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Tinción celular

Técnicas de microscopía óptica más usadas:


• Combinación de colorantes basófilos y acidófilos (por
ejemplo, Hematoxilina-Eosina, Tricrómico de Mallory)
• Histoquímica (Fosfatasa ácida, PAS [ácido periódico-
Schiff])
• Inmuno-histoquímica (uso de Anticuerpos contra
estructuras específicas, conjugados con moléculas
fluorescentes [fluoresceína, rodamina, etc] o con
enzimas)

Microscopía electrónica de transmisión y de barrido


Hematoxilina-Eosina: Técnica de coloración
•Fijación de la muestra con Formalina (solución acuosa tamponada de
formaldehído). Detiene el metabolismo y conserva la estructura del tejido
(proteínas pero no lípidos ⇒ mal fijador de membranas).
•Lavado y deshidratación (serie de soluciones alcohólicas de concentración
creciente hasta el 100%). Extracción del alcohol con Xileno, luego inclusión de
la muestra con parafina fundida (miscible en Xileno). Enfriamiento y endureci-
miento de la parafina ⇒ Taco ⇒ cortes de 5-15 µ de espesor con micrótomo
que se montan sobre portaobjetos.
•Coloración con Hematoxilina: extracción de la parafina con Xileno, re-
hidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración decreciente, y
tinción con solución acuosa de Hematoxilina.
•Coloración con Eosina: deshidratación del corte con soluciones alcohólicas de
concentración creciente, y tinción con solución alcohólica de Eosina. Lavado
con Xileno, agregado de un líquido de montaje no acuoso, y cobertura con un
cubre-objetos para lograr un preparado permanente.
Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloración

La Eosina es un colorante ácido (predomina densidad de carga negativa), por lo cual


se asocia y colorea a estructuras catiónicas del citoplasma y matriz extracelular, tales
como: filamentos citoplasmáticos (como los de células musculares); membranas
intracelulares; y fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos ionizados).

La Hematoxilina se asocia con


mordientes para actuar como
un colorante básico, por lo
cual se asocia y colorea
estructuras aniónicas (que
posean fosfatos, sulfatos y/o
carboxilos ionizados):
•Heterocromatina y nucléolos
•RNA ribosomal
•Matriz extracelular (por los
sulfato de los GAG)
Ácido periódico-Schiff (PAS): Fundamento

El ácido periódico rompe la unión entre carbonos con hidroxilos


adyacentes, y forma grupos aldehído. El reactivo de Schiff reacciona
con los aldehídos para dar un color rojo púrpura intenso.

La reacción de PAS tiñe


carbohidratos, y se usa para
detectar:
•Gránulos de glucógeno
•Moco en diversas células
•Membrana basal de los
epitelios
•Fibras reticulares del tejido
conjuntivo
Microscopía electrónica: fundamentos
vistos en la clase