UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL ESTADO DE HIDALGO

TEMA: ELECTROFORESIS ACOSTA CORTES HEDER

CURSO: GENETICA

Misin Formar y desarrollar mdicos emprendedores, responsables y honestos con un slido sustento humanista, cientfico y tecnolgico, que contribuyan al desarrollo integral del estado de Hidalgo y de Mxico, comprometidos en la solucin de los problemas regionales y nacionales, respetuosos del medio ambiente, y con una actitud crtica para comprender la globalizacin como una oportunidad para proyectar sus valores, conocimientos, habilidades y cultura.

Visin La Escuela de Medicina de la Universidad Autnoma del Estado de Hidalgo es reconocida como la mejor institucin formadora de Mdicos en Mxico.

ELECTROFORESIS

INTRODUCCION
La electroforesis es una tcnica de separacin que puede ser utilizada con fines analticos y que fue introducida por el qumico sueco Arne Tiselius. El inters principal de este investigador fue la qumica de las protenas sricas. Por su trabajo pionero en este campo, Tiselius recibi el Premio Nobel en 1948.

Que es?
La electroforesis es un mtodo analtico en el que se utiliza una corriente elctrica controlada con la finalidad de separar biomolculas segn su relacin tamao a carga elctrica, usndose como base una matriz gelatinosa.

ELECTROFORESIS
Los mtodos electroforticos son de alta sensibilidad, eficacia, poder de resolucin y versatilidad. Mtodo de separacin de: Protenas cidos nucleicos Otras biomolculas Permite determinar: Peso molecular de una protena Punto isoelctrico Distinguir molculas por su carga neta o su forma

PRINCIPIOS TERICOS

Es una tcnica de separacin que consiste en el transporte de iones a travs de una disolucin por accin de un campo elctrico.

La velocidad de migracin en un sistema electrofortico es: Inversamente proporcional a la viscosidad del medio. Proporcional a la fuerza aplicada al campo. Proporcional a la carga neta de la molcula Inversamente proporcional al tamao de la molcula. Inversamente proporcional al coeficiente de friccin.

PARMETROS QUE INFLUYEN EN LA MOVILIDAD ELECTROFORTICA

Tenemos: 1) Parmetros externos Campo elctrico Temperatura 2) Parmetros relacionados con el solvente y con el sistema electrofortico Viscosidad Fuerza inica La naturaleza de los iones componentes El pH 3) Parmetros relacionados con el soluto La carga La forma y tamao de los iones

EQUIPO ELECTROFORTICO
fuente de alimentacin ctodo electrodo cable nodo muestra

gel

electrodo

Componentes:
* Fuente de alimentacin
* Dos

cubeta electrodo muestra

tampn ctodo

(E. horizontal)

electrodos nodo (+) ctodo (-)

* Cubeta
cable

cubeta nodo gel

* Tampn de electroforesis * Soporte electrofortico (gel)

fuente de alimentacin
(E. vertical)

tampn

TIPOS DE ELECTROFORESIS
Electroforesis de frente mvil Electroforesis de zona

Electroforesis de frente mvil

Aquella en la cual las partculas se mueven de forma libre en el medio en el que se encuentran dispersas. Las sustancias a separar se introducen en un tubo en forma de U, disueltas en un tampn de pH y fuerza inica adecuados.

Electroforesis de zona
La disolucin a tratar se aplica como una mancha, o como una banda, y las partculas migran a travs de un disolvente, utilizando adems un medio soporte inerte y homogneo, tal como el papel o ciertos tipos de geles. Esta tcnica es utilizada para analizar mezclas, para determinar la pureza de una muestra, para detectar cambios de movilidad o de conformacin de sustancias.

Medios de soporte usados en electroforesis de zona

Papel Filtro

Mtodo sencillo y rpido

Se usa para la separacin de

protenas

oligonucletidos

carbohidratos

lpidos

Desventajas
Si el papel es fino, se puede desgarrar con facilidad. Si el papel es grueso, las bandas se distorsionan. Se produce interaccin entre las protenas y los grupos hidroxilos de la celulosa del papel, por lo tanto la migracin se frena. Calidad del papel: 90% de celulosa absorcin de agua y conductividad elctrica.

 Se usa en anlisis de fluidos

biolgicos.

Acetato de celulosa

Tiempo de anlisis corto Sencillez de la tcnica.

Su aplicacin principales para separar las protenas del suero, lo que se denomina una proteinograma. Desventaja: Su dbil resolucin

Gel

Son polmeros de red tridimensional

El uso de geles como medio de soporte en electroforesis, constituye una alternativa para solucionar algunos problemas asociados con el uso de papel y de acetato de celulosa como la adsorcin, la difusin y poca resolucin de los compuestos separados. Factor que influyen en la migracin de la muestra en los geles: Resistencia o friccin a este movimiento
Tamao del poro del gel Radio de la molcula

Almidn

Tcnica barata, fcil y rpida Soporte ms usado en electroforesis. De alta resolucin Sus componentes son txicos

Geles

Poliacrilamida

Buena resolucin
Agarosa Separacin de molculas grandes con r > 5-10nm (virus, cidos nucleicos, lipoprotenas

Tampn de electrofresis Agarosa

1 litro 1.5 gr

Micropipeta 20 microlitros
Rack de puntas Microtubos de muestras

1
1 28

Pocillo Muestra 1 Verde 2 Negro 3 Lila 4 Blanco 5 Amarillo 6 Rojo 7 Azul

1 PREPARACION GEL DE AGAROSA

Aadir la solucin de agarosa al molde.

Preparacin del gel para la electroforesis

Llevar a cabo la electroforesis

 La electroforesis en geles de poliacrilamida es uno de los mtodos ms utilizados para la purificacin, anlisis y caracterizacin de protenas. electroforesis desnaturalizante
electroforesis nativa

IEF-PAGE SDS-PAGE

ANLISIS CUALITATIVO
Consiste en identificar, visualizar o localizar, en el medio de soporte, los componentes del espcimen separados por electroforesis. Se puede realizar por medio de colorantes o por mtodos inmunolgicos. Lo ms frecuente es teir el medio de soporte con una colorante.

APLICACIONES
La principal aplicacin en la caracterizacin y anlisis cuantitativo de molculas biolgicas, principalmente protenas, pptidos y aminocidos. Tambin encuentra aplicacin para la separacin de otras sustancias bioqumicas (insulina, histonas, fibringeno, lipoprotenas, enzimas). Aplicaciones de los geles de poliacrilamida en electroforesis es la separacin de molculas circulares y lineales de DNA.

bibiografia
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biolmol/pdfs/16%20ELECTROFORESIS%20GELES%20PAA. pdf http://www.bioted.es/documentos/ELECTROFORESI S%20BASICA.pdf http://www.ehowenespanol.com/listaaplicaciones-electroforesis-sobre_117270/