CROMATOGRAFÍA POR

AFINIDAD
Juan Fernando Pineda Cardona
A00358268
Laboratorio de Bioquímica
CONSISTE EN:

Purificación y separación de proteínas

Matriz/analito(contiene proteínas)

Ligando

Fase móvil

Elución
 ARTÍCULO DE • Resumen:
INVESTIGACIÓN: 140 • Importancia de la Calmodulina (sitios activos)
PROTEÍNAS DE • 87 proteínas se unieron y 48 no interactuaron
CEREBRO DE RATÓN
IDENTIFICADAS POR • Funciones mal definidas
LA CROMATOGRAFÍA • Marco de lectura abierto (descripción de proteínas)
DE AFINIDAD DE
CA2+ EN LA
CALMODULINA Y
ESPECTROMETRÍA
TANDEM
 INTRODUCCIÓN
• Calmodulina participa en las vías de
señalización.
• Crecimiento y movimiento
• Cambio estructural con el ligando Ca2+
• Se une a gran cantidad de proteínas
 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
• Extracción tejido cerebral 3 g
• 20 mL tris 50 mM
• 20 mL NaCl 150 mM
• DTT(inhibidor enlaces disulfuro)
• 200 uL Inhibidor proteasa
• Centrifugación
 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1 2 3 4

-Homogenizado -Homogenizado -Lavado volúmenes -â-dodecyl

-Incubación por 2 horas -Incubación por 2 horas Tris, Nacl, DTT, CaCl2 maltoside(detergente)
Lavado 10 volúmenes Lavado intensivo -Lavado 10 volúmenes con
Tris, Nacl, DTT, CaCl2 volúmenes Tris, Nacl, detergente
DTT, CaCl2

Elución+SDS-PAGE 12%
+tripsina
ESPECTROMETRÍA DE MASAS

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
 CONCLUSIONES
• Gracias a los métodos usados y las incubaciones de 2 horas durante este experimento, un gran
número de proteínas fueron identificadas de distintos familia y diferentes funcionalidades
 BIBLIOGRAFÍA

Berggard, T., Arrigoni, G., Olsson, O., Fex, M., Linse, S., & James, P. (28 de Noviembre de
2005). 140 Proteins Identified by Ca2+-Calmodulin Affinity Chromatography and Tandem Mass
Spectrometry. Journal Proteome Research.

WEBGRAFÍA
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AFINIDAD/