UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE MORELOS

FACULTAD DE FARMACIA LABORATORIO DE BIOQUIMICA II PRACTICA No.3 Produccin de cido pirvico durante la fermentacin de la glucosa por levadura y su identificacin

Grado:

Grupo:

Integrantes: MURRIETA CASTREJON ROBERTO A. OCAMPO MONTALBAN HUGO U. RAMIREZ SANCHEZ KARINA URZUA ROSAS KARINA PROFESORA:

Dr. Alina Juantorena Ugs

FECHA DE ENTREGA: 01/MARZO/2012

Practica 3. Produccin de cido pirvico durante la fermentacin de la glucosa por levadura y su identificacin. Objetivos: -Demostrar la formacin de cido pirvico durante la fermentacin de la glucosa por la levadura de panificacin. -Producir e identificar cido pirvico a partir de glucosa. Introduccin Las molculas de glucosa y de otros azucares de seis carbonos, son la fuente primaria de energa para la mayora de los organismos, aunque los cidos grasos y los aminocidos pueden cumplir con la misma funcin. Las clulas desdoblan la glucosa a travs de una serie de reacciones qumicas. La energa que se encuentra almacenada dentro de la glucosa se libera poco a poco y se usa para adherir los grupos fosfatos a las molculas de ADP para formar ATP. En la fermentacin el catabolismo de la glucosa tiene lugar en ausencia de aceptores de electrones exgenos. No requiere presencia de oxgeno y puede tener lugar tanto en clulas aerobias como en anaerobias. Las bacterias hetertrofas utilizan gran cantidad de compuestos orgnicos como fuente de energa. Muchos microorganismos prefieren carbohidratos, especialmente la glucosa, azcar de seis tomos de carbono, la degradacin de glucosa tiene lugar por glucolisis. La glicolisis se lleva a cabo en el citoplasma de las clulas y no requiere de oxigeno; sin embargo, si hay oxigeno presente, el proceso de liberacin de energa continua, ocurriendo la respiracin aerobia que sucede en la mitocondria. Los anaerobios producen energa por fermentacin, emplean compuestos orgnicos donadores y aceptores de energa. Los anaerobios facultativos y los anaerobios estrictos, realizan muchos tipos de fermentacin para obtener energa. El cido pirvico es el punto en el que desembocan las fermentaciones de carbohidratos y se obtiene a partir del rompimiento de la glucosa para transformarse en acido pirvico (de tres carbonos). La mayor parte de las hetertrofas dan lugar a distintos productos finales por fermentacin de glucosa. En las levaduras el cido pirvico puede seguir otra va fermentativa distinta, la fermentacin alcohlica, obtenindose como producto final etanol. Se aprovecha para la fabricacin del vino y la cerveza. Tambin existe otro tipo de fermentacin, el cido pirvico se transforma en cido lctico.

Material Tubos de ensayo de 13x 100 Tubos de centrifuga

Tripie Rejilla Anillo metlico Mechero Bao mara Pipetas graduadas de 5ml Centrifuga Vasos de pp de 250 y 600ml Pinzas para tubo de ensaye Procedimiento Formacin de piruvato.

Reactivos Sol. de glucosa a concentraciones de 0.5, 1.0 y 2.0 % Suspensin de levadura al 5% en Na2HPO4 y KH2O4 (18 hrs de fermentacin antes de su utilizacin) cido tricloroacetico al 10% Nitroprusiato de sodio 2,4 dinitrofenil-hidracina Hidrxido de amonio concentrado Hidrxido de sodio 4.4 N Sulfato de amonio solido

Marcar dos series de tubos de 3 cada una y adicionar 3ml de las soluciones de glucosa a las diferentes concentraciones 05., 1.0 y 2.0 % a ambas series. A una de las series de tubos adicionarles 3ml de suspensin de levadura con fosfatos de socio (0.213g/100ml) y marcarlos como A; y a la otra serie adicionarle 3 ml de la suspensin de levadura con fosfatos de potasio (0.9g/ml) y marcarlos como B. Colocar todos los tubos en bao mara a 37C por 30 minutos y aadir posteriormente a cada tubo 1ml de cido tricloroacetico al 10% mezclado vigorosamente y centrifugar a 2500 rpm por 10 minutos. Separar el sobrenadante y desechar el precipitado. Identificacin de piruvato. Reaccin con nitroprusiato de sodio. En un tubo de ensaye colocar 1ml del sobrenadante obtenido y hervirlo. Adicionarle 0.5g de sulfato de amonio y agitar. Agregar dos (gotas o pizquitas, si es slido) del reactivo y mezclar vigorosamente y dejar deslizar por las paredes del tubo una gotas de hidrxido de amonio concentrado, hasta la formacin de dos capas. La formacin de un anillo verde o azul en la interface indica afirmativo para la prueba. Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series. Identificacin de piruvato. Reaccin con 2,4 dinitrofenil-hidracina.

En un tubo de ensayo colocar 1ml del sobrenadante obtenido y adicionar 1ml del reactivo, agitar con fuerza y pasar a otro tubo la mitad dela mezcla formada, y adicionar 1ml de NaOH 0.1N. La aparicin de un color rojo indica prueba afirmativa. Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series. Observar la coloracin e intensidad de la misma en cada caso. Resultados Formacin de piruvato.

Identificacin de piruvato. Reaccin con nitroprusiato de sodio.

Fig. no 1 en la cual se muestra que la prueba fue positiva pues aunque en la foto no se distingue se pudo observar un halo verde oscuro en los tubos

Identificacin de piruvato. Reaccin con 2,4 dinitrofenil-hidracina.

Discusin Conclusin

Bibliografa Cuestionario
http://www.netmexico.com/practicas/BIO18RAA.pdf

Catabolismo, anabolismo (pdf)

http://docencia.udea.edu.co/bacteriologia/MicrobiologiaAmbiental/microbiologia_5.pdf