Vacuna antitumoral a partir del uso de

miR-22 para pacientes con leucemia

mieloide aguda empleando lentivirus

Camposano, María Isabel;Cuasapas, Samantha; Egas, Fabricio;Grijalva, Jeanely;

Ibarra, Christopher.
Metodología

1. Obtención de muestras humanas de leucemia

mieloide aguda.

2. Preparación de muestras leucemia mieloide

aguda.

3. Muestras de células de control

hematopoyéticas normales humanas.

4. Muestras de células de control Kit NycoPrep 1.077

hematopoyéticas normales y con leucemia de

ratón .
 Metodología

5. Construcción de plásmidos

• El miR-22 (amplificado mediante RT-PCR )

• Vector de expresión para albergar shRNA – (miR-22), será

MSCV-PIG-miR-22
shRNA

HEK-
293T
Producción de lentivirus
e infección

• plásmidos para ensamblar lentivirus Lentivirus miR-22

• pMD2.G, pMDLg / pRRE y pRSV-Rev
 Metodología

1. Cultivo celular y transfección

Cultivo de células THP-1, KOCL-48, MV4

Transfectarán con el kit

Cell Nucleofector Kit V
RPMI 1640

• Inmunoprecipitación de cromatina
• Ensayos de viabilidad y proliferación celular
• Extracción de ARN y RT-PCR cuantitativa
• Microarray microRNA