MICROBIOLOGIA

DOCENTE:
Bióloga BACA CHOQUE, Yessenia Cristhely

INTEGRANTES:
 MENDOZA SALAS ,Margot
 QUISPE BAEZ, Soledad

PUERTO MALDONADO – PERU

2019
 BACTERIAS GRAM - NEGATIVAS
En microbiología, se denominan bacterias Gram negativas a aquellas
bacterias que NO se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram, y lo
hacen de un color rosado tenue.
 CARACTERISTICAS
Esta característica está íntimamente ligada a la estructura didérmica dada por la
envoltura celular, pues presenta doble membrana celular (una externa y la otra
citoplasmática), lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana.
 MORFOLOGIA BACTERIANA GRAM NEGATIVAS

 Delgada capa peptidoglicanos.

 No posee ac. Teicoico ni lipoteicoicos.
 Membrana externa sobre peptidoglicanos,
forma saco de lona alrededor de la bacteria
actuando como barrera impermeable a
moléculas de gran tamaño.
 Espacio entre membrana externa y
membrana citoplasmática se denomina
espacio periplasmático.
 Espacio periplasmático, posee
diversas enzimas hidrolíticas (proteasas,
fosfatasas, lipasas, nucleasas). Estos son
los algunos de los factores de virulencia
líticos.
MEMBRANA EXTERNA
 Formada por molécula anfipatica
(terminaciones hidrófobas e hidrófilas).
Lipopolisacaridos (LPS) conocidos como
endotoxinas (potente estimulador de la
respuesta inmune) Produce CID o reacción
de Schwartzman
ESPECIES
Vías entéricas
 MEDIOS DE AISLAMIENTO PRIMARIO

En medios selectivos

Pueden ser de capacidad:

• moderada (como en EMB y McConkey),
• alta (como en SS, desoxicolato y citrato)
• completamente específica (sulfato de bismuto y verde brillante).

Algunos de los medios selectivos contienen lactosa y un indicador de pH, lo que

permite desde un principio tener colonias aisladas de bacterias fermentadoras como
Escherichia coli y no fermentadoras de la lactosa (como Salmonella y Shigella)
 Agar MacConkey
• Es un medio diferencial selectivo que permite distinguir entre enterobacterias
que hidrolizan lactosa y las que no lo hacen.
La hidrólisis de la lactosa produce ácidos orgánicos y las colonias que la
hidrolizan adquieren un color rojo.
Las colonias lactosas negativas permanecen incoloras aunque el medio vira a
amarillo por la subida de pH que origina la utilización de las proteínas (peptona)
del medio.
• INDICADOR DE pH: ROJO NEUTRO.
• Las sales biliares y el cristal violeta lo hace selectivo

Sin crecimiento Escherichia coli: en Mc Conckey

MC CONKEY
 Escherichia coli: en XLD
XILOSA, LISINA, DESOXICOLATO

Utilización de azúcares: Xilosa, Lactosa y Sacarosa,

TIOSULFATO: producción de H2S
LISINA: la descarboxilación a cadaverina
 MEDIO EMB: Eosina azul de
metileno

El colorante de anilina(Eosina y azul de metileno) inhiben bacteria Gram (+) y a las

Gram (-) exigentes
Bacterias fermentadoras de lactosa da colonias de color verdoso con brillo metálico
No fermentadoras de lactosa Transparentes
 Medios diferenciales

Son aquellos que se ponen de manifiesto las propiedades metabólicas de los

microorganismos frente a diferentes substratos y que permiten observar una, dos
o más características metabólicas de la bacteria inoculada.

TSI MIO
LIA CITRATO DE
Agar hierro Movilidad indol
(Agar hierro lisina) SIMMONS
triple azúcar ornitina
K: si el medio se mantuvo ROJO (color inicial, alcalino).
A: si el medio se volvió ácido (color amarillo). LECTURA
G: si forma burbujas.
H2S: si forma acido sulfúrico.
(K/A) Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo
solamente fermenta la glucosa.
(A/A) Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el Microorganismo
fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
(K/K)Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azúcares.
G)La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
(H2S) El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido
sulfhídrico.
EJM: E. coli: A/A Producción de gas: +, Producción de H2S: -
 LIA
Agar Hierro Lisina Contiene lisina, sales de fierro, glucosa y
un indicador de pH Púrpura de
Bromocresol

• la descarboxilación y desanimación
oxidativa de la lisina.

• la producción de H2S

• Fermentación de la glucosa.

Tipo de siembra por picadura y estría

 LECTURA

1. LDC -, NO H2S, PRODUCTORA GAS.

2. LDC + ó -, PRODUCTORA H2S Y GAS.
3. LDC - , NO H2S, PRODUCTORA DE GAS
Descarboxilación de aminoácidos CITRTATO DE
(arginina, lisina, ornitina) SIMONS

Contiene citrato de sodio

como fuente de carbono,
fosfato de amonio como única
fuente de fosfato y un
indicador de pH Azul de
bromotimol

• Utilización del citrato de

sodio (fermentación) con
la producción de
subproductos alcainos

Tipo de siembra por

picadura y estría
 LECTURA
El color azul intenso indica Citrato (+) e indica que el microorganismo ha sido
capaz de utilizar el citrato con formación de subproductos alcalinos si el medio
continua verde es citrato (-)

Ejm: E. coli (+)

Enterobacter sp (-)
 MEDIO MIO Medio semisólido, contiene ornitina,
triptófano y glucosa.
Movilidad indol
ornitina
Permite conocer

• movilidad de la bacteria.
• Descarboxilación de la ornitina.
• Producción de indol a partir del triptófano.
• Fermentación de la glucosa.
Tipo de siembra por picadura con asa recta

LECTURA - MOTILIDAD
Se observa la motilidad sin sulfuros en el medio semi-sólido . En el
centro del tubo se observa el eje de siembra y en la periferia de
este eje se observa el movimiento de las bacterias hacia el resto
del medio. A manera de comparación, justo al final del tubo donde
no llega el eje de crecimiento (la punción) no se observa
crecimiento, en comparación con el resto del medio que se
observa opaco. MOTILIDAD +. SULFUROS -.
 LECTURA – PRODUCCION DE SULFUROS

oProducción de sulfuros, a partir del tiosulfato de sodio presente en el

medio.
oLa prueba positiva se observa un precipitado negro en el medio de
cultivo donde creció la bacteria.
oAdicionalmente se observa la motilidad de la bacteria que ha sido
sembrada por punción en este medio semi-sólido.
oSe observa el movimiento de las bacterias que crecen a manera de
sombrilla al rededor del eje de siembra.
LECTURA – PRODUCCION DE INDOL
Se observa la capacidad de la bacteria para desdoblar el triptófano
por medio de la enzima triptofanasa que hidroliza y desamina al
triptófano en:
INDOL + Acido pirúvico + Amoniaco.
Al adicionar el reactivo de Kovacs (p-dimetilaminobenzaldehido)
sobre el medio cuando hay producción de Indol se forma un anillo
rojo (tubo de la derecha) Indol (+).
De lo contrario se forma un anillo amarillo (tubo del centro y la
izquierda) Indol (-).
Ejm: E. coli (+)
klebsiela pneumoniae (-)
 GENERALIDADES

※ BACTERIA que se encuentra generalmente en

los intestinos animales, incluido el humano y, por
ende, en las aguas servidas.
※ Fue descrita por primera vez por Theodor von
Escherich, en 1885, quién la denominó Bacterium
coli .
※ Ésta y otras bacterias son necesarias para el
funcionamiento correcto del proceso digestivo.
※ Produce vitaminas B y K.
※ Es un bacilo que reacciona negativamente a la
tinción de Gram, es anaerobio facultativo, móvil
por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no
forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa
y la lactosa.
 MORFOLOGIA

※ La superficie de las
células esta cubierta de
pilios (cilios) donde se
absorben algunos fagos.
※ Tamaño 1x3 micras
※ Bacilo cortó no porulado.
※ Tiene color rosado en la tinción
※ Gram (Gram negativo)
※ Se mueve por medio de flagelos peritricos (rodean su cuerpo)
※ Fermentadora de lactosa, glucosa y sacarosa.
※ Produce vitamina K y B
※ Puede presentar plásmido (moléculas de ADN) o vivir sin el.
※ Respiración aerobios o anaerobios facultativos.
MEDIOS DE CULTIVO

※Crecimiento, optimo tiene lugar a la temperatura de 30-

37°C y pH de 7,2 a 7,5, prolifera bien a la temperatura
ambiente en los medios corrientes .

※ Se desarrolla a la temperatura de 10-45°C en los

primeros dos días.

※ En agar de carne peptonado se forman colonias

grisáceas poco convexas y semitransparentes, y en el
caldo producen un enturbiamiento difuso, formándose
un sedimento en el fondo.
※ Forma indol, y como regla, sulfuro de hidrogeno,
reduce los nitratos a nitritos, y fermenta la lactosa,
glucosa y otros hidratos de carbono con formación de
gas.
※ E. coli produce muestra pequeñas colonias que eran de forma circular, un
diámetro de aproximadamente 0,5 mm, la elevación de las colonias se ve que se
levanta ligeramente con la superficie
※ se considera que tienen una pigmentación de color rosa en agar Mac Conkey,
debido a su fermentación la lactosa después de la tinción de Gram

Placa positiva de E. coli fluorescente bajo

lámpara ultravioleta, todas son E. coli
(colonias aisladas con centro azul verdoso,
bordes blancos, fluorescencia azul).

Placa positiva con E. coli fluorescente y otras

coliformes no fluorescentes (colonias aisladas con
centro azul verdoso, bordes blancos, fluorescencia
azul, otras colonias aisladas de color azul verdoso no
tienen bordes blancos).
 Placa positiva de E. coli O157:H7 que no fluorece
bajo lámparas ultravioletas por ser glucuronidasa
negativa.

 Placa positiva de E. coli a la queno se ha

aplicado lámpara ultravioleta, o sea, no se ve
fluorescencia pero sí el color azul verdoso.

Color verde metálico en las colonias

característico de Escherichia coli en medio de
cultivo. EMB
 Escherichia coli en agar Mac Conkey. Se
logran ver colonias aisladas, son
colonias medianas, circulares,
convexas, bordes
redondeados, lactosa positivas lo que
les da coloración rosada.

Color verde metálico en las colonias

característico de Escherichia coli en
medio de cultivo .EMB

La temperatura de 55°C la mata en

una hora y la de 60°C al cabo de
15 minutos
 CLASIFICACION
※ Se distinguen seis cepas según su capacidad patógena:
1.- Enteropatogénica (ECEP)
2.- Enterotoxigénica (ECET)
3.- Enteroinvasiva (ECEI)
4.- Enterohemorrágica (ECEH)
5.- Enteroagregativa (ECEA) 6.- Adherencia
difusa (ECAD)

Escherichia coli enteropatogénica (ECEP)

※ Esta cepa causa diarrea, carece de fimbrias y no
produce las toxinas ST y LT, pero utilizan la proteína
intimina, una adhesina, para adherirse a las células
intestinales. Este virotipo posee una serie de factores de
virulencia que son similares a los que se encuentran en
Shigella, como la toxina Shiga. La adherencia a la
mucosa intestinal causa una reordenación de la actina en
la célula hospedante, que induce una deformación
significativa.
 Escherichia coli enterotoxigénica (ECET)
※ Se parece mucho a Vibrio cholerae, se adhiere a la
mucosa del intestino delgado, no la invade, y elabora
toxinas que producen diarrea. No hay cambios
histológicos en las células de la mucosa y muy poca
inflamación. Produce diarrea no sanguinolenta en niños
y adultos, sobre todo en países en vías de desarrollo,
aunque los desarrollados también se ven afectados.
Emplea varias toxinas, incluyendo la enterotoxina
resistente al calor y la enterotoxina termolábil.

Escherichia coli enteroinvasiva (ECEI)

※ Es inmóvil, no fermenta la lactosa. Invade el epitelio

intestinal causando diarrea sanguinolenta en niños y
adultos. Libera el calcio en grandes cantidades
impidiendo la solidificación ósea, produciendo artritis y
en algunos casos arterioesclerosis. Es una de las E. coli
que causa más daño debido a la invasión que produce
en el epitelio intestinal.
 Escherichia coli enterohemorrágica (ECEH)
※ Producen perotoxinas que actúan en el colon. Produce primero
colitis hemorrágica, luego síndrome urémico hemolítico (lo anterior
más afección del riñón, posible entrada en coma y muerte), y por
último, púrpura trombocitopénica trombótica (lo de antes más
afección del sistema nervioso central).
※ Púrpura Trombocitopénica trombótica: anemia hemolítica microangiopática, trombocitopenia,
manifestaciones neurológicas fluctuantes y trastornos renales
※ Anemia microangiopática: anemia que fragmenta y destruye glóbulos rojos en su transito por la sangre.
※ Trombocitopenia: trastorno en el cual no hay suficientes plaquetas.

Escherichia coli enteroagresiva (ECEA)

※ Sólo encontrada en humanos. Son llamadas enteroagregativas
porque tienen fimbrias con las que aglutinan células en los
cultivos de tejidos. Se unen a la mucosa intestinal causando
diarrea acuosa sin fiebre. No son invasivas. Producen
hemolisina y una enterotoxina ST similar a la de las
enterotoxigénicas.
※ Fimbrias: porción terminal de un órgano dividido en segmentos muy finos, como cilios.
※ Hemolisina: proteína de bajo peso molecular que produce lisis de los eritrocitos, leucocitos y plaquetas.
※ Enterotoxina: producto del metabolismo de ciertas cepas de células o bacilos
que posee un grado de tóxico para el organismo humano.
Escherichia coli de adherencia difusa (ECED)

※ Se adhiere a la totalidad de la superficie de las células

epiteliales y habitualmente causa enfermedad en niños
inmunológicamente no desarrollados o malnutridos. No se
ha demostrado que pueda causar diarrea en niños mayores
de un año de edad, ni en adultos y ancianos.

EPIDEMIOLOGIA

※ La bacteria se transmite por:

a) Consumo de alimentos insuficientemente cocidos o crudos
b) ingestión de agua contaminada
c) contacto persona a persona
d) contacto con materia fecal de animales
※ La distribución de E. coli es universal. Hay 630 mil casos de
diarreas en el mundo y 755 mil muertes al año, dominante en
niños y ancianos.
 MEDIDAS DE PREVENCION
※ E l lavado cuidadoso de las manos
puede ayudar. No consuma agua no
potabilizada ni agua ni alimentos
posiblemente contaminados. Cocine
siempre bien las carnes, sobre todo las
molidas, a temperaturas lo
suficientemente altas como para
destruir las bacterias.

RESERVORIOS
※ La materia fecal de animales
(bovinos, porcinos, etc.) y agua
contaminada con heces. El
ganado no se ve afectado por
las toxinas que produce esta
bacteria.
 SINDROMES CLINICOS
E. coli enterohemorrágica (O157H:7)
※ Diarreas (sangrientas)
※ Infecciones urinarias
※ Colitis hemorrágica
※ Meningitis neonatal
※ Trombocitopenia (coagulación en adulto)
※ Síndrome urémico hemolítico (HUS) (niños)
E. coli enteropatógenas (ECEP):
※ Principal causa de diarrea infantil.
※ Diarrea bien acuosa y a veces sangrienta.Se debe al consumo de agua potable y
carnes contaminadas.
※ E. coli difusamente adherente (DAEC): Es la causante de diarrea en los viajeros en
África del Norte y México.
E. coli enterotoxigénicas(ECET:
※ Se adhiere a la mucosa del intestino, no la invade y elaboratoxinas que producen
diarrea no sanguinolenta en niños y adultos.
※ No hay cambios histológicos y hay poca inflamación.
E. coli enteroinvasivas (ECEI):
※ Es inmóvil, no fermenta la lactosa.
※ Invade el epitelio intestinal causando diarrea sanguinolenta en niños y adultos o
disentería (diarrea a con fiebre).
※ artritis y arterioesclerosis, por la liberación de calcio en grandes
cantidades impidiendo la solidificación ósea.
E. coli enteroagregativas (ECEA):
※ se adhieren a la mucosa intestinal y pueden vivir mucho tiempo enel intestino, lo
cual produce una diarrea persistente.

OTRAS CLASIFICACIONES (VARIACIONES)

E. coli meningitis Neonatal (ECMN):

※ posesión del antígeno capsular K-1 que inhibe fagocitosis.
※ invade la corriente sanguínea de los infantes en la nasofaringe y luego se
transportan a las meninges.
E. coli uropatogénica (ECUP):
※ causan el 90% de las infecciones urinarias (cistitis y pielonefritis).