BANDEO CROMOSOMICO

Existen varias técnicas de bandeo

cromosómico, que nos permiten identificar
individualmente los cromosomas, lo cual
facilita la identificación de una alteración
cromosómica numérica y especialmente
demostrar la presencia de alteraciones
cromosómicas estructurales.
• Permite precisar la localización de genes aportando
información al llamado mapeo genético.
• Tener un mayor conocimiento acerca de la estructura
cromosómica y de los reordenamientos que se producen en
las distintas alteraciones tales como:

 Fusiones y fisiones céntricas

 Translocaciones recíprocas y en tandem
 Inversiones peri y paracéntricas
 Deleciones
 Duplicaciones
 Constricciones secundarias
 Fracturas cromosómicas, etc.
 BANDAS CROMOSÓMICAS
Los bandeos cromosómicos pueden clasificarse en
morfológicos y dinámicos:
A.-LOS BANDEOS MORFOLÓGICOS:
se obtienen basándose en técnicas inherentes a la
heterogeneidad de la cromatina. Existe una relación con
proteínas (histónicas y no histónicas) e interacciones ADN. A
su vez clasificados en:

 Técnicas de tinción diferencial

 Métodos de tinción selectiva
 Coloraciónes con fluorocromos específicos aislados o
combinados con colorantes no fluorescentes y
 tinciones con Anticurpos fluorecentes.
B.-LOS BANDEOS DINÁMICOS:
Basados en: técnicas que implican la incorporación de
una base análoga, bromo-deoxiuridina (BrdU), en el ADN
durante la fase S del ciclo celular. Se denomina también
bandeo de replicación debido a la relación existente entre el
tiempo de incorporación del BrdU y el patrón de replicación.

Al incorporar BrdU durante la fase de replicación

temprana se obtiene un patrón de bandeo R destacándose las
regiones ricas en G-C. Luego , los cromosomas pueden
visualizarse utilizando distintos métodos de tinción que
emplean colorante como el Giemsa o el naranja de Acridina o
utilizando Anticuerpos específicos.
TIPOS DE BANDEO CROMOSOMICO

 Técnicas de bandas Q
 Técnicas de bandas G (GTG)
 Técnicas de bandas R
 Técnicas de bandas C
 Técnica de bandas Q
• Fue la primera metodología de bandeo
cromosómico ( llamado así por la sustancia
fluorescente empleada la quinacrina)
• 1970, Casperson y colaboradores la desarrollaron.
• 1971 - (Conferencia en Paris) fue denominada como
la técnica de banda Q.
 UTILIDAD
• Demostrar la porción distal del brazo largo del cromosoma Y
que se tiñe con mas intensidad que los demás cromosomas.
• Las regiones pericentroméricas de los cromosomas 3 y 4 , y
las regiones satelitales y pericentroméricas de los
cromosomas acrocéntricos muestran variaciones
significativas conocidos como polimorfismo o
heteromorfismos demostrados con estas técnicas.
• La fluorescencia mayor depende del ADN, si la región es mas
rica en adenosina y timina (A-T) habrá mayor fluorescencia,
pero si es el ADN rico en (G-C) la fluorescencia tiende a
apagarse.
 DESVENTAJA
• Es el uso de la fluorescencia , que después de que es
usada desaparece progresivamente y es por ello que la
observación, el análisis cromosómico así como la
toma de microfotografía debe ser rápida para su
observación en el microscopio.
SOLUCIONES: PROCEDIMIENTO :

1. Se tiñen las láminas con el

1. Buffer Sorensen´s a pH 5.6
2. Colorante Dihidrocloruro de
Quinacrina al 1%
colorante de Quinacrina por
15 a 20´ en oscuridad.
2. Se lavan las láminas con Buffer
Sorensen´s.
3. Se monta con una laminilla con
el Buffer.
4. Examinar al microscopio de
fluorescensia utilizando una luz
de longitud de onda de 450 a
500nm
Bandeo Q (quinacrina)
Tinción con Mostaza de quinacrina
Bandeo Q
 Tecnica de bandas G

• La técnica de bandas G ( Giemsa ) obtenidas por

digestión proteolítica con el uso de la enzima
tripsina, es la mas usada y considerada como una
técnica estándar.

• Es una técnica conocida como GTG (Bandas G por

tripsina usando Giemsa), es un mecanismo aun
no aclarado.
Tecnica de
bandas G Clark y Coleg.

Histonas ricas No tanto con la

perdida de
en Arginina ADN y proteina de
En las bandas GTG cromosomas durante
el tx con tripsina
Dos tipos de
bandas

Bandas G + Bandas G -
(oscuras) (claras))
Relativamente
ricas en prot. Distribución de las prot.
Sulfihidrilos
Disulfuro Cromosómicas y de ADN
• El patrón de bandas es similar entre (G-Q)
• Es de uso rutinario
• La banda G obtenida por GTG es muy
superior en la resolución,comparada con
aquellas técnicas que utilizan Fluorocrómos.
 PROCEDIMIENTO :
SOLUCION :
1. Se coloca en baño Maria a 37ºC
1. Solución de trIpsina al 1% el frasco Nº 1 de solución de
2. Solución salina fisiológica tripsina 1%
3. Colorante Giemsa 4% 2. Se coloca las láminas con la
preparación cromosómica
(menos de una semana) en el
frasco Nº1 x 10´´.
3. Enjuagar las laminas en el frasco
Nº2 de solución salina
fisiológica.
4. Se colocan las laminas en el
frasco Nº3 de colorante Giemsa
4% x 6 a 8´.
5. Lavar con agua corriente y dejar
secar y observar en el
microscopio.
. Bandeo GTG:
- Tripsina 1% (buffer)
- Solución Salina Fisiolog.
- Giemsa 4%
 

 bandas G-pálidas  bandas G-oscuras

 DNA rico en GC  DNA rico en AT
 replicación temprana  replicación tardía
 Muchos genes   Pocos genes
Esta imagen
muestra cada
cromosoma
humano normal
comparado con
su idiograma, o
mapa, de
bandas G, un
esquema
acordado
internacionalm
ente para los
patrones de
bandas.
 Técnica de bandas R
• Se hace el tratamiento de las laminas a altas
temperaturas en varios buffer
• Tinción con Acridina Oramge o Giemsa
• Las bandas que producen estas técnica en los
cromosomas humanos son el reverso de bandas G
o Q es decir que las bandas claras en Q o G son
bandas oscuras en R.
 VENTAJAS
• Que la regiones teloméricas de los cromosomas
son mas teñidas, a diferencia de las técnicas de
bandas Q y G en las que no son tan claras.

• El tratamiento con calor induce denaturación

de las proteínas cromosómicas así como de las
secuencias del ADN ricas en nucleótidos(A-T),
mientras que el ADN rico en G-C de las bandas R
en una configuración nativa.
 PROCEDIMIENTO :
SOLUCION:

1. Buffer 1. Preparar el buffer sorensen´s

en un koplins y llevar a baño
sorensens(0.06,pH6.59)
Maria 85ºC
2. Colorante de Giemsa.
2. Colocar las láminas
preparadas(1-2 sem) en el
buffer sorensen´s durante 10
´.
3. Lavar las laminas de buffer S.
4. Colocar en colorante de
Giemsa por 5´.
5. Lavar, dejar secar y observar al
microscopio
CROMOSOMAS HUMANOS: BANDAS RGT
 Bandas R
-útil para teñir
los extremos
distáles de los
cromosomas
(deleciones o
reorganizaciones

distales)
Propiedades diferenciales entre las bandas G y R

G R
Composición bajo contenido G+C Alto contenido G+C
Replicación tardía temprana
Secuencias repetidas Line (L1) Sines (alu)
Quiasmas Raros Abundantes
Nº de genes Escaso Abundantes
Clase de genes Específicos Domésticos
 Tecnica de bandas C
• La técnica de bandas C produce una tinción
selectiva de la heterocromatina constitutiva ,estas
bandas están localizadas en la región
pericentromérica de los cromosomas humanos.

• 1971- Fue un método descrito por Arrighi y Hsu.

 APLICACION
 Demuestra variación de tamaño de la región de
heterocromatina constitutiva presente en las regiones
pericentroméricas de los cromosomas.
 Para los cromosomas 1,9,16 y brazos largos del
cromosoma Y.
 Polimorfismos.
 Inversiones pericentroméricas.
Tecnica de
bandas C Desnaturalizar

Extraer el material
cromosómico Alcali

Incubado en
solución salina

GIEMSA
 SOLUCION : PROCEDIMIENTO :

• HCL 0.2N • Tratar la laminas con HCL 0.2N X

• 20´´ a Tº ambiente
Ba (OH)2 5%
• Lavar lamina con H2O destilada.
• Solución saluria de
citrato de sodio(2xSSC) • Tratar las laminas con sol.
• Ba(OH)2 al x 5%x 1a2´.
Giemsa
• Lavar con H2O destilada hasta
eliminar el exceso de bario.
• Colocar las laminas en soluc. 2 x
SSC a 60ºC X 2 horas .
• Lavar con H2O destilada
• Teñir con Giemsa 5% en Buffer
sorensen’s a pH 7.0 x 15´
• Lavar con H2O destilada y
observar al microscopio.
Bandeo C tiñe
específicamente
regiones centroméricas
DETERMINACION DEN Nº DE BANDAS CROMOSOMICAS
 MUCHAS GRACIAS
herrerahh7@yahoo.es