Isolation and identification of lactic acid bacteria from sediments of a coastal marsh using a differential selective medium

Justificacin
Aplicaciones en procesos fermentativos para la produccin y / o conservacin de los alimentos

Las bacterias cido lcticas (LAB)

La capacidad de algunas bacterias para reducir Cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC) se ha utilizado para la identificacin, aunque algunos LAB no puede reducir TTC.

Con el fin de identificar las colonias de LAB de una fraccin cultivable en medio MRS de una comunidad bacteriana en sedimentos de un pantano costero

Se estudi la relacin entre el fenotipo de colonias producido por la reduccin de TTC en MRS y su clasificacin basada en la secuencia del gen 16S ARNr.

Se tom la muestra a 20 cm de profundidad con tubo de PVC esterilizado con etanol al 70%.

Las muestras se colocaron en bolsas de nylon estriles

Se homogeniz, se resuspendi 1 g de muestra en 10 ml de 0,85% de NaCl y se diluy a 10^ 6

Se inocul 1 ml de cada dilucin en 5 ml de caldo MRS

se incubaron en un CO 2 cmara saturado a 30 C durante 2-3 das.

Muestras mas diluidas se les agreg 0,01% de TTC

Muestras aleatorias se purificaron por estras, 2 veces y se clasificaron de acuerdo con el fenotipo colonia.

Comprobacin de pureza por microscopio.

Materiales y Mtodos.

Se extrajo 1ml de ADN genmicos

Se purific por el mtodo TCAB

Y se extrajo con alcohol de fenol / cloroformo / isoamilo

El alineamiento de secuencias se realiz con el software BioEdit

Los productos se secuenciaron por un servicio de secuenciacin externa (Macrogen, Corea)

Cada aislado se amplific por PCR usando los cebadores 16SS

La clasificacin fue por El clasificador de RDP

La capacidad de algunas bacterias (incluyendo LAB) para reducir Cloruro de 2,3,5trifeniltetrazolio (TTC) se ha utilizado para la identificacin, aunque algunos LAB no puede reducir TTC, evitando la diferenciacin adecuada.

Con el fin de identificar las colonias de LAB de una fraccin cultivable en medio MRS,

Con el fin de aumentar la especificidad ,

se estudi la relacin entre el fenotipo de colonias producido por la reduccin de TTC en MRS su clasificacin basada en la secuencia del gen 16S ARNr.

cultivos obtenidos a partir de las muestras ms diluidas tambin se diluyeron y se sembraron en el mismo medio de agar con aadido 001 % TTC (MRSTTC)

Resultados y Discusiones
Las colonias de LAB pueden desarrollar diferentes fenotipos de reduccin de TTC en un medio MRS.
Los fenotipos C, E y G, mostraron gran parecido con la W. cibaria segn la secuencia 16s. Pero no A.

El fenotipo puede variar por la influencia de la edad del cultivo y la disponibilidad de oxigeno, lo B5 y debe E1b fueron clasificados que ser controlado K2A, L2, J1a, J1b. N3a, N3b y N4 como staphylococus, mostrando mostraron morfologa que no inconsistencias, catalasa corresponden a su clasificacin negativas. (cocos).

El grado de reduccin de TTC depende del potencial reductor de cada clula y de la colonia entera.

La presencia de cepas de Lactobacillales, confirm la hiptesis de que estos sedimentos contiene condiciones requerida para mantener estos microorganismos en un estado cultivable.

Lactobacillus, Lactococcus, Enterococcus, Leuconostoc y Weissella han sido aisladas de este tipo de muestras.

La W. cibaria solo de muestras animales/humanas.

Hubo notable diferencia entre el fenotipo y el analisis de la secuencia 16 s., debido probablemente a varios factores ambientales y la falta de caracterizacin.

Conclusin
Se afirma la hiptesis.

Se ve una expectativa para el conocimiento y la observacin de estas comunidades microbiolgicas, lo que nos permite descubrir nuevas caractersticas y aplicaciones que podran tener estos microorganismos.