VIH/SIDA

• Virus 
• Inmunodeficiencia
• Humana

• Sindrome
• Inmuno
• Deficiencia
• Adquirida
 FAMILIA RETROVIRUS

ONCOVIRUS LENTIVIRUS ESPUMAVIRUS

(Virus ARN tumorales ) (Virus lentos)

TIPO B TIPO C VIH 1 (HTLV III) No asociados

Virus de HTLV I VIH 2 (HTLV IV) con enfermedad

tumor HTLV II VIS específica
mamario VIF
ratón
ESTRUCTURA DEL VIH
HIV genes y su función
 VIH  Genes y su Función

TRES GRUPOS DE GENES ESTRUCTURALES

• env: Glucoproteìnas de transmembrana (Gp 41 )

y superficie (Gp 120)
• pol: transcriptasa reversa (p66),integrasa (p31) y

proteasa
• gag: antígeno de grupo, proteínas de matriz (p17 y
cápside (p24)
 VIH Genes y su Función

GENES REGULADORES :

• tat : regulador de expresión viral

• rev : regulador expresión mRNA
• vif: incrementa la infectividad viral
• vpr: replicación viral
• vpu (VIH-1) : liberación viral
• Vpx( VIH-2) : infectividad viral
• nef : regulador inmunológico
 Ciclo Vital del VIH

•Rápida replicación
•10 billones de 
viriones diarios

•Alta tasa de mutación
•1 sustitución del 
genoma por ciclo

•Recombinación 
•7­30 recambios por 
ciclos
Ciclo Vital del VIH
CICLO DE REPLICACION
DE VIH
1. Fusion de VIH a
superficie de celula
huesped.
2. HIV
RNA,transcriptasa
reversa, integrasa y
otras proteinas
virales entran a la
celula huesped.
3. DNA viral formado
por transcripcion
reversa.
4. DNA Viral es
transportado al
nucleo e integrado
dentro del DNA del
huesped
5. Nuevo RNA viral
usado como RNA
genomico y produce
proteinas virales.
6. Nuevo RNA viral y
proteinas se mueven
a la superficie
celular y se forma un
nuevo inmaduro
virus HIV.
7. El virus maduro por
proteasa libera
proteinas
individuales de VIH.
 V  I  H
V  I  H
TIPO VIH                         SUBTIPO

 VIH­1   Grupo M      A       Africa central
              (Grupo                B       Norte y Sur América,Europa,Asia,Oceanía
                  “Mayor”)       C        Sur y Este de Africa
                                          D       Africa Central
                                          E       Tailandia,Africa Central,Sur­Este Asia
                                          F       Africa central,Brasil,Rumanía
                                          G       Africa Central,Taiwan,Rusia
                                          H      Africa Central.
        J        América Central
        K       Congo y Camerún

 Grupo N          N      Camerún 
(Grupo “New”)

                 Grupo O         O      Camerún, Gabón            
         (Grupo “Outlier”)

VIH­2                     Africa Occidental,Francia,India
Subtipos de VIH por Continente
RESUMEN DE LA SITUACIÓN DE LA EPIDEMIA DEL VIH/SIDA
EN EL PERU
• La Epidemia de VIH/SIDA en el Perú se encuentra en el nivel “concentrada”,
porque la prevalencia estimada de VIH en gestantes es de 0.23% y en
población de hombres que tienen sexo con otros hombres (HSH) es de 10.3%.

• La principal vía de transmisión es sexual 97% , madre a hijo 2% y parenteral

1%.

• EL 80% casos notificados de SIDA son varones.

• El 20% de casos notificados de SIDA son mujeres.

• La razón hombre /mujer es de 3:1

• La mediana de la edad de casos de SIDA es de 31 años, entonces es posible que

el 50% de todos los casos se hayan infectado alrededor de los 20 años de edad.

Fuente: Dirección General de Epidemiología

Ministerio de Salud Perú.
RESUMEN DE LA SITUACIÓN DE LA EPIDEMIA DEL VIH/SIDA
EN EL PERU
• La principal población afectada son los hombres que tienen sexo con otros
hombres; parte de ellos, con comportamiento bisexual están infectado a las
mujeres y ellas al salir embarazadas transmiten el VIH a sus hijos.

• El 71% de los casos de SIDA pertenecen a la ciudad de Lima y Callao y el 29%

corresponde al resto del país.

• Las ciudades más afectadas se encuentran en la región de la Costa y la Selva;

en la Sierra la prevalencia de VIH es mas baja.

• El principal modo de transmisión es por la vía sexual; las relaciones sexuales

no protegidas son la mas importante forma de exposición al VIH en el Perú.

Fuente: Dirección General de Epidemiología

Ministerio de Salud Perú.
RESUMEN DE LA SITUACIÓN DE LA EPIDEMIA DEL VIH/SIDA
EN EL PERU

• La probabilidad de riesgo de infección por VIH en el

Perú:

– Mujer Heterosexual : 2 – 3 por cada 1000

– Hombre Heterosexual : 5 por cada por cada 1000
– Pacientes ETS : 3 - 7 por cada 1000
– Trabajadores Sexuales Mujeres : 1- 3 por cada 100
– Trabajadores Sexuales Varones : 3- 4 por cada 10.

Fuente: Dirección General de Epidemiología

Ministerio de Salud Perú.
 RESUMEN DE LA SITUACIÓN DE LA EPIDEMIA DEL VIH/SIDA
EN EL PERÚ
IMPACTO DE LA EPIDEMIA DE VIH/SIDA EN EL PERÚ
• Mas de 42,138 Infecciones por VIH notificadas al MINSA 1983- Set 2010.
• Mas de 26,823 Casos de SIDA notificados al MINSA 1983- Set 2010.
• La mitad del total de casos de SIDA se infectaron probablemente antes de los 25
años.
• Se estima de 3 a 5 por cada 1,000 gestantes estarán infectadas con VIH por año
(2,100 a 3,500 gestantes infectadas por año)
• Se estima de 114 a 342 casos de VIH/SIDA de niños nacidos por año, más de 5,000
en la última década.
• Se estiman 66,004 personas viviendo con VIH en 2009*.
• Mas de 15,000 personas fallecieron por causa del SIDA en los 26 años de epidemia
del VIH/SIDA en el Perú.
• Se estima de 1,100 a 1200 muertes por año reportadas.
Fuente: * Estimación de la Incidencia de VIH aplicando el modelo epidemiológico de Modos de Transmisión (MOT) para epidemias
concentradas : Perú 2010. Conferencia Mundial de SIDA – Vienna –Julio 2010)
Dirección General de Epidemiología
Ministerio de Salud Perú.
PRUEBAS DE TAMIZAJE
 DIAGNOSTICO DE VIH
PRUEBAS DE TAMIZAJE

1. PRUEBAS DE AGLUTINACION
2. PRUEBAS DOT BLOT
3. PRUEBAS INMUNOCROMATOGRAFICAS
4. PRUEBAS ELISA

 PRUEBAS CONFIRMATORIAS
1.INMUNOFLUORESCENCIA
2. INMUNOENSAYO EN LINEA
3. WESTERN BLOT
4. PCR ADN-VIH
 Patrones de Antigenemia y Respuesta de
Anticuerpos Durante la Infección por el VIH-1

“Período de
ventana” p24
Anticuerpos a las proteínas de la Ag
envoltura contra - gp41,120,160
Anticuerpos y Antígeno

Anticuerpos a las proteínas

Concentración de

p24
del centro - p24, 55
Ag

Semana Tiemp Meses a

s o años
 ANTIGENOS

PRIMERA GENERACION :LISADO VIRAL/ PROTEINAS TOTALES

SEGUNDA GENERACION: ANTIG. RECOMBINANTES / PEPTIDOS

SINTETICOS

→TERCERA GENERACION: ANTIG. RECOMBINANTES / PEPTIDOS

SINTETICOS. IgG, IgM
ELISA SANDWICH :AG RECOMB. + EZ (conjugado)

CUARTA GENERACION: AG.REC. P.SINTET. (Antígeno y Anticuerpo))

Evolución de los
marcadores
 Evolución  del Diagnóstico del VIH
1st gen 2nd gen 3rd gen 4th gen
Proteínas    Proteínas    Proteínas   
Antígeno usado   Lisado   recombinantes   recombinantes   recombinantes
y péptidos  y péptidos  y péptidos 
 Viral
sintéticos sintéticos sintéticos
Elisa indirecto indirecto sandwich indirecto y directo

anti­HIV Ig  IgG IgG  IgG Ac

detección IgM Ag P24

Sensibilidad +  ++   +++  ++++

Especificidad +  ++ +  +++  +++

Año aparición 1985 1987 1989 1997

 3. INMUNOCROMATOGRAFÍA

Flujo lateral en el dispositivo

Control
Antígeno de 
VIH

- CORE HIV
PRINCIPIO: Flujo a lo largo de un dispositivo

Añadir
Línea de  Línea de 
Muestra Conjugado
prueba control

Anticuerpos a IgG Oro Coloidal Antígeno de VIH Anticuerpos Anti-

conjugado a antígeno IgG/Oro coloidal
Anticuerpos a VIH
de VIH
 PRINCIPIO: Flujo a lo largo de un dispositivo

Banda De Prueba Banda Control

* La muestra fluye a lo largo de la membrana y los anticuerpos anti-
VIH (si están presentes) se unen al antígeno de VIH conjugado al oro
coloidal formando una banda roja visible.
* Los anticuerpos anti-IgG/Oro Coloidal en la línea control se une a
cualquier partícula de Oro coloidal no unido formando una banda roja
visible.
 PROCEDIMIENTO  PRUEBA RAPIDA­VIH

PASOS  A  SEGUIR:

1. Kit a Temperatura ambiente

2. Abrir la bolsa individual y extraer el test

3. Codificación del test

4. Añadir las gotas de suero, plasma o sangre total en

el pocillo marcado como A

5. Añadir las gotas de buffer en el pocillo B

6. Lectura e interpretación a los 15 minutos

C T A B
INTERPRETACION  PRUEBA RAPIDA­VIH 

C T A B

REACTIVO

T A B
C

NO REACTIVO
 Kits para el Tamizaje de VIH

Ag IgM IgG
Infección
concentración

Días Semanas Meses Años

Seroconversion
Respuesta inmunológica
 ELISA
 ELISA =   ensayo inmunoenzimático  ( Enzyme 
  Linked Inmuno Sorbent Assay). 

Se basa en la detección de antígeno o anticuerpo 
inmovilizado sobre una fase sólida, mediante 
anticuerpos que directa o indirectamente producen una 
reacción cuyo producto coloreado puede ser medido 
espectofotométricamente.
 ELISA

Antígenos inactivados ,parcialmente purificados pre-

cubiertos sobre una placa de ELISA

Suero de paciente contiene anticuerpos,que se

unirán a los antígenos de la placa

Inmunoglobulina antihumana conjugada a una

enzima . Este segundo anticuerpo se une a los
anticuerpos humanos

Cromógeno o substrato el cual cambia de color

cuando es dividido por la enzima unida al
segundo anticuerpo. 
H2O2
 ELISA: Leyenda
Anticuerpo IgM
Fase sólida
Captura anticuerpo

Fase sólida Antígeno

antígeno

Conjugado
Anticuerpo IgG
Elisa: Reacción Antígeno­Anticuerpo

Antígeno Anticuerpo
ELISA: Reacción Ac­conjugado
ELISA: Reacción Substrato
Cromógeno TMB
OPD
O2

H2O2

H2O
 ELISA

Antigen detection

TMB

Solid phase Sample Conjugate

 ELISA  Protocolo estandard :

1.- Dispensar la muestra

Dispensar muestra Lavado
incubar

37°C
 ELISA  Protocolo estandard :
2.­ Dispensar conjugado 

Dispensar conjugado Lavar

incubarar

37°C
 ELISA  Protocolo estandard  :

 3.­ Dispensar el  substrato

Dispensar substrato
e incubar
TMB Temp. ambiente
HO 2 2

H O TMB TMB
2 2

TMB HO
HO TMB
2 2

2 2
 ELISA  Protocolo estandard 
ELISA  Protocolo estandard :
4.­ Stop reaction

H2SO4
 Reacción Enzimática del Substrato

Adición de H SO4
2

Absorbancia
2000 Positivo Alto
1800
1600
1400
1200
1000
800
600
400 Positivo bajo
200
0

30’ Tiempo
 Reacción Enzimática del Substrato

Addición de H SO4
2

Absorbancia
Positivo alto
2000
1800
1600
1400
1200 Positivo bajo
1000
800
600
400
200
0

30’ 60’ Tiempo

 Marcadores enzimáticos más comúnmente utilizados  

Enzima Substrato Buffer/Substrato Color Filtro

secundario
(OPD) Citrate Phosphate Naranja- 492 nm
Buffer, 0.02% H2O2
o-Phenylene marrón
Diamine
HRP
(peroxidasa
(TMB) 30% Hydrogen amarillo 450 nm
de rábano ) 3,3',5,5'- Peroxide (H2O2)
Tetramethyl
benzidine
(ABTS) Citrate Phosphate verde 405 nm
2,2'- Buffer, 30% H2O2
azinodiethyl-
benzthiazoline
sulfonate)
 ELISA  Protocolo estandard 
ELISA  Protocolo estandard :

5.­ Lectura de Absorbancias

Photocell

Lectura Densidades Opticas

Filtro 450 nm

Data reduction

Fuente de luz
 ELISA : controles y muestras

• Control Negativo: asegura que la P P P N N B

placa no reacciona
inespecíficamente
• Control Positivo: asegura que la
placa reaciona correctamente
frente a una muestra positiva
• Control Negativo y Positivo :
Cálculo del Cut-Off
• Blanco asegura que la adición del
substrato no añada ningún
background a la placa
 ELISA

Densidad Optica

2000
1800
1600
1400
1200
1000
800 Positivo
Grey zone
600
400
200
0
Negativo
Elisa automatización

Sistema
Sistemamanual
manual

sistema
sistemaSemi
Semiautomático
automático
ELISA:Sistema automático
ALGORITMO PARA EL DIAGNOSTICO DE INFECCION POR VIH

1er
E L IS A
Resultado (+) Resultado (­)
2do s e re p o rta
E L IS A n o r e a c t iv o
Resultado (+) Resultado (­)
IF I s e re p o rta
n o r e a c t iv o

+ IN E S P E C IF IC O -

W ESTER N
B L O T /LIA

+ IN D E T E R M IN A D O -

R E P E T IR
3 M ESES

+ IN D E T E R M IN A D O -

PC R
PRUEBAS CONFIRMATORIAS
 DIAGNOSTICO DE VIH

  PRUEBAS CONFIRMATORIAS

1.INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI)

2. INMUNOENSAYO EN LINEA (LIA)
3. WESTERN BLOT
4. AISLAMIENTO VIRAL
4. PCR ADN-VIH
        
        BLOT
WESTERN

• El Western blot (o inmunoblot) es una técnica analítica usada 
para detectar proteínas específicas en una muestra 
determinada
• Técnica utilizada para la detección de anticuerpos específicos 
generados contra agentes infecciosos.
• Prueba específica que permite desglosar la reactividad total 
detectada por  ELISA y determinar que proteínas del patógeno 
son reconocidas por el sistema inmune.

• El Western blot fue desarrollado en el laboratorio de George 
Stark, en la Universidad de Stanford . El nombre (Western, 
occidental en inglés) le fue dado por W. Neal Burnettes, y 
consiste en un juego de palabras con una técnica análoga pero 
que usa DNA, el Southern (sureño) blot, por su descubridor  
Edwin Southern. Otras técnicas que fueron nombradas 
siguiendo este juego,  Northen blott (en el que se separa e 
identifica RNA).
 FUNDAMENTO TEORICO

• Separación por electroforesis de mezclas complejas de

proteínas y transferidas a membranas.

• Proteínas inmovilizadas se enfrentan a sueros de

pacientes, detectándose por medio de un Ac anti-
inmunoglobulina humana unida a enzima si hubo el
reconocimiento Ag-Ac.
PRINCIPIO DE WESTERN BLOT

1. ELECTROFORESIS DE LAS PROTEINAS

2. TRANSFERENCIA DE PROTEINAS

3. DETECCION DE ANTICUERPOS
                            
 ELECTROFORESIS DE LAS PROTEINAS

• Separación de mezcla de proteínas en sus diversos 
componentes a partir de lisado celular por 
electroforesis en gel denaturante             SDS­
poliacrilamida (PAGE). 
• Gel de poliacrilamida compuesto por acrilamida y 
bisacrilamida formando malla. 
• Proteínas de alto peso molecular :gel de bajo 
porcentaje 
• Proteínas de bajo peso molecular:gel de alto 
porcentaje. 
• Gel de empacamiento y gel de resolución.
ELECTROFORESIS DE 
LAS PROTEINAS
 TRANSFERENCIA DE LAS PROTEINAS

• Proteínas separadas por electroforesis son transferidas y 
fijadas a una membrana de nitrocelulosa 
• Transferencia electroforética:proteínas migran bajo 
campo eléctrico atraídas al ánodo (polo positivo) debido a 
carga negativa conferida por SDS.
• Transferencia semi seca (semi­dry blotting): gel y la 
membrana colocados horizontalmente entre papeles de 
filtro sumergidos en buffer de transferencia, colocado 
entre electrodos con la  membrana hacia lado anódico.  
TRANSFERENCIA DE 
PROTEINAS
 DETECCION DE ANTICUERPOS

• ANTICUERPO PRIMARIO (sueros).­ 
Anticuerpos utilizados a mayor dilución 
posible que permita distinguir señal 
positiva.rango de dilución 1/100 ­ 1/1500

• Determinar tiempo mínimo de incubación 
para evitar ruidos de fondo por uniones 
inespecíficas. 
 DETECCION DE ANTICUERPOS

    ANTICUERPO SECUNDARIO  
•  mediante un Ac. secundario: anti­
inmunoglobulina unida en forma covalente 
a una enzima
• Fosfatasa alcalina (AP) : 10­50 picogramo 
de poteína.
• Peroxidasa (HRPO): 250­500 picogramos 
de proteína.
 Protocolo
1.  Incubación de la muestra

60 minutos,  Temperatura ambiente
Continua agitación
 Protocolo
2. Lavado

Lavar: 3 x 5 minutes 
 Protocolo
3. Incubación del Conjugado

60 minutos, Temperatura ambiente
Agitación contínua
 Protocolo
4. LAvado

Lavar: 3 x 5 minutes 
 Protocolo
o5. Incubación del Substrato

Substrate Substrate
Substrate

Substrate
Substrate

15 minutos, Temperatura ambiente
Agitación contínua
 Protocolo
6. Parada de la reacción e interpretación

gp 160 gp 120 p24

Resultado Final: Lectura d ediferentes bandas
Interpretación como unas función de los criterios 
internacionales como FDA, CDC, Consensus for 
Retrovirus, WHO,SFTS, etc.
 WESTERN BLOT - VIH

7
GP-160
GP-120

P-66
P-55
GP-41 P-51

P-31

P-24

P-17
hivinfosource.org
TECNICA INMUNOFLUORESCENCIA
TECNICA INMUNOFLUORESCENCIA
NEGATIVO
POSITIVO
INESPECIFICO
 RESULTADO POSITIVO

Pocillo Superior Pocillo Inferior
 RESULTADO NEGATIVO

Pocillo Superior Pocillo Inferior
INESPECIFICO
 INMUNOENSAYO EN LINEA (LIA)

CONTROL 
NEGATIVO

CONTROL 
POSITIVO
INMUNOENSAYO EN LINEA (LIA)
INMUNOENSAYO EN LINEA (LIA)
ALGORITMO PARA EL DIAGNOSTICO DE INFECCION POR VIH

1er
E L IS A
Resultado (+) Resultado (­)
2do s e re p o rta
E L IS A n o r e a c t iv o
Resultado (+) Resultado (­)
IF I s e re p o rta
n o r e a c t iv o

+ IN E S P E C IF IC O -

W ESTER N
B L O T /LIA

+ IN D E T E R M IN A D O -

R E P E T IR
3 M ESES

+ IN D E T E R M IN A D O -

PC R
 GRACIAS …

soledadromeror@yahoo.com