1.

- Familiarizar al estudiante con

algunas técnicas empleadas en la
identificación y separación de
macromoléculas.
2.- Continuar desarrollando las
habilidades necesarias para su
desempeño profesional.
Las macromoléculas pueden
identificarse mediante varios
procedimientos entre ellos: Su
punto isoeléctrico, reacciones
específicas como la de Biuret,
Lugol, Bromuro de etidio y
técnicas como la electroforesis
y la cromatografía.
Es un valor de pH donde las
proteínas tienen el mismo número
de cargas positivas y negativas
(carga total 0) por lo que al
colocarlas en un campo eléctrico
no migran ni al ánodo ni al cátodo.
En el Punto Isoeléctrico la solubilidad
de las proteínas disminuye.

En ese pH las proteínas se unen entre

sí por fuerzas de Van der Waals y
precipitan.
Cada proteína tiene su propio punto
Isoeléctrico.
Se preparan 7 tubos de ensayo con
soluciones buffers de diferentes pH.
1 2 3 4 5 6 7

pH pH pH pH pH pH pH
5.0 5.5 5.8 6.0 6.5 6.8 7.0
¿Cuál es el punto isoeléctrico de la
caseína?
Aquí tienes una muestra de suero
sanguíneo humano que contiene 5
fracciones de proteínas diferentes.
Para realizar la electroforesis se
utiliza esta cámara donde se coloca
el papel de acetato de celulosa.
Se añade buffer veronal pH 8,6 en la
cámara.
Se coloca una muestra de suero sobre el
papel de acetato de celulosa.
Se hace pasar corriente eléctrica (300 V)
durante 30 minutos.
Se coloca el acetato
de celulosa en rojo
ponceau para teñir
las proteínas.
Se transparenta la lámina de acetato
de celulosa y aparecen las siguientes
fracciones.
Se pasa la lámina de acetato de
celulosa por un fotodensitómetro.
Se obtiene un gráfico como este.
Este procedimiento permite
identificar proteínas siempre
que se utilicen patrones
conocidos.
Colocamos en la lámina de acetato de
celulosa una muestra de suero
sanguíneo humano y patrones de
albúmina y globulinas gamma.
Muestra de
suero
Patrón de
albúmina
Patrón de
globulina
gamma.
 Realizamos la electroforesis y al
revelar la lámina obtenemos esta
imagen.
Globulinas gamma Albúmina

Suero
Albúmina
Globulina
gamma
Separar una mezcla
de proteínas por
cromatografía
ascendente de capa
fina.
Una lámina de cristal
recubierta con sílica gel se
introduce en la cámara
cromatográfica que contiene un
disolvente.
Lámina de cristal
recubierta con sílica
gel.
El disolvente asciende por la
lámina.

Después de 45
minutos de
corrida.
Enfrentamos la lámina a una solución
reveladora de Rojo Ponceau.

Cada banda es una fracción

proteínica diferente.
 Usando patrones podemos saber de
que proteínas se trata.
Ferritina Albúmina
Caseína

Mezcla
Caseína
Ferritina
Albúmina
El reactivo de Biuret toma un
color violeta frente a las pro-
teínas.
Se torna color azul oscuro
frente al almidón.
Se coloca entre las bases y
emite fluorescencia ante la
luz ultravioleta.
La aparición de fluorescencia
indica que estamos en presencia
de ADN.
Aquí hay 4 muestras problema
que contienen: proteínas, almidón,
ADN y una mezcla de 2 de ellas.
Cada tubo contiene 5 ml de reactivo de
Biuret.

1 2 3 4

A cada tubo se añaden 0,5 ml de

muestra problema.
1 2 3 4
A 5 ml de cada muestra problema se
le añaden 3 gotas de lugol.

1 2 3 4
 A 2 ml de cada muestra problema le
agregamos 1 ml de Bromuro de Etidio.
Colocar los tubos frente a una lámpara
de luz ultravioleta.

1 2 3 4
Coloca una X en las reacciones
positivas.
Identifica el contenido de las
muestras problema: