Separacin y Procesos

Biotecnolgicos

BT56A- IQ742
Primavera 2009

Clases

CATEDRA
LUNES 12:00-13:30
VIERNES 12:00-13:30
AUXILIAR
Mircoles 14:30-16:00 (Habrn excepciones)
Ejercicios todas las clases
FECHA DE CONTROLES:
CONTROL 1: Mircoles 26 de agosto
CONTROL 2: Mircoles 7 de Octubre
CONTROL 3: Mircoles 11 de Noviembre

Programa
Recuperacin de Protenas
Separacin Slido-Lquido:
Centrifugacin
Filtracin
Coagulacin
Floculacin

Procesos de Membrana
Micro filtracin
Ultra filtracin
Dilisis

Rompimiento de Clulas
Mtodos Mecnicos
Homogenizadores
Molinos de Bolas

Mtodos No Mecnicos
Solventes
lcalis
Enzimticos

Concentracin de Protenas
Precipitacin
Selectiva
No selectiva

Extraccin Lquido-Lquido

Purificacin de Protenas
Tcnicas Cromatogrficas
Adsorcin, Adsorcin en Columnas
Teora de Cromatografa de Protenas

Cromatografa de Filtracin por Geles

Cromatografa de Intercambio Inico
Cromatofocusing
Cromatografa de Interaccin Hidrofbica
Cromatografa de Fase reversa
Cromatografa de Afinidad

Cromatografa de lecho expandido

Tcnicas Electroforticas
Electroforesis
Isoelectroenfoque

Diseo de Procesos de Separacin

Cultivo de Clulas Animales y Vegetales
Procesos Biotecnolgicos
Industria Biotecnolgica de Protenas
Material del Curso
En U_ Cursos

Evaluacin
3 Controles y Examen (Nc)
Ejercicios y Tareas (Ne)
Trabajo de Investigacin (Ntrabajo)
NFPregrado = 0.75 Nc+ 0.25 Ne
NFPostgrado = 0.75 Nc+ 0.15 Ne+0.10 Ntrabajo

Bibliografa
1. Scope R.K "Protein Purification: Principles and Practice" 3er Edicin,
Spingerm 1994
2. Harris E.L. and Angal S. "Protein purification methods: A practical
approach" 1 Edicin, IRL Press, 1989
3. Belter P., Cussler E.L. and Hu Wei Shou "Bioseparations : Dowstream
Processing for Biotechnology":, John Wiley and Sons , 1988.
4. Doran M." Bioprocess Engineering Principles", Academic Press,
1995.
5. Asenjo J.A. "Separation processes in Biotechnology", Marcel Dekker,
1990
6. Tejeda, R.M.Montesinos, R.Guzman "Bioseparaciones", Editorial
Unison, 1995.
7. Ahuja S Handbook of Bioseparations, Academic Press, 2000.

Clases
Material

En U Cursos
DEBEN TRAER EL MATERIAL

Introduccin

INTRODUCCION
La biotecnologa ha avanzado en los ltimos aos.
La oferta de empresas en el rea de ingeniera gentica son
generalmente reportados en las pginas financieras,
=> Esto implica un futuro promisorio para el rea.

Produccin Mundial y Valores de Mercado de Productos Protenicos Tpicos

Categora

Fuente de
protena

Protena

130

Aislado soya

> 105

1500

Suero de Leche

Protena de
suero de leche

500

3000 - 6000

Almidn

Amilasas

600

15000-30000

Tejido Animal

Renina

60

108

Azcar

Hormona de
crecimiento
humano

20 kg

1010

Suero Bovino

Anticuerpos
monoclonales

10 kg

3109

Soya

Harina de soya

Funcional

Soya

Salud

Precio Aproximado
(/t)

> 2107

Nutricional

Reactivo

Produccin
Anual (t)

Principales Productos Biotecnolgicos

$0.250/gr

Etanol

$ 9.000/gr

$ 500/gr

Cuajo
recombinante

$ 50.000.000/gr
$ 2.500/gr
Insulina

Factor de
Coagulacion

La biotecnologa se refiere a cultivos:

Microbianos
Clulas animales
Plantas
Virus
Para producir productos tiles para los humanos y que
generen ganancias a los inversionistas

ANTECEDENTES

Los primeros productos biotecnolgicos se conocen desde

4000 a.C. cuando se producan pan, queso y yogurt.

La definicin de biotecnologa proviene de aproximadamente

100 aos atrs. Se orienta principalmente a productos orgnicos
generados por fermentaciones.
Acetona (Industria de municiones I Guerra Mundial).
cido ctrico y glutmico.
Antibiticos acapar toda la atencin, resultando el producto ms importante
de la biotecnologa, este metabolito secundario produjo grandes beneficios.

Esquema general de la produccin de productos biotecnolgicos

Fermentacin

Cosecha

Disrupcin

Protenas
60 - 70 g/l

Separacin

Desechos

Concentracin
Agua

Downstream processing (DSP)

Preacondicionamiento

Purificacin de
alta resolucin

Refinamiento

Caractersticas de la bioseparacin
La separacin de los productos biotecnolgicos resulta
relativamente ms difcil que las separaciones en la
ingeniera qumica convencional, ya que las molculas que
se separar resultan ser extremadamente frgiles y de
propiedades fisicoqumicas y bioqumicas muy similares
entre ellas.
Cualquier empresa que trabaje en la produccin de
bioproductos, trabaja con alrededor de 200 compuestos
diferentes, mientras que la empresa petroqumica slo
trabaja con alrededor de 10 compuestos.

Parmetros tpicos relacionados con DSP

Concentracin en el
medio (g/l)
Contaminacin
Tiempo de
procesamiento (h)

Purificacin
Produccin/lote (kg)

DSP por lote

Nmero de etapas
DSP

Productos
Qumicos

Antibitico

Enzima

Protenas
Terapeticas

100 - 120

10 - 40

1-5

0.1 - 5

Baja

Baja

Baja

Alta

12 - 24

10 - 24

6 - 12

1+

Alta

Alta

Baja

Muy alta

Hasta 24000

Hasta 8000

Hasta 400

Hasta 3+

Continua

Continua

Continua

Usualmente

5 - 10

5-7

3-6

8 - 14

Composicin de una Corriente de Entrada a DSP

Componente

Concentracin

Comentario

Agua

900 + g/l

Mayor costo de separacin para

productos de bajo valor
Desecho, reciclado o producto

Materia celular

20 - 100 g/l

Producto

Hasta 120 g/l

Sales inorgnicas

Trazas hasta 10 g/l

Usualmente removidas con el medio

Protenas (no producto)

Trazas hasta 3 g/l

Problema de remocin mayor con

productos enzimticos intracelulares

Acidos nucleicos

Trazas hasta 6 g/l (ICP)

Polisacridos

1% + (ICP)

Productos orgnicos
(color)

Trazas en bajo
contenido

Slidos orgnicos

Bajo contenido

Problema de remocin mayor para

protenas intracelulares o productos
enzimticos
Usualmente removidos con el
medio, medios residuales
De materias primas (por ejemplo,
melaza) y los microorganismos
mismos
Del medio

Productos Biotecnolgicos de Inters

Biomasa
Levadura
Bacterias

Hongos

Virus
Adenovirus
Retrovirus
Adenoasociados

Herpes virus
Baculo virus

Metabolitos
Alcoholes
cidos

Protenas

Antibiticos

PProcesos de Produccin de Bioproductos

Qu se desea?

Desde una suspensin diluda se desea un productos biotecnolgico

con:

- Mximo rendimiento

R = Pf/Pi
Pf: Concentracin Producto Final
Pi : Concentracin producto inicial

- Mxima Pureza

Pureza = Pf / S P

S P: Sumatoria de la concentracin de todos los compuestos presentes

-

- Producto con propiedades funcionales

Cumpliendo las condiciones de: Costo Razonable, dado que los

costos de proceso son muy caros, siendo un porcentaje bastante

significativo los equipos.

Diseo del Proceso de recuperacin y purificacin

(Downstream processing DSP)
Para el diseo del DSP se debe conocer las respuestas a las siguientes
preguntas:

Cul es el precio del producto?

Cul es el nivel de produccin?
Dnde est el producto en cada etapa?
Cules son las propiedades fisicoqumicas y/o
bioqumicas que diferencian al producto de sus
contaminantes?
Cul es el costo de las diferentes alternativas del
DSP?
cul es la eficiencia de cada etapa?

Proceso de produccin de Biomasa

Crecimiento de la Biomasa (Fermentacin)
Separacin de la biomasa del medio de
cultivo.
Secado y post-tratamientos
Almacenamiento de la biomasa

Flowsheet Produccin Biomasa

G as O ut

A F L N - 1 0 2 / A F -1 0 2
A ir F ilt r a t io n

W a te r
H S R L -1 0 1 / S T - 1 0 1
H e a t S t e r iliz a t io n

S -1 0 7

S -1 0 6
N u t rie n t s
A m m o n ia

S -1 1 3

B L N D -1 0 1 / V - 1 0 1
B le n d in g
F R M N -1 0 1 / F -1 0 1
S T R G -1 0 1 / V -1 0 2

Fe rme nta tion

S tora ge

A ir

S -1 0 1
A F L N - 1 0 1 / A F -1 0 1

C M P S -1 0 1 / G -1 0S1 -1 0 8

A ir F ilt r a t io n

C F C o m p re s s o r

S -1 0 2
S -1 1 4

S -1 0 9
S -1 0 3
C F G N -1 0 1 / D S - 1 0 1

S -1 1 5

S -1 1 2

D is k -S t a c k C e n t rif u g a t io n

S -1 1 6
F B D N G -1 0 1 / F B D - 1 0 1
R V F L - 1 0 1 / R V F -1 0 1
S -1 0 4

R o t a ry V a c u u m F ilt ra
t io0n5
S -1

F lu id B e d D ry in g

S -1 1 8

F I L L -1 0 1 / F R - 1 0 1
F illin g

S -1 1 7 B O X -1 0 1 / B X - 1 0 1
B o x in g

Proceso de produccin de Virus

Crecimiento de Clulas empaquetadoras
Infeccin de Clulas empaquetadoras
Crecimiento de Clulas empaquetadoras
infectadas
Recuperacin de Clulas empaquetadoras
Rompimiento de las clulas (segn virus)
Separacin de los debris celulares
Purificacin de los virus
Almacenamiento de los virus

Proceso de produccin de
Metabolitos

Crecimiento de la Biomasa (Fermentacin)

Separacin del metabolito de la biomasa.
Tratamiento y purificacin del metabolito
Almacenamiento del metabolito

Produccin de cido Ctrico

S -1 2 0

C-Source

A F L N - 1 0 2 / A F -1 0 2

Water 1

A ir F ilt r a t io n
S -1 1 9
B L N D -1 0 1 / V - 1 S
0 1-1 0 2

H S R L -1 0 1 / S T - 1 0 1

B le n d in g

S -1 1 7

H e a t S t e r iliz a t io n

S -1 1 3

Biomass

S -1 2 1

S T R G -1 0 1 / V -1 0 3

S -1 0 1

R V F L - 1 0 1 / R V F -1 0 1

S t o ra g e T a n k

F R M N -1 0 1 / F -1 0 1

R o t a ry V a c u u m F ilt ra t io n

F e r m e n t a t io n

Air

S -1 1 5

A F L N - 1 0 1 / A F -1 0 1
A ir F ilt r a t io n

S -1 1 8

C M P S -1 0 1 / G -1 0 1
C F C o m p re s s o r

S -1 2 3
S -1 3 3

S -1 2 8

S -1 2 9

Gypsum

Sulfuric Acid
S -1 2 5

S -1 3 1

S -1 2 2

Lime

S -1 2 6

P ro d u c t o

C C R N -1 0 1 / R -1 0 3
C o n t . C r y s t a lliz a t io n

R V F L - 1 0 3 / R V F -1 0 3
R o t a ry V a c u u m F ilt ra t io n

S -1 3 0
R V F L - 1 0 2 / R V F -1 0 2
R X N -1 0 2 / R -1 0 2
G y p s u m F o rm a t io n

S-127

R o t a ry V a c u u m F ilt ra t io n

S -1 2 4

R X N -1 0 1 / R -1 0 1
P ro d u c t P re c ip it a t io n

Proceso de produccin de
protenas

Caldo de Fermentacin
Con Clulas
Clulas

Sin Clulas

Clulas inmovilizadas
Clulas retenidas

Separacin de Clulas

Rompimiento Clulas
Separacin Material
Intracelular (Desechos)

Sobrenadante

Precipitacin cidos
Nucleicos, Proteasas
Tratamiento de cuerpos
incluidos

Concentracin

Purificacin Alta
Resolucin

Refinamiento

Permite
Altos niveles de pureza
Estabilidad del producto

Efecto de la eficiencia de cada etapa

100.0

% Recuperacin

80.0

60.0

40.0

20.0

0.0
0

Nmero Etapas
95%

80%

70% Eficiencia

Resolucin

Velocidad

Cuan fcil es separar

Capacidad Cuanto se procesa

Cuan rpido se procesa

Recuperacin Cuanto se recupera

REGLAS HEURISTICAS PARA EL

DISEO DE SISTEMAS DE
SEPARACION
1. Seleccionar la separacin basndose en diferentes
propiedades.
2. Separar el compuesto ms abundante primero.
3. Usar etapas de purificacin lo antes posible.
4. Seleccionar procesos que exploten las diferencias
en las propiedades fisicoqumicas en la forma ms
eficiente.
5. Hacer el trabajo ms difcil al final.