Ingeniera Gentica Molecular

Mediante la ingeniera gentica han podido modificarse las caractersticas de gran cantidad de plantas para hacerlas ms tiles al hombre, son las llamadas plantas transgnicas. Las primeras plantas obtenidas mediante estas tcnicas fueron un tipo de tomates, en los que sus frutos tardan en madurar algunas semanas despus de haber sido cosechados. Recondando que la clula vegetal posee una rgida pared celular, lo primero que hay que hacer es obtener protoplastos Vamos a ver las tcnicas de modificacin gentica en cultivos celulares. Estas clulas pueden someterse a tratamientos que modifiquen su patrimonio gentico. Las tcnicas se clasifican en directas e indirectas. Entre las tcnicas indirectas cabe destacar la transformacin de clulas mediada por Agrobacterium tumefaciens. Esta bacteria puede considerarse como el primer ingeniero gentico, por su particular biologa. Biologa de Agrobacterium tumefaciens

Esta bacteria, presente en el suelo, es patgena de muchas plantas a las que produce un tumor conocido como "agalla de cuello". Penetra en los tejidos vegetales causando una proliferacin celular. Durante el contacto con las clulas vegetales la bacteria transfiere a las clulas vegetales un plsmido llamado Ti (inductor de tumores). Este plsmido se integra en el ADN del cromosoma de la clula vegetal. Este plsmido transferido o T-ADN contiene los genes oncognicos (onc) cuya expresin provoca una mayor produccin de hormonas de crecimiento, stas son las que inducen las divisiones celulares que dan origen a la formacin del tumor o agalla.

Este fenmeno natural es empleado para utilizar a la bacteria Agrobacterium tumefaciens como vector de los genes que se desean introducir en una clula vegetal, con lo que se transforma dicha clula, la cual puede regenerar, por micropropagacin, una planta entera que ser transgnica.

Agrobacterium: un precursor natural de los biotecnlogos

La bacteria Agrobacterium tumefaciens contiene como ya vimos en un punto anterior, un plsmido Ti, que contiene los genes responsables de su virulencia, llamados genes onc. Cuando la bacteria infecta a la planta, provocando en ella un tumor, una parte del plsmido Ti, llamada T-ADN, que contiene los genes onc, es transferida al ncleo de la clula vegetal y se inserta en un cromosoma de la planta. De esta manera, la bacteria modifica la informacin gentica de la planta, aadindole los genes onc. Agrobacterium se comporta, de esta forma, como un ingeniero gentico natural. Si en el plsmido Ti se eliminan artificialmente los genes onc y se sustituyen por otros genes que interese clonar, se habr obtenido un sistema muy eficaz para introducir ADN interesante a la planta, al mismo tiempo que se habr evitado la aparicin de la enfermedad.

Plantas que se iluminan

En la transfeccin vegetal con Agrobacterium se ha ensayado un marcador inusual: el gen de la enzima luciferasa, de las lucirnagas. El sustrato de esta enzima es una protena llamada luciferina, que con ATP y oxgeno desprende luz. Plsmidos Ti con este marcador, se transfirieron a clulas de tabaco, con las que se formaron nuevas plantas. Las nuevas plantas obtenidas se regaron en la oscuridad con agua y luciferina disuelta. El resultado fue sorprendente: las plantas se iluminaron como si fuesen unas bombillas de poca potencia o un dibujo de un anuncio fluorescente.

Entre las tcnicas directas, se pueden citar la electroporacin, microinyeccin, liposomas y mtodos qumicos. PLANTAS TRANSGNICAS

Entre los principales caracteres que se han transferido a vegetales o se han ensayado en su transfeccin, merecen destacarse:

Resistencia a herbicidas, a insectos y a enfermedades microbianas.

Ya se dispone de semillas de algodn, que son insensibles a herbicidas. Para la resistencia a los insectos se utilizan cepas de Bacillus thuringiensis que producen una toxina (toxina - Bt) daina para las larvas de muchos insectos, de modo que no pueden desarrollarse sobre las plantas transgnicas con este gen. Respecto a los virus se ha demostrado que las plantas transgnicas con el gen de la proteina de la cpsida de un virus, son resistentes a la invasin de dicho virus.

Incremento del rendimiento fotosinttico Para ello se transfieren los genes de la ruta fotosinttica de plantas C4 que es ms eficiente.

Mejora en la calidad de los productos agrcolas

Tal es el caso de la colza y la soja transgnicas que producen aceites modificados, que no contienen los caracteres indeseables de las plantas comunes.

Sntesis de productos de inters comercial

Existen ya plantas transgnicas que producen anticuerpos animales, interfern, e incluso elementos de un polister destinado a la fabricacin de plsticos biodegradables

Asimilacin de nitrgeno atmosfrico

Aunque no hay resultados, se ensaya la transfeccin del gen nif responsable de la nitrogenasa, existente en microorganismos fijadores de nitrgeno, y que permitira a las plantas que hospedasen dicho gen, crecer sin necesidad de nitratos o abonos nitrogenados, aumentando la sntesis de proteinas de modo espectacular. Aspectos bioticos de la utilizacin de las plantas y alimentos transgnicos. Cul es la perspectiva biotica de la produccin y utilizacin de las plantas transgnicas? En el contexto biotico hay que tener en cuenta dos aspectos: el sanitario y el ecolgico. a) Punto de vista sanitario Desde el punto de vista sanitario, el riesgo terico que supone que el gen que da resistencia a los antibiticos beta-lactmicos (ampicilina) pase a bacterias del tracto intestinal humano directa o indirectamente va bacterias del tracto intestinal de los animales que se alimenten con el maz transgnico no procesado. Justificara ese riesgo potencial con una probabilidad prcticamente nula la prohibicin del maz transgnico con el gen Bt de Bacillus thuringiensis ?. Posiblemente no. Por otro lado, nunca se ha demostrado que un gen consumido por boca haya sido transmitido a una bacteria del tracto intestinal. Otro aspecto sanitario es el de la aparicin de alergias insospechadas por el consumo de alimentos transgnicos. Por ejemplo, se han citado casos de alergia producidas por soja transgnica manipulada con genes de la nuez de Brasil o de fresas resistentes a las heladas por llevar incorporado un gen de pescado (un pez que vive en aguas rticas a bajas temperaturas). En este segundo supuesto, las personas alrgicas al pescado podran sufrir una crisis alrgica al ingerir las fresas transgnicas. B) Punto de vista ecolgico Desde el punto de vista ecolgico se ha denunciado la posibilidad de que al crear las variedades transgnicas resistentes a herbicidas se incrementar notablemente el uso de stos con los posibles efectos secundarios negativos de contaminacin del suelo y del agua.

Por otro lado, en especies algamas (de fecundacin cruzada) existe la posibilidad de que una parcela sembrada con plantas transgnicas contamine con su polen a otras parcelas vecinas no transgnicas del mismo cultivo. Por ejemplo, si el polen de un campo de maz transgnico poliniza plantas normales de una parcela prxima, la semilla que se produzca en esta parcela puede haber incorporado el gen Bt transmitido por el polen; es decir, sera transgnica.

Tambin podra ocurrir que la resistencia al herbicida de una variedad transgnica se transfiriera por fecundacin interespecfica espontnea a una especie silvestre afn, con el consiguiente dao para la agricultura. Las plantas transgnicas son un reto de la Biotecnologa actual que han creado un cierto grado de alarma social consecuencia, en cierto modo, del temor a lo desconocido y novedoso. De todas formas, es bueno que se plantee en la sociedad un debate serio y riguroso -sin ecologismos demaggicos- que permita el avance de la ciencia, evitando a la vez peligros y riesgos innecesarios.

3. Riesgos potenciales que pueden implicar las plantas transgnicas Efecto directo sobre el hombre: La protena codificada por el transgn no debe ser txica para el hombre Posibles efectos alergnicos La aprobacin de los productos transgnicos debe ser analizada caso por caso Efecto ambiental: Dispersin incontrolada de la descendencia de la planta transgnica Transferencia del transgn a otras variedades no transgnicas o a otras especies afines Induccin de resistencia a los productos transgnicos por parte de los agentes patgenos y plagas

4. El riesgo cientfico En general, la ciencia ha avanzado a ciegas en cuanto al riesgo, pero alerta a sus sntomas Hay que distinguir entre el riesgo de la investigacin bsica y el riesgo de la aplicacin del conocimiento adquirido Hay discrepancias entre la importancia objetiva de un riesgo y su percepcin subjetiva: El riesgo voluntario causa menos temor que el riesgo impuesto El riesgo de origen natural causa menos temor que el de origen industrial El riesgo que se produce en un entorno familiar causa menos temor que el que se produce en un escenario extico El riesgo que es difuso en el tiempo o en el espacio causa menos temor que el que se concreta en hora y lugar No existe el riesgo cero: Toda actividad humana conlleva un cierto riesgo que ha de ser evaluado en funcin de los beneficios que tal actividad reporta Natural no es sinnimo de inocuo: Hay productos naturales que llevan substancias mutagnicas y cancergenas (por ejemplo: pimienta negrasafrol; setas comestibleshidrazinas; apio psolareno; frutos secosaflatoxinas de hongos; etc.) No todo lo artificial es nocivo : Ninguno de los conservantes autorizados llega a ser tan peligroso como las toxinas que pueden producir las bacterias y los hongos que el conservante evita

Catastro de modificaciones genticas Carcter Tolerancia herbicidas Resistencia virus Resitencia insectos Retraso maduracin Resistencia insectos + tolerancia herbicidas Sntesis almidn Resistencia sequa Porcentaje 27 % 18 % 14 % 11 % 7% 4% 1%

La Trangenesis en los Animales La transgnesis se puede definir como la introduccin de ADN extrao en un genoma, de modo que se mantenga estable de forma hereditaria y afecte a todas las clulas en los organismos multicelulares. Generalmente, en animales, el ADN extrao, llamado transgen, se introduce en zigotos, y los embriones que hayan integrado el ADN extrao en su genoma, previamente a la primera divisin , producirn un organismo transgnico; de modo que el transgn pasar a las siguientes generaciones a travs de la linea germinal (gametos). Entre las aplicaciones de los animales transgnicos se pueden destacar:

La posibilidad de estudiar a nivel molecular el desarrollo embrionario y su regulacin. Manipular de forma especfica la expresin gnica in vivo.

Estudiar la funcin de genes especficos. Poder utilizar a mamferos como biorreactores para la produccin de proteinas humanas. La correccin de errores innatos de metabolismo mediante terapia gnica.

La transgnesis puede efectuarse siguiendo dos estrategias distintas: Transgnesis por microinyeccin de zigotos Desde que en 1982 se obtuviera un ratn transgnico, la produccin de animales transgnicas es cada vez ms cotidiana, existiendo ya animales transgnicos de las siguientes especies: ratn, rata, conejo, cerdo, vaca, cabra y oveja. La tcnica se realiza, fundamentalmente por microinyeccin y se realiza de la siguiente forma:
o

En la primera fase, se aislan un nmero grande de vulos fertilizados. Se consigue sometiendo a las hembras a un tratamiento hormonal para provocar a superovulacin. La fertilizacin puede hacerse in vitro o in vivo. En la segunda fase, los zigotos obtenidos se manipulan uno a uno y con una micropipeta a modo de aguja, se introduce una solucin que contiene ADN. En la tercera fase, estos vulos son reimplantados en hembras que actuarn como nodrizas permitiendo la gestacin hasta trmino.

Por ltimo, tras el destete de los recin nacidos, stos se chequean, para ver si ha ocurrido la incorporacin del transgn. Transgnesis por manipulacin de clulas embrionarias. Una estrategia ms poderosa para la transgnesis implica la introduccin de ADN extrao en clulas embrionarias totipotentes(clulas ES) o clulas embrionarias madres (clulas EM). Estas clulas se toman del interior de la blstula en desarrollo y se pasan a un medio donde se tratan con distintos productos con lo que se conseguir que las clulas no se diferencien, y se mantiene su estado embrionario.

El ADN extrao se introduce en las clulas es mediante diversas tcnicas,posteriormente las clulas transfectadas son reintroducidas en una blstula y sta reimplantada en una hembra. Con esta tcnica los neonatos son quimeras; pero mediante el cruce de stas se consiguen animales transgnicos con aquellas quimeras que hayan incorporado el transgn en su linea germinal Obtencin de una cerda transgnica

Un gen hbrido que contiene el gen humano que codifica la sntesis de una protena de inters biolgico junto con el promotor del gen que codifica una protena de la leche de rata, se introducen por microinyeccin en un vulo de cerda fecundado. El desarrollo de ese vulo da lugar a un animal transgnico que tiene en todas sus clulas el gen hbrido. Debido al promotor elegido, ese gen solamente se expresa en la glndula mamaria de la cerda induciendo la produccin de la proteina humana en la leche.

CLONACIN DE ANIMALES El principio de la clonacin est en la obtencin de organismos idnticos genticamente, y por tanto morfolgica y fisiolgicamente, como lo son dos gemelos univitelinos. Esto ha sido el sueo de muchos ganaderos, que han deseado que todo su ganado tuviera las cualidades de algn ejemplar especialmente bueno. Se pueden utilizar dos mtodos para conseguir clones de animales: Por DISGREGACIN DE CLULAS EMBRIONARIAS. Se basa en el mismo principio por el que nacen gemelos de forma natural. Se pueden separar las clulas de un embrin en diferentes estados de desarrollo, desde el estado de 2 clulas hasta el estado de mrula. Cada clula separada puede funcionar como un zigoto que puede desarrollarse para dar un individuo completo. Por TRANSFERENCIA NUCLEAR. Se toman clulas embrionarias en fase de mrula o blstula, obtenidas por disgregacin, se cultivan in vitro, y despus se transfieren a ovocitos a los que se les ha quitado el ncleo. Se provoca la fusin de las dos clulas animales de modo que el ncleo de la clula embrionaria quede en el interior del ovocito, pudiendo ste empezar a funcionar como un zigoto.

As se han obtenido 470 embriones clnicos de terneros de un nico embrin donante de clulas.

Cuanto ms diferenciadas estn las clulas donantes de material gentico, ms difcil es conseguir la reprogramacin de dicho material gentico para que pueda iniciar la diferenciacin de la clula receptora.

Actualmente es posible obtener clones de clulas totalmente diferenciadas de un animal adulto que actan como donantes de su material gentico, como ocurri en el caso de la famosa oveja Dolly.

Aplicaciones Mdicas Entre ellas se pueden citar:

1.- OBTENCIN DE PROTEINAS DE MAMFEROS Una serie de hormonas como la insulina, la hormona del crecimiento, factores de coagulacin, etc... Tiene un inters mdico y comercial muy grande. Antes, la obtencin de estas protenas se realizaba mediante su extraccin directa a partir de tejidos o fluidos corporales. En la actualidad, gracias a la tecnologa del ADN recombinante, se clonan los genes de ciertas protenas humanas en microorganismos adecuados para su fabricacin comercial. Un ejemplo tpico es la produccin de insulina que se obtiene a partir de la levadura Sacharomyces cerevisae, en la cual se clona el gen de la insulina humana.

2.- OBTENCIN DE VACUNAS RECOMBINANTES El sistema tradicional de obtencin de vacunas a partir de microorganismos patgenos inactivos, puede comportar un riesgo potencial. Muchas vacunas, como la de la hepatitis B, se obtienen actualmente por ingeniera gentica. Como la mayora de los factores antignicos son proteinas lo que se hace es clonar el gen de la proteina correspondiente.

3.- OBTENCIN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES. Este proceso abre las puertas para luchar contra enfermedades como el cncer y diagnosticarlo incluso antes de que aparezcan los primeros sntomas. 4.- DIAGNTICO DE ENFERMEDADES DE ORIGEN GENTICO: Conociendo la secuencia de nucletidos de un gen responsable de una cierta anomala, se puede diagnosticar si este gen anmalo est presente en un determinado individuo. En el siguiente dibujo se explica brevemente la base del diagnstico.

Conclusin Ya demostradas algunas de las aplicaciones de la gentica molecular, podemos decir que a pesar que tienen algunas contraindicaciones, es un muy buen sistema para mejorar y aumentar producciones de plantas y vegetales, tambin sirve para corregir errores genticos, etc. Y una de las aplicaciones que ms nos afectas son las relacionadas con la medicina, ya que se crean nuevas maneras de detener enfermedades que nos afectan tan duramente como el cncer. Creemos que por el gran auge y avences que estn tomando, creemos que a los Ingenieros Genticos Moleculares, les queda una gran tarea por delante, ya que demostrando los avances que llevan hasta el momento, nos podemos dar cuenta que dan para mucho ms. Ojal que pudieran encontrar ms soluciones para enfermedades que nos afectan en la actualidad. Bibliografa Gentica Molecular, Knippers. 3 Edicin. Texto Ilustrado de Biologa e Ingeniera Molecular, Cabrera. http://cerezo.pntic.mec.es/~jlacaden/Ptransg3.html.