Pruebas Bioqumicas

Conjunto de pruebas que ponen de manifiestos las caractersticas

bioqumicas de las bacterias permitiendo identificar gneros y especies.
La identificacin primaria de las bacterias consiste en la determinacin de su
morfologa microscpica (GRAM y forma) y la morfologa macroscpica o
colonial. En este punto somos capaces de poder identificar el gnero bacteriano,
pero recordemos que el reporte final del aislamiento de una bacteria patgena
siempre debe incluir la especie. Las pruebas bioqumicas nos permiten
reconocer especies bacterianas.
La seleccin de las pruebas bioqumicas a utilizar depender del tipo de
bacterias aislada, en el caso de los GRAM positivos la aplicacin de tres pruebas
pueden resultar suficientes en la identificacin de algunas cepas de estafilococos,
mientras que para los GRAM negativos se requiere un nmero mayor de
pruebas para identificar una enterobacteria al nivel de especie.
Prueba de la Oxidasa
El objetivo de la prueba Oxidasa es buscar la presencia de la
enzima Citocromo C oxidasa. Se trata de un enzima que oxida
el citocromo C de la cadenatransportadora de e-. Este se
detecta utilizando el tetra para fenilendiamina: el reactivo de
oxidasa contiene este compuesto que va a ser oxidado por la
citocromo C oxidasa. En estado reducido es incolora, pero
cuando se oxida vira a prpura.

Esta prueba da como resultado la presencia de E. coli (-)

P. aeruginosa(+)
Procedimiento
Con un pequeo papel de filtro aadimos reactivo de Kovacs,
lo impregnamos y a partir del tubo con la bacteria problema
tomamos un poco con el asa de platino y ponemos en el
papel. Tras unos 30 segundos, observamos si ha ocurrido algn
cambio. Las bacterias que dan positivo a esta prueba tienen
generalmente un ciclo respiratorio oxidativo. Se considera
positiva esta prueba cuando toma un color prpura la
muestra.
PRUEBA DE LA CUAGULASA.
*Principio._ Se basa en la capacidad de las bacterias de coagular el plasma por
efecto de la enzima coagulasa.

Se utiliza de manera especifica para identificar especies dentro del grupo de los
staphylococcus:
*Staphyococcus subesp. Anaerobious, S. aureus subesp. Aureus, S. Schleiferi subesp.
Schleiferi coagulans, todos son positivos para la estafilocoagulasa (coagulasa libre,
prueba en tubo).
*S. aureus subesp. aureus, S. lugdunensis y S. schleiferi subesp. schleiferi todos son
positivos para el factor de agregacion (coagulasa ligada, prueba en
portaobjetos).

Un resultado positivo de la prueba de coagulasa constituye un

diagnostico definitivo para la identificacion de S. aureus y con
frecuencia se utiliza para indicar la virulencia o patogenicidad.
BIOQUIMICA
La estafilocoagulasa es excretada al medio extracelular por el S. aureus),es
relativamente estable al calor y se inactiva con facilidad por las enzimas proteolticas
(proteasas).
In vitro, la coagulasa aumenta la velocidad de coagulacin, del plasma, lo que produce la
formacin de un coagulo de fibrina.

La coagulasa ligada se detecta en la prueba en portaobjetos, la prueba de agregacin

del plasma. La coagulasa ligada o el factor de agregacin (CF) es responsable de la
absorcin del fibringeno y lo altera del modo tal que precipita sobre los estafilococos
y causa la agregacin de estos, lo que produce la aglutinacin rpida de las clulas. El
factor de agregacin convierte el fibringeno en fibrina de manera directa.

Coagulasa libre._ la prueba de la coagulasa en tubo detecta ambas coagulasas, la libre

y la ligada, siendo la nica distincin entre ambas la antignica. La coagulasa libre
extracelular reacciona con una sustancia en el plasma denominado factor de agregacin
de la coagulasa (CRF), una sustancia
termoestable similar a la trombina. Este complejo reacciona de manera indirecta
convirtiendo el fibringeno en fibrina. La diferencia principal es que el CRF que
reacciona con la coagulasa no requiere iones de calcio para formar un coagulo y es
insensible a la heparina.
 Interpertacion
I. Procedimiento en portaobjeto
I. POSITIVO (+)
Marcada agregacion dentro de los 5-20 seg.
S. aureus cepa virulenta
II. Positivo Tardio
Cualquier agrefacion o granulacion despues de 20 seg y hasta 1 mnuto
S. Aureus cepa virulenta
III. Dudoso
Cualquier granulacion despues de 1 minuto
Repetir si el resultado es identico, confirmar por prueba en tubo antes de
informar el resultado
IV. Negativo (-)
Sin cambios; la suspension permanece homognea
Confirmar por prueba de tubo antes de informar el resultado
S. epidermis, S. saprphyticus u otro microorganismo
Procedimiento en tubo
I. Fomacion de coagulo o filamentos de fibrina separados
Completo: Coagulo en todo el tubo
Parcial: El cuagulo no se extiende a todo lo largo de la columna liquida.
Cualquier grado de coagulacion es considerado positivo
II. Negativo (-)
Ausencia de formacion del coagulo, la suspension permanece homogenea
(igual que el tubo inoculado)
S. espidermis, S. saprophyticus u otro microorganismo
PRUEBAS DE CATALASA Y PEROXIDASA.
Principio de esta prueba es probar la presencia de las enzimas catalasa y
peroxidasa.

*Estas enzimas son considerada hidroperoxidasas.

*El centro activo de la catalasa son un tipo de protenas hemo denominadas
citocromos.
*El H2O2 (perxido de hidrogeno) si se acumula es toxico para las bacterias y
produce su muerte. La catalasa puede descomponer el perxido de hidrogeno u
oxidar sustratos secundarios pero no tiene accin contra otros perxidos.
*La descomposicin del H2O2 solo puede darse por la presencia de dos enzimas
la catalasa y la peroxidasa. Para la descomposicin cataltica esta involucrada la
reduccin del hierro trivalente, a su forma reducida el hierro bivalente, y la
reoxidacin de este ultimo a oxigeno.

La catalasa puede funcionar de dos modos distintos:

En el catabolismo del perxido de oxigeno o en la oxidacin peroxidativa de
pequeos sustratos como el alcohol etilico, el alcohol metilico, o el mercurio
elemental.
1)La prueba de la catalasa es utilizada para diferenciar principalmente entre los
gneros:
*Streptococcus (-) entre los Micrococcus (+) o de sthaphylococcus (V+)
*Bacillus (+) de los Clostridium (V-)
*Listeria Monocytogenes (+), especies de Kurthia (+), Corynebacterium (+) de
otros
Microorganismos que pueden ser similares desde el punto de vista morfologico
por ejemplo:
Especies de Lactobacillus (V-), especies de Enterococcus (V-) y Streptococcus del
grupo B (-).

2)La diferenciacin de especies de microorganismos:

*Gram Positivos
por ejemplo: Aerococcus Urinae (+) de Aerococcus Viridans (-)
*Gram Negativos
por ejemplo: Moraxella Bovis (variable) y especies de Kingella (-) de otras
especies de Moraxella (+)
PRUEBA DE LA CATALASA
Para esta prueba los reactivos que se utilizan son:
*Perxido de Hidrogeno al 30%
*Buffer fosfato M/15, pH 7.0
*Tween 80, 10%

Algunos procedimientos para las pruebas de catalasa rutinaria a temperatura

ambiente (22-25 C)
El primero es el mtodo en portaobjetos, este es el mas recomendable

El otro consiste es el mtodo en tubo.

Tambin existen las pruebas de catalasa para la diferenciacin de

Mycobacterium.
Para esta prueba existen tres mtodos:
Prueba de la mancha (mtodo de la gota)
Prueba semicuantitativa
Prueba de la catalasa termoestable
PRUEBA DE LA CATALASA INTERPRETACION
*Prueba coagulasa rutinaria:
1._Positivo (+), burbujeo inmediato, observado con facilidad: formacin de O2
2._Negativa (-), ausencia de burbujas, ausencia de O2
*Pruebas de catalasa para mico bacterias:
1._ prueba de la mancha: positivo (+), aparicin de burbujas alrededor de las colonias
dentro
de 4-5 seg. Algunas colonias pueden ser positivas y otras negativas.
Rpido: fuertemente positivo (+)
Lento: positivo dbil (+)

2._ prueba semicuantitativa: medicion de altura de columna de burbujas

>45-50 mm. fuertemente positivo (+)
20-50 mm. positivo debil (+) a positivo (+)
< 20mm. negativo (-)

3._ Catalasa termoestable._ observar el burbujeo inmediato (liberacion de gas), los

tubos
negativos deberan de mantenerse 20 min. para poder ser reportados como negativos,
verificar
de manera cuidadosa ya que unas cuantas burbujas da resultado positivo.
PRUEBA DE CITRATO
Principio
La prueba de citrato se utiliza para determinar si un
microorganismo es capaz de utilizar el citrato como nica fuente
de carbono para el metabolismo y el crecimiento con alcalinidad
resultante.
Objetivo
Ayuda a diferenciar entre gneros, en especial entre los
miembros de la familia Enterobacteriaceae , de microorganismos
Gramnegativos relacionados y de bacterias no fermentadoras.
Escherichia coli, por lo general (-) y especies de Shigella (-)
Edwardsiella (-) de Salmonella (por lo general +)
Serratia proteamaculans (+) de Yersinia Pseudotuberculosis (-) y
Yersinia enterocolitica ( por lo general -)
Proteus Klebsiella-Enterobacter (por lo genreal +) de E.coli (por lo
general -)
 Ayuda a la diferenciacion de especies
Leminorella grimontii (+) de Leminorella richardi (-)
Acidovorax delafieldii (+) de A. facilis (-) y A. temperans (-)
Medio utilizado
Citrato de Simmons
Interpretacin
Positivo (+): Crecimiento con un intenso color azul en el pico de la
flauta
Negativo (-): Ausencia de crecimiento y ningn cambio en el color
(verde)
PRUEBA DE UREASA
Principio:
Determinar la capacidad de un microorganismo de hidrolizar la urea en dos
molculas de amonaco por la accin de la enzima ureasa, con la resultante
alcalinidad.
Objetivo:
Desde un principio esta actividad enzimtica fue caracterstica de todas las
especies Proteus y se le utiliz sobre todo para diferenciar los
microorganismos Proteus rpidamente, ureasa positivos de otros miembros
de la familia Enterobacteriaceae; los otros gneros pueden dar una reaccin
positiva tarda
Ayuda a la diferenciacion de especies:
Enterobacter dissolvens (+), E. gergoviae (+), E. hormaechae, ( V. por lo comn
+) E. cloacae (V) de otras especies de Enterobacter (-)
Ayudar a la identificacion de
1. Vibrio Parahaemolyticus ureasa variable, por lo comn +
2. Helicobacter cinaedi rpidamente ureasa +
3. Especies de Mycobacterium (V)
4. Especies de Cryptococcus (levaduras) (+, 1-2 dias)
Bioqumica
La urea es hidrolizada por una enzima llamada ureasa para dar dos
molculas de amonaco. La ureasa es una importante enzima relacionada
con la descomposicin de los compuestos orgnicos.
Medio utilizado
Urea de Christensen
Se utiliza para detectar la actividad de ureasa por todos los
microorganismos Proteus rpidamente ureasa positivos. Las especies de
Enterobacter pueden utilizar la urea como nica fuente de nitrgeno.
El medio de Christensen elimina la necesidad de que un microorganismo
utilice el amoniaco como su nica fuente de nitrgeno y permite la
deteccin de la hidrlisis de la urea por otros miembros de la familia
Enterobacteriaceae cuya actividad de ureasa es leve y tarda .
La velocidad de la hidrlisis de la urea diferencia los microorganismos de la
subfamilia Proteeae que producen ureasa rdamente , los microorganismos
ureasa positivo tardos como las especies de Klebsiella o de Enterobacter
varan en su velocidad de hidrlisis de la urea.
 Interpretacin
Positivo (+): Color rosa-rojo (rojo-violeta) intenso en el pico de flauta. El
color puede penetrar en el interior del agar; la extensin del color
indica la velocidad de la hidrlisis de la urea
a) Grado de la hidrlisis
4+; todo el tubo rosa- rojo
2+; pico de flauta rosa, fondo sin cambios.
+ dbil; la parte superior del pico de la flauta rosa, el resto sin
cambios.
b) Positivo rpido: 1-6 horas para todos los microorganismos Proteeae
positivos.
c) Positivo tardo: 24 horas a 6 das de incubacion (Klebsiella, Enterobacter,
Citrobacter)

Negativo (-): Sin cambios de color (color piel a amarillo plido)

PRUEBA DE MOVILIDAD
PRINCIPIO
A. Determinar si un microorganismo es mvil o inmvil
B. Las bacterias son mviles por medio de flagelos. Los flagelos
aparecen sobre todo entre los bacilos; sin embargo, unas pocas formas
cocoides son mviles. Las bacterias mviles pueden contener un nico
flagelo o muchos flagelos y su ubicacin vara segn las especias
bacterianas y las condiciones de cultivo. En ocasiones, las bacterias
mviles producen variantes inmviles que parecen estables y en raras
oportunidades revierten a las formas mviles. Los microorganismos
inmviles carecen de flagelos.

OBJETIVO
A. Incubacin: 37C
1.- Ayudar a diferenciar entre gneros
a) Enterobacter de klebsiella (-)
b)Vibrio (por lo comn +) de Actinobacillus (-)
c)Aeromonas media (-) y Aeromonas salmonicida (-) de otras
especies de Aeromonas y Plesiomonas shigelloides (+)
2.- Ayudar a diferenciar entre especies
a) Escherichia coli aergena (+) de la variedad anaergena (inactiva) de E. coli
b) Bacillus anthracis (-) y B. mycoides (-) de otras especies de bacillus
c) Bordetella bronchiseptica (+) y B. avium (+) de B. parapertussis (-) y
B. Pertussis
B. Incubacin: 22-25C (temperatura ambiente)
1.- Ayudar a diferenciacin entre gneros: Listeria monocytogenes (+) de
especies de corynebacterium (por lo comn -)
2.- Ayudar a la diferenciacion de especies
a) Corynebacterium aquaticum (+)y C. matruchotti (+) de otras especies de
corynebacterium (por lo comn variable
b) Yersinia enterocolitica (+) d otras especies de Yersinia (-)

MEDIOS DE CULTIVOS UTILIZADOS

MEDIO PARA LA PRUEBA DE MOVILIDAD (SEMISLIDO)
MIO o SIM
 INTERPRETACION MACROSCOPICA
A. Medio para la movilidad
1.- Resultado positivo(mvil): microorganismos mviles que migran desde la
lnea de siembra y difunden en el medio, lo que produce turbidez. Pueden
mostrar estras de crecimiento velloso
2.- Resultado negativo (inmvil): crecimiento bacteriano acentuado a la largo
de la lnea de siembra; el medio que la rodea permanece claro
3.- Medio de control(no inoculado), Medio control: sin crecimiento, el medio
permanece claro e incolora
PRUEBA DE INDOL
PRINCIPIO
Determinar la cantidad de un microorganismo para producir indol a partir de
triptfano.

OBJETIVO
A. Ayudar a la diferenciacin entre gneros
1.- Separacin se Escherichia coli (+) de los miembros de los gneros
klebsiella (por lo comn -), Enterobacter (V-), Hafnia (-), Serratia (V-) y una
especie de Pantoea, Pagglomerans (-)
2.- Cardiobacterium hominis (+ dbil) de Eikenella corrodens (-), de especies
de kingella (-) y de suttonella indologenes (-)
B. Ayudar en la difernciacin de especies junto con otras pruebas bioqumicas
1.- Paenibacillus alvei (+) de otras especies de bacilos
2.- Escherichia coli (+) , E. hermanii (+) y E. fergusonii (+) de E. vulneris (-) y
E. blattae (-)
3.- Citrobacter freundii (-) de C. koseri (+) y de C. amalonaticus
4.- Klebsiella oxytoca (+) K. ornithinolytica (+) de otras especies de Klebsiella
(V -)
5.- Proteus vulgaris (+), P. Inconstans (+), P. rettgeri (+) de otras especies de
Proteus
 MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS
MIO, SIM

INTERPRETACION
A. Positivo (+): en segundos, aparece un anillo rojo (fucsia brillante) en la
interface del medio con la porcin inferior de la fase alcohlica, sobre el
medio.
B. Negativo (-): no hay ningn desarrollo de color en la capa de alcohol o parece
un anillo turbio
C.Variable (+,-): un color anaranjado en la superficie del medio, debido al
escatol, un compuesto metilado que puede ser un precursor de formacin
del indol.
Prueba de Voges-Proskauer
Principio
Se usa para determinar la capacidad de algunos microorganismos para
producir un producto final neutro, acetil-metilcarbinol, a partir de la fermentacin
de la glucosa
Objetivo
1.-Ayuda a la diferenciacin de gneros:
Klebsiella pneumoniae subesp. pneumoniae (+) y Enterobacter (por lo comn
+) de Escherichia coli (-).
Staphylococcus (por lo comun +) de Micrococcus (-)
2.-Ayuda a la diferenciacin de especies:
Klebsiella pneumoniae subesp. pneumoniae (+), K. oxytoca (+),K.planticola (+)
y K. terrigena (+) de K. pneumoniae subesp. Ozaenae (-) y K.pneumoniae
subesp. Rhinoscleromatis (-)
3.- Ayuda a la identificacin de:
Hafnia alvei: 22-25C(+);37C(V)
Yersinia enterocolitica: 22-25C(V, por lo comn +), 37C(-)
 Listeria monocytogenes(20)
a.- Reactivos Coblentz (+)
b.- Reactivo OMeara (-)
4.- Ambos: rojo de metilo (MR+) y Voges- Proskauer(VP+)
Todas las especies de Listeria (MR+/VP+)
Brochothrix campestris y B. thermosphacta (ambos MR+/vp+).
Medio Utilizado:
Medio de Clark y Lubs modificado (Caldo MR/VP)
El medio MR/VP comercial es una modificacin del medio de Clark y
Lubs. Clark y Lubs utilizaron una concentracin al 1% de peptona y
glucosa, pero una concentracin de no menos de 0.5% es el mnimo
satisfactorio, de modo que la concentracin de iones de hidrgeno
limitante no es alcanzada por los microorganismos rojo de metilo
negativos. Una concentracin de 0.5% de peptona otorga menos
color al medio, lo que facilita la interpretacin de la reaccin.
 Agregar los reactivos de Voges-Proskauer directamente a
una alcuota incubada antes de intentar realizar la
interpretacin.
Reactivos empleados: 3 opciones
A.- Reactivos VP de Barritt (2.5ml)
B.-Reactivos VP de Coblentz (2ml)
C.- Reactivo VP nico de OMeara(modificado) (1ml)
Interpretacin:
VP positivo (+): color rosado-rojo en la superficie del medio
(acetona presente).
VP negativo (-): color amarillo en la superficie del medio
(igual color que el reactivo). Puede formarse un color cobrizo,
pero es un resultado negativo (debido a la reaccin de los
reactivos cuando se mezclan)
NEGATIVO Positivo
 Prueba de Rojo de Metilo
Principio
Probar la capacidad de un microorganismo para producir y mantener estables los
productos finales cidos a partir de la fermentacin de la glucosa y para vencer la
capacidad buffer del sistema.
Esta es una prueba cuantitativa para la produccin del cido (determinacin de pH);
algunos microorganismos producen mas cidos que otros.
Objetivo
Los resultados de rojo de metilo son caractersticas valiosas para la identificacin de
especies bacterianas que producen cidos fuertes a partir de la glucosa
A.-Ayuda a la diferenciacin entre gneros o a la diferenciacin de especies dentro
de un gnero de la familia Enterobacteriacaea. La prueba de rojo de metilo es parte
de la batera de pruebas del IMViV (indol-rojo de metilo-Voges-Proskauer-citrato).
1. Escherichia coli (MR+) de Enterobacter aerogenes (MR-) y Enterobacter cloacae
(MR-)
2. Especies de Yersinia (V, variable, por lo comn +) de otros bacilos gramnegativos
no estricos (MR-).
3. Diferenciar Edwardsiella ictaluri (MR-) de E. hoshinae (MR+) y E. tarda del
biogrupo 1 (MR+)
 4. Diferenciar Leminorella richardii (MR-) de L.grimontii(MR+).
5. Diferenciar Klebsiella oxytoca y K. pneumoniae subesp. pneumoniae
(ambas V, por lo comn MR-) y K. terrigena (V) de otras especies o
subespecies de Klebsiella (MR+).
6.Budvicia aquatica (MR+) de otros miembros de la familia
Enterobacteriacaea con resultados KIA/TSI cido/cido, HS2.
B.- Otros microorganismos que son rojo de metilo positivos.
1. Aerococcus urinae (MR+) de A. viridans (MR-)
2.Todas las especies de Shigella (MR+)
3. Ewingella americana (MR+)
4. Especies de Kluyvera (MR+)
5. Leclercia adecarboxylata (MR+)
6. Especies de Citrobacter (MR+)
7. Buttiauxella agrestis (MR+)
C.- Las pruebas de rojo de metilo y Voges-Proskauer se utilizan para
ayudar en la identificacin de:
1. Aeromonas hydrophila (MR+/VP+)
2. Aeromonas salmonicida subesp.masoucida(MR+/VP+)
3. Aeromonas veronii (MR+/VP+)
4. Especies de Listeria (MR+/VP+)
5. Vibrio metschnikovii(MR+/VP+)
 Medio de cultivo empleado:
Medio de Clark y Lubs (Caldo rojo de metilo/voges-proskauer, clado
MR/VP)
Rectivo utilizado: Indicador de pH Rojo de metilo
Interpretacin:
MR positivo (+):el cultivo es suficientemente cido para permitir que
el reactivo rojo de metilo permanezca con un color distintivo rojo
brillante, estable (pH4.4), en la superficie del medio. Los
microorganismos MR-positivos producen mas cidos con un pH
resultante terminal bajo. Ellos vencen el sistema buffer fosfato y
mantienen una acidez en el medio (pH 4.2 o menor)
MR negativo (-):color amarillo (pH6) en la superficie del medio
Reaccin tarda(+/-):el color naranja rojizo indica que el
microorganismo produce menos cido a partir del sustrato de
prueba. Continuar la incubacin hasta 4 das y repetir la prueba
Fermentacin de Hidratos de
Carbono
Principio:
Determinar la capacidad de un microrganismo para
fermentar un hidrato de carbono especifico
incorporado en un medio basal y producir acido o
acido con gas visible
Objetivo:
Los patrones de fermentacin por lo general son
caractersticos para grupos bacterianos especficos
todos enterobacterias, Ayuda en la diferenciacin
entre gneros Proteus penneri (xilosa A (acido)} de
especies de Providencia (xilosa -)
 Los patrones de utilizacin de los hidratos de carbono pueden ayudar a la
diferenciacin de muchas especies Grampositivos, Gramnegativos y
enterobacteriaceae Staphilococcus aureus, Alcaligenes xylosondans, Kingella
kingae (maltosa A) , Escherichia fegusonii, Haemophilus ducreyi (glucosa -)
Proteus vulgaris entre otras.
Medio Utilizado
Caldo Rojo de Fenol con campana de Durham
 Interpretacin:
1. Positivo (A/F)
Acido: color amarillo, pH 6,8.
Produccin de gas variable
(1) Positivo para el gas
(a) Aergeno: CO2+h2 presentes.
(b) Burbujas de gas presentes en el tubo de Durham
insertado o medio completamente desplazado por el gas
que deja una porcin incolora en el tubo de Durham.
(c) Una nica burbuja en el tubo de Durham es significativa;
registrar como produccin de gas
(d) Registrar como produccin de acido y gas
 (2) Negativo para el gas
(a) Anaergeno
(b) Ausencia de burbujas de gas y el medio en los tubos de
Durham insertados permanece amarillo
(c) Registrar como produccin de acido solamente
2. Tardo: color anaranjado. Si es inseguro, comparar con un tubo
no inoculado y reincubar
3. Negativo
a. color rosa rojizo
b. peptonas con la resultante alcalinidad, pH 8,4.
 (-)

(+)
Lactosa Glucosa Sacarosa Kligler y
TSI
PRINCIPIO:
Determinar la capacidad de un microrganismo de para
atacar un hidrato de carbono especifico en un medio de
desarrollo basal con produccin de gas o no junto con la
determinacin de la posible produccin de acido
sulfhdrico
OBJETIVO: La produccin de H S y/o los patrones de
2

fermentacin por general son caractersticas

particulares de grupos bacterianos especficos genero y
especies sobre todo en la familia enterobacteriaceae
 Medio Utilizado:
TSI (triple azcar hierro) y Klinger
TSI Gracias a su composicin es uno de los medio de cultivo ms empleados para
la diferenciacin de enterobacterias segn:
1. Fermenten o no glucosa.
2. Fermenten o no lactosa o sacarosa.
3. Produzcan o no cido sulfhdrico.
4. Produzcan o no gas.
Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son:
1. Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificar el medio haciendo virar a amarillo el
indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa, el medio
permanecer de color rojo.
2. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su superficie
volvindolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuar de
color rojo.
3. Si produce cido sulfhdrico (debido a la reduccin de las sales de hierro), se presentar un
ennegrecimiento del tubo. La produccin de sulfhdrico y el consiguiente ennegrecimiento
pueden impedir ver la fermentacin de la glucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica
directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa.
4. Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es productora de gas.
*en el kliger se obtiene los mismos resultados difiere en la ausencia de sacarosa
 Resultados positivos por ruptura del medio por gas y
viraje por cambio de pH
Prueba de acido sulfhdrico
Principio: determinar si se ha liberado enzimticamente
acido sulfhdrico gaseoso a partir de los aminocidos
azufrados para producir una reaccin coloreada visible,
negra en presencia de un sistema indicador de acido
sulfhdrico
Objetivo: Ayuda a la diferenciacin de especies e
identificacin
Bioqumica: La proteolisis de las protenas produce
aminocidos individuales; ciertas bacterias
heterotrficas pueden liberar enzimticamente el azufre
de los diversos aminocidos azufrados produciendo
acido sulfhdrico gaseoso
 Medio utilizado: KIA, TSI. SIM
Interpretacin:
A. Positivo(+): Cualquier ennegrecimiento
del medio.
1. a lo largo de la lnea de siembra. El
ennegrecimiento se ve primero donde la
fermentacin es mxima, a lo largo de la
lnea de siembra
Lisina
Determina la capacidad enzimtica de un microrganismo de descarboxilar un aminocido para
formar una amina con la resultante alcalina.

Lisina descarboxilasa.-
1.-ayuda a la diferenciacin entre gneros.
Edwardsiella(+) y salmonella (por lo comn +) de las especies de citrobacter(-).
escherichia coli (+) de las especies de shigella(-).

2.- Ayuda a la diferenciacin de las especias.

Enterobacter aerogenesis(+) gergoviae(+), Hafnia alvei(+) alvei del biogrupo 1(+) de las otras
especies de Enterobacter(-) y Pantoea agglomerans(-).

Pseudomonas cepacia(+) y pseudoalcalidenes(+)

Klebsiella pneumoniae subesp. rhinoscleromatis(-) y ozaenae(variable)

Burkholderia cepacia(+), gladioli(-), mallei(-) y pseudomallei(-).

Lisina Hierro Agar
-Medio de cultivo utilizado para diferenciar microrganismos, especialmente
Salmonella spp., basado en la decarboxilacin /desaminacin de la lisina y en la
produccin de cido sulfhdrico.

Fraccionar en cantidades de 4ml.(en tubos de prueba 13*100mm);extremo inferior

profundo, con una aguja de inoculacin, estriar el pico de flauta corto. y punzar el
fondo del medio 2 veces, encubar de 18 a 24 hrs a 35c

Resultados
1-Decarboxilacin de la lisina:
-Prueba Positiva: Pico violeta /fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta /fondo amarillo.
2-Desaminacin de la lisina:
-Pico rojizo /fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y
alguna cepas de Morganella spp.
3-Produccindecidosulfhdrico:
-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del pico y
fondo)
Ornitina descarboxilasa

1.-Ayuda a la diferenciacin entre gneros.

Enterobacter(por lo comn +) de Klebsiella(-).

Morganella morganii de los biogrupos 1 y 2(+) de especies de Providencia(-).

2.-ayuda a la diferenciacin de las especies.

Salmonella typhi(-), y Salmonella choleraesuis serovariedad gallinarum(-, 24hr)(30) de otras

especies de Salmonella(+).

Shigella sonnei(+) de otras especies de Shigella(-).

Proteus mirabilis(+) de otra especies de Proteus(-).

Aeromonas veronii(+) de las otra especies de Aeromonas(-) aisladas con mas frecuencia.
MIO Medio
Medio usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en base a su movilidad, actividad de
Ornitina descarboxilasa y produccin de indol.

Resultados

1-Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas all de la lnea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra.

2-Ornitina descarboxilasa:
Resultado positivo: color prpura.
Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violceo en la
superficie del medio.

3-Prueba del indol: La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y
la prueba de Ornitina.
Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador.
Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.
CASO CLINICO
http://www.nietoeditores.com.mx/downlo
ad/med%20interna/septiembre-
octubre%202007/Med%20Int-447-57.pdf