Alicia Balladares

Marisel Garrido
Katherine Henrquez
Carlos Montenegro
Michelle Reynoso

Identificacin de
Bacterias por Biologa
Molecular

Introduccin

A qu se denominan tcnicas de biologa molecular? En un principio se denomina as a

todas las tcnicas de laboratorio que se usan para aislar ADN o extraerlo en alta pureza,
visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo, amplificar una regin en una enorme
cantidad de molculas, corte de una determinada regin con enzimas de restriccin para
ver si por una mutacin se gana o se pierde un sitio de restriccin.
Este informe tiene por objetivo indicar primero algunas bacterias que son de difcil
crecimiento, ya sea por lento desarrollo, fastidiosa, exigente, etc., adems explicar
porque las tcnicas de biologa molecular ayudan en su deteccin temprana en el
diagnstico de algunas enfermedades que son causadas por estos microorganismos.
Tambin las compararemos con otros mtodos de diagnstico.

Clamidia trachomatis

Morfologa:
Cocos gram negativos, termolbiles de 2
um, no tienen capacidad de producir ATP,
son intracelulares obligadas (ciclo
replicativo intracelular).

Esta bacteria produce:

Clamidia: es exclusiva del hombre, infeccin de transmisin sexual, infecta las
mucosas del crvix, recto, garganta, uretra y conjuntiva (nios menores de 2
aos). Del 10-20% de las infecciones del crvix evolucionan a enfermedad
inflamatoria plvica, embarazos ectpicos e infertilidad.

Diagnstico:
Es una bacteria muy lbil. Por lo que las condiciones de transporte deben ser excelentes.

CULTIVO:

Detecta bacterias vivas,

es muy especfico, la
sensibilidad no es muy
buena.
Es
difcil
de
estandarizar,
tcnicamente exigente y
requiere de 3 a 7 das
de incubacin.

DETECCIN DE
ANTGENOS:

AMPLIFICACIN DE
CIDOS NUCLEICOS
TAAN:

HIBRIDACIN DE
CIDOS
NUCLEICOS:

DFA es muy rpida (30

min.), pero la interpretacin
La sensibilidad es
es subjetiva.
Es el avance ms
comparable a la
importante para la
EIA tiene especificidad baja
TAAN de muestras
deteccin desde el
pudiendo
dar
falsos
cervicales.
cultivo.
positivos,
no
puede
emplearse con muestras
rectales o farngeas.

Vibrio cholerae
Morfologa:
Bacilo Gram negativo, anaerobio facultativo,
tiene forma de coma extremadamente mvil
debido a su nico flagelo polar. Capaz de
producir oxidasa y fermentar glucosa.
T de crecimiento: 37C con un pH de 7.0 a
8.0
Esta bacteria produce:
Clera: Infeccin intestinal aguda provocada por la ingestin de alimentos o agua
contaminada con la bacteria. Vibrio cholerae serogrupo 01 es el agente
etiolgico del clera epidmico. Tiene dos biotipos: el Clsico y El Tor. Si la
bacteria consigue atravesar la acidez del estmago se adhiere a las paredes del
intestino delgado y produce una enterotoxina que causa diarrea copiosa, indolora
y acuosa que puede conducir a una deshidratacin.

Diagnstico:
Cultivo:
Sembrar en agar TCBS, a 37C
por 24 hrs.
Los cultivos con sospecha de
ser V. cholerae deben
subcultivarse en un medio no
selectivo (por ejemplo, agar
infusin de corazn [AIC] o
agar triptona soya [ATS]) como
preparacin
para
la
identificacin por serologa en
lmina y pruebas bioqumicas.

Deteccin de antgenos:

La desventaja en la
identificacin por este
mtodo es la presencia de
reacciones dbiles con los
antisueros de algunas
cepas.

PCR:
Permite identificar la presencia
de MO y/o genes asociados a
la virulencia.
Caracterizar
rpidamente
aislamientos para confirmar la
especie.
Utilidad en resolucin de cepas
rugosas, autoaglutinantes o que
presentan reacciones dbiles a
los antisueros.

Legionella pneumophila
Morfologa:
Es un bacilo Gram negativo, aerobio,
pleomrfico, flagelado, no formadora de
esporas, su hbitat es ambiental (lagos y ros),
los aminocidos son su fuente de energa. Es
catalasa, oxidasa y gelatinasa positiva.

Esta bacteria produce:

Legionelosis: puede ser neumnica o fiebre de Pontiac, es una infeccin
aguda de resolucin espontanea con sntomas similares a la gripe, remite a
los 2 a 5 das. La forma neumnica tiene un perodo de incubacin de 2 a 10
das con sntomas como fiebre, cefalea, letargo y tos leve hasta una
neumona con rpido desenlace fatal.

Diagnstico:
Cultivo:
IFD:
Serologa:
Medio BYCE, aislada de
muestras respiratorias con baja
sensibilidad.
Un
informe
negativo solo se informa
De
muestras
despus de 10 das de
respiratorias
y Puede tomar de 3 a 4
incubacin
y
revisin
tejidos puede dar semanas.
peridica.
falsos positivos por
Es
una
bacteria
reacciones cruzadas
fastidiosa para su
aislamiento ya que
requiere hierro y
cisterna.

PCR:
Se ha implementado
PCR tradicional y en
tiempo real en
muestras
respiratorias, orina,
suero y leucocitos
con una sensibilidad
entre 30-86%

Borrelia burgdorferi
Morfologa:
Es una espiroqueta gram negativo, en
esencia es un cilindro protoplsmico,
curvado en forma de espiral, tiene de 7 a
11 flagelos, est recubierto por una
membrana externa.

Produce:
Enfermedad de Lyme: infeccin transmitida por la picadura de una garrapata
infectada, empieza con un sarpullido y a medida que la infeccin se disemina, hay
dolor de cabeza, musculares, articulares y rigidez de cuello.

Diagnstico:
Microscopa y
serologa:

Cultivo:

PCR:

Tienen
aplicacin
limitada debido al
nmero escaso de
MO presentes en las
muestras.

Medios de cultivo lquidos derivados del

medio original de Kelly (BSKII, BSK-H y
MKR).
Se incuban de 30 a 34C en condiciones
de microaerofilia por 12 semanas o ms.
Tiene una sensibilidad baja, es en mtodo
caro, lento y laborioso.

Se utilizan muestras de
biopsia de piel (mayor
sensibilidad), LCR, liquido
sinovial y sangre. Es
cualitativo. Sensibilidad de
10-83% (depende de la
muestra).

Bordetella pertussis
Morfologa:
Es un cocobacilo gram negativo, se
disponen como clulas nicas o en
pares, aerbica estricta, oxidativa, las
colonias son pequeas, brillantes, lisas,
de bordes irregulares, convexas y color
perlado.

Esta bacteria produce:

Coqueluche: Inicia con fase catarral con sntomas inespecficos para luego de 7 a
10 das iniciar la fase de estado paroxitico, muchas veces afebril, con episodios de
tos paroxstica en accesos caractersticos, luego de los cuales puede haber
vmitos, especialmente en nios.

Diagnstico:
Cultivo:

Serologa:

PCR:

directa:
Se desarrolla en forma lenta, las Inmunofluorescencia
colonias se ven usualmente a sensibilidad intermedia y alta Mayor sensibilidad que el
las 72 hrs. El mximo especificidad que disminuye con la cultivo.
rendimiento se obtiene entre el edad del paciente, es una tcnica Puede ser positivo a pesar de
perodo catarral y la 1 semana rpida de diagnstico presuntivo. la antibioterapia.
de perodo paroxitico. Sembrado
Permite pesquisar muestras
en medio regan lowe o Bordet
con bajo recuento de MO y no
ELISA: Anticuerpos anti-pertussis no
gengou, su incubacin es a 35necesariamente viables.
es recomendada por el CDC.
36C y es por 7 das.

Campylobacter jejuni
Morfologa:
Gram negativo, no esporuladas, forma
curva o espiral, presentan un flagelo con
el que se mueve de forma muy rpida,
se desarrolla en reduccin de oxgeno a
42c.

Esta bacteria produce:

Campylobacteriosis: infeccin que invade la mucosa intestinal del intestino
delgado y el colon y resulta en una enterocolitis inespecfica.

Diagnstico:
Cultivo:

Microscopa:

PCR:

Se demora de 24-48 hrs en

crecer y hasta 72-96 hrs.
Requiere un medio selectivo
que inhiba la flora normal
entrica.

En campo oscuro es
presuntivo (se ve la
movilidad de la bacteria)
Examen directo de heces:
solo investigacin inicial.

Se puede utilizar la
reaccin en cadena de la
polimerasa
para
la
deteccin directa de C.
jejuni.

Conclusin
A pesar del innegable poder de las tcnicas de biologa molecular en el diagnstico
clnico, es errneo pensar que van a reemplazar a los exmenes convencionales para
deteccin de agentes patgenos.
Sin embargo, la capacidad de estas tcnicas para proporcionar un diagnstico definitivo
en corto tiempo tendr sin duda, un efecto en el manejo del paciente y nos ayudarn a
entender mejor la patognesis de la infeccin.
Aunque existe la posibilidad de usarlas en todos los microorganismos, las tcnicas de
diagnstico molecular tendrn un mayor impacto en algunos patgenos.
A medida que se automaticen, con un costo menor y con regulaciones ms precisas, los
laboratorios clnicos podrn incorporar estos exmenes en el funcionamiento de rutina.