INGENIERIA GENETICA
 QUE ES..??

La ingeniería genética es una técnica que consiste en la introducción de

genes en el genoma de un individuo que carece de ellos.

ADN recombinante

Se realiza a través de las enzimas de restricción que son capaces de

"cortar" el ADN en puntos concretos.

La ingeniería genética incluye un conjunto de técnicas biotecnológicas, entre las

que destacan:

1) La tecnología del ADN recombinante

2) La secuenciación del ADN
3) La reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
 ¿QUÉ ES LA TECNOLOGÍA DEL ADN
RECOMBINANTE?

• El término ADN recombinante hace referencia a la creación de

nuevas combinaciones de segmentos o de moléculas de ADN que
no se encuentran juntas de manera natural.

• La tecnología del ADN recombinante utiliza técnicas que provienen

de la bioquímica de los ácidos nucleicos unidas a metodologías
genéricas desarrolladas originalmente para la investigación de
bacterias y de virus.
 ¿CUÁLES SON SUS APLICACIONES?

• Aplicaciones en investigación y medicina

- Producción a gran escala de proteínas de utilidad médica
- Animales transgénicos
- Terapia génica
• Aplicaciones industriales
• Aplicaciones en agricultura
- Mejora genética de los cultivos
- Nuevos insecticidas naturales
 VECTORES
Agentes que pueden insertar un fragmento de ADN dentro de
una célula huésped = MOLÉCULA DE ADN TRANSPORTADORA

• Inserción de hasta 10kb

1. Plásmidos
• Sistema más común

• Filamentosos (M13, capacidad de inserción 10kb)

• Tipo I (T1, capacidad 23kb)
2. Fagos • Lamba (capacidad 25kb)
• P1 (capacidad 100 kb)

• Capacidad de 44kb
3. Cósmidos • Plásmidos con sitios cos

4. BAC • Capacidad de 300kb

• Cromosoma artificial de bacterias
Plásmidos. Son moléculas de ADN circular, con un tamaño menor que
el del cromosoma. Se replican con independencia del cromosoma
bacteriano ya que tienen su propio origen de replicación.

ADN RECOMBINANTE
Bacteriófagos. El proceso es similar, se trata de insertar el gen deseado en un
fragmento de ADN vírico. Posteriormente se ensamblarán las distintas partes
del virus. Así quedará el virus completo. En el siguiente paso se insertará este
ADN por el proceso de la TRANSDUCCIÓN.
Cósmidos. Son plasmidos que contienen el fragmento de ADN deseado que posee
un borde cohesivo procedente del genoma del fago lambda (extremo cos)y se
empaqueta en el interior de un fago.
Se construye el cosmido uniendo los tres elementos genicos, y el resultado final es
poder introducir en la célula receptora fragmentos largos de ADN
Además del origen de replicación, los vectores de clonación deben llevar otros
genes denominados marcadores, que sirven para identificar las células que
contienen el vector de clonación. Se suelen utilizar como marcadores, genes de
resistencia a antibióticos y genes de bioluminiscencia.

Genes de resistencia a antibióticos. Sirven para identificar bacterias

que contienen el vector de clonación, porque estas bacterias serán
resistentes al antibiótico del gen marcador.

Genes de luminiscencia.. En este caso, la célula que contenga el gen

que se quiere clonar, tendrá la propiedad de emitir luz, ya que el
marcador que se le incorpora determina que se exprese esa
característica. Este sistema se emplea cuando la célula hospedadora es
una célula eucariota.
 Transformación.

Transducción.
d. El clonado.

Una vez que se ha conseguido la población de bacterias transformadas,

(recuerda que llevan además del gen de interés un gen por ejemplo de
resistencia a un antibiótico por ejemplo un gen de resistencia a la ampicilina),
por lo que las bacterias que se consideran transformadas, serán aquellas que
sobrevivan,

El siguiente paso es poner a las bacterias en un medio de cultivo apropiado

para que se multipliquen. A la vez que se reproducen las bacterias lo hace
también el plásmido con el gen que interesa, el resultado es que se obtiene un
clon de células que llevan todas ese gen de interés. Se pueden formar por
tanto diferentes clones con genes de interés para el hombre. Este conjunto de
clones se denomina biblioteca genómica.
SECUENCIACION DE ADN
 SECUENCIACION DE ADN

La secuenciación del ADN es la determinación de la secuencia de

nucleótidos de una molécula de DNA.
La técnica mas empleada en el método de Sanger
 Secuenciación de Sanger se basa en el uso de
Didesoxinucleótidos

Sanger - 1977

Hoy se utilizan
didesoxinucleótidos
con fluorescencia
Esquema de un nucleótido normal (izquierda) y de un dideoxinucleótido o
terminador (derecha).
Grupo 3’ OH ausente en ddNTPs
Grupo 3’ OH ausente en ddNTPs
SECUENCIAMIENTO DE SANGER
Secuenciación por el método de Sanger
SECUENCIAMIENTO AUTOMATICO DE ADN
 Inyección Electrocinética

cátodo

• Inyección por voltaje

• Moléculas negativas entran en el

capilar y migran a polo positivo

capilar • Moléculas con carga negativa afectan

la inyección (Ej: OH-, Cl-)
 Electroforesis capilar

Las moléculas de DNA migran hacia el ánodo;

La excitación es realizada por el láser y la deteción por la cámara CCD.

Láser
Capilar con polímero

+ 5-20 kV
-
Buffer anódo Buffer catódo Muestra
Capillary Array - Celda de detección
RESULTADOS DE SECUENCIACION
PCR: Reacción en Cadena de la
Polimerasa
 PCR: Reacción en Cadena de la
Polimerasa
La PCR es una técnica de biología molecular que se lleva aplicando en el
campo de la investigación desde hace más de tres décadas.

Desarrollada en 1986 por el bioquímico estadounidense Kary Mullis, se basa

en una reacción enzimática mediada por la polimerasa. De ahí su nombre,
derivado de las siglas en inglés de Polymerase Chain Reaction (Reacción en
Cadena de la Polimerasa, PCR).
A estas alturas de la pandemia todos hemos oído hablar de la técnica de la
PCR. A muchos de nosotros nos han realizado la prueba o, al menos,
todos tenemos algún familiar o amigo que se ha sometido al test. Pero 
 CARACTERISTICAS DE LA PCR

1989 Kary Mullis – Premio Novel de Química 1993

1. 90 a 95 °C ADN molde

DESNATURALIZACION

2. 40 a 60 °C Taq Pol 72 °C
3.
HIBRIDACION EXTENSION
LA PCR
APLICACIONES DE LA INGENIERIA GENETICA
 Acuñó la palabra "biotecnología" en Hungría durante
Karl Ereky 1919 en un libro que publicó en Berlín llamado 
(Biotecnología de la producción de carne, grasa y
leche en una explotación agrícola a gran escala de
ciudad)

Él construyó un matadero para un millar de cerdos y

también una granja de engorde con capacidad para
50.000 cerdos, recaudando más de 100.000 cerdos
al año.

La biotecnología puede aportar soluciones a las

crisis sociales, como la escasez de alimentos y
energía. Para Ereky, el término "biotechnologie",
indicó el proceso por el cual las materias primas
podría estar biológicamente mejorado en productos
útiles para la sociedad.
Mediante la ingeniería
genética han podido
modificarse las
características de gran
cantidad de plantas para
hacerlas más útiles al
hombre, son las llamadas
plantas transgénicas.
Las primeras plantas
obtenidas mediante estas
técnicas fueron un tipo de
tomates, en los que sus
frutos tardan en madurar
algunas semanas después
de haber sido cosechados
OBTENCIÓN DE VACUNAS RECOMBINANTES

El sistema tradicional de obtención de vacunas a partir de microorganismos

patógenos inactivos, puede comportar un riesgo potencial.

Muchas vacunas, como la de la hepatitis B, se obtienen actualmente

por ingeniería genética. Como la mayoría de los factores
antigénicos son proteinas lo que se hace es clonar el gen de la
proteina correspondiente.
DIAGNÓTICO DE ENFERMEDADES DE ORIGEN GENÉTICO

Conociendo la secuencia de nucleótidos de un gen responsable de una cierta

anomalía, se puede diagnosticar si este gen anómalo está presente en un
determinado individuo