BIOLOGIA REPRODUCTIVA DE DOS ESPECIES NEOTROPICAS

SINCROMETRICAS DE EPIDENDRUM (ORCHIDACEAE)

a. Museu NACIONAL, UNIVERSIDADE FEDERAL do Rio de JANEIRO,

DEPARTAMENTO de BOTÂNICA, QUINTA DA BOA VISTA, 22940-040 Rio de JANEIRO,
RJ, BRAZIL
b. UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL do Rio de JANEIRO, Instituto de
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS e DA SAÚDE, DEPARTAMENTO de BOTÂNICA,
CAIXA POSTAL 74582, 23851-970 SEROPÉDICA, RJ, BRAZIL
Luciene Campos São Leão a,⁎, Bárbara de Sá-Haiad a, Ana Tereza de
Araujo Rodartea, Rafael Ribeiro Pimentelb, Cristine Rodrigues
Benevidesa,
Lygia Dolores Ribeiro de Santiago-Fernandes a, Heloisa Alves de Limaa

Universidad de Córdoba
Facultad de ciencias básicas
Programa de biología
Curso de biología del desarrollo

Beltrán Díaz, C; Cochez Palencia, L; Fernández Negrette, K;

García Viloria; C.
 El sistema reproductivo de las Orquídeas El néctar es el principal
RESUMEN (Orchidaceae) es predominantemente xenógamo recurso floral

Son una familia de plantas monocotiledóneas que se distinguen

son visitadas por especies de Hesperiidae por la complejidad sus flores y por sus interacciones
(Lepidoptera), que eliminan las polinias. ecológicas con los agentes polinizadores

E. denticulatum E. orchidiflorum
 INTRODUCCIÓN
Es sabido que la hibridación puede haber
desempeñado un papel importante en la
diversificación de Epidendrum, por lo que
es importante investigar las posibles zonas
híbridas para comprender mejor las barreras
reproductivas y los procesos de especiación
en las especies neotropicales de orquídeas.
para explicar aspectos de su biología
reproductiva y la posible aparición de
intercompatibilidad, realizaron análisis
morfológicos, estructurales e
histoquímicos de las glándulas florales.
observando biología y la polinización
floral en el campo; y realizaron
experimentos de polinización manual.
 METODOLOGÍA
2.1. Estudio del área y distribución de la especie

El estudio se realizó entre enero de 2010 y Área de Protección Ambiental de Maricá,

diciembre 2011 en la restinga Maricá, Estado de Río de Janeiro, Brasil

Incluyendo tres fisonomías de Para evaluar la distribución de la especie en

vegetación: la zona de estudio, se marcaron con GPS las
divisiones en un área de 6 ha

Abierta, temporalmente
inundado de vegetación Abierta sin inundación de Cerrada sin inundación
arbustiva vegetación arbustiva de vegetación arbustiva
2.2. Biología floral

Para evaluar las barreras de hibridación previas a la

Evaluación del período de antítesis en dos situaciones, con
polinización relacionadas con la morfología y la biología de
y sin eliminación de las polinias.
floral

Se registra los atributos de color, forma, olor y

Se observa el proceso de apertura de floral en el campo
disponibilidad de néctar

Se Prueba la presencia de los osmóforos mediante la Se observa el campo en el momento de la apertura de flores,
inmersión de flores frescas en una solución acuosa de rojo el período de antesis, los visitantes y las tasas de
neutro, diluida. eliminación de polinias.
2.3. Análisis estructurales

Utilizamos análisis estructurales para determinar la ubicación y la

funcionalidad de los nectarios y los osmóforos.

Para la microscopía electrónica de barrido, las muestras fueron fijo en 4%

de para formaldehído + 2,5% de glutaraldehído en 0,05 M de fosfato de
sodio buffer, pH 7.2
Se realizaron pruebas histoquímicas en muestras
frescas para detectar la presencia de compuestos
lipofílicos, utilizando Sudán III y IV compuestos
Deshidratadas en una serie de etanol, secadas en el punto crítico utilizando fenólicos, utilizando dicromato de potasio
un secador de punto crítico Bal-Tec CPD 030 (Bal-Tec, Pfäffikon, Suiza)
con CO2

Para microscopía de luz, las muestras fueron fixed en una solución de Deshidratadas en una serie de etanol, incrustadas
formaldehído al 4% + 2,5% de glutaraldehído en fosfato sódico 0,05 M en Historesin
buffer, pH 7,2
2.4. Visitantes de las flores

Para comprobar la ocurrencia de

Para evaluar a los visitantes de la polinización nocturna, flores
floral, Se realizo observaciones de E. orchidiflorum con polinias
focales diurna fueron etiquetadas al final de la
tarde
A la mañana siguiente
(06:00 h), se evaluó la
flores para determinar la
Las observaciones continuaron hasta
Todos los meses, durante el final de la tarde (18:00 h) para
eliminación de las polinias
un año, se observó en un
observar la eliminación de las
estéreo microscopio la
polinias durante el día. El
recopilación aleatoria de experimento se repitió dos días en
flores de ambas especies febrero (pico de florecimiento).

para comprobar la tasa de

remoción y deposición de Se evaluó la eficacia de la
polinias, a fin de estimar polinización en base al porcentaje
indirectamente la frecuencia de remoción de polinias / porcentaje
de las visitas y la efectividad de frutos naturales depositados
de polinización.
 2.5. Sistema reproductivo

Se evaluó el sistema reproductivo y Los capullos de flores fueron

la posible existencia de aislados en bolsas de vello y Se midieron los frutos y se evaluó la
intercompatibilidad entre las dos recibieron los siguientes presencia de un embrión en las
especies simpáticas, utilizando tratamientos después de la semillas.
técnicas de polinización apertura de flores

v) polinización natural: sin bolsa y sin

:i) Ninguna manipulación, para
manipular flores fueron la- abollada y
determinar la aparición de selfing
utilizada como control para estimar el
espontánea: E. denticulación y E.
conjunto de frutos naturales: E.
orchidiflorum.
denticulatum y E. orchidiflorum

ii) autopolinización manual, para

iii) manual en específico iv) hibridación: manual interespecifico
determinar la presencia de sistemas
polinización cruzada (xenogamia): polinización cruzada: E. denticulatum
de autoincompatibilidad: E.
E. denticulatum y E. orchidiflorum y E. orchidiflorum
denticulatum y E. orchidiflorum
 RESULTADOS

3.1. Estudio del área y distribución de la especie (Fig. 1)

Fig. 1. Distribución de Epidendrum denticulatum (*) y E. orchidiflorum (▲) en el área de estudio (Maricá, Estado
de Río de Janeiro, Brasil).= abierta sin inundación de fisonomía arbustiva; --- = fisonomía arbustiva
cerrada;............= abierta y temporalmente inundada de fisonomía arbustiva.
3.2. Biología floral

Fig. 2. Inflorescencia y flores de Epidendrum denticulatum (A, B) y

E. orchidiflorum (C, D). Barras de escala = 4 mm en A, B; 5 mm en
C, D.
 3.3. Análisis estructural
3.3.1. Osmóforos

Fig.3: Micrografías del labelo (A, G-I) y del callo (B-F) del Epidendrum denticulado (A-E) y E. orchidiflorum (F-I). A,
B, F: Epidermis adaxial en vista frontal. C, G: epidermis y capas hipodérmicas, en sección transversal. D: detalle de las
células epidérmicas e hipodérmicas, en sección transversal, mostrando paredes gruesas y fosa primaria-esfera. H: células
del parénquima, en sección transversal, teñidas con Lugol; nótense los granos de almidón
 3.3.2. Nectario nupcial

Fig. 4. Micrografías del cunículo de Epidendrum denticulatum (A-E) y E. orchidiflorum (F-I). A, F,

G: contorno del cunículo, en vista frontal. Obsérvese la superficie papilar y los restos de secreción
(flecha roja) en A, la cutícula estriada con ampollas globulares en F y los restos de secreción (flecha
roja) en G. B, H: vista general, en sección transversal. C, D, E: detalle de las papilas, en sección
transversal teñidas con Sudán III, mostrando la cutícula en C;
3.3.3. Nectario extranupcial

Reactivo Sustancia Color E . D E N T IC U L A T U M E. o r c h i d i fl o r u m

nn en l nn en l lc
c

Sudan III Compuesto lipofílico Naranja – – + – – + +

Sudan IV Compuesto lipofílico Naranja – – + – – + +
Dicromato de potasio Compuestos fenólico Marron + – – + – – –
Reactivo de Fehling Azucar Marron + + – + + – –
Reactivo de Schiff’s ácido Polisacaridos magenta + + – + + – –
periodico
Solución de Lugol Almidón Morado + – + + – + +

Tabla 1: Resultados de las pruebas histoquímicas realizadas en flores de Epidrendrum

Denticulatum y E. orchidiflorum. (En = nectario extranupcial; l = labelo; lc = callo del labelo; nn
= nectario nupcial; + positivo; - negativo).
Fig. 5. Micrografías de luz de los nectarios extranupciales de Epidendrum Denticulatum (A-C) y E. orchidiflorum (D-F),
en sección transversal. A, D: vista general del tubo floral que muestra el tejido nectarífero en las axilas de las costillas. B,
E: detalle de una axila costal. Obsérvese la presencia de secreción en el espacio axilar en B y de tricomas en E. C, F:
detalle del tricoma capitado secretorio.
 3.4. Visitantes de floral

Fig. 7. Porcentaje de polinias eliminadas (gris) y no eliminadas

Fig. 6. Etapas sucesivas durante una visita de lepidópteros a (blanco), durante el período de un año (mayo de 2010 - mayo de
Epidendrum denticulatum. A: llegada al recién abierto florecer 2011): Epidendro orchidiflorum (A); Epidendro Denticulado (B).
e inserción de la probóscide. B, C: extracción de polinias Los números en los histogramas se refieren al número de flores
(flechas blancas). Note el néctar extranupcial (flechas rojas). observados por mes.
3.5. Sistema reproductivo (TABLA 2)

N SF MF FF (n) SF MF FF (n)

autopolinización espontánea300 30 0 0 0
autopolinización manual 39 8/20.5% 7/17.9% 4 2 .8 % ( 7 ) 7 13/35.1% 7/18.9% 42.9%(7)
manual de polinización cruzada intraespecífica 36 8/22.2% 6/16.7% 6 6 .7 % ( 6 ) 5 15/42.8% 7/20% 71.4%(7)
(xenogamia)
polinización natural 39 2/5.1% 1/2.6% 4 3 % (4 6 ) 7 6/7.8% 2/2.6% 34.4%(93)

E . D E N T IC U L A T U M × E . o r c h id ifl o r u m E . o r c h i d ifl o r u m × E . D E N T IC U L A T U M

N SF MF FF (n) N SF MF FF (n)

Manual de polinización cruzada interspecifica 37 7/18.9% 5/13.5% 40% (5) 36 6/16.7% 5/13.9% 40% (5)
(hibridación)

Tabla 2: Experimentos sobre el sistema reproductivo en Epidendrum Denticulatum y E. orchidiflorum.

FF(n) = porcentaje de frutos fértiles (número de frutos maduros); MF = porcentaje de frutos maduros; N =
número de flores; SF = porcentaje de frutos iniciados.
 DISCUSIÓN
• Epidendrum Denticulatum y E.
orchidiflorum poseen atributos florales que
no indican que se compartan los
polinizadores. Las atracciones particulares
son, respectivamente, la antítesis diurna,
rosa flores, olor imperceptible por los
humanos, y las visitas de mariposas; frente
a la antítesis nocturna, flores verde, olor
fuerte por la noche, sin visitas durante el
día, y eliminación de polinios sólo por la
noche.
• La resupinación, observada sólo en
Epidendrum orchidiflorum flores, implica
un cambio importante en la orientación de
floral y proporciona una plataforma de
aterrizaje para los visitantes. La posición
del labelo en la parte inferior de las flores
ayuda a los polinizadores nocturnos a
aterrizar y localizar la fuente de néctar,
porque el labelo es una de las estructuras de
floral en voladizo en la secreción de olores.
CONCLUSIÓN
GRACIAS…