisco o rasguos sin sangre

Aplicar vacuna.

Lameduras sobre piel herida previamente

Observar animal o sacrificar

Animal neg. cortar tratamiento

III

Mordedura con sangre y contaminacin con saliva

Aplicar IgG y vacuna Animal neg. Cortar tratamiento

IV

Animal no localizado Mordedura de animal silvestre#

Recibe siempre tratamiento

* Si la zona es de bajo riesgo puede postergarse tratamiento hasta finalizar control del animal (perro o gato)
# Animales salvajes se sacrifican siempre.

RABIA : Profilaxis y Control Vacunas

1- Vacunas con tejidos nerviosos de animales adultos

Pasteur (conejo - desecada)

Fermi (conejo - inactivada con fenol 1%) Semple (carnero inactivada con fenol 1%) 2- Vacunas atenuadas en embrin de pollo (no seguras) 3- Vacunas en embrin de pato, inactivadas, poco inmunognicas

4- Vacunas en cultivos celulares (BHK, Vero, MRC5), inactivadas con UV, betapropionolactona y etilenimina.
Evita reacciones 2rias. Mas aptas para uso humano.

Requiere mayor concentracin para lograr alta carga viral .Son necesarias mas dosis para lograr idntica inmunidad. Encarecidas por mayor procesamiento y mayor numero de dosis.

Cdigo Sanitario para los Animales Terrestres de la Organizacin Mundial de Sanidad Animal (OIE) y debe ser declarada a la OIE Ley Nacional 22953/83, Decreto Ley Pcial 8056/73, Decreto reg. 4669/73

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA

FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS

ARGENTINA Y LOS ORGANISMOS INTERNACIONALES

DECLARADA

Prevalencia ~ 15,5%
0% < 5% > 5% <10% > 40%