Colección, conservación y

transporte

de muestras
microbiológicas
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Para desarrollar un estudio microbiológico
es necesario que previamente se
conozcan:

 El propósito del estudio

 Los objetivos
 Las metodologías
 Las variables
 Los procedimiectos de
análisis
 Las metas a alcanzar.

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TIPOS DE ESTUDIOS

 Los estudios microbiológicos se

clasifican de acuerdo con sus objetivos
y el tiempo de ejecución en tres tipos:
– Estudios base
– Estudios de monitoreo
– Estudios de evaluación

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 Estudios base

 Permite un conocimiento global del

sistema y de las comunidades de
microorganismos.

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 Se considera que los ecosistemas
dulceacuícolas tropicales manifiestan
cambios ambientales y biológicos
considerables, dependientes de las
temporadas de sequía y lluvia.

María Cecilia Arango Jaramillo

C
ON
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CION
ES
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María Cecilia Arango Jaramillo
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 MONITOREO

 Se extiende en el tiempo ( a través de

los años)
 Su propósito: observar
periódicamente ecosistemas
susceptibles de cambios (positivos o
negativos), por alteraciones de
origen natural o antrópicas, tanto
puntuales como continuos.

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Permiten definir:
 Si la capacidad ambiental de un

ecosistema se está superando

 O si los tensores están siendo
asimilados adecuadamente por estos
– (disolución, dispersión, mezcla,
descomposición, biodegradación,
oxidación u otros).

 Así mismo, su implementación puede

darse para observar la recuperación
de ecosistemas deteriorados.

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Los programas de monitoreo
pueden llevarse a cabo para:
Valorar planes de manejo

ambiental
Evaluar efectos ambientales

Seguimiento continuo a procesos

industriales.
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Muestreos no programados deben hacerse:

 Cuando ocurran cambios importantes

 En caso de presentarse condiciones
anómalas que puedan conducir a
variaciones en la calidad del medio
(positivas o negativas).

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 A lo largo del programa de monitoreo,
se debe mantener contacto
permanente con el ecosistema bajo
estudio
 Para no llegar a conclusiones erróneas
o falsas interpretaciones

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 El cotejo de resultados de un tiempo
con los ya existentes, permite inferir
cuales serán las condiciones futuras.

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 Estudios de evaluación

 Estos estudios tienen lugar cuando

condiciones de contaminación de
origen natural o antrópico, se
producen en forma esporádica pero
en magnitudes importantes,
causando un cierto deterioro del
ecosistema con cambios en la
comunidad de microorganismos.

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 DISEÑO DE ESTUDIOS
MICROBIOLÓGICOS

Evaluación preliminar
Elección de los microorganismos a muestrear

Elección de variables físico químicas

Muestreo

Ubicación de estaciones

Tipo y número de muestras

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 Evaluación preliminar

 La evaluación preliminar es
la etapa en la cual se
realiza la planificación del
estudio y requiere del
tiempo necesario para
aclarar todos los
interrogantes que se
presenten.

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Paralelamente se debe llevar a cabo
un reconocimiento del área con el
propósito de:
– Precisar los principales gradientes
ambientales naturales
– Las variables antropogénicas
presentes
– Un premuestreo es necesario para
definir los análisis que se harán y los
equipos de muestreo
– Definir el tratamiento numérico que
habrá de implementarse con cada
variable
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 La planeación de
detallada del estudio
evitará resultados inútiles,
sesgados o erróneos,
erróneos o
incrementos no
programados de esfuerzo,
costos y tiempo.

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 Validez de los resultados del
análisis de aguas
Dependen de
 El número de muestras que

adecuadamente representen el cuerpo

de agua o el efluente.
– Calidad estándar
– Límites permisibles
 Sitios de muestreo y registros
previamente planeados y conocidos
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Recipientes para la toma de
muestras
 Frascos de muestreo:
muestreo 125 ml
como mínimo, tapa metálica hermética.
 Limpieza:
1. Lavado con detergente y agua
caliente
2. Enjuague con agua caliente 3 veces
3. Enjuague con agua destilada
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 Agente desclorinizador.
– Para muestras tratatadas con cloro.
– Tiosulfato de Na al 10%, 0,1 ml por
frasco de 125 mlsuficiente para
neutralizar 15 mg de cloro.
 Cobertura del frasco:
frasco papel Kraft,
aluminio o película plástica

 Esterilización:
– Autoclave: 121°C por 15 minutos
– Calor seco 170°C por 2 horas
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Técnicas de muestreo
 Primero las muestras de
estaciones menos contaminadas
 evitar contaminación cruzada
 Nunca muestras compuestas
 Aguas profundas: Botella Kemerer

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 Aguas superficiales: 15 - 30 cm de
profundidad
 Siempre en contra de la corriente

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  Abrir el frasco sólo
en el momento del
muestreo

 Llenado de frascos
hasta 2-3 cm antes
de la tapapara
agitar

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Identificación y manejo de
muestras
Características de las etiquetas:
 Limpias

 Impermeables

 Indelebles

 Fijas, pero fáciles de remover

 Tamaño suficiente para consignar los

datos
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 Muestras sin
etiqueta o con
etiquetas deficientes
no son aceptadas
en el laboratorio.

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Nombre de la entidad o del estudio
Estación Fecha Hora Muestra No.
No.
Localización de la estación Colector
Tipo de análisis a practicar Preservativo
Tipo de muestra Comentarios

Secretaría de Salud Municipio de El Carmen

Estación Fecha Hora Muestra No.
No. 4 11-08-01 13:00 2
Antes de la bocatoma Jairo Pérez
Colimetría completa Preservativo:
Tiosulfato de Na 10%
Simple Cultivos abonados
con gallinaza hasta la
María Cecilia Arangoorilla
Jaramillo de la quebrada
Registro de datos de campo
Registro de datos de campo
Hoja No. Colectores:
Estación Número Fecha de Hora Otros
de la colección Toma Entrega
muestra

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 Registro de datos de campo
Hoja No. Colectores:
2/2 Javier Trujillo y Sandra Peláez
Estación Número Fecha de Hora Otros
de la colección Toma Entrega
muestra
Antes 1/3 28-08-01 8:00 14:35 Epoca de lluvia
de la Basuras en el
escuela lecho
Alrededores
abonados con
gallinaza
Agua turbia
Riberas
erosionadas

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Selección de sitios de muestreo

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 Lago o represa (recreación)

B A

C B
C
D C
P iscinas C
diariam ente
en B E
tem poradas
dem áximo
uso María Cecilia Arango Jaramillo
Abastecimiento de agua

A B

D
D
C, alaprofundidaddelatoma
D E
D

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Río de orden mayor

60 m

1K
m

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Muestreos en la red

Se necesita una Frecuencia de la toma

cobertura
sistemática para:
 Detectar averías
 Contaminación
cruzada
de muestras:
 Tablas de la EPA
 Legislación vigente
 Standard Method

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Frecuencia del muestreo:
Decreto 475 de 1998, Calidad del agua potable

Población servida Número Intervalo

mínimo de máximo por
muestras muestras
por mes consecutivas
25 a 1.000 1 Mensual
1.001 a 2.500 2 Quincenal
2.501 a 3.300 3 C/10 días


320.001 a 450.000 180 6 por día
450.001 a 600.000 450 7 por día


1.230.001 a 1.520.000 330 11 por día
1.230.001 a 1.520.000 360 12 por día


3.020.001 a 3.960.000 450 15 por día
3.960.001 o más 480 16 por día
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Toma de muestras en la red

Dejar correr Flamear Tomar la muestra

el agua Si utiliza
preservativo, no
la deje rebosar
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Dónde tomar las muestras de la red?
 Edificios municipales y públicos
 Parques
 Escuelas
 Estaciones de gasolina
 Teatros
 Aeropuertos
 Restaurantes
 Plantas industriales
 Residencias privadas
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Transporte de muestras
 Refrigeradas, evitar que
el hielo las cubra
 Fijarlas para evitar roturas

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Almacenamiento de muestras

 0°C a 4°C
 6-12 horas en refrigeración
 30 horas aguas tratadas
 < 6 horas aguas residuales

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Seguridad

 Parte de la  Ellas son la base

confiabilidad de obras o
depende de la acciones legales
vigilancia y  Debe
custodia de demostrarse
las muestras posesión física o
registros
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  El colector
de las
muestras es
responsable
de ellas
hasta su
entrega en
el laboratorio

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 El laboratorio:
 Es responsable de las
muestras que se le
entreguen
 Debe registrar su
entrada y los
resultados del análisis,
la fecha de entrega de
resultados y la de
destrucción de la
muestra
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 El laboratorio debe
utilizar métodos estándar
de acuerdo a la legislación vigente
 Los laboratorios que analicen agua para
consumo humano deberán llevar un
programa de aseguramiento de la
calidad que garantice los resultados
(Decreto 475/98)
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  El coordinador
del estudio debe
recibir copia del
registro de
laboratorio.
 El original
queda
archivado en el
laboratorio

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Para tener en cuenta

 Manipule la muestra lo menos

posiblemuchos microorganismos
sufren estrés o mueren
 Las muestras deben ser manejadas
por el menor número de personas
posible María Cecilia Arango Jaramillo
 Utilice técnicas de muestreo estándar
 Use cuaderno de campo para registrar
datos de cada muestra

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Ladelatapitaoxidadaerala
delaestación 2o3?
Laestaréconfundiendocon
lam uestra12 quetiene
lataparayada?

 Fije las etiquetas en el

campo antes de tomar
la muestra

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  Sitios de
muestreo y
polución visible
deben ser
registrados con
fotos

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El contacto con el laboratorio
 Contacte un  Hable con las
laboratorio personas
especializado en encargadas sobre el
análisis tipo de análisis que
microbiológico de necesitará, la
aguas: garantiza frecuencia de
que tiene muestreo, el
estandarizados los propósito y la
análisis duración del estudio
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Averigüe en el laboratorio:
 Los días y horas en los que el laboratorio

recibe muestras para análisis

microbiológico.
 El número de muestras que le pueden

recibir simultáneamente
 Los requerimientos del laboratorio para la

entrega y procesamiento de muestras

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Análisis microbiológicos
corrientes:

 Microorganismos heterótrofos:ufc/100 ml
Su presencia se utiliza para indicar la
eficiencia en la reducción de
microrganismos en procesos de
sedimentación, cloración, filtración

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 NMP coliformes totales: No. /100 ml
Su presencia significa que hay que tratar
el agua, pero no significa necesariamente
contaminación fecal.
Esta contaminación puede provenir del
suelo, el agua, etc.

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NMP coliformeds fecales : No. /100 ml
Significan contaminación fecal de
origen humano o animal.
Se debe buscar el origen, pero en
ambos casos puede haber
patógenos
Su número es igual o menos que el
de los coliformes totales

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NMP enterococos : No. /100 ml
Los estreptococos confirman
contaminación fecal cercana y reciente
Los estreptococos menos que los
coliformes

 Enterovirus : No. Ufc (calvas)/ml

 En estudios limnológicos se utiliza el

índice de saprobidad

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 Decreto 475 de 1998, Calidad del agua potable
Técnica utilizada
Microorganismos Filtració Sustrato definido Tubos múltiples de
indicadores n por fermentación
membra “aceptable hasta el
na año 2000”
Coliformes 0 UFC 0 microorganismos <2
3 3
totales /100 cm /100 cm microorganismos
/100 cm3 negativo
Escherichhia coli 0 UFC 0 microorganismos Ninguna muestra
/100 cm3 /100 cm3 de agua potable
debe contenerla en
una muestra de100
cm3
independdienteme
nte del método

Se recomienda
un valor máximo de 100 UFC /100 cm3, para
microorganismos mesófilos, como prueba
complementaria de calidad microbiológica del agua
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Control de calidad microbiológica del
agua potable:
 Libro de registro de calidad del agua

% Aceptabilidad = Na X 100
Nt
Na = Número de muestras
aceptables: cumplen con
requisitos Art 25

Nt = Número total de muestras

por mes: total de muestras
analizadas y registradas

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