“DIAGNÓSTICO MOLECULAR DE ASTROVIRUS

HUMANOS”
Pierina Boksar; Marthieli Zapirai; Hugo Do Carmo; Andrea Ilarraz.
1Laboratorio de Virología Molecular. Universidad de la República - Regional Norte - Salto, Uruguay.

INTRODUCCIÓN DISCUSION
Los astrovirus humanos pertenecen a la familia Astroviridae (HAstV) y son una de las Antes de la PCR, debio realizarse la retrotranscripcion (de ARN a ADN), debido a las
principales causas de gastroenteritis aguda (GEA) en todo el mundo, principalmente en caracteristicas del virus, utilizando primers randomicos.
niños y jóvenes. La infección no suele ser grave y en algunos pocos casos conduce a la A traves de la PCR se logro diagnostiar en la muestra problema
deshidratación. Tienen una apariencia de estrella con 5 o 6 puntas y su nombre se
deriva de la palabra griega "astron", que significa estrella, posee un ARN no
segmentado, de cadena sencilla y sentido positivo dentro de una cápside icosaédrica
sin envoltura. El principal modo de transmisión de astrovirus es por alimentos y agua
contaminados.
Fueron descubiertos en 1975 mediante el microscopio electrónico durante un brote
de diarrea. Uno de los métodos mas utilizados para sus diagnóstico es la PCR .

OBJETIVO
Diagnosticar a través de la PCR, Astro Virus Humanos en una muestra
problema.
MATERIALES Y MÉTODOS
Método y Procedimiento

Extracción de ARN viral (Trizol Reagent)

desintegración de tejidos congelado con nitrógeno líquido(-160 °C)

extracción de proteínas y lípidos con fenol y centrífuga.

Precipitación del ácido nucleicos (deshidratación por isopropanol)

Retrotranscripción (Enzima Revert Aid de ARN a Cadn (Taq ADNpolimerasa)

Primer Randómico Hexamérico

H2O RNAse free
Buffer de la enzima RT de la enzima 5 x
enzima RT
ARN genómico viral extraído de la muestra.

PCR para amplificación de una región mediante primer específicos.

Visualización del producto PT- PCR utilizando electroforesis, mediante gel de agarosa y
marcadores de fluorescencia de ácido nucleicos.

Eficiencia de la Taq-POLIMERASA durante el tiempo

CONCLUSIONES
El presente estudio es el primer reporte que demuestra el alto grado de
contaminación de las aguas residuales por los Norovirus y Rotavirus, vertidas
directamente sobre el río Uruguay evidenciando el riesgo de infección de las
personas que entran en contacto directo con las aguas de este río ya sea para
recreación o consumo. Los resultados finales de estos estudios permitirán conocer
REFERENCIAS en detalle los patrones de circulación de RV y NV durante las distintas estaciones
climáticas en el período de un año.