CROMATOGRAFA EN

CAPA FINA

OBJETIVOS
a) Conocer la tcnica de cromatografa en
capa fina, c.c.f., sus caractersticas y los
factores que en ella intervienen.
b) Calcular valores de r.f. de varias
sustancias y correlacionarlo a la seleccin
adecuada del eluyente y deducir la relacin
que existe entre la polaridad de las
sustancias que se analizan y la de los
eluyentes utilizados.
c) Aplicar la tcnica de c.c.f. como criterio
de pureza e identificacin de sustancias.

ANTECEDENTES
a) Concepto de cromatografa. Tipos de
cromatografa. Cromatografa de adsorcin
y cromatografa de particin. Ejemplos.
b) La cromatografa en capa fina. Sus
caractersticas y aplicaciones.
c) Eluyentes, soportes y reveladores ms
comunes para cromatografa en capa fina.
d) Factores que influyen en una separacin
por cromatografa de capa fina.

CONCEPTO DE
CROMATOGRAFA.

La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de

dos o mas compuestos por distribucin entre dos fases, una de las
cuales es estacionaria y la otra una fase mvil. Varios tipos de
cromatografa son posibles, dependiendo de la naturaleza de las
dos fases involucradas: slido-liquido (capa fina, papel o
columna), liquido-liquido y gases-liquido ( fase vapor ).
Todas las tcnicas cromatogrficas dependen de la distribucin de
los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una
fase mvil, llamada tambin activa, que transporta las sustancias
que se separan y que progresa en relacin con la otra,
denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un lquido
o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un lquido.
Todos los slidos finamente pulverizados tienen el poder de
adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su
superficie; y, similarmente, todas las sustancias pueden ser
adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este fenmeno de
adsorcin selectiva es el principio fundamental de la
cromatografa.

CONCEPTO DE R.F.
Rf es el registro y se define como:
Rf = distancia que recorre la muestra desde el
punto de aplicacin / distancia que recorre
el disolvente hasta el frente del eluyente
El valor de Rf depende de las condiciones en
las cuales se corre la muestra (tipo de
adsorbente, eluyente, as como las
condiciones de la placa, temperatura, vapor
de saturacin, etc.). Tiene una
reproducibilidad de 20%, por lo que es
mejor correr duplicados de la misma placa.

CROMATOGRAFA EN CAPA
FINA.
En este caso se utiliza una placa recubierta con fase
estacionaria manteniendo un pequeo espesor
constante a lo largo de la placa. El eluyente
ascender, por capilaridad, por la placa y arrastrar
los componentes a lo largo de sta produciendo
manchas de los componentes.
Se usan lminas de: vidrio como soporte del
adsorbente, plstico (ej: acetato) metlicos (ej:
aluminio). Los tamaos de la placa para CCf
convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2.
Hay placas que contienen un indicador de
fluorescencia, para facilitar la identificacin de las
muestras. Si no se usa indicador y los componentes
no son coloridos se requerirn tcnicas de
revelado.

Eluyentes ms comunes para

cromatografa en capa fina.

ter de petrleo
-tolueno
-dietil-ter, t-butil-ter
-diclorometano
-acetato de etilo
-n-pentano, n-hexano
-ciclohexano
-tetracloruro de carbono
-ter dietlico
-cloroformo
-acetona
-iso-propanol
-etanol
-metanol
-cido actico

REVELADORES MS COMUNES PARA

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA
Las manchas de color son, por supuesto,
inmediatamente visibles; las incoloras
puedenrevelarse mediante:
Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se
puede usar una fase estacionaria impregnada con
un indicador fluorescente (F254 F366), el nmero
que aparece como subndice nos indica la longitud
de onda de excitacin del indicador utilizado.
La introduccin de la placa en vapores de yodo.
El roco con una solucin de agua/H2SO4 1:1 (dentro
de un compartimiento especialmente protegido y
bajo una campana de extraccin de gases).
Despus calentar

ADSORBENTES MS COMUNES PARA

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA.
a) Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)
b) xido de Aluminio Almina (cida, neutra
bsica)
c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
d) Poliamidas
Para la seleccin del adsorbentes deber tomar las
siguientes consideraciones:
a) Polaridad
b) Tamao de partcula
a. Dimetro
b. rea Superficial
c) Homogeneidad

FACTORES QUE INFLUYEN EN UNA SEPARACIN POR

CROMATOGRAFA DE
CAPA FINA.

a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias

se adsorben ms en la fase estacionaria.
b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea
sin corrientes de aire.
c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn
contaminadas con grasa o agentes plastificantes o
adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas
deben limpiarse corriendo primero una mezcla de
cloroformo y metanol y despus dejar secar
completamente antes de aplicar la muestra.
d) Pureza de los disolventes.

MATERIAL POR ALUMNO

SUSTANCIAS Y REACTIVOS

EXPERIMENTO 1: POLARIDAD DE LAS

SUSTANCIAS.
Es un experimento comparativo en el que se desea
saber cul sustancia es ms polar y cul menos
polar. Para ello se le proporcionar a usted las
soluciones 1 y 2. Prepare 3 cromatoplacas (Nota
1) y aplique estas soluciones en cada una de ellas
(Nota 2), de tal manera que queden como se
indica en la siguiente figura:

 Eluya la primera cromatoplaca con hexano, la segunda

con ACOEt y la tercera con MeOH.
En cada caso, una vez que se ha eludo cada placa,
sacar de la cmara de elucin y dejar evaporar el
eluyente para posteriormente revelar con luz
ultravioleta y posteriormente con yodo, observe y
anote sus resultados (Nota 3), luego revele con yodo,
observe nuevamente (Nota 4).
Con base en los resultados obtenidos, conteste:
a) Cul es el eluyente adecuado? por qu?
b) Cul es la sustancia ms polar (solucin 1 2)?
por qu?
c) Cul es la sustancia menos polar (solucin 1 2)?
por qu?

EXPERIMENTO 2: PUREZA DE LAS

SUSTANCIAS.
Se desea saber cul sustancia es pura y
cul es impura. Para ello se le proporcionar
a usted las soluciones 3 y 4.
Prepare una cromatoplaca y aplique en ella
ambas soluciones por separado, como en el
experimento anterior. Eluya entonces con
AcOEt. Revele con luz U.V. y posteriormente
con yodo. Anote sus observaciones.
Conteste:
Cul es la sustancia pura (solucin 3 4)? ,
cul es la impura? , Cul es el Rf de cada
componente?

EXPERIMENTO 3: INFLUENCIA DE LA
CONCENTRACIN.

Se desea saber cul es el efecto de la concentracin de una sustancia en

c.c.f. Para ello se le proporcionar a usted la solucin 5.
Prepare una cromatoplaca y en ella haga 3 aplicaciones de esta solucin
en orden creciente de concentracin como se indica en la siguiente
figura:

Eluya entonces con AcOEt. Revele con luz U.V y. posteriormente con yodo.
En cada caso observe la intensidad de la coloracin de las manchas.
Cul es la relacin que existe entre la intensidad de la coloracin de las
manchas y la concentracin de la sustancia, en cada caso?

EXPERIMENTO 4: LA C.C.F. COMO

CRITERIO PARCIAL DE IDENTIFICACIN
1. Se desea identificar los componentes de una
mezcla, por medio de su comportamiento c.c.f. y
comparndolo con el de sus sustancias testigo
bajo las mismas condiciones experimentales.
Para sto, se le proporcionar a usted las
soluciones 6A y 6B, (Nota 5).
Prepare dos cromatoplacas y en ambas haga las
siguientes aplicaciones:

Luego eluya una de las cromatoplacas con AcOEt

revelando con luz U.V. y despus con yodo. Anote
sus observaciones..
La otra cromatoplaca elyala varias veces (4 por lo
menos) con un eluyente menos polar, por
ejemplo una mezcla de hexano-AcOEt (4:1),
dejando secar la placa entre una elucin y otra.
Observe la placa a la luz U.V. despus de cada
elucin. Si despus de la cuarta elucin la mezcla
no se separa, siga eluyendo hasta la separacin.
Finalmente revele con yodo. Anote sus
observaciones.

2. Se desea identificar el principio activo de un medicamento

comercial, por medio de su comportamiento en c.c.f.,
comparndolo con un estndar bajo las mismas condiciones
experimentales. Para esto, se le proporcionar una muestra
problema de de un analgsico comercial, el cual se
identificar por comparacin con las siguientes soluciones
estndar: A (cido acetilsaliclico), B (cafeina) y C
(acetaminofen) (Nota 5).
Prepare dos cromatoplacas, aplique los estndares de dos en
dos y eluya con hexano, con ACOEt y con hexano-AcOEt
(1:3) y revele con luz U.V. o con yodo.
Calcule el Rf de cada una de ellas, y seleccione el eluyente
ideal

Prepare tres cromatoplacas, aplique cada estndar y su

muestra problema, como se muestra:

Eluya cada placa con el eluyente ideal y revele con luz U.V.
y posteriormente con yodo.
Anote sus observaciones.
Finalmente identifique que compuesto contiene el producto
comercial que se leproporciono.

Notas:
1) Para preparar las cromatoplacas se introducen dos portaobjetos
juntos, limpios y
secos, en una suspensin de gel de slice al 35% en AcOEt.
Para mayor facilidad se pueden usar cromatofolios comerciales.
2) Para aplicar las soluciones a las cromatoplacas utilice capilares,
que previamente
deber ser estirados en la flama del mechero con el fin de que tengan el
dimetro
adecuado. Ver figura.
3) Precaucin, nunca mire directamente la luz ultravioleta, sta
puede causar daos
severos al ojo. Una vez revelada la placa, marque ligeramente con un lpiz el
contorno de las manchas para mejor ubicacin de las mismas.
4) Para mayor claridad de los resultados, incluya en su informe los
dibujos de las
cromatoplacas de todos los experimentos de esta prctica. Hgala del mismo
tamao de las placas.
5) En este caso son soluciones estndar de productos puros.

MANEJO DE RESIDUOS
D1 a D5: Guardar los disolventes para recuperarlos
por destilacin
D6: Empacar cuidadosamente para incineracin.
D7: Se puede recuperar para su reuso, previo
lavado y secado

CUESTIONARIO
a) En el experimento 1, cul de las dos sustancias, la ms polar o la menos polar, recorre mayor
distancia en la placa a partir del punto de aplicacin? Porqu?
b) En ese mismo experimento, calcular los valores r.f. y contestar cul de las dos sustancias tiene r.f.
mayor y cul menor?
Frasco de elucin Revelado con luz UV
Placa
Papel filtro
Punto de aplicacin
Disolvente
Frente del eluyente
c) Qu significa que una sustancia tenga:
a) rf < 0.5 ?
b) rf = 0.5 ?
c) rf > 0.5 ?
d) En el experimento 4, cul de las dos formas de elucin permiti mayor separacin de la mezcla?, a
qu se debe esto?
e) Porqu la c.c.f. es un criterio parcial y no total de identificacin?
F) Cul ser el resultado de los siguientes errores en cromatografa en capa fina?
a) Aplicacin de solucin muy concentrada.
b) Utilizar eluyente de alta polaridad.
c) Emplear gran cantidad de eluyente en la cmara de cromatografa.
g) Una serie de colorantes es separada por cromatografa en capa fina. Calcular los valores de Rf de
cada colorante de acuerdo a la siguiente tabla.
Colorantes Distancia Recorrida (mm)
Eluyente 66.0
Rojo de metilo 56.0
Rodamina B 38.0
Rojo Congo 0.5
h) Qu tratamiento es necesario darle a la alumina para reutilizarla?