BIOSENSORES

TALLER DE INVESTIGACIN II

Introduccin
La necesidad de llevar a cabo determinaciones analticas de manera
rpida, selectiva y con elevada sensibilidad ha dado lugar a la
aparicin y amplio desarrollo de los denominados biosensores.


Introduccin
Estos dispositivos analticos que incorporan un elemento biolgico
como fase sensorial asociado a un transductor fsico-qumico,
presentan un enorme potencial para la deteccin de numerosos
analitos (componente de inters analtico de una muestra), tanto en el
mbito del anlisis clnico, industria alimenticia o medioambiental.
Definicin
Los biosensores son dispositivos de anlisis utilizados para convertir
una respuesta biolgica o qumica en una seal elctrica. Es una
herramienta o sistema analtico compuesto por un material biolgico
inmovilizado (tal como una enzima, anticuerpo, clula entera,
orgnulo o combinaciones de los mismos), en ntimo contacto con un
sistema transductor adecuado que convierta la seal bioqumica en
una seal elctrica cuantificable,

Biosensor
Definicin
Los biosensores difieren esencialmente de las tcnicas de medicin
existentes desde al menos tres puntos de vista muy tiles y
fundamentales:

En el contacto ntimo del material biolgico (tanto si consiste en clulas enteras,
orgnulos, anticuerpos o enzimas) con un transductor que convierte la seal
biolgica en una seal elctrica cuantificable.
En su tamao funcional, generalmente la porcin sensora de un biosensor es
pequea y eso permite pequeos tamaos de muestra, una interferencia
mnima con los procesos existentes despus de la implantacin.
Por ltimo, el anlisis de medios peligrosos o poco accesibles, sin interrumpir el
flujo del proceso.

Funcionamiento de un biosensor
La siguiente figura muestra el funcionamiento bsico de un biosensor:

El analito es reconocido por el sistema receptor generando una seal
primaria. A continuacin el transductor la convierte en una seal secundaria
elctrica, que posteriormente es amplificada, condicionada y procesada, para
ser presentada en forma de dato.

Funcionamiento de un biosensor
Las dos funciones bsicas para un biosensor son el reconocimiento y la
transduccin. Pudindose dar de forma consecutiva o simultnea en funcin
de la naturaleza del sensor y vienen determinadas por la existencia de
materiales especficamente diseados.

El primer material (elemento biolgico), responsable de la etapa de
reconocimiento del analito (molcula o microorganismo), es el que
determinar las caractersticas de selectividad del dispositivo. Este material
podr aparecer integrado, acoplado o inmovilizado sobre un soporte
adiente.

Funcionamiento de un biosensor
Como consecuencia de una reaccin qumica o una interaccin
selectiva con el analito, permitir la generacin de un seal primaria
en cualquier dominio (electroqumico, ptico, trmico, msico, etc).
Algunos de los fenmenos qumicos asociados son:
Cambios de color
Cambios de potencial elctrico
Flujo de electrones
La produccin de calor
Cambios en la frecuencia de oscilacin del cristal

Funcionamiento de un biosensor
Por lo tanto, la informacin suministrada por la seal est directamente
relacionada con la presencia de un analito determinado.

Un segundo material se encarga de traducir esta seal primaria generada
en la etapa de reconocimiento en otra ms fcilmente tratable (seal
secundaria), que normalmente es de dominio elctrico. Esta informacin
transmitida tiene un carcter cuantitativo ya que la magnitud de esta seal
se relaciona con la actividad o concentracin de la especie reconocida en la
etapa previa.

Caractersticas de los biosensores
Un biosensor eficaz debe poseer las siguientes cualidades:

Ser altamente fiable y especfico para el propsito de la aplicacin y que su
reaccin sea independiente de factores tales como la agitacin, la presin, la
temperatura y el pH.
Ser selectivo, sensible, estable (permanecer sin cambios) en condiciones
normales de almacenamiento y mostrar a su vez estabilidad luego de un gran
nmero de pruebas.
La respuesta debe ser rpida (en lo posible en tiempo real), precisa, exacta,
reproducible y lineal en el rango de inters del anlisis adems de que no
poseer ruido elctrico.

Caractersticas de los biosensores
Si el biosensor ser usado para monitoreo invasivo en situaciones clnicas, la sonda
debe ser pequea y no provocar trastornos en el organismo, tales como efectos
txicos o antignicos y ser esterilizable, o al menos no ser propenso a acumular
impurezas o protelisis.

El biosensor deber ser portable, de bajo costo y ser utilizado por personal semi-
capacitado, adems de debe requerir pocos recursos operativos y de
almacenamiento que faciliten su empleo y no supongan un coste adicional.

Caractersticas de los biosensores
Por ltimo, debe haber un mercado para el biosensor. No tiene sentido
desarrollar estos dispositivos si la tendencia es de mantener los mtodos
tradicionales en vez de descentralizar las pruebas en laboratorio.

Existe una amplia variedad de biosensores distintos y no todos poseen cada
una de las caractersticas citadas anteriormente. La combinacin de varias
de ellas podra situar a muchos de estos dispositivos en una posicin
ventajosa frente a las tcnicas de anlisis convencionales (cromatografa,
espectrometra, etc). Adems, permiten que sean aplicables a la
monitorizacin en tiempo real de procesos industriales.

Clasificacin
Como indica la siguiente tabla estos dispositivos pueden clasificarse
en funcin de: el tipo de interaccin que se establece entre el
elemento de reconocimiento y el analito; el mtodo utilizado para
detectar dicha interaccin; la naturaleza del elemento de
reconocimiento; o del sistema de transduccin.
Clasificacin
Clasificacin
Existen mltiples elementos de reconocimiento y sistemas de transduccin.
Estos componentes admiten diversas combinaciones. La eleccin del
material biolgico/biomimtico depende de las caractersticas del
compuesto a analizar. Por ejemplo, cuando se trata de detectar una
sustancia alrgena (sustancia que puede provocar una reaccin alrgica),
se utilizan anticuerpos.

La eleccin del transductor est condicionada por el tipo de elemento de
reconocimiento elegido, ya que ste determina cul ser la variacin en las
propiedades fsico-qumicas que ocurra como consecuencia de la
interaccin.

Por el tipo de interaccin
Sensores Biocatalticos
Sensores de Bioafinidad
Sensores biocatalticos
Son los biosensores mejor conocidos y los ms aplicados. Se basan en la
utilizacin de biocatalizadores, que son elementos que favorecen que
ocurra una reaccin qumica en la cual a partir de uno o varios sustratos se
forman uno o varios productos conocidos sin consumo del biocatalizador,
que se regenera y puede ser utilizado de nuevo.

Los elementos de reconocimiento de tipo biocataltico pueden ser: enzimas,
clulas, completas, orgnulos subcelulares y tejidos. Estos elementos de
reconocimiento pueden acoplarse a distintos tipos de transductores como
electroqumicos, pticos, termomtricos y acsticos.

Sensores de bioafinidad
Se basan en la interaccin del analito de inters con el elemento de reconocimiento,
sin que exista transformacin cataltica, sino que se produce una reaccin de
equilibrio en la que se forma un complejo analito-receptor.

Se pueden utilizar para la deteccin de material gentico de microorganismos, para
detectar la presencia de patgenos o pesticidas o de cualquier tipo de sustancias
que puedan causar una respuesta inmune (y por tanto permitir el desarrollo de
anticuerpos).

Existen distintos tipos de receptores de bioafinidad como anticuerpos, lectinas,
receptores, clulas completas, cidos nucleicos, PIMs, aptmeros y PNAs.

Por el elemento de reconocimiento
Enzimas
Clulas Completas
Orgnulos Subcelulares
Tejidos
Anticuerpos
Lectinas
cidos Nucleicos
Polmeros de Impresin
Molcula
Aptmeros
cidos Nucleicos Peptdicos
Enzimas
Las enzimas son protenas que catalizan reacciones qumicas en los
seres vivos.

La actividad enzimtica est controlada normalmente por el pH, la
fuerza inica, la temperatura y la presencia de cofactores. La
estabilidad de las enzimas es un factor limitante para el tiempo de
vida de un biosensor de tipo enzimtico y se utilizan distintas tcnicas
para aumentarla, como estabilizacin qumica y/o inmovilizacin.

Enzimas
Las enzimas pueden acoplarse a transductores de los tipos
potenciomtrico, amperomtrico, optoelctrico, calorimtrico o
piezoelctrico, y todas funcionan por inmovilizacin de la enzima en
el propio transductor.

Existen enzimas que no se pueden utilizar aisladas debido a que no
son suficientemente estables o a que su purificacin es difcil o
demasiado cara.

Enzimas
Clulas completas
Pueden ser clulas bacterianas, fngicas, protozoos o clulas procedentes
de organismos superiores y pueden ser viables o no viables.

En este caso en lugar de purificar las enzimas se utiliza como elemento
biolgico una clula completa, que posee en su interior mltiples sistemas
multienzimticos en su medio natural. Se pueden utilizar clulas
modificadas genticamente que expresen enzimas determinadas que no se
expresen normalmente o que posean una actividad mayor.

Orgnulos subcelulares
En ocasiones en lugar de utilizar clulas completas o sistemas
multienzimticos aislados, pueden utilizarse orgnulos subcelulares,
que contienen determinados sistemas enzimticos completos, pero
no poseen todos aquellos que presenta una clula completa, como es
el caso de cloroplastos completos, tilacoides o mitocondrias.

Tejidos
Existen determinados tejidos
vegetales que debido a su
funcin fisiolgica en el
organismo son una fuente de
determinadas enzimas o
sistemas enzimticos. Pueden
utilizarse distintos tejidos como
hojas, races, frutas o semillas,
en rodajas o bien en forma de
homogeneizados. Suelen ir
asociados a transductores
electroqumicos.

Tejidos
Anticuerpos
Un anticuerpo es una protena que se une de manera selectiva a una
molcula complementaria denominada antgeno, que en este caso
corresponde al analito. La mayor parte de los biosensores de
bioafinidad se basan en reacciones de unin de antgenos a
anticuerpos especficos.

Anticuerpos
Lectinas
Las lectinas son un grupo de protenas que
se unen de manera selectiva y reversible a
distintos sacridos, como los
oligosacridos que se encuentran en las
paredes celulares bacterianas. Son
molculas de reconocimiento fcilmente
disponibles y econmicas que pueden
asociarse a distintos transductores como
transductores piezoelctricos o de
resonancia de plasmones superficiales.

cidos nucleicos
Los biosensores para el anlisis de ADN se basan en el proceso de
hibridacin, que es la unin de una cadena de ADN con su cadena
complementaria. Estos biosensores, tambin conocidos como gene
chips se usan para el reconocimiento y cuantificacin de ADNs diana
en muestras de inters. Pueden acoplarse sistemas de transduccin
pticos, gravimtricos o electroqumicos.

Polmeros de impresin molcula
Los polmeros de impresin molecular o
PIMs son matrices sintetizadas
artificialmente que presentan, en teora, la
capacidad de reconocer e interaccionar de
forma especfica con determinados
compuestos.

Polmeros de impresin molcula
Aptmeros
Un aptmero es una secuencia de oligonucleticos (ADN o ARN) de
cadena sencilla sintetizada artificialmente, capaz de reconocer
diversas molculas diana con una afinidad y especificidad elevadas.
Estas molculas biomimticas se asemejan a los anticuerpos. Se
pliegan en el espacio y adquieren una conformacin con
determinadas regiones a las que puede unirse el analito.
Aptmeros
cidos nucleicos peptdicos
Los cidos nucleicos peptdicos o PNAs (en sus siglas inglesas) son
otro tipo de molculas sintticas que mimetizan al ADN-ARN. De
hecho, su estructura es muy similar a la de estos cidos.