CINETICA

ENZIMATICA

PARTE EXPERIMENTAL

La actividad enzimtica se manifiesta y mide por:

Formacin de producto
Desaparicin de sustrato
Modificacin de cofactor

La actividad enzimtica se reportara funcin del % de formacin de producto para ello

se hace uso de la siguiente ecuacin:

% Formacin de producto (FC) = 100 (Abs tubos/Abs albmina)*100

Donde:
Abs tubo = Absorbancia de los tubos despus del incubado.
Abs albmina = Absorbancia de la albmina (Abs = 0,971
)

EXPERIMENTO.- Efecto del pH

Preparar cinco tubos con:
TUBO N

pH

1,0

1,5

6,0

9,5

11

mL albmina

5,0

5,0

5,0

5,0

5,0

mL HCL 1N

2,0

0,5

0,0

0,0

0,0

mL CO3Na2

0,0

0,0

0,0

0,5

2,0

mL agua
destilada

0,0

1,5

2,0

1,5

0,0

Preincubar los cinco tubos ms un tubo conteniendo 20 mL de pepsina

al 1% a 37C por 5 minutos. Luego aadir rpidamente 3 mL de la
pepsina preincubada a cada uno de los tubos 15. Mezclar e incubar
a 37C por 10 min. Observar la diferencia o leerla en fotocolormetro con
filtro azul (420 nm).

EXPERIMENTO: Efecto de la temperatura.

Preparar cinco tubos con:
TUBO N

mL albmina

5,0

5,0

5,0

5,0

5,0

mL HCL 1N

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

mL agua destilada

3,5

3,5

3,5

3,5

3,5

Preparar otros cinco tubos con:

TUBO N
mL
pepsina
1%

6
1,0

7
1,0

8
1,0

9
1,0

10
1,0

Incubar por 5 minutos de acuerdo al siguiente esquema de temperatura:

TUBO N
Temperatura

1y6
O C

2y7
Amb.

3y8
37 C

4y9
70 C

5
37 C

10
100 C

Agregar los respectivos tubo N 6 al N 10 a los que hay que incubar a las
temperaturas a que se pre-incuban los tubos 1 5.

Con los resultados obtenidos confeccionar las siguientes graficas, establecer sus
conclusiones

EXPERIMENTO. -Efecto de la concentracin de la enzima

Preparar 5 tubos con:

TUBO N

mL albmina

5,0

5,0

5.0

5,0

5,0

mL HCL 1N

0,5

0,5

0.5

0,5

0,5

mL agua destilada

1,5

2,5

3.5

4,0

4,5

mL pepsina

0,0

0,0

0.0

0,0

0,0

Incubar los 5 tubos a 37C por 5 minutos y enseguida aadir:

TUBO N
mL pepsina
incubada

1
3,0

2
2,0

3
1,0

4
0.5

5
0,1

Incubar por cinco minutos a 37C. Observar al fotocolormetro a 420 nm (filtro

azul), contra una lectura de agua.

EXPERIMENTO.-Efecto de la concentracin del sustrato

Preparar 6 tubos con:
TUBO N

mL albmina

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

mL HCL 1N

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

mL agua destilada

7,0

6,0

5,0

4,0

3,0

2,0

mL pepsina 1%

0,0

0,0

0,0

0,0

0,0

0,0

Leer a 420 nm (filtro azul). Anotar los resultados: incubar a 37C. Colocar 0,5
mL de pepsina pre-dirigida. Incubar por otros 5 minutos a 37C . Leer al
fotocolormetro a 420 nm (filtro azul). Restar la segunda lectura de la primera.
Graficar y comentar los resultados.

CUESTIONARIO