Adsorbato

¿Que es la adsorción?
Proceso mediante el cual se extrae materia de una fase y
se concentra sobre la superficie de otra fase Adsorbente
(generalmente sólida). Por ello se considera como un
fenómeno subsuperficial.

• La adsorción de una especie química presente en solución

ocurre debido a la interacciones entre la superficie activa
de las partículas sólidas y el adsorbato.

• La cantidad adsorbida de una determinada especie

depende no sólo de la composición de la Fase solida, sino
también de la especie química y de su concentración en la
solución.
 Fases Estacionarias (polares) Fases móviles (apolares)
• Características
• Insoluble en el disolvente elegido
• No debe reaccionar con las sustancias a separar
• No debe actuar como catalizador de su descomposición,
transposición o isomerización
• Composición uniforme, incoloro (vible a la separación de
compuestos coloreados)

• Tipos

• Silica (SiO2)
• Alumina (Al203)
• Magnesia (MgO)
• Silicato de magnesio
• Diatomita o tierra de diatomeas (Celite, kieselguhr)
• Zirconia (ZrO2)
• Titania (TiO2)
• Aluminosilicato (Al203 y SiO2)
 Sílice
Ventajas
• Menor superficie activa (menor posibilidad de
reacciones de la muestra indeseables durante la
separación).
• Fuertes partículas de porosidad y tamaño controlado
(puede resistir las presiones altas requeridas en
HPLC).
• Superficie de área mas alta (permite pesos mas
grandes de muestra inyectada, incrementando la
sensibilidad de detección o incremento de
rendimiento en cromatografía preparativa)
• Alta pureza y reproducibilidad (separaciones
repetibles).
• Disponibilidad y costo razonable.
• Amplia cobertura de experimentos.
• Selectividad por compuestos básicos.
• Amplio rango de formas usadas en cromatografía.
Desventajas
• Superficie acida pH 5
• Pobremente adaptada a la separación de
compuestos catiónicos o con múltiples grupos
básicos (-N= o –NR2).
• La parte enlazante Si – 0 – Si hidroliza en pH .8
• Sílice hidroliza a temperaturas superiores a 40
grados C
• Sílice hidroliza en presencia de iones fosfato y
carbonato
• La sílice es soluble en medios acuosos / medios
orgánicos, incluso en medio levemente alcalino a
temperaturas moderadamente elevadas
• El enlace siloxano es inestable a pH < 4.5 y se
convierte en aún más inestable cuanto menor sea
el pH
 Alúmina
• Retiene compuestos ácidos.
• Ácidos carboxílicos fuertemente retenidos (algunas veces
irreversible).
• Selectividad por compuestos a hidrocarburos aromáticos (tamaño de
anillos grandes, ejem picene C22H14).
• Mejor separación para isómeros de hidrocarburos aromáticos
(usando fase móvil optima)
• Presentaciones en forma neutra.
• Adecuado para su uso en altas temperaturas HPLC.
• Fuerte afinidad por halogenuros
• 3 rangos de pH: ácido, base, y el neutro (inicialmente pH 12)
Alúmina Ácida Ajustado a un pH de 4.5 ± Se utiliza para separar los
0.5 fenoles, sulfónicos, ácidos
carboxílicos y amino
Alúmina Básica Ajustado a un pH de 10.0 ± Se utiliza para separar las
0.5 aminas, iminas y
colorantes básicos
Alúmina Neutra Ajustado a un pH de 8.0 ± Se utiliza para separar los
0.5 aldehídos, cetonas y
lactonas
 CFN

(-) (+)
polar polar

CFR
Recordando…
Polaridad de un disolvente

Parámetro de solubilidad de Hildebrand

Parámetro Rohrschneider  P´

“En cromatografía de adsorción εo “

Parámetro de solubilidad de
Hildebrand
δ : Escala cuantitativa de las polaridades de los solventes.

δ Solvente polar k´

δ Solvente no polar K´
δd = Medida de la habilidad del solvente de interaccionar con
la muestra vía. Fuerzas de dispersión de London
δo= Medida del disolvente a interaccionar vía Dipolo-dipolo
δh = Aceptor de H
δa = Donador de H
Cambio de
la
selectividad
• Fuerza del
disolvente 
parametro δ
• Selectividad del
disolvente 
subparametros
δd , δo, δh, δa
Parámetro de Rohrschneider

FE
 Parámetro de Rohrschneider

• Según Snyder (1978) los datos de Rohrschneider serían utilizados con

mayor facilidad si los expresamos de manera diferente, expresando las
constantes de distribución en forma logarítmica.

P´Indice de polaridad, mide la polaridad de

un solvente. Determina la fuerza del solvente,
en eso es similar al parámetro de Hildebran
Índice de polaridad
 Fuerza del disolvente (εo) en cromatografía
de adsorción
Se basa en datos de solubilidad real.
P´ Útil en CLL.

εo  Mejor parámetro para medir la fuerza del disolvente

en la cromatografía de adsorción.
Energía de adsorción por
unidad de área del
solvente εo = Esa/Ae

Es = Energía libre del disolvente en un adsorbente dado

Ae = Moléculas del disolvente en la superficie de un
adsorbente dado
Variaciones en la retención
εo Controla las variaciones de k´
εo Disolvente fuerte k´

k´ pequeña Compuesto eluye rápido

k´ grande Compuesto eluye lento

Aproximadamente
iguales en algunos
casos
εo = 0.48 (terbutil metil eter)

εo = 0.29 (terbutil metil éter- Hexano )

1. p-xilosa
2. Nitrobenceno
εo = 0 (Hexano) 3. Acetofenona
4. 2,6-dinitrotolueno
Triangulo de selectividad
Fuerza del disolvente en alumina
 Selectividad del solvente
Regla del “hidrogen-bonding”: cualquier cambio en la FM que resulte en un cambio en la
interacción en el enlace de hidrogeno entre las moléculas de la muestra y las de la FM  Resulta
en un cambio de α

Aceptores de H

Fase estacionaria: alumina

 Adición de agua o modificadores polares a la
FM
DESACTIVACIÓN
¿Qué pasa si usamos agua
como FM? Cubrir o bloquear sitios
fuertes en la superficie
de la sílice
Agua
Se agrega agua Modifica la interacciona
o metanol fase móvil con la sílice o
alumina
Ventajas de agregar agua a la FM
 Menor variación en la retención de muestras en
cada corrida.
 Mayor eficiencia de las columnas y en algunos
casos reducción de los picos.
 Compensación parcial de las diferencias entre
lotes en adsorbentes del mismo tipo.
 Tendencia reducida del adsorbente para
catalizar reacciones no deseadas de la muestra
durante la separación.
Uso de la CCF para predecir la retención en
NPC
Ventajas

• Anticipar posibles problemas y explorar diferentes fases

móviles
• Saber si existen componentes de la muestra que se
queden retenidos en la fase estacionaria
• Saber que muestras podrían contaminar nuestra
columna  pretatramiento.
Uso de la TLC para predecir la retención en NPC
 Otras Variables de separación
Volumen de muestra
• V muestra< 1/3 del volumen de la primera banda de interés en el cromatograma. A
menos que la muestra sea disuelta en un solvente que es mas débil que la fase móvil.
• Bajo circunstancias favorables, muestras tan grandes como 1mg/g de adsorbente pueden
ser sobrecargadas sin afectar adversamente la separación.
• Adsorbentes de alúmina y empaques de silica pelicular generalmente tienen capacidades
lineales de 0.2 mg/g o menores.
• La carga máxima de muestra de las columnas de CL-S muy eficientes (≤ 10-µm) es también
menor, si no la eficiencia de la columna es degradada.
• El tamaño de muestra puede ser también limitado por la baja solubilidad de la muestra en
fase móvil.
Los valores de H de columna se elevan
apreciablemente por sobrecargas de
columna mas grandes que 0.01mg/g.
 Temperatura
• El efecto de un incremento en la temperatura sobre la separacion,
proporcionará una disminución en la retención de todas las bandas.
• Cualquier cambio en la selectividad con temperatura es ligera. (Si se desean
realizar cambios notorios en la selectividad se requerirá de incrementos
grandes de temperatura)
• Cambios generalmente cuando soluciones diluidas de un solvente B muy polar
son usadas como fase móvil.
• Valores de k’ de muestras normalmente decrecen 2% por cada 1°C que
incrementa en la temperatura de la columna.
Aumento de T, disminución de
tR y disminución en
separación.
 70°C

T ambiente

• Cambios NOTORIOS en la
selectividad requerirán de
temperatura altas.
• Generalmente cuando FM es
solvente muy polar diluido.
 Problemas especiales
Reproducibilidad

“Incapacidad para reproducir adsorbentes y empacados de columnas de CLS de

lote a lote es una queja frecuente de los usuarios”.

Causas probables:
• La retención de moléculas complejas, multifuncionales es una función sensitiva
de la configuración de la superficie del adsorbente, lo cual aparentemente varia
con menor cambio en el proceso usado para sintetizar el adsorbente.

Desafortunadamente, la irreproducibilidad del adsorbente no es un problema

que desaparecerá pronto por lo tanto…
 Aspectos a considerar:
¿La retención constante es particularmente importante para una aplicación
dada?

• Considere el uso de mas métodos de separación reproducibles. Por

ejemplo: Fase reversa o Par-iónico.

Solo la CSL por adsorción me satisface, para mi separación (no pudo usar otra técnica
de separación) y requiero separaciones reproducibles y repetibles por un largo
periodo.

• Entonces una cantidad de adsorbente del mismo lote debería ser guardado
para la preparación de columnas idénticas tiempo después.

• Los empaques de columnas deberán ser adquiridos con el proveedor con los
requerimientos del mismo lote deseado.
 Contaminación por Agua
“Así como la adición de agua a la fase móvil resuelve algunos problemas, cualquier
variación del contenido de agua en fase móvil conduce a otros problemas”.
Efecto:
• Una variación en el contenido de agua de corrida a corrida, conducirá a una
variación inaceptable en los valores (R de diferentes componentes de la
muestra).
Causas :
• Exposición de la fase móvil al aire de diferente humedad que la fase móvil.
• Contacto de la fase móvil con contenedores donde puede ocurrir pérdida o
captación de agua.
• La fase móvil es la contaminación por aire húmedo, cuando se transfiere la línea de
la bomba de entrada de un contenedor de disolvente a otro (cuando se cambian
las fases móviles).
• Es importante no dejar el filtro de la línea de entrada fuera del solvente durante
más de unos segundos.
 Desactivación de la columna

“La desactivación de la columna es un problema general en LSC, más que

para otros métodos LC.”

Causas :

• El uso continuo de una columna LSC, los valores de la muestra k’ comienzan a

disminuir, las bandas se vuelven asimétricas, el número N de platos disminuye y
la resolución empeora gradualmente con el tiempo.

Solución:
• Se necesita entonces la regeneración de la columna, para eliminar toda la
"basura" química que se ha acumulado en el adsorbente con el tiempo.
 ¿Como quitar los residuos?

• Lavar la columna en secuencia con el número siguiente de volúmenes de columna de cada

disolvente: cloruro de metileno (10), metanol (20) y agua (20). Si se sabe que las muestras
básicas o ácidas se han utilizado en gran medida en las anteriores separaciones de LSC en
la columna, entonces se pueden añadir piridina o ácido acético, respectivamente, a las
etapas de metanol y agua.
• Después de la purga de la columna, se debe reacondicionar o reequilibrar para eliminar
cualquier exceso de agua o modificadores polares.
• En todos los casos, el equilibrado final de la columna debe comprobarse permitiendo que
la última fase móvil fluya a través de la columna, con inyección de una muestra estándar (k
'> 1) cada 5 a 10 volúmenes de columna. Sólo cuando la retención de la muestra estándar
se convierte en constante se debe utilizar la columna para separaciones LC.
 Diseño de una separación de CLS por
adsorción.
Columna
• Hoy en día, la mayoría de las separaciones de LSC se llevan a cabo sobre una columna
de particula pequeña, silicas totalmente porosas (por ejemplo, μ-Porasil, Zorbax-Sil,
Partisil-5 o -10, etc.)
• Para aplicaciones de rutina en las que la robustez y fiabilidad del sistema LSC son
importantes, como para el control de un proceso de planta, y donde la separación no
es demasiado difícil (o el tiempo de análisis es menos importante), puede preferirse
una columna de sílice pelicular (Corasil-II, Vydac, etc.)
• Las columnas de empaquetaduras peliculares son más fáciles de preparar y menos
sujetas a taponamiento, también son más fáciles de equilibrar y regenerar. Para
separaciones preparativas de muestras grandes, se usan normalmente partículas de
50 μm de sílice porosa.
 Fase móvil
• Selectividad
• Fuerza del eluyente
• Polaridad
• Valores de k’

Temperatura
• La temperatura ambiente, o termostática cerca de
ambiente si los tiempos de retención deben
mantenerse dentro de límites estrictos.
• Los valores de k’ de la muestra cambiarán en un
cambio de aproximadamente 2% / ° C en la
temperatura de la columna.
 Tamaño de muestra
• Se pueden inyectar hasta 1 mg de muestra por gramo de adsorbente en casos favorables
(Partículas de sílice totalmente porosas).
• Para columnas muy eficientes, los valores de N pueden reducirse cuando el tamaño de la muestra
excede 0,05-0,1 mg / g.
• Se debe comprobar el efecto del tamaño de la muestra sobre la separación al inyectar muestras de
más de 50 μg / g.
• El volumen de la muestra inyectada puede ser generalmente de 25-50 μl para columnas muy
eficientes de pequeño volumen (por ejemplo, 15 × 0,3 cm y 5 μm de particula) y de 50-400 μl para
columnas más largas y más anchas.
• Pueden manejarse volúmenes mayores si la muestra se disuelve en un disolvente que es más débil
que la fase móvil. En algunos casos se pueden inyectar pesos más grandes de muestra si la muestra
se compone como un volumen mayor de muestra más diluida.
 Bibliografía:
1. L. R. Snyder, Anal. Chem., 39, 698, 705 (1967).
2. E. Stahl, Thin-Layer Chromatography: A Laboratory Handbook, 2nd ed., Academic, New York, 1969.
3. J. G. Kirchner, Thin-Layer Chromatography, Wiley-Interscience, New York, 1967.
4. J. Krupcik, J. Kriz, D. Prusova, P. Suchanek, and Z. Cervenka, J. Chromatogr., 142, 797 (1977).
5. K. Tsukida, A. Kodama, and M. Ito, ibid., 134, 331 (1977).
6. Du Pont Instrument Products Division.
7. L. R. Snyder, J. Chromatogr., 63, 15 (1971).
8. Ibid., 20, 463(1965).
9. Ibid., 8, 319(1962).
10. Ibid., 15, 344 (1964).
11. M. Dong and D. C. Locke, J Chromatogr. Sci., 15, 32 (1977).
12. T. H. Beasley, H. W. Ziegler, and A. D. Bell, Anal. Chem., 49, 238 (1977).