MICROSCOPIA

Dr. LEON ARANDA DANIEL

Profesor Principal TC.
 OBJETIVOS
1.- TENER UNA NOCIÓN GENERAL DEL MICROSCOPIO OPTICO.

2.- SABER CUALES SON LAS PARTES DEL MICROSCOPIO OPTICO.

3.- DEFINIR LOS CONCEPTOS BÁSICOS DE MICROSCOPIA OPTICA.

4.- SABER CÓMO SE FORMAN LAS IMÁGENES EN LOS LENTES

CONVERGENTES.

5.- TENER UNA NOCIÓN DE LOS MICROSCOPIOS ESPECIALES.

6.- SABER QUÉ CLASES DE MICROSCOPIOS ESPECIALES EXISTEN.

 Microscopio de campo claro
También llamado común,
compuesto, óptico, fotónico.
1. PARTE MECANICA. (estativo o
montura)
 Pie
 Columna
 Tubo
 Platina
 Subplatina
2. SISTEMA ÓPTICO
 Objetivos
 Oculares
 Aparato de iluminación:
 Espejo
 Condensador
 Diafragma-Iris
 PRINCIPIOS DE FISICA OPTICA
REFLEXION DE LA LUZ
Si un rayo luminoso choca con una superficie pulimentada,
se refleja con un ángulo de reflexión igual al ángulo de
incidencia.

Donde:

i = ángulo de incidencia
r = ángulo de reflexión

Se tiene que i = r
 PRINCIPIOS DE FISICA OPTICA
 PROPAGACION DE LA LUZ EN MEDIOS
HOMOGENEOS: En línea recta.

 RAYOS QUE INCIDEN PERPENDICULARMENTE

EN MEDIOS HETEROGENEOS: No se desvían y
reciben el nombre de la NORMAL.
 PRINCIPIOS DE FISICA OPTICA
REFRACCION DE LA LUZ
Cuando un rayo luminoso pasa oblicuamente:
De un medio de < densidad De un medio de > densidad
a otro de > densidad a otro de < densidad
N N

1 1

1.33
1.33
 PRINCIPIOS DE FISICA OPTICA
 INDICE DE REFRACCION: Relación que existe entre
el seno del ángulo de incidencia y el seno del ángulo
de refracción, siendo esta relación constante
cualquiera que sea la oblicuidad del rayo.

Índice de Refracción de:

Aire = 1.00
Agua = 1.33
Aceite de inmersión = 1.52
Vidrio = 1.51
LENTES: Es todo medio refringente limitado
por una o dos superficies esféricas.

LENTES POSITIVOS: Magnifican la imagen

LENTES NEGATIVOS: No magnifican la

imagen
LENTES POSITIVOS O CONVERGENTES

o Cóncavo
Convexo
(FLINT)
LENTES NEGATIVOS O DIVERGENTES

BICONCAVO PLANO CONVEXO

(CROWN) CONCAVO CONCAVO
REFRACCION DE LA LUZ A TRAVES DE UNA
LENTE PLANO-CONVEXA
N

EJE PRINCIPAL
C.C.. F.S..  .
C.O.
C.C. F.S. C.O.

F.P.
D.F.

RAYO SECUNDARIO: Rayo central

N
REFRACCION DE LA LUZ A TRAVES DE
UNA LENTE BICONVEXA
N N

● ●
FS C.O. FP
FORMACION DE IMÁGENES EN LENTES
CONVERGENTES
PRIMER CASO: Objeto situado más
allá del centro de curvatura

c.c. F.S. C.O

.

IMAGEN: Más pequeña

real e invertida
FORMACION DE IMÁGENES EN LENTES
CONVERGENTES
SEGUNDO CASO: Objeto situado
en el centro de curvatura

IMAGEN: Del mismo tamaño,

real, invertida
FORMACION DE IMÁGENES EN LENTES
CONVERGENTES
TERCER CASO: Objeto situado
entre el centro de curvatura y el
foco secundario (CASO DEL
OBJETIVO)

● ●

IMAGEN: Aumentada, real.

invertida
FORMACION DE IMÁGENES EN LENTES
CONVERGENTES
CUARTO CASO: Objeto situado
en el foco secundario

IMAGEN: No se forma
FORMACION DE IMÁGENES EN LENTES
CONVERGENTES
QUINTO CASO: Objeto situado entre
el foco secundario y el centro óptico
(CASO DEL OCULAR)

IMAGEN: Aumentada,
virtual, derecha
SISTEMA OPTICO

1.- OBJETIVOS

2.- OCULARES

3.- APARATO DE ILUMINACION

 1.- OBJETIVOS
Formados por un lente o por un sistema de lentes convergentes,
que producen una imagen real, aumentada e invertida

CLASES DE OBJETIVOS
A.- OBJETIVO EN SECO B.- OBJETIVO DE INMERSION

ACEITE DE
AIRE INMERSION
N=1 N=1.51
VIDRIO LAMINA PORTA OBJETO: Con el objeto, VIDRIO
N=1.52 cubierto por el cubreobjeto N=1.52
 1.- OBJETIVOS
CLASES DE OBJETIVOS
A.- OBJETIVO EN SECO B.- OBJETIVO DE INMERSION

VIDRIO VIDRIO
N=1.51
N=1.51
ABERRACION CROMATICA:

SE CORRIGE CON
LENTES DE CROWN Y
FLINT: Verde y Rojo o
verde y amarillo.
ABERRACION DE ESFERICIDAD:

SE CORRIGE EN PARTE:
•Cerrando el diafragma
•Utilizando objetivos
aplanáticos.
 TIPOS DE OBJETIVOS
a) APLANATICOS: Tienen corregida la
aberración de esfericidad.
b) ACROMATICOS: Tienen corregida la
aberración cromática para 2 colores (rojo y
azul) y la de esfericidad para 1.
c) APOCROMATICOS: Tienen corregida la
aberración cromática para 3 colores (rojo,
verde y azul) y la aberración de esfericidad
para 2.
 TIPOS DE OBJETIVOS

d) SEMI APOCROMATICOS: Tienen corregida

la aberración cromática para todos los
colores, dan imágenes nítidas y luminosas
aunque no perfectas, son más económicos
que los anteriores y muy usados.
e) DE CORRECCION: Tienen un tornillo que
sube o baja la lente superior del objetivo,
para corregir las desviaciones producidas por
el diferente espesor de los cubreobjetos.
ANGULO DE ABERTURA

Es el ángulo limitado por los rayos más periféricos

que penetran en el sistema óptico y contribuyen a
formar la imagen de un punto cualquiera del objeto.
ABERTURA NUMERICA (AN): Capacidad de un objetivo
de utilizar un mayor número de rayos luminosos en la
formación de una imagen.

AN = N . Sen a

N= Índice de refracción del

medio interpuesto entre el
objeto que se observa y la
lente frontal del objetivo.
Sen a = Seno del
semiángulo de abertura
PODER DE RESOLUCION: Capacidad de un objetivo de
dar imágenes nítidas de dos puntos próximos .

LIMITE DE RESOLUCION (R): Es la menor distancia a

que pueden estar situados los dos puntos para su perfecta
discriminación.

0.61 x Long de Onda

R=
Abertura Numérica
PODER DE PENETRACION O PROFUNDIDAD DE FOCO:
Capacidad del objetivo de permitir observar varios
planos del preparado con una misma posición de
enfoque.
Es inversamente proporcional a su abertura numérica.

PODER DE DEFINICION:
Capacidad del objetivo de formar imágenes claras
y de contornos nítidos
 2.- OCULARES
Originan una imagen aumentada, virtual y derecha

GENERALMENTE
SON DE:
5X
10X
15X
20X
 TIPOS DE OCULARES
A. OCULAR DE HUYGENS B. OCULAR DE RAMSDEN
O NEGATIVO O POSITIVO
 TIPOS DE OCULARES
C. OCULAR DE COMPENSACION: Corrige la
aberración cromática restante de los objetivos
apocromáticos.
D. OCULARES APLANATICOS,
ORTOSCOPI-COS Y PERISCOPICOS:
Destinados a dar campos amplios, corregidos
del abombamiento producido en mayor grado
por los objetivos muy potentes.
3.- APARATO DE ILUMINACION
Está situado debajo de la platina y formado
por:

A.- EL ESPEJO: Tiene una cara plana y otra

cóncava, proyecta el haz de rayos que ha
de iluminar el objeto.
ESPEJO
 3.- APARATO DE ILUMINACION
Está situado debajo de
la platina y formado por:
B.- EL CONDENSADOR:
Sistema de lentes
convergentes que
proyecta sobre el
preparado, el haz de luz
que lo atraviesa en
forma de un amplio
cono.
3.- APARATO DE ILUMINACION
Está situado debajo de
la platina y formado por:
C.- EL DIAFRAGMA IRIS:
Situado debajo del
condensador, sirve para
regular la cantidad de
rayos luminosos que
llegan al objeto.
3.- APARATO DE ILUMINACION

Está situado debajo de

la platina y formado por:
LA FUENTE DE LUZ
puede ser NATURAL O
ARTIFICIAL
FORMACION DE IMAGEN EN EL MICROSCOPIO

O
B O
J B O
J
E
E
C
T
O T U
I L
V A
O
R
El condensador produce un haz de luz que ilumina el objeto, el
objetivo lo aumenta y proyecta la imagen sobre el ocular, este
aumenta aún más la imagen y la proyecta sobre la retina del
observador.
MICROSCOPIOS
ESPECIALES
 CARACTERÍSTICAS:
TIENEN COMO BASE AL MICROSCOPIO ÓPTICO, AÑADIENDO
ALGUNOS ADITAMENTOS QUE DISMINUYEN LA LONGITUD DE
ONDA Y AUMENTAN EL ÁNGULO DE ABERTURA.

MAYOR RESOLUCIÓN

PERMITEN VER ESTRUCTURAS MÁS PEQUEÑAS.

TIPOS DE MICROSCOPIOS ESPECIALES
 DE POLARIZACIÓN
 DE INTERFERENCIA
 DE CONTRASTE DE FASE
 DE CAMPO OSCURO
 DE LUZ ULTRAVIOLETA
 DE FLUORESCENCIA
 ELECTRÓNICO
TRANSMISIÓN
BARRIDO
MICROSCOPIO DE POLARIZACION
MICROSCOPIO DE POLARIZACION
 Mediante este microscopio es posible obtener
información de la estructura a nivel molecular
y se puede utilizar en células vivas.
 Estructuras birrefringentes que pueden verse
con el M. de Polarización: Fibras musculares,
fibras nerviosas, fibras del tejido conjuntivo
(colágenas, elásticas y de reticulina), conos y
bastones de la retina, gotitas de líquido en la
corteza suprarrenal, cilios, flagelos, tejido óseo
calcificado.
MICROSCOPIO DE CONTRASTE
DE FASE
MICROSCOPIO DE CONTRASTE
DE FASE
 Permite ver finos detalles de estructuras
transparentes y al estado fresco.
 Se introducen placas ópticas en el objetivo y el
condensador, un diafragma anular lanza un
cono luminoso encargado de transformar las
diferencias de fase en diferencias de amplitud,
con lo que el ojo humano hace la diferenciación
del índice de refracción, como diferencias de
intensidad.
MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA
MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA
 Mientras que el M. de contraste de fase sólo es
un instrumento cualitativo, con el M. de
interferencia se puede obtener datos
cuantitativos.
 Esto se logra al dividir la luz de una única
fuente en 2 haces luminosos, de los cuales 1
se envía a través del objeto y el otro no se
altera, por lo que actúa como haz de
referencia.
MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA

 Después se vuelven a unir ambos haces que

interfieren entre sí de la misma manera como
sucede en el M. de contraste de fase.
 El haz que atravesó el objeto sufre un retraso
con respecto al haz de referencia, es decir,
sufre una modificación de fase.
MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA

 Dado que el retraso es función del índice de

refracción y el espesor, el valor del retraso se
puede emplear para determinar la masa por
unidad de superficie del preparado y en
consecuencia, la masa de los elementos
celulares individuales.
MICROSCOPIO

DE LUZ

ULTRAVIOLETA
 MICROSCOPIO DE LUZ
ULTRAVIOLETA
 Su sistema óptico está construido en cuarzo,
que deja pasar la luz UV. la misma que es
invisible y daña la retina, por ello la imagen se
registra en una película fotográfica.
 La luz UV tiene longitud de onda de alrededor
de 250 nm o 2500 angstroms, es decir, casi la
mitad de la luz visible.
 MICROSCOPIO DE LUZ
ULTRAVIOLETA
 Aumenta el poder de resolución, pero la
principal importancia es que los ácidos
nucleicos absorben la luz UV de determinada
longitud de onda (260 nm), por ello es que se
pueden detectar con facilidad.
 MICROSCOPIO

DE

FLUORESCENCIAA
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

 Algunas sustancias fluorescen, porque

irradian luz de otra longitud de onda al ser
iluminadas. La luz irradiada siempre tiene
longitud de onda más larga que la original.
 Autofluorescencia o fluorescencia primaria:
Existe en algunas sustancias o estructuras
biológicas: vitamina A, el BK, la clorofila, la
riboflavina, etc.
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
 Fluorescencia secundaria: Es la inducida
utilizando colorantes fluorescentes llamados
también fluorocromos, Ejm. Anaranjado de
acridina, la quinacrina, la fluoresceína, etc.
 Las estructuras fluorescentes se ven a color
sobre un fondo oscuro, como fuentes
luminosas, con lo que es posible observar
estructuras mucho más pequeñas que el poder
de resolución del microscopio.
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

 En inmunofluorescencia, es posible ver la

reacción antígeno anticuerpo.
 En citogenética, se pueden tipificar los
distintos cromosomas del cariotipo.
 Identificación de sustancias químicas, gran
número de proteínas han sido identificadas con
esta técnica.
 MICROSCOPIO
DE
CAMPO OSCURO
MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

 En histología se usa a
menudo el campo oscuro para
el análisis de preparados radio
autográficos, pero una
importante aplicación clínica
es la determinación del
Treponema Pallidum (sífilis).
MICROSCOPIO ELECTRONICO

 Representa un verdadero avance en cuanto a

incrementos del aumento y del poder de
resolución.
 Reemplaza la luz visible de longitud de onda de
alrededor de 500 nm, por un haz de electrones
de longitud de onda de 0.005 nm.
MICROSCOPIO ELECTRONICO

 Como los electrones no atraviesan las

lentes de vidrio, se reemplazan por bobinas
electromagnéticas, en cuyos campos
electromagnéticos o electrostáticos se
modifica el trayecto del haz de electrones,
de modo similar a como se refracta el haz
de luz visible en una lente de cristal.
MICROSCOPIO ELECTRONICO

HAY DOS CLASES

DE TRANSMISIÓN DE BARRIDO
MICROSCOPIO
ELECTRONICO
DE TRANSMISION
MICROSCOPIO E. DE TRANSMISION

 Los electrones atraviesan el objeto.

 Se calienta un cátodo filamentoso de tungsteno
en una atmosfera de vacío, emitiendo electrones
que son acelerados hacia el ánodo, por una
diferencia de potencial de alrededor de 50-100
KV. El ánodo tiene un orificio central por donde
pasa un flujo constante de electrones o haz de
electrones.
MICROSCOPIO E. DE TRANSMISION

VENTAJAS:
Permite conocer la ultra estructura biológica,
porque se puede obtener aumentos útiles
superiores a 500,000 veces, pudiéndose observar
objetos tan pequeños como de 10 a 15 A°.
MICROSCOPIO E. DE TRANSMISION

DESVENTAJAS:
No se pueden ver células vivas, porque los
electrones se propagan en el vacío y los cortes
deben ser totalmente deshidratados.
Los cortes deben ser demasiado finos (200 a 1000
A° de espesor), por el escaso poder de penetración
de los electrones.
MICROSCOPIO E. DE TRANSMISION

DESVENTAJAS:
Las estructuras no pueden ser coloreadas, sin
embargo se utilizan como colorantes electrónicos,
metales pesados tales como osmio, plomo, uranio y
el lantano que actúan aumentando el contraste de
las estructuras.
MICROSCOPIO E. DE BARRIDO
 Los electrones no atraviesan el objeto.
 La imagen se forma indirectamente, a través de
la captación puntual de detalles en la superficie
del preparado.
 El preparado se cubre con una delgada capa de
un metal pesado y se bombardea con un haz de
electrones muy estrecho, que “barre” la superficie
del objeto en un patrón lineal y lo copia.
MICROSCOPIO E. DE BARRIDO
 La imagen obtenida se visualiza directamente
sobre la pantalla y se puede registrar en una
fotografía o en forma digital.
 No se necesita cortes ultra finos porque los
electrones no atraviesan el objeto.
 La nitidez de la imagen en profundidad es de
hasta 10 veces la que se obtiene con el M.
óptico. En consecuencia, se puede lograr una
imagen tridimensional y definida, de la superficie.
 CONCLUSIONES
1. El microscopio es el instrumento más importante
en la histología, por el pequeño tamaño de las
estructuras que se analizan.
2. Tiene una PARTE MECANICA. (Pie, Columna,
Tubo, Platina y Sub platina) y un SISTEMA
ÓPTICO. (Objetivos, Oculares y Aparato de
Iluminación: Espejo, condensador y diafragma
iris)
 CONCLUSIONES
3. La luz se propaga en línea recta en medios
homogéneos, pero en medios heterogéneos,
cuando incide oblicuamente: Si pasa de un medio
de < densidad a otro de > densidad, se desvía
acercándose a la normal y se aleja de la normal si
pasa de un medio de > densidad a otro de <
densidad.
 CONCLUSIONES
La luz que incide perpendicularmente en medios
heterogéneos, no se desvía y toma el nombre de la NORMAL.
Lente es todo medio refringente limitado por una o dos
superficies esféricas.
Foco principal es el punto donde convergen todos los rayos
refractados.
Centro óptico es el centro de la lente.
Centro de curvatura es el centro de la esfera de donde
proviene la lente.
Eje principal es la recta que une el C.O. y el C.C.
 CONCLUSIONES
4. FORMACIÓN DE IMÁGENES:
a) Objeto se sitúa más allá del centro de curvatura, se
forma una imagen más pequeña, real e invertida.
b) Objeto está en el centro de curvatura, se forma una
imagen del mismo tamaño, real e invertida
c) Objeto se ubica entre el centro de curvatura y el foco
secundario (CASO DEL OBJETIVO), se forma una imagen
más grande, real e invertida.
d) Objeto se localiza en el foco secundario, no se forma
imagen.
e) Objeto se coloca entre el foco secundario y el centro
óptico (CASO DEL OCULAR), se forma una imagen más
grande, virtual y derecha.
 CONCLUSIONES
5. Los Microscopios Especiales tienen como
base al Microscopio Óptico, al que se le añade
algunos aditamentos que disminuyen la longitud
de onda y aumentan el ángulo de abertura, esto
le da mayor resolución y por lo tanto se pueden
ver estructuras más pequeñas.
 CONCLUSIONES
6. Clases de Microscopios Especiales: M. De:
Polarización.
Interferencia.
Contraste de Fase.
Campo Oscuro.
Luz Ultravioleta.
Fluorescencia.
Electrónico: *De Transmisión.
*De Barrido.
 BIBLIOGRAFIA
 Alan Stevens – James Lowe. Texto y atlas de
Histología. Mosay/DoymaLibros. 2015.
 Junqueira y Carneiro. Histología Básica Texto
y Atlas. Editorial Panamericana. 12va Edición.
2015.
 Leslie Gartner / James Hiat. Atlas y texto de
Histología. Editorial Panamericana. 6ta
Edición. 2015.
 https://suretkasoluciones.wixsite.com/librosme
dicinapdf/post/geneser-de-histolog%C3%AD-
4ta-edici%C3B3n-en-pdf-mega
MUCHAS
GRACIAS