INP

Laboratorio de Bacteriologa

De la Toma de Muestras a la Identificacin del Microorganismo: Un Reto de Todos los Das

QFB Patricia Arzate Barbosa

Clasificacin de Bacterias en Base a Requerimientos de Oxigeno

Aerobias Anaerobias Anaerobias Facultativas Microaeroflicas

Identificacin de Bacterias Gram Negativas

Aerobias (BNF, Familia Vibrio) Anaerobias facultativas (Enterobacterias) Microaroflicas (Haemophilus, Neisseria y Campylobacter)

Identificacin del patgeno con Pruebas Convencionales Tinciones Placas (Medios de cultivo) Condiciones ambientales Pruebas Bioqumicas

Metodologa Actual
Kits rpidos Mtodos semiautomatizados Pruebas convencionales (Microorganismos fastidiosos) Pruebas serolgicas Tcnicas de Biologa Molecular

Mtodos Convencionales para Identificacin de Bacterias Para lectura de Pruebas Bioqumicas Deben utilizarse los mismos procedimientos y medios en los que se basan las tablas. Las reacciones presentes en la tabla deben estar en un intervalo de confianza arriba del 90% para que sean significativas.

Las pruebas deben estar dentro de un estricto control de calidad.

Bacilos Gram Negativos no Fermentadores (BNF)

Factores que dificultan su identificacin:

Bacterias poco frecuentes. El personal no esta familiarizado con BNF. Algunos BNF desarrollan lentamente. Algunos BNF tienen reactividad dbil bioqumicamente. Algunos BNF tienen requerimientos especiales de cultivo.

Diferenciacin de Bacilos Gram Negativos Aerobios o Facultativos

Bacteria
Enterobacteriaceae

Reaccin Gas Oxidasa Desarrollo A. Kligler TCBS A/A, A/Alc V A/Alc*

Vibrio

Aeromonas
Plesiomonas

A/Alc*
A/Alc

+
+

BNF

Alc/Alc

Reacciones bioqumicas despus de 24 h a 35C

Agar kligler

Prueba de oxidasa

Agar TCBS

Pruebas Bioqumicas
Fermentacin de hidratos de carbono Utilizacin de hidratos de carbono Prueba de Indol Prueba del Rojo de Metilo Prueba de Voges Proskauer Descarboxilacin de amonicidos Produccin de cido sulfhdrico Desaminacin de fenilalanina Reduccin de nitratos Reacciones de oxidacin-fermentacin

Medio de SIM

Desc. de aminocidos

Utilizacin de Citrato

Utilizacin de malonato

Fenilalanina desaminasa

Medio de OF

Fermentacin de Hidratos de Carbono

Adonitol D-Sorbitol Myo-Inositol Dulcitol D-Manitol Glucosa Lactosa L-Arabinosa Maltosa Sacarosa Trehalosa D-Xilosa

Pruebas Enzimticas

Oxidasa
Catalasa DNAsa

Ureasa

Pruebas Bioqumicas

A L O

K O/G O/M

O/X C

Burkholderia cepacia

Pruebas Bioqumicas

Pruebas de Identificacin Rpidas Para Bacilos Gram negativos

Oxidasa Indol (Prueba de la mancha) ONPG, Deteccin de b-galactosidasa (o-nitrofenil-b-D-galactopiranosido) MUG, Deteccin de b-glucoronidasa (metilumbeliferil-b-D-glucoronido)

Kits de Identificacin Rpidos

OMP, NGP, Weetaps (Enterobacterias, 8 pruebas enzimaticas, adicionando ureasa) A partir de colonias en agar: El CPS ID 2 (Para IVU, se puede realizar la prueba de indol, detecta b-glucoronidasa y bgalactosidasa). El Rainbow UTI System (Reac. Cromognicas con tiras de papel filtro).

Kits de Identificacin Rpidos

E. COLI SCREEN (Carr-Scarborough) Lyfo-Kwik OMI (MicroBiologics) MUG Disk (Remel Inc) MUG Plus (Difco Laboratories) Estos mtodos se basan en el hecho de que la mayora de cepas de E. coli son rpidamente positivas para indol, ONPG (b-galactosidasa) y MUG (b-glucoronidasa).

Sistemas de Identificacin Comerciales

API 20E (Biomeriux) API Rapid 20E API NFT Enterotube II (BD) Minitek (BD) Oxi/Ferm II (BD) Micro ID (Remel) Rapid ID SS/u (Remel) Rapid ID ONE (Remel) Rapid ID NF/plus (Remel)
RAPID ONE API 20E

Enterotube II

Minitek

RAPID NF plus

Sistemas de Identificacin Comerciales

BBL Crystal (BD) Sistema Sceptor (BD) GN Microplate (Biolog)

Sistemas Automatizados
Sensititre ARIS

Vitek 2 Compact 30/60

MicroScan WalkAway 40/96

Phoenix 100

Sistemas Automatizados
Ventajas: Interface con computadoras. Ahorro de tiempo. Minimiza errores de transcripcin. Acceso a funciones computarizadas. (Suma de resultados, reportes epidemiologicos, antibiogramasetc)

Sistemas Automatizados
Algunas desventajas: En Microorganismos fastidiosos o BNF. Microorganismos de lento crecimiento. Microorganismos que presentan reacciones dbiles. Algunos Microorganismos no estn en la base de datos.

Mtodos de Identificacin Comercial para bacterias productoras de Diarrea Ac inmunofluorescentes para E. coli O157. Premier EHEC (Toxina shiga VT1 y VT2). InmunoCard STAT E. coli O157 plus (cultivos) Deteccin de Ag de E. coli O157 (Antisuero, ELISA, aglutinacin en latex). E. coli ST IEA (ELISA, toxina termoestable, Denka Seiken Co). VET RPLA (Aglutinacin en latex, Toxina Termolbil de E. coli y V. cholerae, Oxoid).

Infeccin por Campylobacter jejuni

Despus de 3 das Fiebre elevada Diarrea con sangre Dolor abdominal Colitis ulcerativa Complicaciones:
Artritis reactiva (60%). Sndrome Guillain-Barr (38%).

Sndrome urmico-hemoltico (5%).

Identificacin de Campylobacter jejuni Tiene forma de espiral o coma, Gram negativo

Requiere de medios especiales (antibiticos y factores de crecimiento) Atmsfera de 5 - 10% CO2 Temperatura de 42C

Identificacin de Campylobacter jejuni

Cultivo: Agar CCDA, caldo Preston, 48h. 42 C. Tincin dbil al Gram Prueba de oxidasa y del Hipurato de sodio positivas. No fermentan ni oxidan los carbohidratos. INDX Campy y Campy Slide (Aglut. En latex). ProSpect Microplate y RIM inmmuno (Heces).

Identificacin de Helicobacter pylori Deteccin de ureasa (Biopsa) Cultivo especial a 37 C, microaeroflia Deteccin de Ac IgG, IgA, IgM (ELISA) Prueba del aliento (Urea marcada con C13 o C14) Deteccin de DNA o RNAr

Identificacin de Haemophilus influenzae

Cocobacilos Gram negativos, oxidasa +

Biotipos I VIII (Urea, Ornitina e indol, Kilian 1976)

Serotipos capsulares a-f

Identificacin de Haemophilus influenzae

Requiere de factores VyX Cultivo en agar sangre de caballo o agar chocolate + factor V

Prueba del satelitismo para H. influenzae

H. influenzae Biotipo III

H. Influenzae Biotipo I

H. influenzae

XV

H. parainfluenzae

H. aphrophilus

H.ducreyi

Identificacin de Haemophilus sp

Bacteria
H. influenzae Biotipo I-VIII H. aegyptius

Req. Req. Sacarosa Factor V Factor X

Ribosa

Xilosa

+
+ +

+
+ -

+
+ -

+
-

H. parainfluenzae Biotipo I-VIII

H. ducreyi

Identificacin de Neisseria sp

Identificacin de Neisseria sp

Diplococos Gram negativos, oxidasa +

Requieren de Fe++ y cistena 5-10% de CO2 Medios de cultivo: Thayer Martin, Martin Lewis, New York City

N. meningitidis

N. gonorrhoeae

Identificacin de Cocos Gram Negativos

Bacteria
Neisseria meningitis Neisseria gonorrhoeae

OX

A sangre T. Martin Glu

Lac

Mal

DNAsa

+ +

V
+ +

+ +

+ +

+
V

Neisseria lactamica
Neiserias comensales Moraxella catarrhalis

+
+ +

+
V V

+
V

UtiIizacin Carbohidratos para Neisseria sp

CTR GLU MAL SAC LAC

Mtodo rpido: SSB (Sol. Salina balanceada pH=7) + rojo de fenol + gotas de carbohidratos al 20%, incubar a 35C y leer en 4 horas.
Medio de CTA (Agar cistina tripticaseina) carbohidratos al 1%, rojo de fenol , incubar a 35C de 24 a 72 horas.

Neisseria sp
N. elongata

M. catarrhalis N. flavescens

Sistemas comerciales para Identificacin de Haemophilus sp y Neisseria sp Utilizacin de Carbohidratos

RIM Haemophilus, RIM Neisseria API-NH (bioMerieux, 24h, Neisseria sp, Haemophilus sp y M. catarrhalis) Gonobio test (IAF Production, rpido, N. gonorrhoeae) Neisseria Kwik test (Micro-Bio-Logics, 4h, Neisseria sp) API Quad-Ferm+ (bioMerieux, 2h, Neisseria sp y M. catarrhalis), serie de pozos: control, GLU, MAL, LAC, SAC, DNAsa y b-lactamasa (Foto de N. gonorrhoeae).

Sistemas comerciales para Identificacin de Haemophilus sp y Neisseria sp

Pruebas con enzimas cromognicas

BactiCard Neisseria (Remel, 4h, Neisseria sp y M. catarrhalis) Gonochek II (E-Y Laboratories, 30 min, Neisseria sp y M. catarrhalis) Neisstrip (Lab M Ltd Rpido, Neisseria sp)

Sistemas comerciales para Identificacin de Haemophilus sp y Neisseria sp Pruebas inmunolgicas:

Ac fluorescentes test (Syva, N. gonorrhoeae) Coaglutinacin (Phadebact, Haemophilus influenzae, N. Meningtidis y N. gonorrhoeae) GonoGen I y II test (New Horizons Diagnostics, N. gonorrhoeae) Gonozime (Abbot Laboratories, ELISA, N. gonorrhoeae)

Sistemas Automatizados para Identificacin de Haemophilus sp y Neisseria sp

MicroScan (HIND)

Vitek (NHI Card)

Frotis de Gram y Coaglutinacin

Utilidad: Proporcionan al mdico un diagnstico presuntivo Se puede iniciar un tratamiento antimicrobiano