Es una tcnica que se utiliza en el laboratorio para la

identificacin y cuantificacin de cualquiera de las

inmunoglobulinas.

Su base se encuentra en la presencia de un precipitado visible,

resultado de la combinacin antgeno-anticuerpo en determinadas
circunstancias.
 (Dreux 1908 - Pars 1985),
Doctor en Medicina en 1946 escribi algunas notas y
clsicos en el que se describen las soluciones de
antgenos y anticuerpos de inmunodifusin en gel de
agar

Recibi premio nobel en 1984 por las teoras en cuanto a

la especificidad del desarrollo y control del sistema
inmune y el descubrimiento del principio para la
produccin de anticuerpos monoclonales.
 (Estocolmo 1914-2004)
mdico sueco Ouchterlony desarrollado en su tesis
un nuevo mtodo analtico para la inmunodifusin .

Este mtodo se llama a menudo el mtodo de

Ouchterlony y fue fundamental para el desarrollo de
la inmunologa durante dcadas.
El mtodo se usa en todo el mundo.
 Este mtodo fue utilizado de manera sistemtica
en inmunologa clnica:

Determinaciones de inmunoglobulina
Determinaciones transferan.
Protena C reactiva.
Protena embrionaria (-fetoprotena)

se asocia con ciertos tumores

hepticos.
 se asocian con
asociados con malignidad
Ig G
Ig G enfermedades hepticas e induce a una perdida
crnicas y mielomas . de protenas.

se asocia a infecciones
Ig A Induce a una perdida
crnicas, enfermedades
Ig A de protenas.
hepticas y mielomas.

Deficiencia
Se asocia a hepatitis, Ig M
de
Ig M mieloma, anticuerpos.
magroglobulinemia de
waldenstroms .
 En la mayora de las tcnicas de inmunodifusion
se utiliza agarosa, la cual se prepara hirviendo
lentamente los grnulos en el bao de agua.

La mayora de los tipos de agarosa se disuelven

poco mas de 90C y gelifican a 45C.

En el soporte de agarosa se coloca el antgeno y el

anticuerpo (es necesario conocer uno de ellos para
identificar el otro).
 Ambos migran en todas las direcciones y cuando
encuentran a su contrario presentan una banda
de precipitacin fcilmente observable

Esta tcnica constituye la base comn de

una gran variedad de tcnicas que permite
realizar desde un anlisis cualitativo hasta
una estimacin cuantitativa de un antgeno.
 Tcnica que cuantifica de manera sencilla y
econmica inmunoglobulinas
de isotipo G, M y A antgenos
solubles (C3, C4, transferrina,
protena C reactiva) presentes
en muestras biolgicas.

La tcnica se basa en la difusin de la muestra

conteniendo el antgeno a
medir (inmunoglobulinas
antgenos solubles) en una
matriz semislida de agar en
la que se encuentra disuelto
el Ac especfico.
 La muestra biolgica se introduce en los orificios
cilndricos excavados en el agar y a medida que el
antgeno difunde en forma radial, se alcanza la
relacin Ag-Ac que permite la formacin
precipitados visibles.

Una vez finalizada la difusin se mide el radio (R)

de los precipitados que es proporcional a la
concentracin de antgeno (C).
 La concentracin de protena en la muestra
biolgica (Cx) se calcula realizando una curva
de calibracin utilizando muestras patrones
de concentracin conocida

La tcnica se basa en la difusin de la muestra

conteniendo el antgeno a
medir (inmunoglobulinas antgenos solubles)
en una matriz semislida de agar en la que se
encuentra disuelto el Ac especfico.
 colocamos en la parte inferior del tubo un
vol. de agar 1% fundido, mezclado con un
vol. igual del antisuero.

Dejamos solidificar y agregamos igual vol.

de agar 0,5%, dejamos solidificar.
 Porultimo agregamos agar 1% donde se
encuentra disuelto el Ag.

Tanto el Ag. como el Ac. migrarn hacia la

zona media de menor concentracin, de
manera que, otra vez, se formarn gradientes
que harn que en determinado punto los
reactivos estn en equivalencia y precipiten.
 si la concentracin de Ag. y Ac. estn en
relaciones ptimas (equivalentes) la banda se
formar en un punto intermedio del tubo,
mientras que si la cantidad de Ag.

Esta en exceso necesitar recorrer una mayor

distancia para alcanzar una dilucin tal que se
encuentre en equivalencia con el Ac. y as la
banda se formar ms cerca del fondo.
 Constituye un mtodo muy completo ya que
permite obtener mas informacin que los
anteriores.

Consiste en colocar en una placa de Petri agar

1,5% al cual luego de solidificar se le realizan
perforaciones en forma de pocillos a distancia
conveniente y en dichas perforaciones se colocan
pequeas cantidades de Ag. y Ac.
 En este caso los reactivos difunden en forma
radial a partir del pocillo generando bandas de
precipitacin cuyas caractersticas dependern de
varios factores.
 Mediante la tcnica de Ouchterlony podemos
determinar la existencia o no de determinantes
comunes entre Ag. segn las caractersticas de las
bandas formadas.
cuando las concentraciones colocadas en los pocillos
estn cerca de la equivalencia la banda se formar a
mitad de distancia entre ellos.

Nos permite tener idea de los PM de cada reactivo ya

que al tratarse de una difusin radial, la concavidad de
la banda estar hacia el lado del pocillo donde se halla
colocado el reactivo de mayor PM, y viceversa, si ambos
PM son semejantes la banda ser recta.
 la posibilidad de hacer varios pocillos en
una placa permite obtener informacin
sobre similitud de los Ag. reaccionantes.

Las macromolculas antignicas tienen en su

superficie zonas llamadas determinantes
antignicos y que son los sitios reconocidos por el
Ac.
 Para determinar la relacin Ag/Ac (prueba
CUALITATIVA), encontramos tres patrones
bsicos:

1. Identidad:

Los dos Ag tienen

los mismo epitopos
reconocidos por el
suero y se forma
una banda de
precipitacin con
forma de arco
continuo.
2. No Identidad:

Los Ag son distintos y se forman bandas

de precipitacin independientes y no dan
un arco continuo. Aparece una figura con
forma de aspa.
3. Identidad Parcial:

Los dos Ag comparte un epitopo, pero uno de

ellos tiene un epitopo extra que es reconocido
por el suero y se forma un arco de precipitacin
al que le sale un espoln.
 Mediante la tcnica de Ouchterlony
podemos determinar la existencia o no de
determinantes comunes entre Ag. segn las
caractersticas de las bandas formadas.
 http://www.esacademic.com/dic.nsf/es_medicloped
ia/40399/inmunodifusi%C3%B3n
http://es.scribd.com/doc/7219379/Guia-de-
Tecnicas
Inmunologia diagnostico e interpretacion de
pruebas de laboratorio
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Inmunol
ogia.htm
Inmunologia una ciencia activa edicion 2

Manual depracticas de inmunologia, adriana

garibay Escobar, edicion 2006