PRUEBAS INMUNOLÓGICAS DE

LABORATORIO

2
Reacciones de Aglutinación y
Hemaglutinación

Las pruebas de aglutinación, son aquellas

reacciones que se caracterizan por la
formación de agregados visibles, cuando se
mezclan antígenos (Ags) particulados o
insolubles (aglutinógenos) con sus
anticuerpos (Acs) específicos (aglutininas)..
• En estas reacciones también se utilizan glóbulos
rojos, bien sea para detectar Ags propios de su
membrana (tipificación ABO y factor Rh) o también
para ser utilizados como reactivos en varias pruebas
de laboratorio.
• Cuando se utilizan globulos rojos, la reacción se
denomina hemaglutinación y los Acs involucrados,
hemaglutininas.
1.Generalidades de las reacciones de
Aglutinación

Estas pruebas pueden detectar el Ag

o el Ac en una muestra biológica y se
puede realizar en forma cualitativa o
semicuantitativa.
1.Mecanismo de la reacción

La unión del aglutinógeno y la aglutinina ocurre en

segundos, pero la formación de los agregados

En estas reacciones el Ag o aglutinógeno debe ser

multivalente.
Esto conlleva la formación gradual de un
entrecruzamiento (una red) entre el Ac y los
determinantes antigénicos, que al final de la reacción
da como resultado la formación de grumos visibles.
•Utilidad Clínica de las reacciones de Aglutinacón:
•Detección de aglutininas en el suero de pacientes con:
salmonelosis, brucelosis, leptospirosis, fiebres tíficas,
etc.
•Determinación del Factor Reumatoideo en la Artritis
Reumatoidea.
•Determinación en suero de Proteína C Reactiva (PCR)
en procesos inflamatorios.
•Determinación en orina de Gonadotrofina Coriónica
Humana (GCH) (prueba de embarazo).
1.Utilidad Clinica de las reacciones de
Hemaglutinación:

 Tipificación ABO y Factor Rh

 Determinación de Acs anti-Toxoplasma gondi
y anti-tripanosoma cruzi.
 Prueba de la Anti-Inmunoglobulina Humana (Prueba de
Coombs)
Este es un método ingenioso para detectar Acs incompletos
o bloqueantes.
Estos Acs probablemente son moléculas bivalentes que
forman un enlace monógamo (a grupos antigénicos de
repetición de la superficie celular), por lo que no se produce la
reacción de aglutinación.
 Para la obtención de la anti-inmunoglobulina humana o reactivo
de Coombs puede utilizarse diversos métodos inmunoquímicos,
uno de ellos es el denominado fraccionamiento Igs humanas.
Luego de esta fracción se inyecta a una especie animal
heteróloga (conejo, carnero). El animal empezara a producir Acs
contra las Igs humanas (reactivo de coombs polivalente)
 La prueba de Coombs tiene 2 modalidades:

 Prueba de Coombs Directa: Detecta la presencia de Acs

imcompletos sobre glóbulos rojos provenientes de individuos
sensibilizados. El ejemplo clásico, es la detección de Acs anti-Rh
sobre los glóbulos rojos de un recién nacido Rh positivo, cuya
madre es Rh negativo.

Cuando una mujer es factor Rh negativo, que da embarazada y el

hijo es factor Rh positivo, entonces de acuerdo al estado funcional
de la placenta o en el momento del parto los eritrocitos fetales
pueden pasar a la circulación materna. Los glóbulos rojos fetales
son antigénicamente extraños a la madre y ella empieza a producir
anticuerpos anti-Rh positivo.
Estos Acs son de la clase IgG y tienen
capacidad de atravesar la placenta, por
lo que reacciones con factor Rh positivo
de los glóbulos rojos del feto, quedando
recubiertos de estos Acs. Estos glóbulos
rojos empiezan a ser lisados por el
complemento o son destruidos en el
bazo y el feto empieza a sufrir de
anemia.
Cuando el niño nace y se sospecha de anemia
hemolítica del recién nacido, el médico ordena
Coombs directo para detectar los Acs anti-Rh
positivos sobre los glóbulos rojos del recién
nacido. Para ello se le extrae sangre al recién
nacido y sus glóbulos rojos se hacen
reaccionar con el Reactivo de Coombs.
 Prueba de Coombs Indirecta: Detecta la
presencia de Acs incompletos en el suero,
mediante una reacción en 2 etapas, que
comprende la incubación de la muestra sérica
con glóbulos rojos con el objeto de
sensibilizarlos y en una segunda etapa ocurre
la aglutinación de los glóbulos rojos
sensibilizados por el reactivo de Coombs.
.
En la misma circunstancia del ejemplo anterior, es
importante determinar el título de Acs anti-Rh en la
mujer embarazada.
Para ello en una primera etapa se hacen reaccionar
glóbulos rojos conocidos (Rh positivos) con el suero
de la paciente. Luego de un periodo de incubación,
en una segunda etapa se añade el reactivo de
Coombs (anti-Ig) y si la mujer tiene Acs anti-Rh
positivos se observará la aglutinación de los
glóbulos rojos
 Las pruebas de Coombs pueden usarse para detectar:
 Detectar Acs incompletos sobre la membrana
plasmática del glóbulo rojo en individuos sensiblizados
(coombs directo)
 Anemias hemolíticas inducidas por fármacos
 Anemia hemolítica del recién nacido
 Anemias hemolíticas autoinmunitarias
 Detectar Acs incompletos que se encuentran libres en el
suero (coombs indirecto)
Pruebas de Inmunofluorescencia

Estas sustancias tienen la propiedad de que

puedan acoplarse a moléculas proteicas tales
como los Acs formándose conjugados (Ac al que
se le ha acoplado un fluorocromo) que pueden
ser utilizados para detectar Ags presentes en la
membrana celular, inmunocomplejos depositados
en tejidos y Acs de una determinada
especificidad circulantes en líquidos orgánicos.
 Detecciónn del virus de la rabia en cortes de tejido cerebral
de animales
 Detección de inmunocomplejos depositados en biopsias de
órganos como piel o riñón
 Detección de gonococos en secreciones uretrales
 Detección de Chlamydia trachomatis en frotis endocervical
 Detección de Treponema pallidum en frotis de los exudados
de las lesiones pimarias o en las serosidades de las
lesiones secundarias cutáneomucosas de pacientes con
sífilis.
 Identificación y contaje de células B y T en sangre periférica
humana
Pruebas Imunoenzimáticas (ELISA)

• Estas pruebas se basan en la detección de complejos Ag-Ac

mediante el empleo de enzimas unidas al Ag o al Ac, los cuales
actúan sobre determinados sustratos para dar origen a
productos coloreados que pueden ser medidos
espectrofotométricamente.
• La intensidad del color será directamente proporcional a la
cantidad de complejos Ag-Ac que se ha formado y por tanto
directamente proporcional a la concentración del Ac o Ag
investigado en la muestra analizada (ej., suero).
• Estas pruebas constituyen una de las herramientas actuales
mas útiles en el laboratorio de inmunodiagnóstico debido a que
las mismas presentan las siguientes ventajas:
 Alta sensibilidad y especificidad
 Son pruebas de gran aplicabilidad clínica
 Son de fácil realización
 Son pruebas cuyos resultados se obtienen en un
tiempo relativamente corto
 Son pruebas seguras ya que los reactivos empleados
no presentan riesgos a la salud
 Los reactivos empleados por lo general son bastantes
estables.
 Las pruebas de ELISA se pueden realizar
de diversas formas o modalidades según
el objetivo propuesto, entre estas
modalidades figuran el método indirecto
y el método de captura, también
denominado “de doble Ac” ó “sándwich”.
Pruebas de Neutralización

La neutralización o actividad neutralizante se

refiere a la capacidad de un suero inmune específico
(antisuero o acs específicos) de reducir o inhibir la
actividad biológica de un microorganismo o de algún
producto derivado del mismo. Esta propiedad de los
Acs ha permitido desarrollar un conjunto de técnicas
de laboratorio, las cuales se identifican de manera
genérica con el término de “pruebas o reacciones de
neutralización”.
Modalidades de las pruebas de neutralización

La mayoría de las pruebas de neutralización que tienen

utilidad clínica se pueden agrupar en 3 modalidades:
 Neutralización de toxinas (exotoxinas) y productos
extracelulares secretados por bacterias.
 Neutralización de enzimas
 Neutralización Viral