ABSORCIN ULTRAVIOLETA Y VISIBLE

ASPECTOS TERICOS.
Las aplicaciones cualitativas y cuantitativas de la espectrofotometra de absorcin dependen del hecho que las sustancias absorben radiacin en regiones especficas del espectro, en la cual la energa suministrada es suficiente para excitar tomos y molculas. El espectro de absorcin de una sustancia es, en la prctica, una grfica de absorcin contra la longitud de onda y sirve para identificar la especie molecular y para obtener estas grficas se emplean los espectrofotmetros. Todo espectrofotmetro mide y registra la absorcin de energa radiante por parte de molculas de compuestos y tomos de elementos. All se relacionan la energa radiante y las partculas expuestas a esta radiacin. La potencia radiante de un rayo de luz es proporcional al nmero de fotones por unidad de tiempo. Un fotn de energa choca con una partcula y la excita, producindose la absorcin de energa. La probabilidad que una molcula capture fotones est relacionada con su rea de seccin transversal. La velocidad de absorcin depende del nmero de colisiones por unidad de tiempo, entre el rea transversal y los fotones. En la misma proporcin en que se aumente el nmero de molculas capaces de absorber fotones (aumentando el trayecto de la radiacin a travs del medio o paso ptico) o la concentracin de la especie molecular, se aumentar la rapidez o tasa de absorcin de fotones. De igual forma, al aumentar la potencia del haz energtico, se aumentar la cantidad de fotones que atraviesa el medio por unidad de tiempo, aumentndose en la misma proporcin el nmero de colisiones en la unidad de tiempo con las molculas absorbentes de radiacin (si permanece constante la concentracin). Si un haz de radiacin monocromtica de potencia radiante Po, recorre un diferencial de distancia (dx) en un medio absorbente de radiacin, el decrecimiento en potencia -dP, ser dado por la ecuacin:

- dP = k P0 dx o -dP / P0 = -d(ln P) = K dx ya que el nmero de especies absorbentes de radiacin es proporcional al espesor, pero independiente de P. La constante de proporcionalidad K depende de la longitud de onda de la radiacin. La concentracin C es constante.

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La ecuacin se puede separar en

f b d ln P K dx p 0 0

Lo que nos indica que la Potencia radiante absorbida es proporcional al espesor que atraviesa. Si se piensa que Po es la energa radiante inicial a X = 0 y que P es la radiacin transmitida (no absorbida) resultante del medio capaz de absorber radiacin en x = b, esta ecuacin puede integrarse en todo el paso ptico como: ln Po - ln P = ln (Po/P) = K b A esta expresin se le conoce como ley de Lambert. Seala que la radiacin monocromtica proveniente de una onda plana que pasa a travs de un medio de concentracin constante, capaz de absorber radiacin, la potencia radiante disminuye logartmicamente a medida que la longitud de paso ptico aumenta aritmticamente. Hay dependencia entre la potencia radiante y la concentracin de la especie absorbente y puede determinarse esta dependencia, si la longitud de onda y la distancia que atraviesa el rayo en la muestra permanecen constantes. El nmero de molculas capaces de absorber radiacin y que chocan con los fotones es directamente proporcional a la concentracin C -d P = K P dC y cuando se integra desde C = 0 hasta C = C, se encuentra que ln Po / P = K C Esta ecuacin representa la ley de Beer. Si se combinan las ecuaciones de Lambert y de Beer, donde el espesor y la concentracin C son variables, se llega a la ecuacin: ln Po / P = K b C Log Po / P = a b C. Se definir Absorbancia [A] como y la transmitancia T como de tal forma que A = log1/T = - log T A = log Po / P = a b C T = P / Po

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y el porcentaje de transmitancia es simplemente 100T. La constante a en estas ecuaciones es la Absortividad, cuyas unidades son litro.gramos-1.cm-1 Si la concentracin de la solucin est dada en Molaridad (M) y b est en centmetros, esta constante a se llamar Absortividad molar () y en este caso sus unidades son litro.mol-1.cm-1. Recuerde que cuando pasa radiacin a travs de una celda donde hay una muestra, parte de la radiacin se refleja en cada superficie, en donde hay cambios en el ndice de refraccin y en vez de medirse Po como la potencia radiante que incide en la celda, las prdidas por reflexin pueden ser compensadas tomando a Po como la potencia radiante transmitida a travs de una celda que contiene solo el solvente puro. La muestra debe colocarse en una celda idntica como sea posible a la de referencia, para realizar mediciones. La celda debe estar libre de suciedad, ralladuras, polvo o huellas para evitar la dispersin. La Turbidez tambin dispersa radiacin y es un aspecto importante a controlar. Cuando se grafica Absorbancia contra concentracin, dar una lnea recta que pase por el origen. La absorcin de radiacin por molculas a longitudes de onda especficas se usa para anlisis cuantitativo, debido a la relacin directa entre Absorbancia y concentracin. La sensibilidad del anlisis depende la magnitud de la absortividad y de la Absorbancia mnima que puede medirse con el grado de certeza requerido. Para el caso de una sustancia que se trabaja en el laboratorio, podemos calcular la concentracin mnima detectable conociendo las otras variables. Si la Absorbancia mnima detectable es 0.001y la absortividad molar () del complejo Hierro (II)-1,10-fenantrolina es 12000 litros.mol-1.cm-1, la concentracin molar mnima que puede ser detectada ser, para un paso ptico b = 1 cm C = A/ () b = 0.001/(12000 litros.mol-1.cm-1)(1cm) = 1.2x10-7 M

Ley de Lambert - Beer El anlisis qumico proporciona informacin sobre la composicin de una muestra de materia. Algunos anlisis dan resultados de tipo cualitativo y aportan informacin til en la que pueden reconocerse especies atmicas o moleculares, deducirse caractersticas estructurales o reconocer en la muestra la presencia de determinados grupos funcionales. Otros anlisis son de tipo cuantitativo; en stos los resultados se representan como datos numricos y se expresan como porcentaje, partes por milln o miligramos por litro. En ambos tipos de anlisis la informacin necesaria se
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obtiene por medio de la medida de una propiedad fsica que se relaciona en forma caracterstica con el o los componentes de inters. Las propiedades que se utilizan para conocer la composicin qumica de la muestra pueden denominarse seales analticas. Como ejemplo de este tipo de seales cabe citar: emisin o la absorcin de la luz, conductancia, peso, volumen e ndice de refraccin, pero ninguna es exclusiva de una especia dada; as por ejemplo, todos los elementos metlicos presentes en una muestra cuando se calienta un arco elctrico a una temperatura suficientemente elevada, emiten por lo general radiacin ultravioleta o visible; todas las especies cargadas conducen la electricidad y todos los componentes de una mezcla contribuyen a su peso, su volumen y su ndice de refraccin. En consecuencia, en todos los procedimientos analticos es necesario realizar una separacin. En algunos casos esta etapa consiste en la separacin fsica de los componentes qumicos individuales que estn presentes en la muestra antes de la generacin y de la seal analtica. En otros casos se genera y se observa la seal en la muestra entera, luego se asla o se separa la seal deseada. La separacin de las longitudes de onda por medio de un dispositivo adecuado, por ejemplo, un espectroscopio, hace posible la identificacin de cada componente sin que sea necesario separarlo fsicamente. En cambio, no existe ningn mtodo general que permita diferenciar la conductancia de los iones sodio de la causada por iones potasio. Por tanto si se quiere utilizar la conductancia como seal para el anlisis de una de estas especies inicas en una muestra que tambin contenga la otra, ser necesario realizar la separacin fsica de ambas especies.

MTODOS ANALTICOS. En la tabla siguiente se enumeran las seales ms comunes que se utilizan con fines analticos. Obsrvense que las primeras seis corresponden a la emisin de radiacin o bien a la interaccin de stas con la materia. Las tres siguientes son elctricas; Las cinco finales, son de naturaleza variada y se presentan como un slo grupo. Tambin se enumeran en la tabla los nombres de los diferentes mtodos analticos basados en dichas seales. Es interesante destacar que hasta en ao 1920 la mayora de los anlisis se basaban en las dos ltimas seales enumeradas en la tabla, o sea masa y volumen. Por este motivo, los mtodos gravimtricos y volumtricos se conocen como mtodos clsicos de anlisis, a diferencia de los dems procedimientos que se denominan mtodos instrumentales.

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Pocas caractersticas distinguen claramente los mtodos instrumentales de los clsicos, ms all de la cronologa de su desarrollo. Algunas tcnicas instrumentales son ms sensibles que las tcnicas clsicas. Adems de los mtodos enumerados en la segunda columna de la tabla, existe otro grupo de mtodos analticos que se utilizan para resolver y separar los compuestos estrechamente relacionados. Los mtodos comunes de separacin comprenden la cromatografa, destilacin, la extraccin, intercambio inico, cristalizacin fraccionada y precipitacin selectiva.

TABLA 1: ALGUNAS SEALES ANALTICAS. Seal Emisin de radiacin Mtodos analticos basados en la medicin de la seal. Espectroscopia de emisin (rayos X, ultravioleta, radiacin visible), fotometra de llama. Fluorescencia (rayos X, ultravioleta, radiacin visible), mtodos radioqumicos. la Espectrofotometra (rayos X, ultravioleta, radiacin visible, infrarroja); colorimetra; absorcin atmica, resonancia nuclear magntica y espectroscopia de resonancia espn. de Turbidimetra, nefelometra, espectroscopia Raman

Absorcin radiacin

de

Dispersin radiacin Refraccin de Refractometra, interferometra radiacin Difraccin de Rayos X, mtodos de difraccin electrnica. radiacin Rotacin de radiacin Polarimetra, dispersin ptica rotatoria y dicrosmo circular. Potencial elctrico Potenciometra, cronopotenciometra Corriente elctrica Polarografa, amperometra culombimetra Resistencia elctrica Conductimetra. Razn masa a carga Espectrometra de masa Velocidad de reaccin Mtodos cinticos Propiedades Trmicas Conductividad trmica y mtodos de Entalpa Volumen Anlisis volumtrico Masa Anlisis gravimtrico

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TERMINOLOGA UTILIZADA EN ESPECTROSCOPA DE ABSORCIN En la tabla siguiente se enumeran trminos y smbolos empleados con mayor frecuencia en espectroscopia de absorcin. Recientemente se ha hecho un considerable esfuerzo por la American Society for testing Materials para crear una nomenclatura uniforme. Los trminos y smbolos que se enumeran en las dos primeras columnas de la tabla, se basan en estas recomendaciones. La columna tres contiene otros smbolos que podrn encontrar se en la bibliografa ms antigua. TABLA 2. SMBOLOS Y TRMINOS MS UTILIZADOS EN ABSORCIN . Trmino y smbolo Definicin. Potencia radiante, P, Energa de la radiacin que Po incide en el detector, por cm2 de superficie y por segundo. Absorbancia, A log Po/P Transmitancia, T Po/P Trayectoria de radiacin, b en cm. Absortividad, a A/(bc) Absortividad molar, A/(bc) Otros nombres y smbolos Intensidad de la radiacin, I, Io. Densidad ptica, extincin, E Transmisin, T l,d D;

Coeficiente de extincin, k Coeficiente de extincin molar

Transmitancia: Si se representa un haz de radiacin paralela antes y despus de pasar a travs de una capa de solucin de b cm de espesor, y que contiene una especie molecular que absorbe radiacin cuya concentracin es c. Como consecuencia de las interacciones entre los fotones y las partculas absorbentes, la potencia del haz disminuye de Po a P. La transmitancia T de la solucin, es la fraccin de la radiacin incidente transmitida por la solucin. O sea que: T = P/Po La Absorbancia de una solucin est definida por la ecuacin. A = -log10 T = log Po/P Obsrvese que a diferencia de la transmitancia, la Absorbancia de una solucin aumenta a medida que aumenta la atenuacin del haz.

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Absortividad y Absortividad molar: Como se ver a continuacin, la Absorbancia es directamente proporcional a la trayectoria de la radiacin a travs de la solucin y a la concentracin de la especia que produce la absorcin. Es decir

A = abC donde a es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. Resulta evidente que la magnitud de a depende de las unidades de b y C, en litro/gramo. cm. Cuando se expresa la concentracin en moles por litro y la trayectoria a travs de la celda en centmetros, la absortividad se denomina absortividad molar y se representa con el smbolo cuyas unidades son litro/mol cm. En consecuencia cuando b se expresa en centmetros y c en moles por litro, se tiene que: A = bC

MEDIDA EXPERIMENTAL DE P Y Po. Las relaciones dadas para transmitancia o absorbancia, son indirectamente inaplicables al anlisis qumico. En la forma en que han sido definidos, ni P ni Po, pueden medirse en forma prctica en el laboratorio debido a que la solucin que se desea estudiar debe estar contenida en algn tipo de recipiente. Es inevitable entonces la interaccin entre la radiacin y las paredes de ste, lo que produce una prdida de radiacin por reflexin en cada interfase; ms an, puede existir una absorcin significativa en las paredes de la celda. Por ltimo, el haz puede sufrir una disminucin de potencia durante su paso a travs de la solucin, como consecuencia de la dispersin producida por las molculas de gran tamao o las heterogeneidades. La prdida por reflexin puede ser importante; por ejemplo, en el pasaje vertical de radiacin visible a travs de una interfase aire-vidrio se puede reflejar aproximadamente al 4%. Con la finalidad de compensar estos defectos suele compararse la potencia del haz transmitido a travs de la solucin con la de un haz que pasa a travs de una celda idntica que contiene el disolvente d e la muestra. De esta forma, se puede obtener una absorbancia experimental que se aproxima al valor de la verdadera absorbancia de la solucin; es decir
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A = log Psolvente/Psolucin = log Po/P En lo que sigue, Po y P representan la potencia de un haz de radiacin despus de pasar a travs de la celda que contiene el disolvente o la solucin del analito respectivamente. MEDIDAS DE TRANSMITANCIA Y ABSORTIVIDAD. Las medidas de transmitancia (o de absorbancia) se realizan por medio de distintos tipos de instrumentos de espectroscopia ptica como: a) espectroscopia de emisin, b) espectroscopia de absorcin, y c) espectroscopia de fluorescencia y dispersin. La salida elctrica G del detector de este instrumento est dada por: G = KP + K donde K es la corriente obscura que se observa por lo general cuando no incide ninguna radiacin en el transductor, y K es una constante de proporcionalidad. En muchos instrumentos, el dispositivo de lectura consiste en una escala lineal calibrada en unidades de 0 a 100%T. Utilizando este tipo de instrumentos una medida de transmitancia de hace en tres pasos. Primero, mientras est interrumpida la incidencia del haz luminoso sobre el transductor por medio de un obturador, se realiza un ajuste elctrico hasta que la aguja del dispositivo de lectura marque cero; este paso de denomina ajuste de la corriente obscura o de T 0% . A continuacin se hace un ajuste a T100%, con el obturador abierto y la celda con el disolvente colocada en la trayectoria del haz. Para realizar este ajuste, puede ser necesario aumentar o disminuir la potencia de salida de la fuente por medios elctricos, tambin se puede varia r la potencia del haz luminoso por medio de un diafragma ajustable o colocado en posicin apropiada a un peine o ua cua ptica. Despus de este paso, podemos escribir la ecuacin de esta forma: Go = 100 = KPo + 0.00 Para realizar el ltimo paso del procedimiento de medida, se sustituye la celda con el disolvente por la celda que contiene la muestra. Entonces la lectura del dispositivo de medida estar dada por G = KP + 0.00 Si se divide esta ecuacin por la precedente, se obtiene: G = P/ Po x 100 = T x 100

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De esta forma, es posible que el instrumento d lecturas en porcentaje de transmitancia. Por supuesto, tambin se puede construir una escala de absorbancia. PREVIO A LA LEY DE LAMBERT - BEER. Cuando una onda electromagntica de longitud de onda definida incide sobre una sustancia, la fraccin de la radiacin absorbida, ignorando las prdidas debidas a reflexiones y disipacin, es una funcin de la concentracin de la sustancia en la trayectoria de la luz y del espesor de la muestra. La complicacin de la reflexin y de la absorcin en la ventana puede evitarse definiendo P0 como el poder de radiacin que pasa a travs de una muestra testigo contenida en la misma cubeta de la muestra. La transmitancia T se define como la relacin de intensidades (o del poder de radiacin) de la radiacin no absorbida (con respecto a la muestra testigo), P, y de la radiacin incidente; de esta forma. La absorbancia A, es el logaritmo decimal de la recproca de la transmitancia: El porcentaje es 100T; el porcentaje de absorcin es 100. Las aplicaciones analticas del comportamiento de absorcin de las sustancias pueden ser cuantitativas y cualitativas. Las aplicaciones cualitativas de la espectrometra de absorcin, dependen del hecho de que una cierta especie molecular slo absorbe luz en regiones especficas del espectro y en grados variables de caractersticos de dicha especie particular. Al resultado se le conoce como espectro de absorcin de esa especie y es la huella dactilar para propsitos de identificacin.

LEY DE BEER La relacin entre la intensidad y la concentracin de la especie absorbente tiene mucho ms inters por lo que Beer determin que al aumentar la concentracin del absorbente, se produce el mismo efecto que un aumento de proporcional en la longitud del trayecto de absorcin de la radiacin. De esta forma, la constante de proporcionalidad k es a su vez, proporcional a la concentracin de soluto absorbente, esto es: k = aC usando logaritmos de base 10 en vez de naturales, solo puede modificarse el valor de k (o a), a incorpora el factor de conversin de base diez, es decir,
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2.303. Esta es la expresin conocida como "Ley Combinada de Lambert - Beer" que por lo general se conoce solo como Ley de Beer. Si la longitud de trayecto de la muestra se expresa en centmetros y la concentracin y la concentracin en gramos de absorbente por litro de solucin, la constante a, llamada absorbancia relativa especifica o coeficiente de absorcin, tiene por unidades litro g-1 cm-1. Con frecuencia se desea especificar C en trminos de concentraciones molares, manteniendo b en unidades de centmetros. Una grfica de la absorbancia en funcin de la concentracin ser una lnea recta que pasa por el origen esta es la representacin de la ley de Beer. Las escalas de lectura y de medicin de los espectrofotmetros suelen estar calibradas para leer absorbancias y transmitancia. La sensibilidad de un espectrmetro depende de la magnitud de la absorbancia especfica y de la absorbancia mnima que puede medirse con el grado de certidumbre requerido. Desviaciones a la Ley de Beer. Las desviaciones se clasifican en tres categoras: reales, instrumentales, y qumicas. Las desviaciones reales se originan en cambios del ndice de refraccin del sistema analtico. Kortum y Seiler sealaron que la ley de Beer slo es aplicable en forma precisa a bajas concentraciones no es la absorbancia especfica lo que es constante e independiente de la concentracin. A concentraciones cercanas a 10-3 M o menores, el ndice de refraccin es esencialmente constante. Y lo mismo sucede con la absorbancia especfica. Esto no elimina la posibilidad de anlisis cuantitativos a concentraciones elevadas, pues el uso de soluciones patrn y una curva de calibracin pueden proporcionar una exactitud suficiente. La derivacin de la ley de Beer supone una luz monocromtica, pero la luz verdaderamente monocromtica slo puede obtenerse en un alto grado con fuentes de emisin de lneas muy especializadas. Todos los monocromadores, cualesquiera que sea su calidad y tamao, tienen un poder de resolucin finito y, por consiguiente un paso de banda instrumental mnimo. Sin embargo, si la absorbancia es esencialmente constante en la amplitud del paso de la banda instrumental, la ley de Beer concuerda con lmites bastante precisos. De esta forma si la constante de absorbancia no es constante len el intervalo de longitudes de onda usado, la ley de Beer produce errores. Las desviaciones qumicas de la Ley de Beer son causadas por desplazamientos de un equilibrio qumico o fsico en el que participa la especie absorbente. Si una especie absorbente participa en un equilibrio cido - base, la ley de Beer fallar, a menos que el pH y la fuerza inica se mantengan constantes.

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Error relativo de concentracin. En las mediciones de absorcin con una fuente constante, los cuantos de luz llegan a tal velocidad que la respuesta del detector no depende de su naturaleza discreta. El error relativo mnimo de concentracin para detectores en los que el ruido es independiente de la intensidad de la energa radiante que llega al detector puede obtenerse. De esta forma, resulta razonable decir que un error de 0.1% de la transmitancia produce un error de 0.27% en la concentracin de la muestra. DEMOSTRACIN DE LA LEY DE BEER Considere el bloque de materia que puede absorber radiacin, mostrado en la figura. Un haz de radiacin monocromtico cuya potencia inicial se denomina P0,incide perpendicularmente en la superficie lateral del bloque y despus de atravesar una longitud b del material, que contiene n partculas absorbentes (tomos, molculas o iones), la potencia se disminuye hasta hacerse P a causa de la absorcin. Considrese ahora una seccin transversal del bloque de rea S y un espesor infinitesimal dx. Dentro de esa seccin hay dn partculas absorbentes. Asociada a cada partcula, se puede imaginar una superficie en la que se produce la captura fotnica. Si un fotn llega a una de estas reas la absorcin ser inmediata. La proyeccin del rea total de estas superficies de captura dentro de la seccin se designa como dS, por la tanto la relacin entre el rea de captura y el rea total es dS/S. Esta relacin representa la probabilidad de captura de fotones dentro de la seccin.

P o

d x
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La potencia Px del haz que entre en la seccin es proporcional al nmero de fotones por centmetro cuadrado y por segundo y dPx representa la cantidad eliminada por segundo dentro de la seccin. La fraccin absorbida es dPx/Px cuya relacin es igual a la probabilidad media de captura fotnica. El signo menos india la respectiva disminucin en la potencia radiante debido a la absorcin.

dPx dS Px S

dS representa la suma de las reas de captura fotnica de las partculas dentro de la seccin, por lo que debe ser proporcional al nmero de partculas o

dS dn
dn es el nmero de partculas y es una constante de proporcionalidad que se puede denominar seccin transversal de captura. Si se combinan las anteriores ecuaciones y si se integra entre los lmites inicial y final 0 y n:

P dPx n P 0 0 Px
resulta:
ln P n P0 S

dn
S

Transformando el logaritmo natural a logaritmo decimal o de Briggs e invirtindola para cambiar el signo, tenemos:
2.303 log P0 n P S P0 n log P 2.303S

Recordar que n es el nmero total de partculas dentro del bloque. El rea de la seccin transversal S puede expresarse en trminos del Volumen V del bloque en cm3 y de su longitud b (en cm) V S b
log P0 nb P 2.303V

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n/V tiene unidades de concentracin (nmero de partculas por cm 3) y debe convertirse en moles por litro. El nmero de moles viene dado por
Nmero de moles npartcula s 6.02 x1023 partculas / mol

y c en moles /litro viene dado por

c
de donde n, es:

n 1000cm3 / Litro 1000n molx mol / litro 23 3 6.02 x10 Vcm 6.02 x1023V

n
Entonces la ecuacin
log

cxVx 6.02 x1023 1000

Po nb P 2.303V

queda:

log

Po 6.02 x1023bc P 2.303x1000

Si se definen las constantes reunidas en esta ecuacin como (conocida como Absortividad molar del analito) 6.02 x1023 2.303x1000 queda expresada de la forma:

Po log P

bc A

A bc
Expresin conocida como ecuacin de Beer. En donde A es la absorbancia, b es la longitud del paso ptico, c es la concentracin en moles por litro y es la absortividad molar del analito.

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