BIOTECNOLOGIA BSICA

PRODUCCION Y PURIFICACION DE ENZIMAS

Mg. Elena Benavides Rivera

LIMA - PERU


UNIVERSIDAD NACIONAL
MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Per; DECANA DE AMERICA)
Facultad de Farmacia y Bioqumica
En el ao 4000 a. C., los egipcios
elaboraban pan con levadura; en el
2500 a.C., los chinos producan el
"kui", una cerveza de arroz. Y
existen indicios de que algunos
pueblos de Amrica Central
conocan las propiedades
antibiticas de ciertos hongos. Sin
saberlo, recurran a la hoy
denominada biotecnologa.

ENZIMAS
Catalizadores biolgicos que, en todos los seres
vivos, se encargan de catalizar las transformaciones
que constituyen el metabolismo.

Las enzimas se usan en kits diagnsticos, en
anlisis del ADN en causas criminales o
identificacin de paternidad, en procesos qumicos
productivos, en frmacos, en las industrias
agroalimentarias (edulcorantes, bebidas, quesos),
en otras industrias (carnes, pieles) y, en grandes
cantidades, en los biodetergentes para intensificar
su accin limpiadora.

ENZIMAS

Catalizadores biolgicos muy potentes y
eficaces, qumicamente son protenas.


Actan en pequea cantidad y se recuperan
indefinidamente.


Aceleran la conversin de sustratos a
productos en una reaccin, disminuyendo la
ENERGIA DE ACTIVACIN.


Esta reaccin puede llegar a darse
instantnea o casi instantneamente.
CARACTERSTICAS DE LA ACCIN ENZIMTICA
Especificidad de
sustrato (S).
Especificidad de
accin.
CARACTERSTICAS DE LA ACCIN ENZIMTICA
Accin enzimtica formacin de complejo
(transicin)
E + S ES E + P
El sustrato se une a enzima por uniones electrostticas,
hidrfobas, puentes de hidrgeno, entre otras en centro
activo.
Algunas enzimas actan con ayuda de estructuras no proteicas.
CARACTERSTICAS DE LA ACCIN ENZIMTICA
Cofactor:
iones o molculas
inorgnicas.
Coenzima:
Molcula orgnica.
EFECTO DEL pH Y TEMPERATURA
2. Efecto de la T.
Influye en actividad. Punto
ptimo representa el mx.
de actividad.
T bajas Ez. "muy
rgidas"
T altas > 50C,
actividad cae por
desnaturalizacin.
1. Efecto del pH.
Ez. tienen pH ptimo de
actividad. pH puede afectar:
Centro activo: Aa con
grupos ionizados.
Centro no activo:
ionizacin de Aa puede
modificar conformacin de
enzima.
Velocidad mxima
T ptima
EFECTO DEL pH Y TEMPERATURA
2. Efecto de la T.
Influye en actividad. Punto
ptimo representa el mx.
de actividad.
T bajas Ez. "muy
rgidas"
T altas > 50C,
actividad cae por
desnaturalizacin.
1. Efecto del pH.
Ez. tienen pH ptimo de
actividad. pH puede afectar:
Centro activo: Aa con
grupos ionizados.
Centro no activo:
ionizacin de Aa puede
modificar conformacin de
enzima.
Velocidad mxima
T ptima
CLASIFICACION DE ENZIMAS
1. Oxido-reductasas
(Oxido-Reduccin)
Si una molcula se reduce,
tiene que haber otra que se
oxide
2. Transferasas
(De grupos funcionales)
grupos aldehidos
gupos acilos
grupos glucosilos
grupos fosfatos
(kinasas)
CLASIFICACION DE ENZIMAS
3. Hidrolasas
(Hidrlisis)
Transforman polimeros en
monomeros. Actuan sobre:
enlace ester
enlace glucosidico
enlace peptidico
enlace C-N
4. Liasas
(Adicin a dobles enlaces)
Entre C y C
Entre C y O
Entre C y N
CLASIFICACION DE ENZIMAS
5. Isomerasas
(Isomerizacin)
6. Ligasas
(Formacin de enlaces,
aporte de ATP)
Entre C y O
Entre C y S
Entre C y N
Entre C y C
TECNOLOGA ENZIMTICA
El objetivo es la superacin de aquellos
inconvenientes que retrasan la aplicacin de las
enzimas en estos procesos a escala industrial.

Alternativa biotecnolgica basada en que las
industrias desarrollen productos de calidad
homognea, aprovechen ptimamente sus
materias primas, aceleren sus procesos de
produccin, minimicen y disminuyan el
deterioro del medio.
INTRODUCCIN
Aplicaciones industriales en la obtencin de
productos qumicos, en la industria alimentaria
y farmacutica.

Los procesos catalizados por enzimas presentan
una serie de ventajas frente a los catalizadores
convencionales no biolgicos:

Presentan una gran actividad cataltica;
Muestran una gran especificidad de sustrato
Son muy activos a temperatura ambiente y
presin atmosfrica.
INTRODUCCIN
El empleo de enzimas no se ha generalizado en
los procesos qumicos industriales debido a que la
mayora de las enzimas no son estables en las
condiciones de trabajo.

Por otra parte al ser solubles en agua, su
separacin de los sustratos y productos es difcil, y
por tanto, no se pueden reutilizar.

Con la inmovilizacin de las enzimas se han
podido superar estos ltimos inconvenientes,
permitiendo que el proceso biotecnolgico sea
econmicamente rentable.
PRODUCCIN INDUSTRIAL
Las enzimas industriales se obtiene por extraccin a
partir de clulas:
Animales
Vegetales
Microbianas

Actualmente
Slo enzimas de microorganismos y por fermentacin
se han desarrollado significativamente.

Se aprovecha potencial gentico de microorganismos
para obtener enzimas tecnolgicamente ms
avanzadas.
PRODUCCIN DE ENZIMAS
Utilizar enzimas termoestables para obtener:
Velocidades de reaccin mayores,

Menores viscosidades del sustrato,

Aumento de la solubilidad de los reactantes
y,

Disminucin de la contaminacin microbiana.
PRODUCCIN DE ENZIMAS
Los microorganismos deben tener las
siguientes propiedades:

Facilidad y rapidez de crecimiento en
fermentadores grandes,
Alto rendimiento de enzima,
Fcil de aislarlo, purificarlo y concentrarlo.

La mayora de las enzimas son de origen
microbiano y se producen por
fermentacin sumergida aerobia
convencional.

USOS DE LAS ENZIMAS
Las enzimas ms utilizadas son la -
amilasa, la glucoamilasa, la glucosa
isomerasa y varias proteasas.

Entre otros pueden citarse la tripsina, la
ureasa, la ribonucleasa, la peroxidasa, la
papana y otras proteasas, la amilasa, la
asparraginasa, el alcohol deshidrogenasa,
la fosfatasa alcalina y la glucosa oxidasa.

Aproximadamente el 60% son proteolticas
y el 30% carbohidrasas.
USOS DE LAS ENZIMAS
Se pueden dividir en 3 clases en funcin a su
disponibilidad, precio y pureza:
Enzimas utilizados en gran escala,
Enzimas utilizados en cantidades menores,
Enzimas especializados.

Caractersticas de las enzimas industriales:
Estabilidad,
Las impurezas no deben interferir en su
actividad,
Barato, activo y seguro,
Debe ser til en en aplicaciones muy
diferentes.

FUENTES DE ENZIMAS
Las clulas microbianas son la fuente usual de
enzimas para uso industrial.

Excepto las proteasas como la papana, ficina ,
bromelna y la quimosina.

Se producen a partir 25 organismos, incluyendo
hongos.

Los enzimas microbianos son ms tiles que los
derivados de plantas o animales por la gran variedad
de actividades catalticas.
FUENTES DE ENZIMAS
Adems son ms estables que los homlogos de
las plantas o animales.

Los microorganismos productores de enzimas
ms tiles y mejor conocidos son los Aspergillus
niger, A. oryzae y Bacillus subtilis.

Uno de las escasos enzimas unidos a membranas
que han sido explotadas comercialmente es la
colesterol oxidasa, es inusual que este localizada
en la parte externa de la pared celular.

Renina
Se halla en el estomago de las terneras.
Accin proteoltica dbil
Poderoso agente coagulador de la leche (pH
ptimo 5.4)
Papaina
Se halla en el latex del fruto verde de la papaya.
Su caracterstica es su contenido en grupos SH
Es relativamente resistente al calor (a 50-60C la
proteolsis es rpida)
Coagula fcilmente la leche
Proteinasas

Carbohidrasas
Alfa amilasa
Se halla en las glndulas salivales, pncreas,
hongos, bacterias y malta
Descomponen los almidones y glucgeno en
maltosa y glucosa (previo paso a dextrina)
La amilasa animal requiere cloruro de calcio
Beta amilasa
Los granos los producen en gran
abundancia
Descomponen el almidn a maltosa.

INDUSTRIAS TRADICIONALES Y
ENZIMAS ASOCIADAS
Fabricacin de queso

La operacin ms importante es la coagulacin de la casena
de la leche mediante la adicin de renina y renina/pepsina
Tambin se ha aadido papaina para la proteolisis durante
el aejamiento del queso.

Elaboracin de pan

La harina cruda contiene muchas enzimas en pequea
cantidad.
La proteinasa de la harina es inactivada por la oxidacin.
La alfa-amilasa ocasiona aumento de volumen de la hogaza.
Lipoxidasa es un blanqueante de la harina y mejora su
amasado. Origen: harina de soja y leguminosas.

INDUSTRIAS TRADICIONALES Y
ENZIMAS ASOCIADAS
Fabricacin de zumos

Uso de enzimas en la destruccin de pectinas.
Una de las enzimas produce metanol, pero en pequea
cantidad.

Fabricacin de glucosa y fructosa

A partir de maz
Las enzimas utilizados son alfa amilasas y
amiloglucosidasas
La glucosa se transforma en fructosa por accin de la
glucosa-someraza.
INDUSTRIAS TRADICIONALES Y
ENZIMAS ASOCIADAS
Refinado de azcar
Degradacin de la rafinosa
Resultado: cristalizacin y produccin de sacarosa.
La hidrlisis se efectua a pH 5 para evitar la
inversin del azucar.

Detergentes biolgicos
Enzimas proteolticas y lipoliticas
Problemas:
El exceso de enzimas ataca nutrientes y seres que
viven en los desagues.
Afectan el tratamiento de las aguas residuales por
cambios en las demandas de oxigeno y slidos
suspendidos.
INDUSTRIAS TRADICIONALES Y
ENZIMAS ASOCIADAS
Productos Farmacuticos y mdicos

Bio Sidus obtiene hormona de crecimiento
humana a partir de leche de vacunos clonados
y transgnicos

Este hecho es la culminacin exitosa de otra
etapa en el camino de bsqueda de
medicamentos de alta tecnologa para llegar
en forma ms eficiente a mayor cantidad de
pacientes a un menor precio.

el primero que logra la produccin de
hormona de crecimiento humana en dichos
animales.

INDUSTRIAS TRADICIONALES Y
ENZIMAS ASOCIADAS


Agosto de 2002, naci Pampa, la primera
ternera clonada de Latinoamrica. Hecho
extraordinario logrado por el cientfico argentino,
ya que fue el primer bovino nacido por clonacin
de clulas somticas fetales.
En los meses siguientes nacieron varias terneras
integrantes de la "dinasta Pampa". Adems de
clonadas algunas de ellas son transgnicas, ya
que son portadoras de un gen de otra especie.
Para este proyecto el gen agregado a las clulas
bovinas fue el de la hormona de crecimiento
humana - somatotropina.

INDUSTRIAS TRADICIONALES Y
ENZIMAS ASOCIADAS
Luego de una estimulacin temprana de sus
glndulas mamarias, comenz a dar leche
conteniendo hormona de crecimiento humana,
superando toda estimacin previa.
Un solo animal podra satisfacer holgadamente
la demanda total de este medicamento en
nuestro pas.
Diversos estudios fueron realizados sobre la
protena aislada y purificada a partir de la
leche de Pampa Mansa y demostraron que el
producto biosinttico es biolgicamente activo,
siendo capaz de promover el crecimiento de
animales de laboratorio, y que su perfil
fisicoqumico resulta idntico al producido por
la hipfisis humana.

INDUSTRIAS TRADICIONALES Y
ENZIMAS ASOCIADAS
Los antecedentes mundiales, relatados para
esta forma de produccin, indican que un
animal puede llegar a secretar ms de 20
gramos por da de la protena transgnica.

Siguiendo este razonamiento y con
estimaciones conservadoras, se calcula que
cada animal podra producir en su leche unos
5 kilogramos anuales de una protena
especfica.
ANTIBITICOS SEMISINTTICOS
Las penicilinas semisintticas son los
principales productos farmacuticos obtenidos
por tecnologa enzimtica.
Naturales
plantas
animales
microorganismos
mesfilos
extremfilos
Modificados
mutantes
recombinantes
ingenerados
Produccin
Distribucin de las enzimas Industriales
Proteasas Carbohidrasas Lipasas Otras
59% 28% 3% 10%
--------------------------------------------------------------------------
Alcalinas 25% a-Amilasas 13% Analticas
Neutras 12% Isomerasas 6% Farmacuticas
Acidas 10% b-Amilasas 5% Para desarrollo
Alcalinas 6% Pectinasas 3%
Tripsinas 3% Celulasas (1%)
Acidas 3% Lactasa
Seleccin de las Fuentes
Especificidad
pH
Temperatura
Activacin / Inhibicin
Anlisis
Disponibilidad
Costo
Estabilidad
Enzimas en Sntesis Qumica
Procesos con E con CoE disociables
ligasas
oxidoreductasas
Procesos con E sin CoE disociables
liasas
hidrolasas
S + H
2
O
P
1
+ P
2

proteasas
lipasas
glicosidasas
acilasas
pptidos
steres
oligosacridos
antibiticos
OBTENCION DE ENZIMAS:
1. Extraccin de Glndulas
animales
Insulina
Renina
2. Extraccin de plantas
Papaina
3. Cultivos bacterianos
EXTRACCIN DE GLNDULAS ANIMALES
Renina Cuajo (Jugo gstrico)
1. Estmagos frascos NaCl6% + Ac. Brico pH 5,2;
preservar
2. Filtrar acidificar c/HCl : pH 2,5; activar
prorenina

a) Diluir (opcional): neutralizar y filtrar
b) Sol Conc. preparados slidos: pp(ClNa SO
4
Na
2
) pI =
3,6
Absorber sobre hidrxido de Aluminio, filtrar, eluir con
B. Fosfto
Glicerina xinh. Bact redisolver secar al vaco
Polvo
Polvo + almidn act. st. : polvo tableta
- 1950 renina ternero
- 1960 mezclas renina-pepsina
- 1970 renina microbiana
- 1985 renina de levadura recombinante
- 2000 renina ingenierada

OTRAS :

- Pepsina
- Pancreatina
- Tripsina

- Hialuronidasa
- F.S.H.


EXTRACCIN DE PLANTAS
Proteasas
1. Actividad ptima
2. Endotipos Exotipos
3. No muy estable al calor.
APLICACIONES
- Curtido
- Modificacin de harinas
- Apresto de tejidos
- Aclaramiento de cervezas
- Extraccin de aceite a partir de residuos de
pescado
- Limpieza y lavado de ropa
- Recuperacin de plata de fotografas
- Ablandamiento de carnes
EXTRACCIN DE PLANTAS
Enzimas amilolticas

1) Hidrlisis del almidn previa a la fermentacin
alcohlica
2) Modificacin de harinas
3) Clarificacin de jugos de fruta
4) Engomado y desengomado de fibras textiles
5) Aglomeracin de materiales de fundicin
ENZIMAS DE MICROORGANISMOS
Amiloltico
Asperguillus arizae, oryzae, niger, Penicillium
roqueforti. Rhizopus sp. Bacillus subtilis;
Clostridium acetobutylicum.
Proteoltico

Bacillus subtilis; Ps. putrida, Clostridium sp.
Invertasa
Saccharomyces carlsbergensis, Aspergillus oryzae
Pectinestera
sa
Aspergillus sp.; Pencillium sp.

Hemoltico
Streptococcus haemolyticus
Penicilinasa
Bacillus cereus, subtilis
Enzimas Termoestables
enzimas termoestables de organismos mesfilos
enzimas de organismos termfilos
genes termfilos clonados en organismos mesfilos
genes mesfilos modificados estructuralmente
ENZIMAS DE MICROORGANISMOS
Produccin :
Por induccin
[ ]
sustrato
Hibridacin
MATERIA PRIMA
ANIMAL
VEGETAL
EXTRACTO TOTAL
EXTRACTO BRUTO
ENZIMA PURA
MICROBIANA
ETAPA 1
EXTRACCIN
ETAPA 2
FRACCIONAMIENTO
ETAPA 3
PURIFICACIN
REPRESENTACIN ESQUEMATICA DE PROCESO
DE AISLAMIENTO Y PURIFICACIN DE ENZIMA
MTODOS DE EXTRACCIN
METODOS

- Desintegracin de tejidos y
partculas celulares



- Extraccin con soluciones
acuosas.


- Mtodos especiales de
extraccin.


- Extraccin con detergentes.


- Extraccin con enzimas.
TRATAMIENTO

Mecnico: homogenizacin cortes.
Sonizacin, turmics.
Molienda con microperlas de vidrio.
Desintegracin y homogenizacin a alta presin.

Temperatura: shock fro.
Ph: shock alcalino o cido.
Concentracin salina: shock osmtico.

Extraccin por: butamol o acetona.
Por solventes .
Congelacin-descongelacin

Desoxicolato de sodio, Tween 20, Teepol XL, Triton X
100.

Autolisis: proteolisis y liplisis.
Utilizacin de enzimas purificadas: tripsina, lipasa.
METODOS CROMATOGRFICOS
Cromatografia de filtracin sobre gel:
Conocido como cromatografa de exclusin.

Separa protenas por peso molecular y tamao.


Cromatografa de intercambio inico:
Comportamiento cido base de protenas.

Enzimas con numerosos grupos funcionales
cargados elctricamente.
METODOS CROMATOGRFICOS
Cromatografa de adsorcin:
Adsorbentes no polares: protenas retenidas por
interacciones hidrfobas y fuerzas de van der
Waals.
Adsorbentes polares: interacciones inicas y
enlaces hidrgeno.

HPLC:
Se separa protenas con alto poder de resolucin
y una gran velocidad de separacin.
Purificacin

Precipitacin
Adsorcin
Separacin en dos fases Lquidas
Cromatografa en Columna
Electroforesis
Ultrafiltracin y Dilisis
Concentracin y Envasado

PRINCIPALES MICROORGANISMOS Y
ENZIMAS UTILIZADAS INDUSTRIALMENTE
Bacterias
- Bacillus - subtilis amilasa
amiloliquefaciens glucanasa
proteasa neutra

licheniformis amilasa
proteasa alcalina

coagulans glucosa isomerasa
- Actinomycetes
Actinoplanes sp glucosa isomerasa

Streptomyces sp glucosa isomerasa

- Escherichia coli penicilina acylasa
Hongos filamentosos
- Aspergillus oryzae




niger



- Rhizopus

- Mucor pusillus

miehei
amilasa
proteasa cida
Lactasa

Glucanasa
Celulasa
Amyloglucosidasa
glucosa oxidasa
Lactasa
Pectinasa
Catalasa
lipasa

amyloglucosidasa
lipasa

proteasa cida

proteasa cida
esterasa
PRINCIPALES MICROORGANISMOS Y
ENZIMAS UTILIZADAS INDUSTRIALMENTE
Levaduras
- Saccharomyces cerevisiae Invertasa


- Kluyveromyces lactis Lactasa


- Kluyveromyces fragilis Lactasa


- Pachysolem tannophilus Xilitol DH

PRINCIPALES MICROORGANISMOS Y
ENZIMAS UTILIZADAS INDUSTRIALMENTE
Disminucin de
la viscosidad.
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
Modificacin
caractersticas fsico-
qumicas y
organolpticas de
alimentos
Mejoramiento de
filtrabilidad,
digestabilidad,
textura y
caractersticas
organolpticas.
Clarificacin y
estabilizacin de
lquidos para su
conservacin.
Solubilizacin de
macromolculas.
Mejor poder
edulcorante.
Estabilidad
bacteriolgica
.
Baja tasa de
cristalizacin.
Correccin de las
deficiencias
enzimticas de origen
natural.
VENTAJA PRODUCTO ENZIMA

MEJORA DE LA FILTRACIN



DISMINUCIN DE LA VISCOSIDAD.

PRECIPITACION POR FRIO.


PERDIDA DE AMARGOR

ANTI-CRISTALLIZACION

PROTECCIN MICROBIANA

CORRECCION ENZIMATICA

ACELERACIN FERMENTACION
LACTICA

CERVEZA
JUGO FRUTA
VINO

CONCENTRADO DE
FRUTAS
CERVEZA


JUGO CITRICOS

LACTO SUERO QUESO
FRESCO
QUESO FRESO

HARINA PANIFICACION

DESECHOS DE CULTIVOS

B GLUCANASA
PECTINASA
DEXTRANASA

PECTINASA
PROTEASA, TaNASA,
GLUCOSA OXIDASA


NARAMGINASA

LACTASA

LISOZIMA

AMILASA FUNGICA

PROTEASAS
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
INDUSTRIA ENZIMAS USOS
Lctea
Tripsina.
Lactasa
Enmascara el gusto a xido.
Fabricacin de leche delactosada, evita la cristalizacin de
leche concentrada.
Quesera
Quimosina (renina)
Lactasa
Lipasa
Coagulacin de las protenas de la leche (casena).
Influencia en el sabor y aceleracin de la maduracin.
Helados
Lactasa
Glucosa-
isomerasa
Evita la textura arenosa provocada por la cristalizacin.
Permite la utilizacin de jarabes de alta fructosa.
Crnicas
Papana, Fiscina
Bromelina
Ablandamiento de carnes.
Produccin de hidrolizados.
Panificacin
Amilasa
Proteasa
Lipoxidasa
Lactasa
Mejora la calidad del pan.
Disminuye la viscosidad de la pasta.
Produce una miga muy blanca
Mejora la coloracin de la superficie.
Cervecera
Amilasas
Papana,
Pepesina
Usadas para licuar la pasta de malta.
Evitan la turbidez durante la conservacin de ciertos
productos.
Vinificacin
Pectinasas
Glucosa-
oxidasa
Mejoran la clarificacin y extraccin de jugos.
Evitan el oscurecimiento y los sabores desagradables.
Bebidas no
alcohlicas
Pectinasas
Glucosa-
isomerasa
Tannasa
Glucosa-
oxidasa
Mejoran la clarificacin de jugos.
Conversin de la glucosa en fructosa (jarabes de alta
fructuosa).
Aumenta la solubilidad y disminuye la turbidez del t.
Evita el oscurecimiento y los sabores desagradables.
1) -amilasa bacteriana (a-1,4-glucano-4-glucanohidrolasa)
- Industrialmente, fermentacin de Bacillus
amyloliquefaciens.

- T ptima 70-90C y pH 5.5 a 7 cuando T llega a 90

- Muy sensible al medio inico.

- Necesita presencia de calcio.

- Agregado de NaCl, mejora actividad de la Ez.

- Accin hidroltica de amilosa y amilopeptina.
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
1) -amilasa bacteriana (a-1,4-glucano-4-glucanohidrolasa)
- Solubilizacin de almidn con cada de viscosidad y
aparicin de capacidad reductora (grupos aldehido).

- Principal producto es la maltosa.

- Dificultad que presenta es su termolabilidad.

- Bacillus licheniformis
- Tipo termoestable, T de trabajo 105 a 110C.
- Estabilidad a cambios bruscos de pH.
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
2) Glucosa isomerasa
Microorganismos productores de gnero: Streptomyces,
Actinoplanes, Nocardia, Artrobacter, Pseudomonas y
Bacillus.
Ez. periplsmica inducida por xilosa.
T de trabajo entre 60 a 70C, utiliza el cobalto como
cofactor.
Se puede producir jarabes de alta [ ] en fructosa (55%).
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
Estructura de la Glucosa
Isomerasa
3) Invertasa
Levaduras: Saccharomyces cerevisiae y
carlsbergensis.
Clulas secas en concentrado lquido, solido o
inmovilizado.
T y un pH de trabajo de 55C y 4,5 respectivamente.
En industria se trata de obtener jarabes invertidos
con 50% sacarosa, 25% glucosa y 25% fructuosa.
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
1) Proteasas

Del tipo serinas proteolticas.


Se esta investigando homologo en Trichomonas
vaginalis


Actividad en rango de elevada T y alcalinidad.


Posicin de serina activa es 221.


Se ha intentado explicar el mecanismo durante el
lavado.
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIA DE DETERGENTES
1) Proteasas

No totalmente claro porque proteasas con estructura
similar difieren en sus mecanismos.


Determinacin de eficacia:
En base a degradacin de sustancias solubles.

Contrasta con sistema heterogneo durante el
proceso de lavado, donde una parte de sustratos
deben ser insolubles.
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIA DE DETERGENTES
2) Lipasas

Activas en todos los rangos de T y pH.


Hidrolizan grasas en sustancias ms hidroflicas y ms
fciles de eliminar en condicin alcalina.


Grasas animales o vegetales: triglicridos.


Se forma mezcla de tres cidos grasos, diglicridos,
monoglicridos y glicerol.


Paralelamente a serinas proteasas (microbianas y/o
pancreticas) contienen una trada cataltica.
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIA DE DETERGENTES
2) Lipasas
Serina activa cubierta por tapadera que debe
estar abierta para acceder a sustrato.
En medio apolar, tapadera se encuentra cerrada.
En medio acuoso, la tapadera esta abierta y solo
en este medio puede actuar.

Lipasas actuales requieren ms de un lavado
para eliminar toda la grasa; slo son activas
durante un perodo del lavado.
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIA DE DETERGENTES
Residuo de histidina
es usado para activar
la serina
Serina
Histidina
Aspartato
1) Amilasas Desengomantes Bacterianas
Aceleran proceso de desengomar en comparacin con
amilasas convencionales.

Resisten mayores T y menos sensibles a otras
sustancias en la solucin desengomante.
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIA DE TEXTILES
1) Enzimas hidrolticas del Krill
As se conoce genricamente al orden Euphausiaceae,
un tipo de crustceos parecidos externamente a los
camarones.
Enzimas potentes con inters potencial para usos
farmacuticos en produccin de
APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS
INDUSTRIA FARMACUTICA
Agentes para quimionucleosis
Agentes desbridantes, para tratar
heridas necrticas y desarrollo de
frmacos para varios tipos de
infecciones.
Aumentar rendimiento de produccin
Aumentar la pureza
Aumentar estabilidad
Aumentar especificidad
Aumentar reactividad
Modificar propiedades
Transferir capacidad productiva a
organismos seguros
Manipulaciones genticas
mutacin
recombinacin
mutagnesis dirigida
mutagnesis sitio dirigida
evolucin acelerada