Salmonella

Laboratorio de Microbiología Aplicada

Dra. Esther Z. Vega Bermúdez
Salmonella sp.
 Salmonella

Salmonella Salmonella
enterica bongori

Subs.
enterica
Subs. Subs. Subs.
salamae Subs. Subs.
arizonae diarizonae indica houtenae

From: Porwollik, S., et al., 2004. Characterization of Salmonella enterica subspecies I genovars by
Of Microarrays. J. of Bacteriol. 186:5883-5898.
Incidencia de Salmonella
 Características

 Enterobacterias
 Bacilos Gram (-)
 Mótiles con
flagelación perítrica
 No esporulan
 No fermentan
lactosa
 2, 300 especies
 Crece entre 40-140oC
 Variantes Genéticas
 Mediada por Plasmidios
– Utilización de lactosa y sucrosa
 Microorganismos atípicos pueden “escapar”a la
detección en situaciones clínicas
 Las especies de Salmonella no son un grupo
homogéneo de organismos
 Reservorios / Alimentos
Relacionados
 Carnes crudas
 Aves
 Huevos
 Leche y productos lácteos
 Pescado
 Camarones
 Salsas
 Mezclas para bizcocho
 Postres de crema
 otros
 Patogénesis

 Dosis infecciosa tan bajo como 15-20 células (depediendo de

hospedero)
 Antígenos estructurales (pared celular o
antígeno O, H- flagelar y el IV-antígeno
capsular termolábil -poder frente a los
ácidos)
 Sustancias tóxicas
 Endotoxinas
 Exotoxinas (efecto irritante y citotóxico
para el tracto intestinal)
 Ruta oral-fecal
 Sintomatología y Enfermedades
 Septicemias
 Período de incubación de  Bacteremias
6-48hrs  Cistitis, endocarditis y
 Diarreas
osteomilitis
 Dolor abdominal
 Fiebre entre 8-72hrs
 Síndrome de Reiters
 Dolor de cabeza y
que puede terminar en
en el cuerpo
artritis crónica
 Escalofríos  Fiebre tifoidea ó
 Naúseas paratifoidea
 Vómitos
 Diagnóstico y Tratamiento
 Pruebas de serología y de heces fecales
 Aislar el paciente
 Tratamiento para todos en el hogar
 Antibíoticos
 Muestreo en Alimentos
Métodos convencionales de aislación que
requieren de cinco días para confirmar
resultados.
Cultivo 37-420C o en nevera.
Salmonella
 Metodología
 Pre-Enriquecimiento
– Caldo de lactosa
 Permite la recuperación de células “heridas”
 Aumenta la razón Salmonella:Non-Salmonella
– Agua de dilución peptonada
Productos Animales
 Dilución 1:10
– I.e.. 25 g muesra a 225 ml de caldo
 24 horas a 35 oC
 Enriquecimiento Selectivo
 1 ml de caldo de Lactosa
– 10 ml Selenite Cystine
– 10 ml tetrathionate broth
 Permite el crecimiento de Salmonella
 No hay resultados despúes de este paso
 24 horas a 35oC
 Placas Selectivas
 Tres tipos de medio selectivo
– Bismuth Sulfite
 Marrón, gris, negro con “metallic sheen”
– Hektoen Enteric Agar
 Azul-verdoso con o sin centro negro o “glossy black”
– Xylose Lysine Desoxycholate
 Rosado con o sin centro negro
 Estriado de “Selective Enrichments”
 Incubación de 18-24 h a 35oC
 Resultados – PRESUMPTIVE POSITIVE
 Medio Diferencial – Discernimiento
bioquímico
 Triple Sugar Iron Agar
– Streak Slant and Stab Butt
– 1% Lactosa
– 0.1% Glucosa
– Sulfato Ferroso
 Indicador de H2S
– Tiosulfato
 Producción de H2S
– Rojo fenol
 Alkalina – Rojo, Acido – Amarillo
– Incubación a 35 oC por 24 horas
 Triple Sugar Iron Agar
 Reacción de Salmonella
– Red Slant (Alkalino)
– Acid Butt (Amarillo)
– Precipitado Negro
 Lysine Iron Agar- Discernimiento
bioquímico
 Stab Butt and Streak Slant
– Se quiere condiciones anaeróbicas en el fondo para que
ocurra la decarboxilación
 Decarboxilación a partir de L-Lysina
 Sulfato Ferroso
 Bromo Cresol Purple
– Violeta – Alkalino, Amarillo - Acido
 Glucosa
 Tiosulfato
 Lysine Iron Agar
 Reacción de Salmonella
– Alkaline Butt – Purple
– Precipitado Negro
 Sólo es negativo si hay condiciones ácidicas,
pueden obtenerse otras reacciones no típicas
 Confirmación Bioquímica
 Aglutinación de antígenos superficiales con
anticuerpos específicos para Salmonella
 Antígenos de Salmonella
– O – Somático – Lipopolisacárido
– H – Flagellar – Proteína
– K – Capsular - Polisacáridos
 Aglutinación
 Mezcle anticuerpos con un poco de cultivo
 Aglutinación es un resultado positivo
 Aislamiento vs. Enumeración
 Usualmente sólo se aisla
 Se enumera para propósitos de investigación
– Método MPN
– Método de filtración por membranas
 No “Accurate”
Otros métodos- kits bioquímicos
Table 1. Partial list of miniaturized biochemical kits and automated systems for identifying foodborne bacteria* (
5, 8, 15, 16, 21,Format
System 35, 36 ). Manufacturer Organisms
APIb biochemica bioMerieux Enterobacteriaceae, Listeria, Staphylococcus, Campylobacter, Non-
Cobas IDA l
biochemica Hoffmann fermenters, anaerobes
Enterobacteriaceae
Micro-ID b l
biochemica LaRoche
REMEL Enterobacteriaceae, Listeria
EnterotubeII l
biochemica Roche Enterobacteriaceae
Spectrum 10 l
biochemica Austin Enterobacteriaceae
RapID l
biochemica Biological
Innovative Enterobacteriaceae
BBL Crystal l
biochemica Diag.
Becton Enterobacteriaceae, Vibrionaceae, Non-fermenters, anaerobes
Minitek l
biochemica Dickinson
Becton Enterobacteriaceae
Microbact l
biochemica Dickinson
Microgen Enterobacteriaceae, Gram negatives, Non-fermenters, Listeria
Vitek b l
biochemica bioMerieux Enterobacteriaceae, Gram negatives, Gram positives
Microlog l
C a
Biolog Enterobacteriaceae, Gram negatives, Gram positives
MISb oxidation
Fatty acidaa Microbial-ID Enterobacteriaceae, Listeria, Bacillus, Staphylococcus, Campylobacter
Walk/Away biochemica MicroScan Enterobacteriaceae, Listeria, Bacillus, Staphylococcus, Campylobacter
l
Replianalyze biochemica
a
Oxoid Enterobacteriaceae, Listeria, Bacillus, Staphylococcus, Campylobacter
r
Riboprinter l
nucleic
a
Qualicon Salmonella, Staphylococcus, Listeria, Escherichia coli
Cobas acida
biochemica Becton Enterobacteriaceae, Gram negatives, Non-fermenters
Micro-ID
Malthus b l
conductanc
a
Dickinson
Malthus Salmonella, Listeria, Campylobacter, E. coli, Pseudomonas, coliforms
Bactometer e
impedance
a a
bioMerieux Salmonella
* Table modified from: Feng, P., App.I., FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed.
a
Automated systems
NOTE:
b This
Selected table adopted
systems is intended for general
AOAC Officialreference only and
First or Final lists known available methods. Presence on this list does not indicate
Action.
verification, endorsement, or approval by FDA for use in food analysis.
 Identificación basada DNA-DNA

Table 2. Partial list of commercially-available, nucleic acid-based assays used in the detection of foodborne
bacterial pathogens* (2, 5, 8, 12, 14, 22, 25, 36, 37).

Organism Trade Name Format Manufacturer

Salmonella GENE-TRAKc probe GENE-TRAK

BAX PCR Qualicon

BINDb phage BioControl

Probelia PCR BioControl

* Table modified from: Feng, P., App.I, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed.
a
Polymerase chain reaction
b
Bacterial Ice Nucleation Diagnostics
c
Adopted AOAC Official First or Final Action
NOTE: This table is intended for general reference only and lists known available methods. Presence on this list does not
indicate verification, endorsement, or approval by FDA for use in food analysis.
 Identificación basada en detección de
antígenos
Table 3. Partial list of commercially-available, antibody-based assays for the detection of foodborne pathogens and toxins* (3, 5, 8, 12, 33, 36).
Organism/toxin Trade Name Assay Formata Manufacturer
Salmonella Bactigen LA Wampole Labs
Spectate LA Rhone-Poulenc
Microscreen LA Mercia
Wellcolex LA Laboratoire Wellcome
Serobact LA REMEL
RAPIDTEST LA Unipath
Dynabeads Ab-beads Dynal
Screen Ab-beads VICAM
CHECKPOINT Ab-blot KPL
1-2 Teste diffusion BioControl
SalmonellaTEKe ELISA Organon Teknika
TECRAe ELISA TECRA
EQUATE ELISA Binax
BacTrace ELISA KPL
LOCATE ELISA Rhone-Poulenc
Assurancee ELISA BioControl
Salmonella ELISA GEM Biomedical
Transia ELISA Transia
Bioline ELISA Bioline
VIDASe ELFAb bioMerieux
OPUS ELISAb TECRA
PATH-STIK Ab-ppt LUMAC
Reveal Ab-ppt Neogen
Clearview Ab-ppt Unipath
UNIQUEe Capture-EIA TECRA
* Table modified from: Feng, P., App.I, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed.
a
Abbreviations: ELISA, enzyme linked immunosorbent assay; ELFA, enzyme linked fluorescent assay; RPLA, reverse passive latex agglutination; LA, latex agglutination;
Ab-ppt, immunoprecipitation.
**Automated
b CAUTION: unless the assays claim that they are specific for the O157:H7 serotype, most of these tests detect only the O157 antigen; hence will also react with
ELISA
O157
c
EHECstrains that are not of E.
- Enterohemorrhagic H7coli;
serotype.
ETEC These O157, non-H7
- enterotoxigenic strains, generally do not produce Shiga toxins and are regarded as not pathogenic for humans.
E. coli
NOTE: This table
Furthermore, is intended
some forto
antibodies general
O157 reference
can also only and
cross lists
react known
with availableE.methods.
Citrobacter, hermanii Presence on this
and other list does
enteric not indicate verification, endorsement, or approval by
organisms.
d
Also detects E. coli LT enterotoxin
FDA for use in food analysis.
e
Adopted AOAC Official First or Final Action
Identificación basada en la utilización de sustratos

Table 4. Partial list of other commercially available rapid methods and specialty substrate media for
detection of foodborne bacteria* (4, 8, 13, 20, 27, 36).
Organism Trade Name Formata Assay Manufacturer

Salmonella Isogridb HGMF QA Labs

OSRT Medium/ motility Unipath (Oxoid)

Rambach Medium CHROMagar

MUCAP C8esterase Biolife

XLT-4 Medium Difco

MSRVb Medium  

* Table modified from: Feng, P., App.I, FDA Bacteriological Analytical Manual, 8A ed.
a
Abbreviations: APC, aerobic plate count; HGMF, hydrophobic grid membrane filter; ATP, adenosine triphosphate;
MUG, 4-methylumbelliferyl-ß-D-glucuronide; ONPG, O-nitrophenyl ß-D-galactoside; MPN, most probable number.
b
Adopted AOAC Official First or Final Action.
c
Application for water analysis
NOTE: This table is intended for general reference only and lists known available methods. Presence on this list does not
d
EHEC - enterohemorrhagic Escherichia coli
indicate verification, endorsement, or approval by FDA for use in food analysis.