GENERALIDADES EN EL

ESTUDIO DE LOS VIRUS

DEFINICIÓN Y COMPOSICIÓN
ORIGEN Y EVOLUCIÓN
COMPARACIÓN CON OTROS MO
NATURALEZA Y FACTORES AMBIENTALES QUE LOS AFECTAN
Importancia del conocimiento de los Virus

• Enfermedades (humanos, animales, plantas)

• Baculovirus (en insectos como vectores de expresión)
• Bacteriófagos ( Tratamientos antibacterianos, Fagotipificación,
Vectores de clonación, elementos de patogenicidad,
marcadores de PM)
• Multiplicación viral para : Estudios morfológicos y de
composición, Pruebas diagnósticas, Vacunas, Genomas-
secuenciación)
• Epidemiología : Serotipos, Genotipos, Topotipos, regulación.
• Tratamiento contra cáncer(virus de viruela para infectar células
de la red de irrigación de tumores).
Concepto, Naturaleza y Origen

Definicion de Pasteur y col. (1892)

Fluido vivo infeccioso y/o contagioso. Partículas filtrables.

Definicion de Luria y Darnell (1967)

"Los virus son entidades cuyo genoma se replica dentro de celulas vivas usando su maquinaria de
sintesis. Esto determina la formacion de elementos especializados (particulas virales) que
permiten la transferencia del genoma viral a otras celulas.“

Actual
• Son parásitos intracelulares obligados
• Infectan diversos tipos celulares en los organismos vivos
• Tamaño ultramicroscópico , de 15-20 a 250- 400 nm.
• Mecanismo especial de multiplicación : Replicación.
• Material genético único (DNA o RNA).
• Se apoderan de la maquinaria biosintética de la célula, nutrientes y E.
• Morfología simple (3 elementos : Ac. Nucleico, cápside y envoltura)
• Tienen capacidad infectiva y antigénica.
• Son partículas filtrables y boyantes
Virología
• Las 2 características fundamentales que presentan los virus
son:
1. Composición simple y
2. Forma de multiplicación especial,
ambas propiedades determinan su parasitismo
intracelular obligado.

De ahí que surjan los conceptos de:

VIRUS y VIRIÓN.

Y otros: Viroides,Priones
• La partícula viral madura, denominada virión consiste
básicamente de:
1. un bloque de material genético
2. rodeado de proteínas que lo protegen del medio ambiente
3. y algunos presentan envoltura de origen membranal
Estas 2 últimas, le sirven como vehículo para permitir su
transmisión de una célula a otra.
La estructura puede presentar mayor o menor grado de
complejidad.
¿ Ciclo de Vida ?
Los virus tienen una fase extracelular en la que la partícula vírica
o virión (se encuentra fuera y es potencialmente infeccioso) es
inerte en su metabolismo, no respira ni biometaboliza nada.

La fase intracelular se inicia cuando ingresa a la célula

hospedadora, en la que ocurre la replicación vírica, se sintetizan
todos los componentes del virus empleando los componentes
metabólicos y estructurales de la célula hospedero (célula que
sufre una infección).
Origen de los virus
3 teorías:
Teoría REGRESIVA O exógena.
•Hace referencia a que determinados organismos (clamydias,rickettsias) de carácter
intracelular, por un mecanismo totalmente retrógrado se hagan dependientes de un
ser más complejo, en lugar de elegir ser autónomos.
•Es probable que los virus deriven, por un camino retrógrado, de organismos más
complejo que hayan sufrido una involución de seres complejos a simples.

Teoría PROGRESIVA o endógena. Los virus podrían proceder de elementos celulares

escapados del control de la célula, fragmentos de nucleosomas o ribosomas.

Teoría Evolutiva
•Es muy posible que tal como ocurre con los demás seres vivientes, el origen de los
virus sea oceánico.
•Los virus emergieron de los océanos junto con sus hospedadores y con ellos iniciaron
su coevolución terrestre.
•Existe una evolución continua de los virus en sus hospedadores.
Teoría de la evolución química y celular.
•TEORIA CO‐EVOLUTIVA: LOS VIRUS CO‐EVOLUCIONAN CON SUS
HOSPEDADORES.
Evolución viral
Cambio constante en una población viral como respuesta a las
presiones de selección.
Las presiones de selección son provocadas por:
1.Medio ambiente
2.Respuesta antiviral del hospedador
3.Comportamiento social

Limitaciones de la evolución viral

•Cápside: Limita la capacidad de empaquetado.
•Genoma: Su replicación depende de organelos celulares.
•Mutaciones excesivamente eficientes: Eliminarían a los
hospedadores.

•Ejemplos : Influenza y VEB

Características comparadas entre los virus y otros
microorganismos

Protozoarios
Micoplasma

Chlamydae
Rickettsiae
Bacterias

Hongos
Virus
Crecimiento en
medio simple √ √ X X X √ X

División binaria √ √ √ √ X S,A √+otros

esporas mec

Ácido nucleico √ √ √ √ X √ √

Ribosomas √ √ √ √ X √ √

Antimicrobianos
Antimicóticos
Susceptibilidad a
antibióticos √ √ √ √ X

Susceptibilidad al
interferón X X X √ √ X Algunos
• LOS MICROBIOS DOMINAN LAS LÍNEAS EVOLUTIVAS DE LOS 3
DOMINIOS DE LA VIDA:
• BACTERIA ARCHAEA EUKARIA
• LOS VIRUS SON MICROBIOS,NO PERTENECEN A NINGÚN
DOMINIO DE LA VIDA, PERO,INFECTAN A LOS SERES
VIVIENTES DE TODOS LOS DOMINIOS
 Factores que afectan a los virus y
Métodos para el estudio de los virus
• Los virus fuera de las células pueden estar expuestos
a diversos agentes :
1. Físicos y Químicos
2. Naturales y No naturales.
Acción : Pérdida de la infectividad por:
3. Ruptura
4. Cambios proteicos
5. Cambios en ácidos nucleicos
Por lesiones en las estructuras que los componen.
(Cápsides, Ac. nucleicos y Envolturas)
• Los cambios pueden ser:
• Reversibles → Reactivación
• Irreversibles → Muerte o Mutación

Mejoría o Muerte
• Importancia: El conocimiento de los agentes físicos y
químicos que inactivan la infectividad de los virus es
importante para:

• Manejo óptimo en el laboratorio por ejemplo para tener

altos rendimientos para:
1. Vacunas,
2. Estudios morfológicos y de composición
3. Secuenciación,
4. Partículas o proteínas para Dx.
5. Replicación, Infectividad, Epidemiología, Etc.

• Destrucción (cuando sea necesario)

1. Desinfección/Asepcia
2. Inactivación de virus para vacunas (↑infectividad, sin afectar
antigenicidad)
Factores ambientales que influyen en la inactivación de los virus
A)Físicos
1. Temperatura
2. pH
3. Radiaciones

B) Químicos
4. Solventes y detergentes
5. Desinfectantes
6. Colorantes
7. Mutágenos
8. Enzimas
1. Temperatura
Las °t óptimas para los virus oscilan entre 25-40°C.
25°C para insectos y plantas y 35-40°C para animales y células.
Las temperaturas elevadas sirven para la inactivación y hay en
diferentes grados. Controladas no provocan pérdidas Ag´s.
°C Vida media Viral
60 segundos
37 Minutos
20 Horas
4 Dias
-20 Dias-meses
-70 Años CO2
Soluciones crioprotectoras : -196
DMSO, Glicerol, SFB SFT, Albúmina.
Anos N liq.
Liofilización o congelamiento en seco (deshidratación de M.O. al vacío).
Los virus son notoriamente termolábiles, en unos cuantos minutos a las
temperaturas de 55 °C a 60 °C, su cápside proteica se desnaturaliza, con el
resultado de que el virión ya no es infeccioso probablemente porque ya no es
capaz de presentar una adhesión normal a la célula y/o es incapaz de
liberarse de su envoltura.

Algunos virus respiratorios envueltos tienden a ser inactivados por proceso

de congelamiento y subsecuente descongelamiento.

A temperatura corporal ocurre alguna perdida de infectividad, aunque esta

perdida es superada por la velocidad en que las partículas virales continúan
multiplicándose in vivo.

A temperatura ambiente la velocidad de degeneración es mas lenta pero

sigue siendo significativa debido principalmente a los cambios en el ácido
nucleico.

Los virus deben conservarse a temperatura baja 4 °C por un día más, pero a
largo plazo requiere temperaturas bajo cero.
2. pH
• En general neutro : 7.0-7.2
• Cambios bruscos desnat. de proteínas.
• Estables entre pH 5.0 y 9.0
• Algunos resisten pH ácido in vivo (desnudos).
• Importante en reacciones serológicas y cultivos.
• En general, los virus prefieren un ambiente isotónico con
pH fisiológico (7.9 – 8.2) pero sus limites de tolerancia son
bastante amplios.
Radiaciones
• Actúan a nivel de genoma viral por ser penetrantes.
R.Ionizantes : Rayos X y γ
• Son de muy alta E, generan peróxidos, radicales libres
y otras sustancias tóxicas.
• Letales para genomas de 1 cadena y ruptura para
genomas de 2 cadenas.
R. No ionizantes : Rayos UV e IR.
Son de alta E, generan dimerización de bases
nitrogenadas, por lo tanto producen mutaciones
(letales, medias y exitosas).
3. Radiaciones
• Rayos UV, rayos X, rayos γ otras mutaciones e
inactivación
Se pueden conservar algunas propiedades de los virus
si son controladas.
Radiaciones
La eficiencia de la inactivación por radiaciones ionizantes sobre
virus con ácido nucleico de filamento único es muy alta, ya que
casi toda ionización produce una ruptura letal en la cadena del
polinucleótido.

Con los ácidos nucleicos de doble filamento, una proporción de

la ruptura de un filamento es letal.

Ionizantes (rayos x, rayos ɤ)

No ionizantes (radiaciones ultravioleta)

B) Químicos
1.Solventes y jabones /detergentes
Actúan sobre lípidos ( en virus envueltos) :
•Éter, cloroformo, alcoholes, desoxicolato de sodio.
•Jabones y detergentes(SDS, CAPB, LSS, LSA, LESA, CCAmonio) y
•Sales biliares.
Los virus con envoltura son fácilmente destruidos por los solventes de lípidos.

La susceptibilidad a los solventes de lípidos se emplea habitualmente como prueba

preliminar eliminatoria en la identificación de virus recién aislados.
Los virus con envoltura no pueden sobrevivir a la exposición de la bilis en el aparato
digestivo.
Los detergentes aniónicos como sulfato dodecil sódico son efectivos contra todos los
virus con envoltura y contra algunos (pero no todos) los virus icosaédricos sin envoltura.

2.Desinfectantes : Virocidas y Virostáticos.

Alcoholes, Fenoles, Aldehídos, Derivados de halógenos (Cl y I), Metales pesados (Hg,
Ag), Oxidantes (peróxidos y NO).

El formaldehido, ácido clorhídrico diluido o hipoclorito de sodio son demasiado

irritantes para ponerlos en contacto con el hombre.
3.Colorantes : Actúan a nivel genoma y provocan mutaciones e inactivación. Naranja
de acridina y Rojo neutro.
Los colorantes vitales heterotricíclicos como el rojo neutro o naranja de acridina
pueden terminar intercalándose entre las bases de las moléculas de ácido nucleico
viral replicante.
Esto no es letal en si mismo pero se hace letal bajo la exposición subsecuente a la luz
(inactivación fotodinámica).

4.Mutágenos : Análogos de bases nitrogenadas, se intercalan entre las bases del

ácido nucleico y provocan mutaciones.
2- aminopurina, nitroso guanidina, β-propiolactona, 5-yodo deoxiuridina, Ac, nitroso.
De uso in vitro: ácido nitroso, hidroxilamina, agentes alquilantes.
De uso in vivo: análogos de ácidos nucleicos, agentes intercalantes.

5.Enzimas : Nucleasas ( Ribonucleasas, Desoxirribonucleasas).

Las proteasas no destruyen virus
• Estabilización por sales: Mecanismo no conocido.

• Resisten 50°C durante una hora

• Sales MgCl2 Picorna y reovirus
• MgSO4 Orthomyxo y paramyxovirus
• Na2SO4 Herpesvirus

• Importante en la preparación de vacunas para distribución

• en sitios tropicales.
Métodos de detección
Aislamiento viral
• Animales (Ver diferentes grupos y diferentes tipos)
• Huevo embrionado (ver vías y virus apropiados)
• Cultivo celular (cultivo 1ario, Cepas celulares y Líneas celulares)

Detección del genoma

• Métodos de biología molecular Directos

Detección de Antígeno
• Microscopía electrónica
• Métodos virológicos
• Métodos inmunológicos (ELISA de captura, WB, IFD)
• Métodos de biología molecular

Detección de Anticuerpos
• Métodos inmunológicos (IgM, IgG, IgA) Indirectos
Microscopía electrónica.

Es necesaria la utilización del microscopio electrónico para observar y estudiar la estructura de

los virus, el análisis de sus dimensiones y el recuento de partículas.

Existen distintos tipos de técnicas de microscopia que permiten la observación directa o

indirecta de los virus, sus estructuras y sus efectos (microscopia de transmisión, de barrido,
tinciones negativas, criofractura, etc.)
• Microscopía
1. De transmisión. El haz de electrones incidente atraviesa la muestra o
espécimen  observado y la sombra de detalles finos o ultra-estructura es
capturada en una pantalla fosforescente  con propiedades de emisión de
luz, ubicada en la parte inferior de la columna, no explora superficies
2. De barrido. Explora las superficies de las muestras realizando un
paneo sobre la misma y capturando la radiación reflejada la cual se
codifica en datos computacionales con la idea de reconstruir la imagen
del espécimen
 Métodos de Dx de virus
Métodos virológicos
• Microscopía electrónica
• Hemaglutinación.
• Inhibición de la hemaglutinación
• Hemoadsorción.

Métodos inmunológicos (Ag-Ac)

• Inmuno aglutinación
• ELISA.
• IF
• RIA
• QL
• Inmuno cromatografía
• Western blot
• Neutralización
 Métodos moleculares

• PCR: RT-PCR, anidada, multiplex, Tiempo real.

• Slot blot.
• Dot blot.
• Southern blot.
• Northern blot.
• Microarreglos
• Secuenciación